老龄肾阳虚证的差异表达基因谱分析

目的 采用基因表达谱芯片技术,分析老龄肾阳虚证的发生与基因表达异常间的联系.方法 筛选肾阳虚证患者3名和正常对照者3名,采用美国Affymetrix公司的HG-u133Plus 2.0基因表达谱芯片,通过组间比较,筛选出老龄肾阳虚患者差异表达基因.结果 芯片数据组间比较分析后获得34条差异表达基因,聚类分析得到6条有特征性地差异表达基因,主要涉及细胞周期和凋亡,肿瘤发生以及免疫.结论 老龄肾阳虚证的发生涉及一系列免疫紊乱的复杂的过程,可能与个体的衰老存在密切关联.     

老龄冠心病心肾阳虚证的差异表达基因谱分析

目的:采用双通道基因表达谱芯片技术,分析老龄冠心病心肾阳虚证基因表达水平的异常。方法:采用病证结合的诊断标准,筛选老龄冠心病心肾阳虚证患者6名和同龄健康对照者6名,采血,分离白细胞,提取总RNA,做基因芯片检测。结果:经Microsoft excel和Microsoft office Access软件筛选,老龄冠心病心肾阳虚证与健康对照者比较,获得44条差异表达基因,主要涉及脂代谢、免疫、心血管病变的基因。结论:老龄冠心病心肾阳虚证的发生涉及一系列免疫和脂代谢紊乱的复杂的过程,与动脉硬化存在密切关联。     

右归丸调控老龄肾阳虚免疫相关基因表达水平的研究

目的:研究右归丸对老龄肾阳虚体质干预前后其免疫相关基因定量表达水平的差异,探讨右归丸调控的分子靶向。方法:基于课题组前期获得的老龄肾阳虚证差异基因表达谱,筛选免疫相关差异表达基因28条。纳入老龄肾阳虚体质者,给予右归丸治疗28 d,以肾阳虚半定量诊断标准进行疗效评价,采用RT-PCR技术检测右归丸对老龄肾阳虚干预前后28条免疫相关基因的定量表达水平差异。结果:28条免疫相关基因经右归丸干预前后有7条基因存在表达水平差异。结论:经PCR验证的老龄肾阳虚免疫相关差异表达基因集中反映了肾阳亏虚对免疫系统功能的影响,提示肾阳虚体质与肿瘤发生可能存在某种关联机制。     

肾阳虚证免疫功能相关基因筛选及其表达分析

目的以基因芯片技术从基因表达角度分析肾阳虚证与免疫功能的关联性。方法筛选出符合中医肾阳虚证诊断标准的患者4例,健康对照4例,提取mRNA,经标记、杂交、清洗、芯片扫描、图像的采集与数据分析等过程,获得基因表达数据,通过SAM芯片数据分析软件筛选肾阳虚证显著表达基因。结果筛选到70条显著表达基因,其中与免疫相关的有18条。结论肾阳虚证患者存在免疫功能异常,免疫功能基因的异常表达是肾阳虚证发生的分子基础之一。     

基因芯片技术研究针灸对肾阳虚证骨关节炎患者免疫相关基因表达的影响

目的:探讨针灸对肾阳虚证骨关节炎患者免疫相关基因表达的影响。方法:用基因芯片技术检测肾阳虚证骨关节炎患者及正常人的基因表达谱,以及针灸治疗显效者的治疗前后基因表达谱的变化。结果:通过基因表达谱芯片筛选出与肾阳虚骨关节炎免疫相关的基因13条,肾阳虚骨关节炎患者与正常人相比表达下调4条,上调5条。经温针治疗显效的4例患者治疗前后的基因芯片比较结果显示:NM000265、NM001838基因普遍上调,NM_001784基因普遍下调,其他基因表达无规律性变化。结论:肾阳虚证骨关节炎的发生涉及免疫相关基因表达的异常,针灸可能通过诱导或阻遏这些基因的表达发挥效应。     

