NK细胞活性与血清可溶性CD25水平检测在继发性噬血细胞性淋巴组织细胞增多症诊断中的意义

本研究探讨继发性噬血细胞性淋巴组织细胞增多症（secondary hemophagocytic lymphohistiocytosis，HLH）患者外周血NK细胞活性、血清可溶性CD25（sCD25）水平的检测在早期诊断中的意义。收集2005年6月至2008年5月继发性HLH疑似病例38例，25名正常健康人员作为对照，采用LDH释放法检测外周血NK细胞活性，ELISA法检测血sCD25的水平，38例疑似病例根据HLH-2004诊断标准分为排除组和诊断组，比较各组NK细胞活性及sCD25水平的差异，同时比较确诊组确诊前后各项诊断标准的符合情况。结果表明：38例疑似患者中有22例最终确诊为继发性HLH，其NK细胞活性均明显低于正常对照组，差异有显著统计学意义（P〈0．001），血清sCD25水平明显高于正常对照组，差异亦有统计学意义（p〈0．05），且确诊组患者的NK细胞活性和血清sCD25水平在疾病早期100％出现异常。结论：NK细胞活性及血清sCD25水平的检测对于继发性HLH的早期诊断可能具有重要的意义。     

基于CD_(107a)标记流式细胞仪检测NK细胞毒性方法的建立

目的建立基于CD107a标记、利用流式细胞仪检测NK细胞毒性的方法。方法首先将外周血单个核细胞(PBM-Cs)与K562细胞以3∶1比例混合,2 h后加入莫能菌素,1.5 h后加入CD107a和CD56标记抗体,流式细胞仪分析CD107a阳性细胞的频率。其次观察CD107a抗体孵育时间、不同效靶比例对CD107a阳性细胞检测的影响。最后观察该方法与传统LDH释放法检测NK细胞毒活性的一致性。结果 NK细胞活化后可在其表面检测到高水平表达的CD107a分子,效靶细胞孵育结束后加入CD107a抗体可降低检测背景,低效靶比例同样具有检测敏感性。该方法与LDH释放法的检测结果一致。结论利用CD107a抗体标记检测NK细胞毒活性的方法具有快速、敏感、所需效应细胞少的优点。     

基于CD107a标记流式细胞仪检测NK细胞毒性方法的建立

目的建立基于CD107a标记、利用流式细胞仪检测NK细胞毒性的方法。方法首先将外周血单个核细胞（PBMCs）与K562细胞以3：1比例混合,2h后加入莫能菌素,1．5h后加入CD107a和CD56标记抗体,流式细胞仪分析CD107a阳性细胞的频率。其次观察CD107a抗体孵育时间、不同效靶比例对CD107a阳性细胞检测的影响。最后观察该方法与传统LDH释放法检测NK细胞毒活性的一致性。结果NK细胞活化后可在其表面检测到高水平表达的CD107a分子,效靶细胞孵育结束后加入CD107a抗体可降低检测背景,低效靶比例同样具有检测敏感性。该方法与LDH释放法的检测结果一致。结论利用CD107a抗体标记检测NK细胞毒活性的方法具有快速、敏感、所需效应细胞少的优点。     

噬血细胞性淋巴组织细胞增多症患者血清中新蝶呤的检测及意义

本研究通过检测噬血细胞性淋巴组织细胞增多症(HLH)患者外周血血清中新蝶呤(Npt)水平,探讨其在HLH中的意义。应用酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测20例HLH患者治疗前后和15例正常对照者外周血血清Npt水平及sCD25水平。结果显示,HLH组诊断时血清Npt和sCD25水平分别较正常对照组明显升高(P<0.0001)。HLH组患者治疗后血清Npt和sCD25水平分别较治疗前明显下降(P<0.0001)。将治疗前后Npt水平与sCD25水平分别进行相关性分析,发现两者具有显著相关性(治疗前r=0.81,P<0.05;治疗后r=0.65,P<0.05);与此同时,治疗前Npt水平与血清铁蛋白亦有显著相关性(r=0.55,P<0.05)。结论:血清Npt可能在HLH的发病机制中起着重要作用,其水平的升高对疾病的早期诊断及病情评估具有重要意义。     

