多药耐药相关蛋白在肝癌多药耐药细胞系HePG2/ADM中的作用

目的研究4种耐药蛋白：多药耐药蛋白（multi—drug resistance protein 1，MDR1），多药耐药相关蛋白1（multi—drug resistance related protein 1，MRP1），肺耐药蛋白（lung resistance protein，LRP），乳腺癌耐药蛋白（breast cancer resistance protein，BCRP）在肝癌多药耐药中的作用。方法通过培养液中阿霉素（adriamycin，ADM）浓度递增诱导法筛选培养，建立HePG2／ADM肝癌多药耐药细胞株；采用real time荧光定量PCR检测四种耐药蛋白mRNA在正常肝细胞系L02、肝癌细胞系HePG2及HePG2／ADM中的表达差异；Western blot检测3种细胞系中4种耐药蛋白的表达。结果（1）建立HePG2／ADM细胞系。MTT法检测阿霉素对HePG2／ADM细胞IC50为亲本细胞的282倍（P〈0．05）。（2）HePG2／ADM中MDR1和BCRP mRNA表达分别是HePG2的400倍（F=87．49，P〈0．05）和9倍（F=1006，P〈0．05）。MRP1和LRP mRNA表达差异无统计学意义（FMRPI=3．43，FLRP=2．44，Pall〉0．05）。（3）L02和HePG2中4种耐药蛋白mRNA的表达均无差异（FMDRI=1006，FBCRP=87．49，FMRPI=3．43，FLRP，=2．44，Pall〉0．05）。（4）Western blot检测发现HePG2／ADM细胞中MDR1，BCRP，LRP蛋白表达显著高于HePG2和L02细胞（FMDHI=28．68，FBCRP=18．60，FLRP=6．28，Pall〈0．05），MRP1蛋白表达不增高（FMRPI=0．70，P〉0．05）。（5）4种耐药蛋白表达在HePG2和L02细胞差异均无统计学意义（FMDRI=28．68，FBCRP=18．60，FMRPI=0．70，FLRP=6．28，Pall〉0．05）。结论MDR1和BCRP在HePG2／ADM多药耐药中起重要作用，HePG2／ADM多药耐药与MRP1和LRP可能无关。     

应用基因芯片技术筛选胰腺癌多药耐药相关基因

目的应用基因芯片技术筛选胰腺导管腺癌（PDAC）获得性多药耐药（MDR）相关基因。方法通过含人类全基因组的寡聚核苷酸基因芯片（Affymetrix HG U133 2．0plus）筛查人胰腺癌细胞株SW1990与多药耐药细胞亚株SW1990／5-FU,SW1990／ADM和SW1990／GEM之间的表达基因差异,并进行生物信息学分析。结果与亲本株SW1990相比,3株耐药细胞亚株中表达均有差异的基因共有165条;其中上调表达基因43个,下调表达基因122个。差异表达基因的功能分类包括：抗氧化还原、细胞凋亡、细胞周期、信号转导、细胞黏附相关的基因等。聚类分析发现差异基因中的PRDX4簇、TNKS2簇及CCDC5簇可能与耐药发生密切相关。结论胰腺癌对化疗的多药耐药是复杂的多基因作用的结果。本试验初步建立了胰腺癌多药耐药发生相关的总体基因表达改变图谱,为胰腺癌多药耐药发生机制的研究提供了新的靶点。     

乙肝病毒X蛋白对肝癌细胞多药耐药的影响

目的观察乙肝病毒（HBV）X蛋白对肝癌多耐药性产生的影响，探讨肝癌多药耐药的形成与乙肝病毒感染的关系。方法应用脂质体介导技术稳定转染peDNA3／HBX质粒至HepG2人肝癌细胞株，噻唑蓝（MTr）法检测阿霉素及丝裂霉素作用下转染前后细胞的存活率，An—nexin／PI法流式细胞分析术检测转染前后细胞在受到5-氟尿嘧啶（5-Fu）作用后的凋亡指数（AJ），逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot技术分别检测转染前后HepG2内多药耐药相关基因在mRNA和蛋白水平的表达。结果MTr法显示阿霉素和丝裂霉素作用下，转染了peDNA3／HBX质粒的HepG2细胞的IC50明显高于对照组（P〈0．05）。5-Fu作用后转染组和对照组的AJ分别是（9．83±1．50）％VS（17．79±1．70）％，两者差异有统计学意义（P〈0．05）。整合了HBX基因的HepG2细胞内多药耐药相关基因在mRNA和蛋白水平的表达也均高于未转染细胞，转染前后比较在mRNA水平mdrl、MRPl、LRP基因的表达分别提高了190％、68％、95％；而在蛋白水平p—gp、MRPl、LRP的表达分别提高了64．3％、87．5％和90．8％。结论乙肝病毒X蛋白可上调HepG2细胞内多药耐药相关基因的表达，从而促进肝癌多药耐药性的产生。     

