p27kip1的过表达对肾癌细胞增殖及凋亡的影响

目的：研究外源性p27kip1基因对肾癌细胞周期、细胞凋亡及增殖的影响。方法：将含p27cDNA的质粒在脂质体介导下在体外转染肾癌GRC-1细胞．Western Blot、FCM及MTT检测分析外源性p27kip1蛋白在细胞内的表达．观察其对细胞周期、凋亡及细胞增殖的影响结果：体外转染GRC-1细胞48h后．p27蛋白在p27kip1转染后的GRC-1细胞中高表达。FCM检测表明．细胞停滞于G1期，实验组G1期细胞占66．9%．并出现亚G1凋亡峰：而空白对照组和转染空载体组G1期细胞分别为32.2%和33.8%。MTT法检测表明．转染p27cDNA后，实验组细胞增殖明显受抑。结论：p27kip1基因在体外转染GRC-1细胞并过表达p27kip1蛋白，抑制细胞由G1期向S期过渡．从而抑制细胞增殖．诱导细胞凋亡。     

p27kip1的过表达对肾癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究外源性 p27kip1 基因对肾癌细胞周期、细胞凋亡及增殖的影响。方法:将含p27cDNA的质粒在脂质体介导下在体外转染肾癌GRC 1细胞,Western Blot、FCM及MTT检测分析外源性 p27kip1 蛋白在细胞内的表达,观察其对细胞周期、凋亡及细胞增殖的影响。结果:体外转染 GRC 1 细胞 48 h 后, p27 蛋白在p27kip1转染后的 GRC 1 细胞中高表达。FCM检测表明,细胞停滞于 G1 期,实验组 G1 期细胞占66 9%,并出现亚G1 凋亡峰;而空白对照组和转染空载体组 G1 期细胞分别为 32 2% 和33 8%。MTT 法检测表明,转染 p27cDNA 后,实验组细胞增殖明显受抑。结论: p27kip1 基因在体外转染GRC 1细胞并过表达p27kip1蛋白,抑制细胞由G1 期向 S期过渡,从而抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

基因芯片技术检测乳腺癌多柔比星耐药相关基因

目的:探讨基因表达谱差异与乳腺癌化疗耐药之间相关性.方法:选择人乳腺癌多柔比星耐药细胞株MCF-7/ADM与其亲本细胞株MCF-7为研究对象.应用MTT法检测并比较化疗药物ADM对乳腺癌细胞株的体外抑制率,应用含14755个基因的人cDNA芯片检测多柔比星耐药细胞株MCF-7/ADM与其亲本细胞株MCF-7基因表达谱的变化.结果:经MTT快速比色法检测,MCF-7/ADM较MCF-7对多柔比星耐药性明显增强,耐药指数为33.67.通过cDNA芯片检测两乳腺癌细胞株基因表达谱,得到了乳腺癌多柔比星耐药细胞株与其亲本细胞株差异表达的基因,并初步筛选出在两个细胞株中,明显差异表达的基因2374个,其中1099个基因在多柔比星耐药细胞株中上调,1275个基因下调.这些基因涉及细胞凋亡、细胞骨架及信号传导、细胞增殖、分化及周期调控、基因转录和翻译以及细胞物质与能量代谢等多方面.上调基因主要为Bcl-2、GSTP1、c-myc、MMP-1和NNMT等,下调的基因主要是p53、p21、p27Kip1和CYPIA1等.结论:乳腺癌耐药是一个极其复杂并且不断变化的过程.这个过程涉及多种途径、多个基因,基因芯片技术可为筛选化疗药物敏感性相关基因提供全面、可靠的技术支持.     

丁酸钠对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞增殖及p27Kip1蛋白表达影响的研究

目的:通过观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histon-deacetylase inhibitors,HDACIs)丁酸钠(sodium butyrate,NaB)对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞的增殖影响以及p27Kip1蛋白表达改变,探讨NaB调控乳腺癌细胞增殖的分子机制.方法:乳腺癌MCF-7细胞经不同浓度NaB作用后,相差显微镜观察细胞形态变化和细胞增殖情况,流式细胞仪分析细胞周期分布,免疫组化检测p27Kip1蛋白表达.结果:NaB对MCF-7细胞有显著的增殖抑制作用,呈时间剂量依赖性,处理后的MCF-7细胞出现凋亡形态变化;细胞周期阻滞于G0/G1期,NaB 2 mmol/L组G0/G1期达(62.2±2.2)%,4 mmol/L组G0/G1期达(78.1±3.8)%,空白组G0/G1期达(53.1±2.4)%,P<0.05;p27蛋白表达水平上调.结论:NaB可抑制乳腺癌细胞的生长,该作用可能与p27蛋白表达增加有关.     

