清肺口服液对呼吸道合胞病毒感染人胚肺成纤维细胞TGF-β1 mRNA基因表达的影响

目的 探讨清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)转化生长因子-β1(TGF-β1)基因表达的影响.方法 RSV攻击体外培养的HELF细胞后,以清肺口服液含药血清、利巴韦林含药血清及空白血清干预,采用实时荧光定量PCR法测定各组HELF TGF-β1表达变化.结果 病毒对照组较正常细胞组TGF-β1下降至1/3,清肺口服液含药血清组可显著升高TGF-β1水平至RSV感染细胞的2倍.利巴韦林含药血清和空白血清作用相似,对TGF-β1表达有一定的影响.结论 RSV感染可使HELF细胞TGF-β1 mRNA表达水平显著下降;清肺口服液可调节TGF-β1 mRNA表达,减缓RSV感染后细胞的异常变化,这可能是其抗病毒作用机制之一.     

清肺口服液对呼吸道合胞病毒感染人胚肺成纤维细胞PDGF-BB mRNA基因表达的影响

目的 观察清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)基因表达的影响.方法 RSV攻击体外培养的HELF细胞后,以清肺口服液含药血清、利巴韦林含药血清及空白血清干预,采用实时荧光定量PCR法(RealTime-PCR)测定各组人胚肺成纤维细胞PDGF-BB mRNA表达变化.结果 病毒对照组较正常细胞组PDGF-BB上升3倍,清肺口服液含药血清可显著降低PDGF-BB至RSV感染细胞的1/5.利巴韦林含药血清和空白血清作用相似,对PDGF-BB表达有一定的影响.结论 RSV感染可使HELF细胞PDGF-BB mRNA表达水平显著升高;清肺口服液可调节PDGF-BB等细胞因子的mRNA表达,缓减RSV感染后细胞的异常变化,这可能是其抗病毒作用机制之一.     

清肺口服液对呼吸道合胞病毒感染人胚肺成纤维细胞TGF-β_1 PDGF-BB mRNA基因表达的影响

目的:探讨清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)转化生长因子-β1(TGF-β1)、血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)基因表达的影响。方法:RSV攻击体外培养的HELF细胞后,以清肺口服液含药血清,利巴韦林含药血清及空白血清干预,采用实时荧光定量PCR法(RealTime-PCR)测定各组人胚肺成纤维细胞TGF-β1、PDGF-BBmRNA表达变化。结果:病毒对照组较正常细胞组PDGF-BB上升为3倍、TGF-β1下降为1/3,清肺口服液含药血清组可显著降低PDGF-BB至RSV感染细胞的1/5、升高TGF-β1至RSV感染细胞的2倍。利巴韦林含药血清和空白血清作用相似,对TGF-β1,PDGF-BB表达有一定的影响。结论:(1)RSV感染可使HELF细胞PDGF-BBmRNA表达水平显著升高,TGF-β1mRNA表达水平显著下降;(2)清肺口服液可调节TGF-β1、PDGF-BB等细胞因子的mRNA表达,缓减RSV感染后细胞的异常变化,这可能是其抗病毒作用机制之一。     

清肺口服液对呼吸道合胞病毒肺炎患儿血清IL-8、ICAM-1表达水平的影响

目的:探讨清肺口服液对呼吸道合胞病毒肺炎患儿血清白介素-8(IL-8)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的影响。方法:采用酶联免疫吸附法(ELISA),测量8例RSV肺炎患儿治疗前后血清中IL-8、ICAM-1水平。结果:清肺口服液治疗后患儿血清中IL-8水平比治疗前显著下降,而血清中ICAM-1水平比治疗前显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:清肺口服液可显著降低RSV肺炎患儿血清中IL-8水平,升高ICAM-1水平,可能与清肺口服液的免疫调节作用有关。     

清肺口服液对人喉癌细胞感染呼吸道合胞病毒后ICAM-1表达水平的影响

目的探讨清肺口服液对人喉癌细胞（Hep-2）感染呼吸道合胞病毒（RSV）后细胞间黏附分子-1（I-CAM-1）表达水平的影响。方法分时段以清肺口服液含药血清,利巴韦林含药血清及空白血清干预RSV感染的体外培养的Hep-2细胞,48h时及72h后收集各组细胞上清,采用酶联免疫吸附试验法（ELISA法）测定各组人喉癌细胞ICAM-1表达变化。结果 48h时及72h后病毒模型组ICAM-1的表达明显高于清肺口服液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组及利巴韦林Ⅱ、Ⅲ组;空白血清组与病毒模型组无显著差异。清肺口服液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组与利巴韦林Ⅱ、Ⅲ组比较,无显著差异。清肺口服液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组之间比较,无显著差异。72h后各组ICAM-1的表达与48h相比,无显著差异。结论清肺口服液可降低Hep-2感染RSV后ICAM-1的过度表达,减轻炎症反应,提前给药更可获得良好的效果,这可能是清肺口服液抗病毒的机制之一。     

