VHL基因和HIF-1α在大肠癌组织中的表达及临床意义

为探讨VHL基因和缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）在大肠癌中的表达及其与大肠癌临床病理因素的关系,我们用免疫组织化学SP法检测165例大肠癌和20例癌旁组织中VHL、HIF-1α表达情况,并分析其表达与大肠癌中医证型、分化程度、临床分期、转移及预后的相关性。结果显示,VHL基因在165例大肠癌组织中的阳性表达率为21．8％,在20例癌旁组织中的阳性表达率为75．1％（P〈0．001）;HIF-1α蛋白在165例大肠癌组织中的阳性表达率为75．2％,在20例癌旁组织中的阳性表达率为5．0％（P〈0．001）;VHL基因的阴性表达与HIF-1α蛋白的阳性表达与大肠癌患者的中医证型、肿瘤分期、淋巴结转移、器官转移及预后有关（P〈0．05）。结果表明,VHL基因表达下调和HIF-1α蛋白表达上调在大肠癌的侵袭、转移中发挥重要作用。     

抑癌基因KLF-6和APC在结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的 研究抑癌基因KLF-6和APC在结直肠癌中的表达规律及其临床意义。方法 应用RT-PCR和免疫组织化学法对32例结直肠癌组织和正常黏膜组织中KLF-6和APC基因mRNA及蛋白的表达进行检测和分析。结果 KLF-6与APC的mRNA阳性表达率在结直肠癌组织中分别为37、5％和34，3％，明显低于正常结直肠黏膜组织的96．9％和93．8％（P〈0．05）。KLF-6与APC的免疫组化染色阳性表达率在结直肠癌组织中分别为28．1％和25．0％，明显低于正常结直肠黏膜组织的81．3％和84．4％（P〈0．05）。KLF-6与APC在结直肠癌中的表达存在相关性（P〈0．05），并与肿瘤组织的分化程度、浸润深度、淋巴结转移及临床分期均有明显相关性（P〈0．05）。结论 抑癌基因KLF-6和APC的低表达可能与结直肠癌的发生、发展、转移及预后有关，且两者存在相关性。     

hMLH1在直肠上皮内瘤变和早期直肠癌组织中的表达

目的探讨hMLH1在直肠上皮内瘤变与早期直肠癌组织中的表达情况及其早期诊断价值。方法采用PV-9000二步法免疫组织化学检测技术对术后确诊的28例早期浸润性直肠癌、36例直肠上皮内瘤变和30例正常直肠黏膜组织的石蜡切片进行hMLHl蛋白表达的检测。结果正常直肠黏膜组织、直肠上皮内瘤变组织和早期浸润性直肠癌组织hMLH1蛋白的阳性表达率分别为100％（30／30）、77．8％（28／36）和39．3％（11／28），3组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。直肠上皮内瘤变组织hMLH1的阳性表达与患者的年龄、性别、肿瘤最大径、异型增生、肿瘤类型和距肛缘的距离均无关（P〉0．05）；早期直肠癌组织hMLH1阳性表达与其分化程度有关（P〈0．05）。结论hMLHI基因表达缺失可能是直肠癌发生的早期事件之一,hMLH1蛋白检测对于上皮内瘤变和早期直肠癌中两种疾病的早期诊断有一定的临床价值。     

共刺激分子B7-H1在直肠癌与癌旁组织中的表达及临床意义

目的探讨共刺激分子B7-H1在直肠癌与癌旁组织中的表达及临床意义。方法运用免疫组织化学检测共刺激分子B7-H1在50例直肠癌与相应的癌旁组织中的表达,对两者之间的表达水平作相关性分析,并探讨癌组织及癌旁组织的表达与临床病理参数之间的关系。结果B7-H1在直肠癌和癌旁组织中表达的阳性率分别为66．0％（33／50）,20．0％（10／50）,两者比较差异有统计学意义（P〈0．01）,但两者之间的表达评分呈正相关（r=0．435,P=0．002）。在直肠癌组织中B7一H1的表达与患者性别、年龄、肿瘤大小及分化程度之间差异无统计学意义（P〉0．05）,而与TNM分期、淋巴结是否转移以及术后生存时间有关（P〈0．05）;在癌旁组织中B7-H1的表达仅与术后生存时间有关（P〈0．05）,而与其他参数之间的相关性不明显（P〉0．05）。结论B7-H1在直肠癌和癌旁组织中的表达,可能与肿瘤的进展和侵袭相关,可以作为直肠癌患者预后的诊断标志。     