人p27kip1重组腺病毒载体的构建及其介导的p27kip1表达

目的　研究外源性p2 7kip1基因对细胞周期及细胞增殖的影响。方法　构建CMV启动子转录调控的含人p2 7kip1cDNA的E1区替代的腺病毒载体pAxlcw .CIhp2 7kip1,与经EcoT2 2 1酶切的Ad5腺病毒DNA -末端肽复合物共转染 2 93细胞 ,制备p2 7kip1重组腺病毒 ,在体外转染HeLa细胞 ,Westernblot、FACS及MTT检测分析外源性p2 7kip1蛋白在细胞内的表达 ,以及对细胞周期及细胞增殖的影响。结果　获得含人p2 7kip1cDNA的重组腺病毒 ,滴度为 1.7× 10 9pfu/ml。体外转染HeLa细胞2 4h后 ,p2 7kip1蛋白在p2 7kip1转染后的HeLa细胞中高表达 ;FACS检测表明 ,p2 7kip1和LacZ重组腺病毒转染后的HeLa细胞 ,经 10 %血清刺激后处于G1期的细胞分别为 89.93%和 5 9.84% ;MTT法检测表明 ,人p2 7kip1重组腺病毒转染后的HeLa细胞经 2 0 %血清刺激后 ,48及 72h的A值均低于LacZ重组腺病毒转染后的HeLa细胞 (P <0 .0 1)。结论　本研究中所制备的p2 7kip1重组腺病毒能有效介导外源性p2 7kip1基因在体外转染HeLa细胞并高表达p2 7kip1,抑制细胞由G1期向S期过渡 ,从而抑制细胞增殖 ,为进一步研究p2 7kip1基因治疗奠定了基础。     

丁酸钠对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞增殖及p27^kip1蛋白表达影响的研究

目的：通过观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂（histon—deacetylase inhibitors，HDACIs）丁酸钠（sodium butyrate，NaB）对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞的增殖影响以及p27^kip1蛋白表达改变，探讨NaB调控乳腺癌细胞增殖的分子机制。方法：乳腺癌MCF-7细胞经不同浓度NaB作用后，相差显微镜观察细胞形态变化和细胞增殖情况，流式细胞仪分析细胞周期分布，免疫组化检测p27^kip1蛋白表达。结果：NaB对MCF-7细胞有显著的增殖抑制作用，呈时间剂量依赖性，处理后的MCF-7细胞出现凋亡形态变化；细胞周期阻滞于（G0／G1期，NaB2 mmol／L组G0／G1，期达（62．2±2．2）％，4mmol／L组G0/G1，期达（78．1±3．8）％，空白组G0／C0期达（53．1±2．4）％，P〈0．05；p27蛋白表达水平上调。结论：NaB可抑制乳腺癌细胞的生长，该作用可能与p27蛋白表达增加有关。     

Trastuzumab联合丁酸钠对人乳腺癌细胞株SKBR3细胞增殖和p27Kip1表达的影响

目的:观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACIs)丁酸钠(NaB)及曲妥珠单抗Trastuzumab对人乳腺癌细胞株SKBR3细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡的影响,探讨NaB及Trastuzumab调控乳腺癌细胞增殖的分子机制.方法:乳腺癌SKBR3细胞经NaB、Trastuzumab单独或联合作用后,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪分析细胞周期分布及细胞凋亡,Western Blot方法检测p27Kip1的表达.结果:NaB单独用药显著抑制SKBR3细胞增殖,促进细胞G0/G1期阻滞,增加细胞凋亡和p27Kip1蛋白的表达,P<0.05;20 μg/mL Trastuzumab单独用药,对细胞有增殖抑制和细胞周期阻滞作用(P<0.05),但对细胞凋亡及p27Kip1蛋白表达无明显影响,P>0.05.Trastuzumab可协助NaB 增加对SKBR3的抗肿瘤作用及p27Kip1蛋白表达,P<0.05.结论:Trastuzumab联合NaB抑制乳腺癌细胞的增殖,促进细胞周期阻滞及细胞凋亡的发生,以上过程可能是通过增加p27Kip1的蛋白表达来实现.     

