原发性肝癌患者外周血中AFPmRNA检测的临床意义

通过定量检测AFPmRNA在原发性肝癌（PHC）患者外周血中的表达,探讨AFPmRNA作为PHC患者早期诊断和微转移指标的可能性。建立荧光定量聚合酶链式反应（FQ-PCR）,检测58例外周血AFPmRNA的表达量。其中,30例PHC患者中19例AFP≥20ng/m l,23例外周血中AFPmRNA有表达;肝癌患者外周血中AFPmRNA的基因拷贝数与肝癌患者有肝内外转移有明显相关,而肝炎及健康对照组外周血中AFPmRNA均未表达,肝硬化组有一例表达。应用荧光定量PCR检测PHC外周血中AFPmRNA表达情况,可以作为早期反映PHC患者外周血中是否存在肝癌细胞和发生微转移的早期灵敏指标。     

实时荧光定量PCR技术检测食管鳞癌c-myc mRNA的表达

目的 探讨c-myc mRNA表达与食管鳞癌发病的关系.方法 采用实时荧光定量PCR法检测24例食管鳞癌患者食管鳞癌组织和正常食管鳞状上皮组织、癌旁食管鳞状上皮组织中c-myc mRNA的表达.结果 食管鳞癌组织与癌旁食管鳞状上皮组织c-myc基因的表达量相近,二者均明显高于正常食管鳞状上皮组织(P<0.05).结论 c-myc基因在食管鳞状上皮癌变过程的早期阶段起重要作用.     

原发性肝癌患者外周血甲胎蛋白mRNA表达水平及其意义

甲胎蛋白（AFP）是肝癌发生、发展过程中表达的蛋白质,长期以来被认为是标志性蛋白而用于肝癌的早期诊断;但灵敏度和特异性均不够理想,尤其是它不能反映肝癌有无转移,而及早发现微小病灶对于原发性肝癌（PHC）患者治疗具有重要意义。近年来国外研究者用高敏感的反转录聚合酶链反应（RT—PCR）技术在肿瘤患者的循环血液中查找癌细胞,用于早期发现PHC患者外周血中是否存在肝癌细胞。这对于肝癌的早期诊断、预防及治疗有着重要的指导意义。     

外周血甲胎蛋白mRNA定量与裸鼠肝癌术后复发转移的关系

目的 研究外周血中胎蛋白信使核糖核酸(AFP mRNA)水平与原发性肝癌根治性切除术后复发转移的关系。方法 裸鼠肝内原位接种裸鼠人肝癌转移模型LCI-D20肿瘤组织,接种后第10天切除移植瘤,切除后第2天用不同剂量干扰素α-1b(IFNα-1b )治疗,治疗35 d后取外周血1 ml,用TaqMan实时定量逆转录－聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测AFP mRNA水平,同时观察肿瘤复发转移情况。结果 对照组裸鼠术后肝内复发率和肺转移率均为100%(12/12),外周血AFP mRNA阳性率为100%。小剂量IFNα-1b治疗组肝内复发率62.5%(5/8),复发瘤体积小于对照组(25 mm~3±2mm~3对1143mm~3±3mm~3,t=9.27,P＜0.01),无肺转移,外周血AFP mRNA阳性率87.5%(7/8),水平低于对照组[(85±6)copies/μg对(955±2)copies/μg,t＝4.33,P＜0.01)。大剂量IFNα-1b治疗组肝内复发率为12.5%(1/8),体积仅0.5mm~,无肺转移,外周血AFP mRNA均阴性(x~2=11.67,P＜0.01)。结论 外周血AFP mRNA可作反映肝癌复发转移的敏感指标,TaqMan实时定量RT-PCR技术检测循环血肝癌细胞灵敏、简便、精确度高。     

外周血有核细胞甲胎蛋白mRNA和白蛋白 mRNA联合分析对肝癌诊断的临床价值

目前 ,肝细胞癌 (ＨＣＣ)患者行部分肝切除和肝移植术后残余肝和移植肝的复发率仍相当高 ,其原因主要与术前未能检出微转移灶及 (或 )术中肝癌细胞释放入血有关。因而 ,如能在术前发现外周血或肝外组织中的微转移灶 ,将有助于选择治疗方法 ,降低术后复发率 ,提高生存率[1] 。我们以分子生物学方法 ,检测肝病患者外周血中白蛋白 (Ａｌｂ)ｍＲＮＡ和甲胎蛋白 (ＡＦＰ)ｍＲＮＡ ,分析它们在肝癌诊断及转移早期判断中的临床价值。一、材料与方法1.研究对象 :从南通医学院附属医院和第二医院的住院患者中收集急性肝炎 12例、慢性肝炎 2 0例、肝硬…     