结直肠癌组织中GINS复合物的表达及其临床意义

目的探讨GINS复合物在结直肠癌组织中的表达及其临床意义。方法运用实时荧光定量PCR方法检测76例结直肠癌标本中GINS复合物4个基因PSF1、PS砣、PSF3和SLD5的mRNA表达情况．并分析其与结直肠癌患者临床病理特征及预后的关系。结果结直肠癌组织中PSF1、PSF2、PSF3和SLD5mRNA的相对表达量（0．001853±0．000651、0．007757±0．004260、0．000967±0．000481、0．003248±0．001721）均明显高于正常黏膜组织（0．000352±0．000169、0．002951±0．001216、0．000472±0．000271和0．001675±0．001156）（均P〈0．01）。PSF1mRNA表达与肿瘤大小（p〈0．01）有关;PSF2mRNA表达与患者年龄（P〈O．05）和淋巴结转移（P〈0．05）有关;PSF3mRNA表达与患者临床病理特征无关（P〉0．05）;SLD5mRNA表达与患者淋巴结转移（P〈0．01）有关。PSFl、PSF2和SLD5高表达组患者的5年生存率分别为57．1％、54．3％和54．3％,均明显低于低表达组患者的77．1％、80．O％和80．0％,差异均有统计学意义（均P〈0．05）。Cox回归分析结果提示,PSFlmRNA表达是影响结直肠癌患者预后的独立因素之一（P〈0．05）。结论GINS复合物在结直肠癌组织中高表达,且与患者临床病理特征有密切关系．其中PSFlmRNA表达可作为预测结直肠癌患者预后的生物学指标。     

多基因联合提高结直肠癌甲基化检测阳性率的研究

目的探讨联合检测Vimentin、sFRP1和HPP1基因甲基化对提高结直肠癌甲基化阳性率的意义。方法收集90例结直肠癌（结直肠癌组）和60例腺瘤性息肉（腺瘤组）患者及20例结直肠正常组织（正常对照组）标本,提取组织标本的DNA,采用甲基化特异性PCR（MSP）检测Vimentin、sFRP1和HPP1基因甲基化状态。分析其与结直肠癌的关系及甲基化阳性率。结果结直肠癌组Vimentin、sFRP1和HPP1基因甲基化率分别为66．7％（60／90）、68．9％（62／90）和72．2％（65／90）;腺瘤组则分别为53.3％（32／60）、55．0％（33／60）和50．0％（30／60）;正常对照组分别为0、0和5．0％（1／20）。结直肠癌组3个基因甲基化阳性率均高于腺瘤组和正常对照组（P〈O．05）。3个基因甲基化联合检测诊断结直肠癌和腺瘤的阳性率分别为93．3％（84／90）和76．7％（46／60）,高于单个基因检测的甲基化阳性率（P〈0．05）。3个基因甲基化状态与本组结直肠癌患者的性别、年龄、肿瘤部位、淋巴结转移、远处转移及TNM分期无关（P〉0．05）。结论Vimentin、sFRP1和HPP1基因启动子甲基化水平在结直肠癌组织中升高．其联合检测明显提高了结直肠癌甲基化检测阳性率．有可能成为结直肠癌早期诊断的甲基化检测方案。     

散发性结直肠癌患者血RASSF2和sFRP1启动子区甲基化检测

目的检测散发性结直肠癌患者血清RASSF2和sFRP1启动子区甲基化情况．从而为散发性结直肠癌的早期筛查提供参考。方法使用甲基化特异性PCR检测59例散发性直结肠癌患者和59例健康对照血清sFRP1和RASSF2基因启动子区甲基化的情况,并分析其与结直肠癌临床病理特征的关系。结果59例结直肠癌患者中RASSF2和sFRP1甲基化者分别为16例（27．1％）和18例（30．5％）;而59例健康对照无一例发现RASSF2或sFRP1基因甲基化,差异有统计学意义（均P〈0．01）。29例（49．2％）结直肠癌患者有至少1个基因甲基化,其甲基化率明显高于RASSF2和sFRP1单-基因甲基化率（均P〈0．05）。结直肠癌患者血清RASSF2和sFRP1基因甲基化率与结直肠癌临床病理特征均无明显关系（均P〉0．05）。结论血清RASSF2和sFRP1基因启动子区甲基化水平在结直肠癌组织异常升高,联合两基因的血清甲基化检测可为散发性结直肠癌的早期筛查提供参考。     