清肺口服液对Hep-2细胞感染呼吸道合胞病毒后IL-6、IL-8调控的研究

目的探讨清肺口服液对人喉癌上皮细胞（Hep-2）感染呼吸道合胞病毒（RSV）后白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-8（IL-8）表达的影响。方法分时段以清肺口服液含药血清、利巴韦林含药血清及空白血清干预RSV感染的体外培养的Hep-2细胞,48h及72h后收集各组细胞上清,采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定各组人喉癌细胞IL-6、IL-8表达变化。结果 48h及72h后病毒模型组IL-6、IL-8的表达明显高于清肺口服液组（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）、利巴韦林组（Ⅱ、Ⅲ）,有显著差异,空白血清组（Ⅱ、Ⅲ）与病毒模型组无显著差异。清肺口服液组（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）与利巴韦林组（Ⅱ、Ⅲ）比较,无显著差异。清肺口服液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组之间比较,无显著差异;72h后各组IL-6、IL-8的表达与48h相比,无显著差异。结论清肺口服液可降低Hep-2感染RSV后IL-6、IL-8的过度表达,减轻炎症反应,提前给药更可获得良好的效果,这可能是清肺口服液抗病毒的机制之一。     

清肺口服液对呼吸道合胞病毒感染人胚肺成纤维细胞肿瘤坏死因子-α转化生长因子-β_1蛋白表达的影响

目的:探讨清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒感染的人胚肺成纤维细胞肿瘤坏死因子(TNF-α)、转化生长因子(TGF-β1)蛋白表达的影响。方法:用呼吸道合胞病毒Long株感染人胚肺成纤维细胞,用清肺口服液含药血清作用于该细胞,并设空白血清、和正常细胞做对照,24h后采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组细胞上清液TNF-α、TGF-β1蛋白水平。结果:清肺口服液含药血清组两种细胞因子明显升高(P0.01)。结论:清肺口服液含药血清可以在病毒感染早期升高TNF-α、TGF-β1蛋白表达,从而增加病毒清除,抑制过度的免疫反应,这可能是该药治疗呼吸道合胞病毒感染的机理之一。     

清肺口服液拮抗呼吸道合胞病毒感染的血清药理学研究

目的 评价清肺口服液抗呼吸道合胞病毒(RSV)的活性.方法 采用MTT法,以利巴韦林为对照组,观察清肺口服液及不同给药方式对RSV的拮抗作用.结果 清肺口服液具有明显抗RSV的作用,与利巴韦林比较差异无统计学意义;清肺口服液的作用机制可能为抑制病毒吸附或增殖.结论 清肺口服液可以通过不同环节拮抗RSV病毒,是治疗RSV感染的有效复方制剂.     

清肺口服液通过ERK1/2通路调控RSV所致呼吸道炎症损伤的机制

目的:通过研究清肺口服液对呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)感染后气道上皮细胞胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinases,ERK1/2)磷酸化蛋白及相关炎症因子表达的影响,探讨清肺口服液抗RSV感染及其继发炎症损伤的调节机制。方法:RSV体外感染人支气管上皮细胞(human bronchial epithelial cells,16-HBE)建立气道上皮炎症损伤模型,设置空白组,模型组(RSV),利巴韦林组(利巴韦林),清肺口服液高、中、低质量浓度组,共6组。其中空白组给予含2%FBS的RPIM 1640培养基进行培养,其余各组在空白组的基础上造模,模型组加入等量RSV(MOI=1),利巴韦林组加入等量利巴韦林注射液(0.2 mg·L-1),清肺口服液组给予清肺口服液高、中、低质量浓度(200,100,50 mg·L-1)进行干预。应用噻唑蓝(tetrazolium salt colorimetry,MTT)比色法检测清肺口服液对RSV感染16-HBE的毒性作用,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测清肺口服液对细胞中RSV复制的影响,并用蛋白免疫印迹法(Western blot)检验ERK1/2信号通路相关蛋白磷酸化表达变化,同时用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定细胞上清中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6),白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)水平。结果:与空白组比较,模型组RSV大量增殖,16-HBE出现典型的炎症损伤表现,ERK1/2磷酸化蛋白水平显著提高(P0.01),同时细胞上清中释放大量的炎症因子IL-6,IL-8(P0.01)。加入清肺口服液或利巴韦林后,16-HBE中的RSV复制水平显著降低(P0.01),且清肺口服液(200,100 mg·L-1)可显著下调ERK1/2磷酸化蛋白的表达(P0.01),并显著降低细胞上清中炎症因子IL-6,IL-8的表达水平(P0.01)。结论:清肺口服液能够抑制RSV病毒复制并减轻RSV感染所致的气道炎症损伤,其机制可能与下调ERK1/2磷酸化蛋白水平及降低气道炎症因子的表达有关。     