实时荧光定量PCR技术检测肺炎衣原体的诊断价值

目的探讨实时荧光定量PCR技术检测肺炎衣原体的诊断价值。方法对呼吸道感染的186例患者的痰液分别采用实时荧光定量PCR技术和基因测序检测,以评价实时荧光定量PCR技术检测肺炎衣原体感染的准确性。结果实时荧光定量PCR检测肺炎衣原体的灵敏度为100.0%,特异度为93.1%,阳性预期值为80.8%,阴性预期值为100.0%,准确率为94.6%。结论实时荧光定量PCR技术检测肺炎衣原体具有较高的可靠性,适用于临床快速诊断肺炎衣原体感染的相关疾病。     

KLK4 mRNA实时荧光定量检测方法研究

应用SYBR Green I作荧光染料,利用磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）作内对照,建立KLK4mRNA的实时荧光定量（FQ—PCR）检测方法。结果建立的FQ—PCR方法扩增GAPDH和KLK4mRNA的效率分别为0．98和0．96;检测GAPDH和KLK4的批内变异系数（CV）分别为0．8％和1．6％,批间CV分别为3．9oA和2．4％;基因扩增产物DNA序列分析及熔解曲线分析表明该方法特异可靠。认为本研究建立的FQ—PCR检测方法简便、特异、重复性好、可信度高,可为KLK4基因表达水平的研究提供基础。     

不同实时荧光定量PCR仪对外周血中EB病毒DNA检测结果的影响

目的:应用同一种商品化EB病毒核酸定量检测试剂盒在2款实时荧光定量PCR仪同时检测外周血标本中EB病毒载量,探讨不同类型的实时荧光PCR仪对EBV DNA定性和定量检测结果的影响.方法:提取179例外周血标本(包括102例全血和77例血浆)的DNA后,应用EB病毒核酸定量检测试剂盒(PCR-荧光探针法)分别在2款实时荧...     

实时荧光定量PCR检测恙虫病东方体

目的建立检测恙虫病东方体的实时荧光定量PCR(quantitative real-ti me PCR)方法。方法根据恙虫病东方体56kD外膜蛋白基因序列设计引物和探针,以克隆的56kD基因片段作DNA模板,建立实时荧光定量PCR检测方法。结果建立的荧光定量PCR标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系(r=0.999)。荧光定量PCR检测恙虫病东方体的灵敏度约为套式PCR的100倍,并且具有良好的重复性。用该定量PCR检测其它相关立克次体和病原菌DNA样本,检出结果均为0。用该定量PCR检测恙虫病东方体实验感染小鼠的血、脾脏、肺脏、肝脏标本,结果脾脏中东方体出现最早和检出量最多,肝脏和肺脏次之。血中的恙虫病东方体量较低。结论本研究建立的荧光定量PCR方法具有很高的特异性和敏感性,可用于东方体感染早期血样本的快速检测作恙虫病感染早期诊断,并且可以定量分析评价恙虫病东方体感染的程度。     

实时荧光定量PCR检测IL-8mRNA在大肠癌的表达

目的:探讨大肠癌组织IL-8 mRNA表达及其临床意义.方法:用实时荧光定量PCR检测56例大肠癌组织及癌旁正常组织IL-8 mRNA表达,分析IL-8mRNA表达与大肠癌临床病理因素之间的关系.结果:癌组织和癌旁正常组织IL-8 mRNA表达有显著差异(1.106±0.420 vs 0.792±0.374,P＜0.05).癌组织IL-8 mRNA表达与淋巴结转移、组织学类型、血管侵犯、肝转移及肿瘤病理分期密切相关,与肿瘤部位、肿瘤大小、及患者的性别和年龄等无关.结论:IL-8高表达同大肠癌生物学行为密切相关,可能与大肠癌的发生、发展及预后有关.     