SLE患者外周血CD3+CD16+CD56+NK T细胞和CD3+CD4-CD8-DN T细胞的流式细胞分析及意义

目的探讨CD3+CD16+CD56+天然杀伤T(NK T)细胞和CD3+CD4-CD8-双阴性T(DN T)细胞在SLE患者外周血中的变化及意义。方法选取32例SLE活动期患者作为SLE活动组、30例SLE稳定期患者作为SLE稳定组、25例健康人作为健康人对照组,用流式细胞术检测各组对象外周血中NK T细胞和DN T细胞的比率,并比较其与SLE疾病活动性指数(SLEDAI)之间的相关性。结果 SLE活动组外周血NK T细胞比率(3.47±1.49)%显著低于SLE稳定组(5.30±1.83)%及健康人对照组(6.24±2.11)%,P均<0.01,但SLE稳定组与健康人对照组差异无统计学意义(P>0.05);SLE活动组外周血DN T细胞比率(5.16±1.97)%显著高于SLE稳定组(4.00±1.37)%及健康人对照组(3.15±1.06)%,P均<0.01,SLE稳定组亦高于健康人对照组(P<0.05)。SLE患者外周血NK T细胞比率与SLE DAI呈显著负相关(r=-0.439,P<0.01);SLE患者外周血DN T细胞比率与SLE DAI呈显著正相关(r=0.446,P<0.01);SLE患者外周血NK T细胞比率与DN T细胞比率之间无明显相关性(r=-0.215,P>0.05)。结论外周血中NK T细胞及DN T细胞比率改变可能参与了SLE的发病过程,且可能与SLE的病情活动性相关。     

CD4+CD25+调节性T细胞及TGF-β1与系统性红斑狼疮病情活动性关系的研究

目的 检测系统性红斑狼疮患者(SLE)外周血CD4+CD25+调节性T细胞、转化生长因子-β1(TGF-β1)浓度,探讨其与疾病活动性的关系.方法 选择SLE患者76例,根据患者病情程度分为3组,其中稳定组17例,活动组33例,肾病组26例.同期选择24例健康体检者作为正常对照.采用流式细胞仪检测SLE患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞群比率,用ELISA法检测血清中TGF-β1浓度.观察CD4+CD25+T细胞群、TGF-β1浓度与SLE患者疾病活动程度的关系.结果 ①活动期SLE患者外周血CD4+ CD25 +调节性T细胞群比率、TGF-β1浓度显著低于稳定期及正常对照组(P<0.01),疾病稳定期与正常对照组结果差异无统计学意义.②SLE并发肾病组外周血CD4+CD25+调节性T细胞群比例、TGF-β1浓度显著低于非肾病组(P<0.05).结论 SLE患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞群比率、TGF-β1浓度与SLE活动性关系密切,可能是导致疾病发生和病情发展的关键环节之一.     

系统性红斑狼疮患者外周血淋巴细胞亚群分析

目的研究系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血淋巴细胞亚群的变化。方法应用流式细胞仪检测了65例SLE患者(其中活动期30例,非活动期35例)及32例健康体检者外周血淋巴细胞亚群。结果与健康对照组相比,活动期患者的CD4+、NK细胞(CD16+CD56+)百分率明显降低(P<0.05),CD8+、B(CD19+)细胞百分率明显升高(P<0.05),CD4+/CD8+比值显著降低(P<0.05)。SLE患者活动期与非活动期比较,CD4细胞数低于稳定期,CD8细胞数明显高于稳定期。结论 SLE患者外周血淋巴细胞亚群细胞的变化与疾病的病情变化相关联。     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞FcγRⅡb和血清sCD30水平变化与Th1/Th2细胞漂移关系的研究