应用基因表达谱芯片技术筛选老龄肾阳虚证特征功能类基因

目的:利用基因芯片技术探讨肾阳虚证发生的特征功能基因集。方法:在老龄肾阳虚证流行病学调查过程中,筛选出典型肾阳虚证患者2例和正常对照2例,采用美国Affymetrix公司的HG-u133Plus2.0基因表达谱芯片,按一步法抽提总RNA,分离纯化两种样品的mRNA,经逆转录合成掺入生物素标记的cDNA合成探针,与芯片杂交和严格洗片后,用荧光扫描仪扫描芯片荧光信号图像,获得肾阳虚患者差异表达基因。结果:两例患者和正常人比较获得680和503条差异表达基因,通过g:GOSt基因芯片数据分析平台进行基因功能分类,发现免疫反应功能类基因出现显著性。结论:肾阳虚证的发生与免疫反应功能类基因的异常表达密切相关。     

温针个案的分子药效学分析

目的　采用基因芯片技术研究温针对肾阳虚证骨关节炎患者基因表达的影响 ,探讨温针治疗肾阳虚证骨关节炎的分子机制。方法　以 4 0项肾阳虚辨证因子量表为评定标准 ,筛选出 8例符合西医骨关节炎诊断标准和中医肾阳虚证诊断标准的典型肾阳虚证患者 ,给予温针治疗 15d ,选取疗效最好的 4例提取mRNA作基因芯片分析 ,本文仅选择其中 1例。结果　治疗后患者疼痛积分由 14分降至 1分 ,骨关节炎病情严重指数由 19分降至 1分 ,肾阳虚积分由 2 0分降至 6分 ,虚寒积分由 2 6分降至 9分。获得表达差异的基因 2 4 6条 ,已知功能的 12 6条 ,分别涉及免疫、代谢、细胞骨架及运动等多种相关基因。结论　温针通过影响多种相关基因的表达而达到治疗的效果。     

骨关节炎肾阳虚证信号转导差异表达基因分析

目的:以基因芯片技术从差异基因表达角度分析骨关节炎肾阳虚证与信号转导相关差异表达基因。方法:先后筛选出符合西医膝骨关节炎和中医肾阳虚证诊断标准的患者两组,每组8例,与8例正常对照组比较。两组病人均取血、提取mRNA,经标记、杂交、清洗、芯片扫描、图像的采集与数据分析等过程,分别混合与对照组杂交作两张基因芯片,最后对数据进行信息挖掘。结果:两张芯片各获得162和75条差异表达基因,其中与信号转导相关的分别为26条和11条;两张芯片共同差异表达基因6条,与信号相关的有3条,占总数的1/2。提示:信号转导是生命活动的一种最基本和最重要的方式。细胞间信号转导异常可能在肾阳虚证骨关节炎的发生、发展过程中起着重要作用。     

右归丸对围绝经期综合征/肾阳虚证基因表达谱的影响

目的:研究右归丸对围绝经期综合征肾阳虚证基因表达谱治疗前后的异同。方法:以围绝经期综合征肾阳虚证患者为对象,服用右归丸一个月,应用基因芯片技术,分析治疗前后围绝经期综合征肾阳虚证基因表达谱;结合SAM软件对差异表达基因进行筛选并分析。结果:经核酸定量分析仪检测,6例患者RNA的OD260/OD280比值在1.90~1.98,经琼脂糖凝胶电泳检测,28s和18 s条带清晰,28 s条带约是18 s条带的2倍,说明RNA完整性较好;治疗前后基因表达谱存在明显的差异,表达有差异的基因共81条,ratio值≤0.5的基因62条;ratio值≥2的基因19条,下调基因大于70%,获得基因主要是与免疫应答、代谢通路、信号通路、氧化应激、细胞因子相关基因等,差异表达基因的信号值区为治疗前与治疗后两大类,说明与临床治疗结果符合。结论:围绝经期综合征肾阳虚证患者通过右归丸治疗后,下调基因超过70%,且主要与多种代谢途径密切相关。     