淋巴管内皮透明质酸受体1在结直肠癌组织中的表达及其临床意义

目的 明确淋巴管特异性标记物淋巴管内皮透明质酸受体1（LYVE-1）的表达情况,并探讨其表达与结直肠癌淋巴结转移及预后的关系。方法选取40例结直肠癌标本及其癌旁组织．采用实时定量PCR检测LYVE-1mRNA水平．采用免疫组织化学染色检测LYVE-1蛋白表达水平、淋巴管密度（LVD）及MVD．分析LYVE-1表达和LVD计数与淋巴结转移及患者预后的关系。结果结直肠癌组织中LYVE-1的表达和LVD计数明显高于正常组织（P〈0．05）。有淋巴结转移者LYVE-1表达水平和LVD计数均明显高于无淋巴结转移者（P〈0．05）。低LVD组术后复发率和3年生存率分别为46．7％和90．1％,高LVD组则分别为60．0％和56．7％（均P〈0．05）;而LYVE-1的表达则与术后复发及预后无明显相关（均P〉0．05）。结论LYVE-1特异性表达于淋巴管,与结直肠癌淋巴结转移密切相关：LVD可用于评价预后。     

Wnt-1诱导分泌蛋白1在直肠癌中的表达及其临床意义

目的定量检测Wnt-1诱导分泌蛋白1（Wnt-1 induced secreted protein-1，WISP-1）基因在人直肠癌及远端正常直肠组织中的表达，为进一步研究该基因功能提供线索。方法提取人直肠癌及癌旁正常直肠组织总RNA，采用实时RT—PCR分析WISP-1的表达，再对PCR结果进行分析。结果WISP-1 mRNA在直肠癌组织中的表达水平显著高于癌旁正常直肠组织，差异有统计学意义（P〈0．05）。WISP-1的表达与肿瘤的分化程度、Dukes分期及淋巴结转移等因素有相关性。结论WISP-1基因的异常表达可能与直肠癌的发生、发展有关，有望成为直肠癌诊断预后的标志物和治疗的新靶点。     

SNCG在结直肠癌肝转移中的表达及其临床意义

目的探讨SNCG在结直肠癌肝转移患者中的表达情况及其临床意义。方法收集1999年1月至2003年12月间中国医学科学院肿瘤医院收治的具有完整临床病理及随访资料的217例结直肠癌手术标本。其中113例伴肝转移,104例无肝转移。采用免疫组织化学染色检测SNCG在结直肠癌组织中的表达。分析SNCG表达与结直肠癌肝转移临床病理特征及预后的关系。结果肝转移组和无肝转移组患者结直肠癌组织中SNCG阳性表达率分别为68．1％（77／113）和27．9％（29／104）,差异有统计学意义（P〈0．05）。Logistic多因素分析显示,SNCG表达是判断结直肠癌是否伴有肝转移的独立因素（OR=8．29,95％CI：3．37～20．37,P〈0．01）。SNCG阳性表达与阴性表达的同时性肝转移患者术后中位生存时间分别为8．2个月和12．6个月．差异有统计学意义（P〈0．05）;Cox多因素分析显示,SNCG表达是结直肠癌同时性肝转移患者的独立预后因素（RR：1．97．95％CI：1．10—3．53,P〈0．05）。结论SNCG在肝转移患者的结直肠癌组织中高表达．SNCG表达不仅可以作为结直肠癌肝转移预示因子,也是同时性肝转移的重要预后因素。     

STAT3及其磷酸化STAT3和E钙黏蛋白在结直肠癌组织中的表达及意义

目的探讨结直肠癌组织中STAT3及其磷酸化STAT3（P-STAT3）和E钙黏蛋白（E—cadherin）表达的相关性及其与肿瘤浸润转移的关系。方法用免疫组织化学Elivision^TM plus法检测江西赣南医学院第一附属医院病理科存档的50例结直肠癌组织及相应癌旁组织中STAT3、P-STAT3及上皮细胞间质化（EMT）相关蛋白E—cadherin的表达,并分析其与结直肠癌临床病理特征的关系。结果50例结直肠癌组织中STAT3和p-STAT3及E—cadherin的阳性表达率分别为72％（36／50）、76％（38／50）和26％（13／50）,相应癌旁组织中的表达则分别为24％（12／50）和26％（13／50）及68％（34／50）,结直肠癌组织STAT3和p-STAT3的表达明显高于相应癌旁组织,而E—cadherin的表达则明显低于癌旁组织（均P〈0．05）。STAT3、P-STAT3及E．cadherin表达与肿瘤浸润深度、分化程度、肿瘤大小、淋巴结转移及TNM分期有关（均P〈0．05）。STAT3和P—STAT3蛋白在结直肠癌中的表达与E-cadherin呈显著负相关（均P〈0．05）。结论STAT3和p-STAT3可能通过对E—cadherin的抑制作用进而引起EMT现象,从而导致结直肠肿瘤的发生和进展。     