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)FcγRⅡb、CD30的表达与辅助T细胞亚型(Th1/Th2)漂移在SLE发病机制中的作用。方法检测了129例SLE患者和30名健康对照者PBMCFcγRⅡb、Th1、Th2细胞以及血清sCD30;FcγRⅡb的检测采用流式细胞术,血清sCD30的检测采用酶联免疫吸附试验(ELISA),Th1、Th2细胞的检测采用免疫组化染色方法。结果SLE患者与健康对照者相比,PBMC FcγRⅡb的表达以及Th1细胞明显降低(P<0.01),而血清sCD30水平以及Th2细胞显著升高(P<0.01)。结论PBMC FcγRⅡb、CD30表达的变化以及Th1/Th2细胞漂移与SLE发病机制有关。     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞FcγⅡb和血清sCD30水平变化与Th1/Th2细胞漂移关系的研究

目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)FcγRⅡb、CD30的表达与辅助T细胞亚型(Th1/Th2)漂移在SLE发病机制中的作用.方法 检测了129例SLE患者和30名健康对照者PBMCFcγRⅡb、Th1、Th2细胞以及血清sCD30;FcγRⅡb的检测采用流式细胞术,血清sCD30的检测采用酶联免疫吸附试验(ELISA),Th1、Th2细胞的检测采用免疫组化染色方法.结果 SLE患者与健康对照者相比,PBMC FcγRⅡb的表达以及Th1细胞明显降低(P＜0.01),而血清sCD30水平以及Th2细胞显著升高(P＜0.01).结论 PBMC FcγRⅡb、CD30表达的变化以及Th1/Th2细胞漂移与SLE发病机制有关.     

消化系统肿瘤患者外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞分析与临床意义

目的通过观察外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞活性在消化系统肿瘤患者中的表达,探讨消化系统肿瘤患者的细胞免疫功能状况及临床意义。方法采用流式细胞分析法对123例消化系统肿瘤患者外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞进行检测,并与35例健康对照组比较。结果与健康对照组比较,消化系统各肿瘤组患者外周血总T细胞(CD3+)、T4细胞(CD3+CD4+)、NK细胞(CD3-CD16/56+)百分率下降(P<0.01);T4/T8(CD3+CD4+/CD3+CD8+)比值降低(P<0.05);T8细胞(CD3+CD8+)百分率明显升高(P<0.05);消化系统各肿瘤组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论消化系统肿瘤患者外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞活性表达较健康对照组显著降低,表明消化系统肿瘤患者细胞免疫功能低下。检测消化系统肿瘤患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞水平对评估患者的细胞免疫功能、监测抗瘤疗效和判断预后均具有一定的临床意义。     

流式细胞术检测NK细胞活性在获得性噬血细胞性淋巴组织细胞增多症诊断中的应用

本研究目的旨在建立一种准确、稳定的NK细胞杀伤活性检测方法,应用于获得性噬血细胞性淋巴组织细胞增多症诊断。21例疑似患者及20例健康对照者纳入本研究。根据HLH-2004标准将疑似患者分为确诊组和排除组,将pEGFP—N1质粒转染人NK细胞的天然靶细胞K562,经过G418筛选后进一步单克隆,得到稳定、均一表达绿色荧光蛋白的EGFP—K562细胞,将EGFP—K562细胞与人外周血单个核细胞按10：1的比例混合孵育2小时后,用碘化丙啶（PI）标记,用流式细胞仪分析呈红、绿色荧光的细胞数,最后计算NK细胞的杀伤效率;同时采用LDH释放法测定外周血NK细胞对单纯K562细胞的杀伤活性,并进行比较。结果表明：获得了稳定表达绿色荧光蛋白的EGFP—K562细胞;流式细胞仪检测表明健康人NK细胞杀伤率与病人组之间存在明显差异,流式细胞仪技术检测NK细胞杀伤活性与传统LDH释放法检测NK细胞杀伤活性具有显著相关性。结论：EGFP—K562细胞株作为靶细胞用于流式细胞术检测NK细胞杀伤活性,无需预先染色和标记靶细胞,操作简便、省时、稳定、重复性高,可应广泛应用于获得性噬血细胞性淋巴组织细胞增多症诊断。     