Trastuzumab联合丁酸钠对人乳腺癌细胞株SKBR3细胞增殖和p27~（Kip1）表达的影响

目的：观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂（HDACIs）丁酸钠（NaB）及曲妥珠单抗Trastuzumab对人乳腺癌细胞株SKBR3细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡的影响,探讨NaB及Trastuzumab调控乳腺癌细胞增殖的分子机制。方法：乳腺癌SKBR3细胞经NaB、Trastuzumab单独或联合作用后,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪分析细胞周期分布及细胞凋亡,Western Blot方法检测p27Kip1的表达。结果：NaB单独用药显著抑制SKBR3细胞增殖,促进细胞G0/G1期阻滞,增加细胞凋亡和p27Kip1蛋白的表达,P〈0.05;20μg/mL Trastuzumab单独用药,对细胞有增殖抑制和细胞周期阻滞作用（P〈0.05）,但对细胞凋亡及p27Kip1蛋白表达无明显影响,P〉0.05。Trastuzumab可协助NaB增加对SKBR3的抗肿瘤作用及p27Kip1蛋白表达,P〈0.05。结论：Trastuzumab联合NaB抑制乳腺癌细胞的增殖,促进细胞周期阻滞及细胞凋亡的发生,以上过程可能是通过增加p27Kip1的蛋白表达来实现。     

p21在乳腺癌化疗中对表柔比星的增敏性及其作用机制的研究

背景与目的:p21是一种重要的细胞周期负性调控因子,目前对其在乳腺癌化疗过程中的作用尚不明确.本课题旨在观察将p21基因转染乳腺癌细胞后,对表柔比星敏感性的改变,以探讨新的表柔比星耐药可能的机制.方法:构建表达载体pEGFP-p21,采用脂质体转染法转入乳腺癌细胞株MCF-7中,筛选稳定表达p21的克隆;应用实时荧光定量PCR法检测转染组细胞中p21 mRNA的表达,流式细胞术和Hoechst33342荧光染色法分析细胞周期分布和凋亡变化;应用MTT法检测p21基因转染前后MCF-7细胞对表柔比星敏感性的变化,实时荧光定量PCR法(real-time fluorogent quantitative PCR,RFQ-PCR)观察survivin mRNA水平的变化.结果:pEGFP-p21载体转染MCF-7细胞后,MCF-7细胞中p21 mRNA的表达量明显增高,是空白对照组的155倍;转染后的细胞被阻滞于G0/G1期,但实验组与空白对照组相比,凋亡率改变的差异无统计学意义(P>0.05);表柔比星与p21基因转染联合作用时,p21可促进表柔比星对MCF-7细胞的杀伤作用,且细胞的抑制随作用时间的增加而增强,同时伴有survivin mRNA表达的降低,与表柔比星单独作用相比,差异有统计学意义(P<0.05).结论:p21基因能增强MCF-7细胞对表柔比星的敏感性,其作用可能是通过使细胞周期发生G0/G1期阻滞及下调survivin的表达来实现的.     

ING4基因表达对乳腺癌细胞生长抑制作用的研究

目的：研究人ING4基因对乳腺癌细胞MCF-7的生长抑制作用。方法：通过实时荧光定量-PCR（real-time fluorogentic quantitative-PCR，RFQ-PCR）检测3种乳腺癌细胞株中ING4 mRNA的表达水平；ING4基因的表达质粒转染MCF-7细胞；MTT法和FCM法检测ING4基因对MCFM细胞增殖的影响；Annexin-V／PI双染法观察细胞凋亡情况；RT-PCR法分析转染／NG4后p53、p21及bax基因的转录表达情况。结果：在3种乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-435和MDA-MB-231中ING4的表达均明显低于正常乳腺组织。转染ING4表达载体的MCF-7细胞较对照组细胞生长速度减慢（P〈0．05）；细胞周期中G1期比例增加，S期比例减少；细胞凋亡率升高。p53的表达未见明显变化，而p21和bax表达显著上调。结论：ING4与乳腺癌的发生发展具有一定相关性；高表达ING4基因能够抑制人乳腺癌细胞MCF-7的生长。     

Expression of P27(KIP1) is prognostic and independent of MYCN amplification in human neuroblastoma

Amplification of the MYCN gene is significantly associated with an unfavorable prognosis and rapid progression in human neuroblastoma tumors. One potential mechanism by which MYCN may cause these effects is by deregulating cell proliferation. Tissue culture experiments support a model in which MYC genes stimulate cell cycle progression by antagonizing the function of the cell cycle inhibitor p27(kip1). In culture, activation of MYC induces both sequestration of p27(kip1) by cyclin D complexes and its subsequent proteolytic degradation. We have tested whether this model applies to human neuroblastoma in a retrospective study of 100 primary tumor biopsy samples from neuroblastoma patients with a documented follow-up. Consistent with this hypothesis, MYCN-amplified tumors express high levels of both cyclin A and proliferating cell nuclear antigen, 2 marker proteins of cell proliferation. Further, expression levels of p27(kip1) are of prognostic significance in human neuroblastoma patients. Similar to tissue culture systems, p27(kip1) is sequestered by cyclin D complexes in a subset of human neuroblastoma samples. Surprisingly, however, expression levels of p27(kip1) are prognostic independent of MYCN amplification, and tumors that have an amplified MYCN gene do not express elevated levels of D-type cyclins or contain significantly lower levels of p27(kip1). Our data do not support a model in which regulation of p27(kip1) function is an important mechanism by which amplified MYCN deregulates cell proliferation in neuroblastoma.     