肾阳虚骨关节炎个案与13个免疫基因的初步研究 --辨证论治的个体化医学及分子疗效评定方法探试

目的 :观察温针治疗肾阳虚骨关节炎典型病例的疗效 ,通过基因芯片前沿方法研究该疗效的差异表达基因。从而探索辨证论治的个体化医学治疗效果及分子疗效评定的新方法。方法 :对 10例典型肾阳虚关节炎患者 ,辨证评分 ,然后施以温针灸治疗后精选疗效最好者。对其治疗前、后分别采血 ,提取mRNA ,经标记、杂交、清洗、芯片扫描、图象采集与数据分析等过程获得差异基因表达谱。结果 :在 10例肾阳虚关节炎治疗有显著性的背景上 ,所选 1例患者的肾阳虚证、疼痛分分别减少 2 6分、12分 ,基因芯片检测该患者治疗前、后血液获得有表达差异的基因 5 7条 ,其中已知功能的基因有 3 3条 ,与免疫相关有 13条 ,约占整个已知功能基因的 3 6 4%。结论 :温针治疗肾阳虚证有效病例的基因表达涉及广泛 ,其分子机理包括免疫、能量、疾病、肿瘤等多个方面 ,但以免疫方面最为突出。同时也可由肾阳虚证的分子生物学基础 ,来探讨辨证论治的个体化医学疗效及其评价方法     

运用基因芯片技术分析老龄肾阳虚证与Wnt/β-catenin信号通路的相关性

目的：采用基因表达谱芯片技术,分析老龄肾阳虚证的发生与Wnt/β-catenin信号通路上基因表达异常间的联系。方法：筛选肾阳虚证患者3名和正常对照者3名,采用美国Affymetrix公司的HG-u33Plus2.0基因表达谱芯片,比较两组间在Wnt/β-catenin信号通路上的差异表达基因。结果：芯片数据组间比较后在Wnt/β-catenin信号通路上获得5条差异表达基因。讨论：老龄肾阳虚证的发生与Wnt/β-catenin信号通路的调控紊乱之间有必然联系,衰老机制可能是这一联系的关键。     

慢性再生障碍性贫血中医辨证分型与MHC-DRB1*等位基因的相关性研究

目的:探讨慢性再生障碍性贫血中医辨证与MHC-DRB1等位基因多态性之间的关系.方法:采用聚合酶链式反应/序列特异性引物的技术方法,对慢性再生障碍性贫血(CAA)患者和对照组的MHC-DRB1各等位基因进行检测和分析.结果:肾阳虚型组患者MHC-DRB10301基因频率明显高于健康对照组,两组差异有非常显著性(P＜0.01).MHC-DRB1各等位基因未见与CAA肾阴虚型相关.结论:MHC-DRB10301基因可能是CAA肾阳虚型的易感基因,或者也可能是CAA的易感基因或其一部分,表明该型患者的免疫调控缺陷遗传基础的存在.MHC与CAA的先天体质疾病类型之间有一定的内在联系,能在一定程度上反映中医体质的遗传特征和CAA中医辨证的客观性.     

Hsa-miR-3074在肾阳虚证中的表达差异性研究

目的探讨miR-3074-3p的表达对肾阳虚证发生的影响。方法采集14例肾阳虚证患者和10例健康者外周静脉血,取其白细胞,使用TRIzol法提取RNA并进行质量检测。将该样本的总RNA逆转录合成cDNA,通过实时定量PCR检测,分析miR-3074-3P的相对表达量。结果miR-3074-3p在肾阳虚证组中相对于健康对照组表达上调。结论miR-3074-3p在肾阳虚证患者基因表达中相对于健康人上调明显,其作用机制需进一步研究证实。     

慢性再生障碍性贫血中医证型与经络能量指数的相关性

目的 :探讨慢性再生障碍性贫血(CAA)的中医证型与人体十二经原穴的能量指数关系,为临床疗效评价提供一种中医量化指标。方法:收集符合中医辨证分型诊断标准的肾阳虚组和肾阴虚组各30例,另随机选取30例健康者作为对照。采用中医智能经络检测仪分别对CAA患者及对照组进行能量指数测定。结果:肾阴虚组与肾阳虚组的阴/阳、上/下、左/右、体能分别与对照组比较,差异具有统计学意义(P0.05);肾阳虚组与肾阴虚之间的阴/阳、上/下、左/右比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:经络检测仪可对CAA患者脏腑功能状态进行量化分析,获得的数据可以作为辨证依据用于临床辨证分析,为CAA的证治提供了一种新的思路。     