长链非编码RNA调节细胞周期素D1表达对结直肠癌细胞辐射敏感性的影响

目的筛选影响结直肠癌细胞辐射敏感性的长链非编码RNA（1ncRNA）并探讨其作用机制。方法选取RKO和Lovo结直肠癌细胞株梯度照光后行克隆形成实验。应用单击多靶数学模型计算存活分数SF2值并绘制剂量存活曲线：高通量IncRNA／mRNA芯片筛选在RKO与Lovo、以及2Gv照光前后RKO细胞中表达差异2倍以上的lncRNA基因和蛋白编码基因：采用GeneOntology联合Pathway综合分析阳性表达基因主要作用通路：实时PCR进一步检测验证RKO细胞株照光前后P53、P21、细胞周期素（cyclin）D1表达变化。结果克隆形成实验显示,Lovo细胞株SF2=0．47．RKO细胞株SF2=0．53,Lovo辐射敏感性显著高于RKO（P〈O．05）。高通量lncRNA／mRNA芯片筛选得到阳性表达长链非编码RNA基因268条,蛋白编码基因270条;GeneOntologv联合Pathway综合分析显示：细胞周期相关基因所占比重最大（38．6％）,并有多条lncRNA表达水平与cvclinD1编码基因CCNDl组间表达差异显著相关。RKO与Lovo两株细胞P53和P21相对表达量的差异均无统计学意义（P〉0．05）,RKO细胞cyclinD1相对表达量明显高于Lovo细胞（P〈0．05）;RKO细胞株经2Gy剂量照射前后,P53和P21相对表达量的差异无统计学意义（P〉0．05）,而cvclinD1表达明显下调（P〈0．05）。结论incRNA可能通过形成转录复合物与CCNDl基因结合,调节cvclinD1蛋白表达进而影响结直肠癌细胞辐射敏感性：且lncRNA对cvclinD1表达的调节不依赖于P53-P21-cyclinD1通路。     

JAK2-STAT3-波形蛋白信号通路对结肠癌细胞增殖迁移的影响

目的探讨JAK2-STAT3-波形蛋白信号通路在结肠癌细胞增殖迁移中的作用。方法应用JAK2抑制剂AG490处理人结肠癌Lovo细胞株。采用MTT法进行细胞增殖实验：采用细胞划痕实验检测细胞迁移能力;用免疫荧光染色和Western blot检测Lovo细胞中波形蛋白和磷酸化STAT3（P—STAT3）的表达水平。结果AG490处理后,Lovo细胞增殖明显受到抑制．且呈剂量依赖性和时间依赖性（P〈0．05）。细胞划痕后24h,AG490处理组（实验组）的细胞划痕宽度恢复20％,而对照组划痕宽度恢复60％（P〈0．05）。实验组Lovo细胞中P—STAT3和波形蛋白蛋白表达明显降低（P〈0．05）。结论JAK2-STAT3-波形蛋白信号通路参与调控人结肠癌细胞的增殖和迁移。     

腺病毒介导的Bcl-XL shRNA对结肠癌细胞的体外抗肿瘤性

目的研究腺病毒介导的Bcl—XL shRNA对结肠癌细胞株的体外抗肿瘤性。方法将已有的Bcl-XL腺病毒进行扩增纯化．并通过反转录反应分析该腺病毒在mRNA水平对Bcl-XL的表达调控。通过MTT检测及克隆形成实验,了解该腺病毒对结直肠癌细胞株（Lovo细胞株）的体外杀伤作用。结果Ad／Bcl．XLshRNA作用于Lovo细胞株导致Bcl—XL mRNA表达水平下降。与对照腺病毒Ad／GFP相比,Ad／Bcl-XL shRNA显著抑制Lovo细胞的增长（P〈0．05）,且该抑制效应呈剂量和时间依赖性;显著抑制Lovo细胞的克隆形成（P〈0．05）,且该抑制效应呈剂量依赖性。而Ad／Bcl—XL shRNA对正常人成纤维细胞（NHFB）无明显杀伤作用。结论腺病毒介导的Bcl-XL shRNA对Lovo细胞株具有杀伤作用,可能存在潜在的结肠癌治疗价值。     