p27kip1cDNA对胃癌细胞端粒酶活性及细胞周期的影响

目的　观察p2 7基因表达对胃癌SGC790 1细胞端粒酶活性及细胞周期的影响。方法　采用腺病毒介导的方法将p2 7kip1cDNA导入胃癌SGC790 1细胞中 ,应用TRAP -ELISA法检测细胞端粒酶活性的变化 ,流式细胞仪分析细胞周期的变化。结果　转染了 p2 7kip1cDNA的细胞端粒酶活性显著下降 ,G1期细胞比率显著增高 ,细胞增殖指数显著降低。结论　外源性 p2 7基因的表达可使SGC790 1细胞生长停滞于G1期 ,端粒酶活性下降 ,Ad -p2 7kip1对治疗胃癌有潜在意义     

Progestins regulate genes that can elicit both proliferative and antiproliferative effects in breast cancer cells

Sex steroid hormone progesterone is known to have profound effects on the growth and differentiation of the normal mammary gland and malignant breast epithelial cells. In vitro progesterone and synthetic progesterone-like compounds (progestins) inhibit breast cancer cell growth. Medroxyprogesterone acetate (MPA) is a synthetic hormone widely used in the adjuvant treatment of advanced breast cancer, hormone replacement therapy and in oral contraceptives. It is a paradoxical hormone, since it inhibits breast cancer cell proliferation, but has also been implicated in increased breast cancer risk. To better understand the molecular mechanism by which cell proliferation and differentiation are regulated by progesterone and MPA in human breast cancer, we utilized cDNA microarray and quantitative real-time RT-PCR methods to identify their target genes. This study describes novel progestin/progesterone target genes in breast cancer cells and, notably, novel target genes that elucidate the underlying molecular mechanism of the dual role progestins play in the breast. A cDNA microarray containing 3000 genes showed notable regulation in 30 and 27 genes by MPA and progesterone, respectively. Only 6 out of the 30 genes regulated by MPA are down-regulated, but no progesterone down-regulation was observed. Overlapping in gene regulation by progesterone and MPA occurred, but the majority of genes regulated by these hormones were distinct. Given that progestins both stimulate and inhibit cancer cell growth, we report our findings on novel progestin and progesterone targets, which could explain the paradoxical actions of progestins in the breast.     

全反式维甲酸诱导胶质瘤细胞基因的差异表达

 目的 分析全反式维甲酸诱导胶质瘤细胞所致的差异表达基因,为研究胶质瘤进展的基因通路及机制提供依据。 方法 运用cDNA微阵列技术比较全反式维甲酸处理前后胶质瘤SHG-44细胞（WHO Ⅳ级）的基因表达谱,鉴定与胶质瘤进展相关的差异表达基因。随机选择数个差异表达基因进行Northern杂交以验证cDNA微阵列结果的可靠性。 结果 鉴定出42个差异表达基因,其中表达上调28个、下调14个;按功能有凋亡类、细胞侵袭与转移类、细胞周期与生长调节类、细胞骨架类、细胞代谢类等。 结论 初步揭示SHG-44细胞基因的差异表达,开展对这些基因的研究有可能阐明胶质瘤进展的基因通路及机制。     

细胞周期蛋白激酶抑制蛋白p27kip1在肿瘤预后中的研究现状

细胞增殖是可调控的，细胞周期正向和负向调节因素参与其中。目前已发现细胞周期蛋白／周期蛋白激酶抑制剂同细胞周期Ｇ１期的调控有关。这此抑制剂中，ｐ２７＾ｋｉｐ１的研究特别受重视，在Ｇ１期细胞周期蛋白／周期蛋白激酶复合物的调节中起主要作用。ｐ２７高表达可引起Ｇ１期阻滞，抑制多种癌细胞的生长。目前仅在少数种类的肿瘤中检测了ｐ２７的免疫活性。在结肠癌和乳腺癌中，ｐ２７低表达与肿瘤进展和低生存率相关。研究证明