CD16CD56NK细胞在重症肌无力发病机制中的作用

目的:研究重症肌无力(MG)患者外周血CD16+CD56+ NK细胞的水平,及其在MG发病机制中的作用.方法:应用流式细胞仪检测16例MG患者与20名正常对照外周血CD16+CD56+NK细胞的百分率.结果:MG组外周血CD16+CD56+NK细胞百分率(13.81±5.59)%明显高于对照组的(7.23±1.95)%,P <0.05.结论:NK细胞在MG发病中起重要作用,既可通过分泌IFN2γ等细胞因子途径促进MG的发病,也可通过细胞毒作用发挥免疫效应.     

NK细胞活性在诊断继发性噬血细胞综合征中的意义探讨

本研究探讨继发性噬血细胞综合征（hemophagocytic syndrome，HPS）患者外周血NK细胞活性水平及其在早期诊断中的意义。采用LDH释放法检测16例凝似HPS患者和25名正常健康人外周血NK细胞的活性，并将确诊继发性HPS患者的NK细胞活性与正常人NK细胞活性进行比较。结果表明：16例疑似HPS患者中有8例最终确诊为继发性HPS，其NK细胞活性均明显低于正常对照组，两者相比差异有显著统计学意义（p〈0．001），且已确诊患者的NK细胞活性在疾病早期即出现异常。结论：NK细胞活性的检测对于HPS的早期诊断可能具有重要意义。     

Natural killer cell function and lymphocyte subpopulation profiles in inflammatory bowel disease

Peripheral blood natural killer (NK) cell activity and lymphocyte subpopulation profiles were studied in 23 patients with inflammatory bowel disease (IBD) and in 16 healthy control subjects. NK activity was assessed by a 4-hr 51Cr release assay using K-562 erythroleukemia cell line targets. Both monocyte depleted and nondepleted lymphocyte preparations were tested using 50:1 and 25:1 effector to target cell ratios. Lymphocyte subpopulation profiles were determined by incubation of cell suspensions with the monoclonal anti-lymphocyte antibodies (OK-M1, OK-T4, Leu-4 and Leu-2) labeling with goat anti-mouse FITC and sorting by flow cytometry on the fluorescence-activated cell sorter (FACS). NK activity in patients with IBD showed wide variation, but mean activity was not significantly different from normal controls. Analysis of patient subgroups by disease activity, disease type, duration or treatment also failed to reveal significant differences from controls. Parallel measurements of peripheral blood lymphocyte subpopulations using these phenotypic markers revealed no significant differences between patients with IBD and control subjects.     

免疫球蛋白样抑制性受体KIR基因与HLA-Cw的匹配对NK细胞活性的影响

本研究探索自然杀伤（naturalkiller,rqK）细胞表面杀伤细胞免疫球蛋白样抑制性受体（killerimmunoglobulin—like inhibitionreceptor,KIR）基因与HLA—Cw配体匹配对NK细胞活性的影响。对27名健康人取新鲜外周血20ml,用NK细胞免疫磁珠分选试剂盒负向分选高纯度NK细胞。对30例初治确诊急性髓系白血病（AML）患者取新鲜骨髓液10ml,分离单个核细胞作为靶细胞。流式细胞仪检测NK细胞CD158a,CD158b表达水平。取健康人和患者的外周血各2ml,以PROTRANS法抽提DNA,采用序列特异性引物PCR—SSP分型技术分别检测HLA—Cw、KIR基因。MTT法检测KIR与HLA—Cw基因不同组合的NK细胞对AML患者白血病细胞的杀伤率。结果表明：分选后的NK细胞,纯度为（90．8±6．08）％。NK细胞KIR基因与靶细胞HLA—Cw等位基因的匹配数少则NK细胞的杀伤效应强,0个等位基因匹配的杀伤率为（50．66±8．40）％,1个匹配与2个匹配的杀伤率分别为（38．28±6．71）％,（19．74±4．15）％,（F=20．226,P〈0．001）。NK细胞的KIR表达水平与杀伤作用也有一定的联系（F=16．276,P值〈0．001）。结论：NK细胞对AML白血病细胞的杀伤作用与抑制性KIR／HLA—Cw的匹配数及KIR的表达相关,匹配越少、KIR表达越低,杀伤率越高。     