实时荧光定量RT-PCR检测结直肠癌中ERCC1 mRNA的表达及其临床意义

目的传统的影像学检查及肿瘤标志物检测对结直肠癌微转移的诊断价值有限。本研究旨在探讨ERCC1 mRNA在结直肠癌患者外周血中的表达情况及其临床意义。方法用实时定量荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,对53例结直肠癌患者和21名健康人的外周血标本进行ERCC1 mRNA检测,分析其表达与肿瘤临床病理特征的关系并应用接受者操作特征曲线(ROC曲线)分析ERCC1 mRNA检测对结直肠癌的诊断价值。结果结直肠癌组外周血ERCC1 mRNA表达水平显著高于正常对照组(P<0.05),其表达与肿瘤淋巴结转移、血行转移和TNM分期相关(P<0.05)。ERCC1 mRNA诊断结直肠癌的ROC曲线下面积0.89,诊断界值为Ct≤32。结论实时定量荧光RT-PCR检测ERCC1 mRNA可以更好地评估结直肠癌血道微转移,有利于判断预后。     

冠心病患者外周血单个核细胞HCMV-DNA的荧光定量PCR检测

目的了解冠心病(CHD)患者外周血单个核细胞(PBMCs)人巨细胞病毒(HCMV)-DNA存在情况并探讨其临床意义。方法应用实时荧光定量PCR(real time FQ-PCR)方法,对62例CHD患者,29例其他心血管疾病患者和30例健康体检者的PBMCs内HCMV-DNA进行定量检测。结果 CHD患者PBMCs的HCMV-DNA检出率41.9%,其他心血管疾病组10.3%,正常对照组10.0%,差异有统计学意义(P<0.05)。CHD组HCMV-DNA载量介于103~105拷贝/ml者为12例,占阳性例数的46.1%(12/26),介于105~106拷贝/ml者为8例,占阳性例数的30.7%(8/26)。结论 CHD患者PBMCs的HCMV感染可能在其致动脉粥样硬化性发病过程中发挥重要作用。     

实时荧光定量PCR在登革热病毒快速检测中的应用

目的应用实时荧光定量PCR快速检测登革热病毒感染。方法采集疑似登革热患者血清,采用实时荧光定量PCR检测登革热病毒,同时采用ELISA检测血清登革热IgM抗体。结果患者发病第7d血清登革热IgM血清抗体A值为0.236和0.237(临界值0.250),高度疑似阳性,第13d血清IgM抗体阳性。患者发病第2d,通用型核酸检测显示血清登革热病毒核酸含量较多,经过治疗,于第7d病毒拷贝下降。发病第2d,核酸检测确定感染病毒为登革热Ⅲ型;发病第13d血清登革Ⅲ型病毒核酸检测阴性。结论实时荧光定量PCR法具有准确性好、灵敏度高等优点,可用于登革热病毒感染的快速检测。     

液滴式数字PCR与实时荧光定量PCR检测利什曼原虫的方法比较

目的 建立内脏利什曼病液滴式数字PCR检测方法,将其与同时建立的实时荧光定量PCR检测方法进行方法学比较,探究其在内脏利什曼病诊断方面的价值。方法 以杜氏利什曼原虫小环动基体DNA(kinetoplast DNA,kDNA)为分子靶标,根据其约200 bp的保守片段设计引物和探针,建立内脏利什曼病液滴式数字PCR检测方法,比较其与实时荧光定量PCR检测方法的检测限、精密度以及在不同利什曼原虫虫株中的检测效果。结果 液滴式数字PCR检测下限与实时荧光定量PCR检测下限相同,约为1.0×10 copies/μL;随待测样本浓度的降低(1.0×10⁴ copies/μL～1.0×10 copies/μL),液滴式数字PCR检测方法变异系数呈增大趋势(12.07%～62.96%),重复性越差;实时荧光定量PCR变异系数较小(2.96%～4.26%),且不同浓度之间的变异系数差别不大。2种方法在不同利什曼原虫中的检测灵敏度不同。结论 和实时荧光定量PCR相比,液滴式数字PCR在利什曼原虫检测中的灵敏度和重复性没有表现出显著的优势,后续还需更多的研究从分子靶标的选择、灵敏度、...     