藤黄酸逆转人结肠癌细胞株SW480奥沙利铂耐药性的作用及机制研究

目的探讨藤黄酸对多药耐药人结肠癌细胞株SW480/L—OHP的耐药逆转及其对多药耐药基因（MDR1）和P-糖蛋白（P—gP）表达的影响。方法采用逐步增加药物浓度的方法建立奥沙利铂耐药结肠癌细胞株SW480/L—OHP。噻唑蓝（MTT）法测定SW480/L-OHP细胞株的耐药指数和藤黄酸在无细胞毒浓度下对结肠癌细胞耐受奥沙利铂的逆转作用,流式细胞术检测细胞凋亡、周期变化,RT—PCR检测各组细胞MDRlmRNA表达水平,Westernblot检测各组细胞P—gP蛋白的表达水平。结果藤黄酸对结肠癌SW480及SW480/LOHP细胞增殖均具有抑制作用,且呈量效关系。奥沙利铂与低毒剂量藤黄酸共同作用SW480/L-OHP细胞,其Ic50显著降低（P〈0．05）,耐药逆转倍数为3．72。与奥沙利铂单药组相比,加入低毒剂量藤黄酸后,细胞凋亡率明显增加,差异有统计学意义（P〈0．05）。藤黄酸作用后MDRlmRNA转录水平降低,同时下调了P—gp蛋白表达。结论藤黄酸部分逆转SW480/L—OHP细胞对奥沙利铂的耐药性,其机制与增加细胞内奥沙利铂的蓄积,抑制MDRl基因的表达及降低P—gp的表达有关。     

RNA干扰逆转人胃癌细胞多药耐药的研究

目的：研究RNA干扰沉默多药耐药（multidrug resistance,MDR）基因对胃癌多药耐药细胞株BGC-823/5-Fu生长的影响。方法：构建靶向MDR1的shRNA干扰质粒转染人胃癌多药耐药细胞株BGC-823/5-FU,噻唑蓝（MTT）法检测耐药细胞对5-Fu的敏感性,实时荧光定量PCR（Real-time-PCR）检测MDR1 mRNA表达的变化,Western blot检测各组细胞P-gp表达的变化,流式细胞术检测细胞周期变化、凋亡情况。结果：与RNAi-control组和normal组相比,RNAi-MDR1组细胞干扰质粒细胞的IC50明显降低,为2.104±0.242（P〈0.05）,敏感性的相对逆转率为76.8%;MDR1 mRNA表达明显下调（P〈0.05）;P-gp的表达水平降低（P〈0.05）;凋亡率明显升高至（5.757±0.684）%。结论：应用RNA干扰有效抑制了MDR1的表达,使P-gp的表达降低,增强了BGC-823/5-Fu细胞对5-Fu的敏感性,为寻找逆转胃癌细胞多药耐药有效方法奠定了基础。     

原发性肝癌多药耐药基因的表达与化疗敏感预测的相关性研究

目的探讨原发性肝癌多药耐药基因的表达与化疗敏感预测的相关性。方法取64例肝癌切除组织行ATP-TCA法肿瘤体外药敏试验。以RT—PCR法半定量检测肝癌多药耐药基因表达情况，分析多药耐药基因的表达与化疗敏感预测的相关性。结果1．原发性肝癌5种耐药基因的表达率分别为：MDR190、63％、MRP96．88％、GST-π96．88％、LRP90.63％、TOPOⅡ96.88％，各耐药基因的表达率间无显著相关。2，多药耐药基因MDR1、MRP、GST-Ⅱ、LRP、TOPOⅡ的表达量在肝癌组织分别为1．17±0．47、1．59±0．33、1．18±0．48、1．03±0．48、1．00±0．31．在癌旁组织分别为1．11±0．38，1．32±0．44，1．04±0．42．0．96±0．32，1．19±0．28，除TOPOⅡ外，癌旁组耐药基因mRNA表达量低于肝癌组的表达量，两者间的差别无显著性（P〉0．05）。3．多药耐药基因的表达与疗效的关系显示：在有效组中MDR1、MRP、GST-ⅡLRPmRNA的表达量低于无效组，且在MDR1、MRP、LRP存在显著差别（P〈0．05）。TOPOⅡmRNA的表达量有效组高于无效组，但差异无显著性（P〉0．05）。4．ATP—TCA法肿瘤体外药敏试验临床敏感预测准确率为77．27％（17／22），对抗药性的预测准确率为100％（2／2）；临床符合率为79．17％。5．MDR1的表达量与MIT、VP-16、EPI、TAX的IC。值正相关；MRP的表达量与MIT、VP-16、EPI的IC50值正相关；GST-π的表达量与5．FU、CDDP、OXA、GEM的IC50值正相关；LRP的表达量与5-FU、CDDP、OXA、EPI、GEM的IC50值正相关；TOPOⅡ的表达量与CPT的IC50值正相关。6．多药耐药基因预测化疗的准确率为72．70％。结论在肝癌存在实现化疗敏感预测基因化的可行性．可通过监测多药耐药基因的表达来预测化疗的效果．选择相关的化疗药物。     