清肺饮对呼吸道合胞病毒感染大鼠血清白细胞介素-4、干扰素-γ及肺组织的影响

目的:观察清肺饮对呼吸道合胞病毒感染大鼠血清白细胞介素-4、干扰素-γ及肺组织影响。方法:42只SD大鼠被随机分成正常对照组、病毒感染模型组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组、和地塞米松对照组6组,大鼠在戊巴比妥钠腹腔注射麻醉下用呼吸道合胞病毒滴鼻吸入感染的方法建造病毒感染模型。采用荧光免疫试剂检测法,检测白细胞介素-4、干扰素-γ。观察肺组织病理学变化。结果:与正常对照组相比,病毒感染模型组大鼠白细胞介素-4升高、干扰素-γ下降,均有统计学差异(P0.05,P0.05),与病毒感染模型组比较,中药高、中、低剂量组及地塞米松组白细胞介素-4含量均明显减低(均P0.01),中药中、低剂量组干扰素-γ含量升高(P0.05,P0.01),地塞米松组干扰素-γ含量升高(P0.05)。清肺饮能减轻呼吸道合胞病毒感染大鼠肺泡壁增厚程度,减少炎症细胞浸润。结论清肺饮对呼吸道合胞病毒感染大鼠的血清白细胞介素-4有抑制作用、干扰素-γ有升高作用。清肺饮能减轻呼吸道合胞病毒感染大鼠肺组织损害程度。     

清肺口服液对RSV感染哮喘急性发作小鼠肺组织炎症及气道反应性的影响

目的:探讨清肺口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)感染哮喘急性发作小鼠模型肺组织炎症及气道反应性的影响。方法:60只雄性6~8周龄Balb/C小鼠,每组10只,随机分为正常组,模型组,清肺口服液高、中、低剂量组(2.34,1.17,0.59 g·kg^-1·d^-1),利巴韦林组(0.1 g·kg^-1·d^-1),共6组,卵细胞(OVA)致敏及雾化激发哮喘模型,经RSV隔日滴鼻连续3次感染,获得RSV感染哮喘模型;治疗组予清肺口服液分高、中、低剂量ig;正常予等量生理盐水ig:阳性药组给予利巴韦林注射液ip。末次激发24 h后,用Buxco RC系统检测小鼠气道反应性;收集支气管肺泡灌洗液(BALF)进行嗜酸细胞分析;肺组织经HE染色,PAS染色,VG染色评估炎症反应。结果:与正常组比较,模型组小鼠BALF中嗜酸粒细胞比例(EOS%)明显升高,气道反应性较正常组明显增高(P<0.01),模型组小鼠肺组织呈现哮喘合并感染典型改变,组织充血水肿,分泌物显著增多;气道周围炎性细胞浸润、胶原增生显著;与模型组比较,清肺口服液中剂量组BALF中EOS%明显降低,清肺口服液及利巴韦林干预均可显著改善气道高反应性(P<0.05),其中中剂量清肺口服液效果尤为显著,气道功能与正常组相比差异无显著性,清肺口服液中剂量可以明显减轻小鼠肺组织充血水肿及炎性细胞浸润,气道分泌物及气道周围胶原增生较模型组明显改善。结论:中剂量清肺口服液可以明显减轻RSV感染哮喘急性发作小鼠肺组织炎症及气道高反应性。     

基于血浆代谢组学分析金欣口服液治疗小鼠RSV肺炎的作用机制

目的:通过GC-MS技术分析BALB/c小鼠血浆内源性代谢产物的相对含量变化,阐明金欣口服液治疗呼吸道合胞病毒(RSV)肺炎的作用机制。方法:RSV滴鼻感染BALB/c小鼠建立RSV肺炎模型,首次滴鼻2 h后予金欣口服液(剂量27.6 g·kg-1·d-1)灌胃治疗,连续滴鼻3 d后各组处死5只小鼠取肺组织行组织病理学检查,连续给药7 d后采集各组小鼠的血浆,运用GC-MS检测(m/z 50~500)血浆内源性代谢物及其相对含量的变化,分析其可能参与的代谢通路。结果:RSV肺炎小鼠的血浆中共测得32种内源性代谢产物,其中乳酸、尿素、谷氨酰胺、葡萄糖、花生四烯酸和1,5-脱水山梨醇为差异代谢产物,主要与花生四烯酸、谷氨酰胺、丙酮酸的代谢通路有关。结论:金欣口服液治疗RSV肺炎可能与调节RSV感染导致的代谢紊乱相关。     