实时荧光定量RT-PCR检测结直肠癌中外周血端粒酶逆转录酶mRNA的表达及其临床意义

目的:建立外周血端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA表达量检测的实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)系统,检测结直肠癌患者hTERT mRNA的表达并探讨其对结直肠癌微转移的诊断价值.方法:用实时荧光定量RT-PCR技术检测53例结直肠癌患者和21名健康人的外周血标本hTERT mRNA表达情况,分析其表达与肿瘤临床病理特征的关系并应用接受者操作特征曲线(ROC曲线)分析hTERT mRNA检测对结直肠癌的诊断价值.结果:结直肠癌组外周血hTERT mRNA表达水平显著高于正常对照组(t1=7.953,P＜0.05).其表达与肿瘤淋巴结转移、血行转移和TNM分期相关(t'/t=2.334,2.149,2.460,均P＜0.05)hTERT mRNA诊断结直肠癌的ROC曲线下面积0.91,诊断界值为Ct≤32.结论:应用实时荧光定量RT-PCR技术克服了传统PCR只能定性检测而不能定量检测的缺-点:外周血hTERT mRNA可作为诊断结直肠癌微转移的标记物.     

人类SUZ12基因实时荧光定量PCR检测方法的建立

目的:建立SYBR Green I实时荧光PCR定量检测人类SUZ12基因的方法.方法:将SUZ12 RT-PCR扩增片段克隆入载体pGEM-T后,经测序鉴定正确后,进行纯化和定量及系列稀释,应用SYBR Green I实时荧光定量PCR检测SUZ12,建立标准曲线,熔解曲线分析产物的特异性.结果:该法检测的最低拷贝数为14.2,线性范围为1.42×10~1-1.42×10~8拷贝,相关系数r为-1.00,1.42×10~7拷贝/L标本的批内变异系数(CV)和日间CV分别为1.8%和2.8%.熔解曲线分析显示单一的峰,熔解温度(melting temperature,Tm)为(81.37±0.16)℃.结论:实时荧光定量PCR方法检测SUZ12基因,快速有效、灵敏度高、特异性好.     

实时荧光定量PCR方法检测幼兔粪便双歧杆菌的实验研究

目的:应用实时荧光定量PCR技术对实验幼兔粪便内双歧杆菌进行定量分析．方法:依据双歧杆菌16S rDNA序列设计属特异性引物,以常规PCR产物经克隆后的质粒 DNA为标准品,经光谱定量、梯度稀释后制备标准曲线．抽提正常对照组和双歧杆菌喂饲组幼兔粪便内的细菌基因组DNA,用实时荧光定量PCR技术定量分析样品中双歧杆菌数量．结果:两组幼兔粪便内双歧杆菌测定结果均成阳性,双歧杆菌喂饲组0．05 g湿粪内菌量的对数值较对照组显著升高(6．37±0．58 vs 5．18 ±0．98,P=0．004)．结论:实时荧光定量PCR方法可正确定量实验兔粪便内双歧杆菌数量．     

实时荧光定量PCR检测人类EZH2基因方法的建立

目的:建立SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR定量检测人类EZH2基因的方法.方法:将EZH2 RT-PCR扩增片段克隆入载体pGEM-T后,经测序鉴定正确后,进行纯化和定量及系列稀释,应用SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测EZH2,建立标准曲线,熔解曲线分析产物的特异性.结果:该法检测的最低拷贝数为10,线性范围为101～108拷贝,相关系数r为-1.00,104copies/μl标本的批内变异系数(CV)和日间CV分别为1.0%和2.7%.熔解曲线分析显示单一的峰,熔解温度(Tm)为(83.42±0.13)℃.结论:实时荧光定量PCR方法检测EZH2基因,具有高敏感性、高特异性和高精确性等优点,可作为进一步研究EZH2的方法.     

荧光实时定量PCR方法在肺癌相关基因检测中的应用

目的研究实时定量荧光PCR在非小细胞肺癌患者肿瘤组织、正常组织及外周血中RRM1、ERCC1表达水平检测的应用价值。方法构建目的基因质粒标准品,运用PCR仪进行SYBR荧光实时定量分析,比较其表达水平。结果两者在外周血中表达水平与TNM分期、是否淋巴转移等有关;肿瘤组织和外周血中的表达具有一致性。结论荧光实时定量PCR具有良好的特异性和灵敏度,费用低,操作简便,可应用于临床检验工作。