Ⅲ~Ⅳ期糖尿病肾病不同中医证型的血清蛋白组学研究

目的:探索Ⅲ~Ⅳ期糖尿病肾病(DN)患者血清差异蛋白,同时筛选不同中医证型的血清差异蛋白。方法:收集Ⅲ~Ⅳ期DN患者70例(气阴两虚证19例,脾肾气虚证18例,血瘀证16例,湿热证17例),同时选择健康受试者35例(健康对照组),应用表面加强激光解吸电离-飞行时间-质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测各组血清蛋白指纹图谱,并对差异蛋白峰进行对比分析。结果:1) DN组与健康对照组之间共有9个蛋白峰存在显著差异,质荷比(M/Z)分别为2042.57、3291.28、4986.15、5312.69、5564.09、9861.47、10786.53、13392.89、17395.27;2)气阴两虚证与脾肾气虚证之间共有4个蛋白峰存在显著差异,M/Z分别为2994.77、4986.15、7937.25、2758.91;3)气阴两虚证与血瘀证之间共有4个蛋白峰存在显著差异,M/Z分别为4986.15、16982.62、6819.69、9947.36;4)气阴两虚证与湿热证之间共有3个蛋白峰存在显著差异,M/Z分别为4986.15、11741.33、7001.54;5)脾肾气虚证与血瘀证之间共有3个蛋白峰存在显著差异,M/Z分别为3448.22、8063.43、9787.21;6)脾肾气虚证与湿热证之间共有5个蛋白峰存在显著差异,M/Z分别为2144.34、3992.01、8871.35、10568.32、14643.47;7)血瘀证与湿热证之间共有6个蛋白峰存在显著差异,M/Z分别为4233.15、5771.32、5987.18、8496.76、6651.25、13551.94。结论:Ⅲ~Ⅳ期DN组与健康对照组血清蛋白表达存在差异,该差异或可作为相关临床诊断的标志物,对探索DN的发病机制具有重要的参考价值;在不同中医证型之间能够找到差异血清蛋白,可能反映"证"的实质内涵,对今后建立诊断决策模型具有积极意义。     

益气活血解毒方治疗晚期上皮性卵巢癌疗效相关靶基因筛选

目的采用mRNA芯片探究益气活血解毒方维持治疗晚期上皮性卵巢癌(AEOC)气虚血瘀证疗效相关基因靶点,明确其有效作用机制。方法观察AEOC气虚血瘀证患者服用益气活血解毒方维持治疗后的无进展生存期(PFS),选取PFS最长的8例为敏感组,PFS最短的8例为不敏感组。采用mRNA芯片检测2组患者治疗后血液mRNA表达情况,并对差异表达基因进行GO、KEGG、singal-net、path-net生物信息学分析,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证。结果益气活血解毒方疗效相关差异表达基因共1157个(P<0.05),其中上调基因497个,下调基因660个。qRT-PCR显示,MAPK3、HLA-DOA、CD40、KIR2DL3差异表达有统计学意义(P<0.05)。结论益气活血解毒方治疗AEOC气虚血瘀证患者的疗效机制可能在于抑制MAPK3及与免疫通路相关的HLA-DOA、CD40、KIR2DL3靶基因。通过对益气活血解毒方作用靶基因的探究,可为AEOC气虚血瘀证微观辨证及中医精准治疗提供依据。     

基于GC-TOF-MS结合代谢组学分析阳虚证缺血性脑卒中生物标志物的研究

目的:运用气相色谱-飞行时间质谱联用技术(GC-TOF-MS)结合代谢组学方法探究缺血性脑卒中阳虚证患者与健康平和质人群血清中的代谢产物差异,总结缺血性卒中阳虚证相关生物标志物特点,从而进一步揭示疾病的发生机制.方法:将10例缺血性脑卒中阳虚证患者作为观察组,10例中医体质为平和质的健康者作为对照组.应用GC-TOF-...