胃癌患者术前腹腔冲洗液中CDH1甲基化状态及其临床意义

目的探讨术前腹腔冲洗液中CDHl基因的异常甲基化与胃癌进展的关系。方法采用实时荧光甲基化特异性聚合酶链反应技术．检测92例胃癌患者术前腹腔冲洗液中CDHl基因启动子区域5’-CpG岛的甲基化状态．并分析其与临床病理因素及预后之间的关系。结果92例胃癌患者中．有45例（48．9％）检测到了CDHl基因异常甲基化现象,其中完全甲基化12例（13．0％）,部分甲基化33例（35．9％）。CDHl基因甲基化与肿瘤大小、生长方式、分化程度、淋巴管侵犯、浸润深度、淋巴结转移、远处转移及临床分期有关（均P〈0．05）,而与性别、年龄、肿瘤部位及幽门螺杆菌感染无关（均P〉0．05）。CDHl甲基化与非甲基化患者术后中位无进展生存期分别为20和38个月,差异有统计学意义（P〈0．01）。经Cox模型分析证实,术前腹腔冲洗液DNA中的CDHl甲基化状态是影响胃癌患者术后生存的独立预后因素（P=0．000,RR=332．88,95％CI：21．71-5105．07）。结论CDHl基因启动子区域5＇-CpG岛的异常甲基化在胃癌中属于高频分子事件．术前腹腔冲洗液DNA中CDHl甲基化分析可反映胃癌进展状况。     

低氧诱导因子-1α和轴突导向因子4D在结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的比较低氧诱导因子-1α（HIF-1α）和轴突导向因子4D（Sema4D）在结直肠癌组织和正常组织中的表达,探讨两者之间的相关性及临床意义。方法采用免疫组织化学SP法检测86例结直肠癌组织和52例正常组织中HIF-1α和Sema4D的表达,并分析其与结直肠癌临床病理特征及预后的关系。结果结直肠癌组织中HIF-1α和Sema4D蛋白阳性表达率显著高于正常组织[分别为58．1％（50／86）比7．7％（4／52）,X2=34．624,P〈0．01;60．5％（52／86）比11．5％（6／52）,x2=31．839,P〈0．01]。HIF-1α和Sema4D蛋白与结直肠癌组织分化程度（P／0．003,P=0．010）、TNM分期（P=0．003,P=0．017）和淋巴结转移（P=0．003,P=0．020）明显有关;且两者表达呈正相关（r=0．567,P〈0．01）。全组患者5年生存率为37％。其中HIF-1α蛋白阳性和阴性表达者的5年生存率分别为24％和56％（P=0．003）;Sema4D蛋白阳性和阴性表达者的5年生存率分别为23％和59％（P=0．001）。Cox多因素分析显示,Sema4D表达是结直肠癌患者的独立预后因素（P=0．026）,而HIF-1α表达不是其独立预后因素（P=0．501）。结论HIF-1α和Sema4D具有协同关系,两者蛋白的联合检测,可为预测结直肠癌的预后判断提供参考。     

miR-196b mRNA和HoxB8 mRNA在结直肠癌组织中的表达及其临床意义

目的研究miR-196b和HoxB8在结直肠癌组织中的表达及与其临床病理特征的关系,并探讨在结直肠癌组织中miR-196b与靶基因HoxB8表达的关系。方法用实时荧光定量PCR技术检测30例结直肠癌组织及对应的正常黏膜组织中miR-196b mRNA和HoxB8 mRNA的表达量,用Western blot法检测HoxB8蛋白的表达。结果 miR-196b mRNA和HoxB8 mRNA在结直肠癌组织中的表达量均高于其在对应的正常黏膜组织中的表达量（P〈0.05）。miR-196b mRNA的表达与结直肠癌的淋巴结转移、肿瘤分期（Ⅰ＋Ⅱ与Ⅲ＋Ⅳ）及远处转移均有关（P〈0.05）,而与肿瘤部位、大小、大体类型、浸润深度、组织分化程度、患者的年龄及性别均无关（P〉0.05）;HoxB8mRNA的表达与结直肠癌的上述临床病理特征均无关（P〉0.05）。miR-196b mRNA与HoxB8 mRNA的表达存在负相关（r=-0.458,P〈0.05）,而与HoxB8蛋白的表达无明显相关性（r=-0.236,P〉0.05）。结论 miR-196bmRNA及HoxB8 mRNA在结直肠癌组织中均呈高表达,miR-196b mRNA的高表达与结直肠癌的发生、发展及预后有关。miR-196b可能通过与靶基因HoxB8 mRNA的3′非编码区结合抑制HoxB8 mRNA的表达。     