肝细胞癌NKG2D表达及对NK细胞细胞毒的影响

【目的】分析肝细胞癌NKG2D表达及对NK细胞细胞毒的影响。【方法】应用免疫荧光技术和流式细胞术 (FCM )分选 2 5例肝细胞癌 (HCC)、10例健康对照的外周血NK细胞 ,定量分析NKG2D蛋白表达。用MTT比色法检测抗NKG2DpAb加入前后NK细胞的细胞毒效应。【结果】HCC患者NK细胞的NKG2D蛋白表达量均低于正常对照 ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。抗NKG2DpAb能显著抑制NK细胞对K5 6 2、HepG2细胞的细胞毒效应 ,使NK细胞对两种靶细胞的细胞毒效应分别下降了 6 .7和 4 .1倍。【结论】NK细胞NKG2D表达异常与肝细胞癌的发生发展可能相关。     

Natural killer cell cytotoxicity: a methods analysis of 51chromium release versus flow cytometry

The purpose of this study is to describe design considerations for the use of flow cytometry (FC) compared to 51chromium (51Cr)-release assays utilizing cryopreserved peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) to detect natural killer (NK) cell cytotoxicity. Subjects were 10 healthy women aged 18 to 39 years. Intra-assay variability between methods differed only at the lowest effector-target ratios evaluated. Interassay variability was wide but did not differ between methods. The relationship of lytic unit-10 between methods was strongly positive. Cytotoxicity detected by 51Cr release was higher than that detected by FC for all 10 subjects. Cost was comparable. However, had more assays been performed, technician time would have been greater with flow cytometry. More whole blood was needed to perform the flow cytometry cytotoxicity assay than 51Cr-release cytotoxicity assay. The authors found no compelling reason to adopt NK cell cytotoxicity by flow cytometry over 51Cr release.     

Natural, lectin- and phorbol ester-induced cellular cytotoxicity in Crohn's disease and ulcerative colitis

Cellular cytotoxicity of peripheral blood cells was studied in patients with Crohn's disease or ulcerative colitis and healthy controls. The spontaneous cytotoxicity or natural killer (NK) cell activity, evaluated against the erythroleukemia K-562 and the colon cancer CaCo-2 and HT-29 cell lines, of total mononuclear cells and enriched lymphocytes was depressed in Crohn's disease and ulcerative colitis patients compared to the controls. Phytohaemagglutinin (PHA) increased the cytotoxicity in the patients, to a similar maximal level as the stimulated controls. In contrast, the phorbol ester, phorbol-myristate-acetate (PMA), enhanced the cytotoxicity in patients and in controls, but in the patients not to the levels of the controls. No cytotoxicity was observed in the monocyte-enriched fraction both in patients and controls using the same assay system. A similar small but significant stimulation of monocyte cytotoxicity was obtained by PHA and PMA in patients and in controls. In conclusion, inflammatory bowel disease is associated with a depressed NK cell activity in peripheral blood which is not target specific. PHA but not PMA could restore the deficient NK cell activity. Monocytes seem not to be involved in the decreased NK cell activity in patients with inflammatory bowel disease.