金欣口服液对感染RSV大鼠血清IL-6、IL-8的影响

目的：观察金欣口服液对感染呼吸道合胞病毒（RSV）大鼠血清中IL-6、IL-8的影响。方法：将56只SD大鼠随机分为7组,分别为正常组,模型组,金欣高、中、低剂量治疗组,预先给药组,利巴韦林治疗组。用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定各组SD大鼠血清中IL-6、IL-8的水平。结果：大鼠感染RSV后血清中IL-6、IL-8水平均高于正常组（P〈0．05）,金欣治疗组及利巴韦林组干预后IL-6、IL-8水平显著降低（P〈0．01）;与利巴韦林组相比,金欣高剂量组、预先给药组的IL-6的水平明显降低（P〈0．01）;预先给药组中,血清IL-6的水平低于中、低剂量组（P〈0．01）,而IL-8水平比高、中、低剂量组均显著降低（P〈0．01）。结论：金欣口服液能降低两者的水平,且以预先给药方式更为有效,推测可以预防和治疗感染RSV的大鼠。     

截哮口服液对呼吸道合胞病毒的抑制作用研究

目的:观察截哮口服液对呼吸道合胞病毒复制的抑制作用。方法:将呼吸道合胞病毒接种于Hela细胞单层增殖,测定截哮口服液对细胞最低无毒浓度。取不同浓度的药液加入病毒,观察在细胞单层上的空斑形成以判定病毒产量。结果:截哮口服液使呼吸道合胞病毒产量减少,药物浓度的高低与病毒产量的高低呈明显的负相关(rs=-1,P<0.05);其对RSV有直接灭活作用,且能影响病毒的吸附与吸附后的复制过程。结论:截哮口服液在Hela细胞中对呼吸道合胞病毒的复制有抑制作用。     

截哮口服液对呼吸道合胞病毒的抑制作用研究

目的：观察截哮口服液对呼吸道合胞病毒复制的抑制作用.方法：将呼吸道合胞病毒接种于Hela细胞单层增殖,测定截哮口服液对细胞最低无毒浓度.取不同浓度的药液加入病毒,观察在细胞单层上的空斑形成以判定病毒产量.结果：截哮口服液使呼吸道合胞病毒产量减少,药物浓度的高低与病毒产量的高低呈明显的负相关（rs=-1,P＜0.05）;其对RSV有直接灭活作用,且能影响病毒的吸附与吸附后的复制过程.结论：截哮口服液在Hela细胞中对呼吸道合胞病毒的复制有抑制作用.     

呼吸道合胞病毒感染诱发哮喘大鼠模型的建立与评价

目的:探讨用呼吸道合胞病毒(RSV)诱导鸡卵白蛋白(OVA)致敏,建立病毒感染哮喘大鼠模型的方法,并评价其效果。方法:40只SD大鼠随机分为磷酸盐缓冲液(PBS)对照组、OVA组、RSV组、和OVA/RSV组4组。应用OVA腹腔注射致敏、OVA气道雾化吸入结合RSV滴鼻激发复制病毒性哮喘模型,PBS组不造模。观察大鼠哮喘发作症状;动物体描箱法测定乙酰甲胆碱(Mch)激发条件下气道反应性(以Penh值表示);H.E染色观察肺组织病理变化,以地高辛多标记点原位杂交检测肺组织中RSV RNA。结果:RSV组和OVA/RSV组肺组织中可见明显的RSV的阳性信号(棕黄色),PBS组、OVA组则未见RSV的阳性信号。与PBS组相比,除在浓度为0mg/ml(PBS)时OVA组无显著性差异(P>0.05),余各组在各浓度Penh值均增高(P<0.05,P<0.01);与OVA/RSV组相比,各组Penh值均降低(P<0.05,P<0.01)。结论:运用OVA致敏、激发,以RSV连续滴鼻的方法制备大鼠病毒性哮喘模型,病理生理特征更符合哮喘定义;且用有活力的RSV感染诱发的哮喘与临床病毒性哮喘的实际发病情况相近,该模型的建立可以为哮喘研究提供更好的选择工具。