趋化因子受体CXCR1及CXCR2在胃癌腹膜转移中的表达及意义

目的检测趋化因子受体CXCR1及CXCR2在胃癌原发灶、癌旁组织和腹膜转移灶中的表达情况,分析其在胃癌腹膜转移中的临床意义。方法免疫组化法检测趋化因子受体CXCR1、CXCR2在胃癌腹膜转移患者原发灶、转移灶、癌旁组织和未转移患者原发灶中的表达情况;对胃癌腹膜转移的患者进行随访,比较趋化因子受体CXCR1及CXCR2阳性和阴性表达的中位生存时间;Logistic回归多因素分析胃癌腹膜转移的危险因素。结果CXCR1、CXCR2在胃癌腹膜转移组原发灶和癌旁组织中的表达有统计学差异（均P〈0．05）。发生腹膜转移和未发生腹膜转移的原发灶间,CXCR2的表达也有统计学差异（P〈0．05）,而CXCR1的表达差异则无统计学意义（P〉0．05）。CXCR2在胃癌腹膜转移灶中的阳性表达与肿瘤的浸润深度、分化程度、肿瘤大小相关（均P〈0．05）;CXCR1在胃癌腹膜转移灶中的表达与肿瘤的浸润深度、分化程度、肿瘤大小、肿瘤部位、淋巴转移、年龄、性别均无相关性（均P〉0．05）。CXCR2表达阳性的患者的术后生存时间低于CXCR2表达阴性的患者。原发肿瘤的大小、浸润深度、分化程度,以及原发灶中CXCR2的表达是胃癌腹膜转移的危险因素。结论趋化因子受体CXCR1、CXCR2的表达水平与胃癌的生长有关;而CXCR2的表达与胃癌腹膜转移有关。     

早中期结直肠癌患者外周血鸟苷酸环化酶mRNA和细胞角蛋白20mRNA检测及预后分析

目的探讨外周血鸟苷酸环化酶（GC．C）mRNA和细胞角蛋白20（CK20）mRNA水平与早中期结直肠癌患者肿瘤转移及预后的关系。方法应用荧光定量聚合酶链反应技术,检测74例早中期结直肠癌患者术前外周血GC．CmRNA以及CK20mRNA的表达．并结合临床和病理各项指标以及术后随访资料,对患者肿瘤转移危险因素和预后进行统计学分析和评价。结果74例结直肠癌患者外周血GC．CmRNA阳性率为33．8％（25／74）,CK20mRNA阳性率为31．1％（23／74）;1、2、3年无瘤生存率分别为94．6％、82．4％和78．4％。单因素预后分析发现,外周血GC．cmRNA、CK20mRNA、肿瘤分化类型、有无肠系膜根部淋巴结转移、有无脉管瘤栓和术后是否接受化疗6因素与本组患者3年无瘤生存有关（均P〈0．05）;有无肠系膜根部淋巴结转移和有无脉管瘤栓是预后的独立影响因素（P〈0．05）。按肿瘤分期分层分析,外周血CK20mRNA和有无脉管瘤栓是Ⅲ期结直肠癌患者3年无瘤生存率的独立影响因素（P〈O．05）。结论检测外周血CK20mRNA、GC—CmRNA对于早期发现早中期结直肠癌转移可能具有重要的临床意义。     

结直肠癌细胞Kiss-1基因表达在X线照射后的变化及其与肿瘤细胞增殖和凋亡的关系

目的研究X线照射后人结直肠癌SW480细胞中肿瘤转移抑制基因Kiss-1表达水平变化及其对细胞增殖和凋亡能力的影响。方法SW480细胞分为对照组（0Gy）和不同照射剂量（2、4、6和8Gy）的实验组。实验组经6-MVX线照射后48h,应用细胞免疫组织化学、实时定量PCR法检测细胞中Kiss．1蛋白及mRNA水平．通过软琼脂集落形成实验和流式细胞法检测细胞增殖和凋亡情况。结果与对照组相比,2、4Gy剂量组细胞Kiss-1蛋白表达无明显改变（P〉0．05）．6、8Gv剂量组表达明显上调（P〈0．05）;在2、4、6Gy剂量组细胞瞄SS-1基因mRNA水平上调（P〈0．05）,8Gy剂量组则无明显改变（P〉0．05）;与对照组相比,各剂量组细胞克隆形成数均明显减少（P〈0．05）：4、6、8Gy剂量组细胞凋亡率增加（P〈0．05）。2Gv剂量组细胞凋亡率无明显改变（P〉0．05）。结论X线照射有可能上调SW480细胞Kiss-1基因的表达．同时残存癌细胞凋亡率增高、增殖力下降。