结直肠癌转移生物标记物的蛋白质组学研究

目的应用蛋白质组学技术寻找结直肠癌转移潜在标志物,研究氟尿嘧啶（5-Fu）对差异蛋白表达的影响,并初步探讨结直肠癌的转移机制。方法常规培养Lovo及SW480细胞至指数生长期后提取蛋白。采用MTF法检测5-Fu对此两种细胞的半数抑制浓度（IC50）,分别用IC50的5-FU干预Lovo和SW480细胞后提取蛋白。对所提取的蛋白进一步行二维凝胶电泳,选取表达有显著差异的点进行质谱检验和生物信息学分析。采用Western blot及免疫荧光验证5-FU作用前后两种细胞显著差异蛋白的表达。结果二维凝胶电泳和质谱分析成功鉴定出11种差异蛋白．根据预设条件筛选出：核内不均匀核糖核蛋白K（hnRNP K）、蛋白质二硫键异构酶（PDI）。Western blot及免疫荧光实验显示;Lovo细胞株中hnRNPK蛋白表达较SW480高,PDI蛋白表达较SW480低：5-Fu干预后．Lovo细胞株中hnRNP K蛋白表达下调程度较SW480显著．免疫荧光强度减弱,SW480细胞株中PDI蛋白表达上调幅度较Lovo细胞显著,免疫荧光强度增强。结论hnRNP K和PDI表达在不同转移潜能结直肠癌细胞系Lovo和SW480存在显著差异,5-Fu干预后其表达有着规律性改变。     

与放疗抵抗相关的长链非编码RNA在不同放疗敏感性结直肠癌细胞株中的表达

目的 筛选与结直肠癌细胞放疗敏感性相关的长链非编码RNA（lncRNA）.方法 将HT29、SW480、RKO、Lovo和HCT116等5株结直肠癌细胞梯度照光后行克隆形成实验,通过细胞存活率（SF2值）来检测5株细胞的放疗敏感性差异;利用高通量lncRNA芯片筛选在SW480、RKO和Lovo细胞株中两两比较表达差异均大于2倍的lncRNA,并通过实时定量PCR进一步检测所选lncRNA在5株结直肠癌细胞中的表达差异.结果 5株结直肠癌细胞放疗敏感性由低至高（即SF2值由高至低）依次为HT29 （0.83±0.03）、SW480 （0.69±0.02）、RKO （0.53±0.02）、Lovo （0.47±0.05）和HCT116（0.32±0.03）（P＜0.01）.lncRNA芯片筛选得到5种与结直肠癌细胞放疗敏感性相关的lncRNA基因,其中R05532、NR_015441和NR_033374基因表达水平与细胞放疗抵抗呈正相关（均P＜0.01）,而NR_073156和AA745020基因表达水平与细胞放疗抵抗无明显相关性（均P＞0.05）.结论 R05532、NR_015441和NR_033374三种lncRNA可能成为结直肠癌细胞放疗敏感性的预测分子,其高表达提示放疗抵抗。     

CEA启动子特异性启动双自杀基因CD与TK在CEA＋恶性肿瘤中表达

目的探讨CEA启动子（CEA promoter，Cp）在肿瘤细胞特异性启动双自杀基因胞嘧啶脱氨酶（cytosine deaminase，CD）与胸苷激酶（thymidine kinase，TK）的作用。方法培养Lovo与Hela细胞，传代冻存。10μl带有Cp．CD．TK重组腺病毒（recombinant adenovirus with Cp．CD．TK，RA-Cp．CD．TK）病毒液转染Lovo与Hela，荧光显微镜观察，收集细胞提取总RNA，PCR扩增Cp、CD与TK，电泳鉴定。病毒转染Lovo与Hela传代接种96孔培养板，每株细胞分两组，每组24孔：第一组给予5-氟胞嘧啶（5-fluorocytosine，5-Fc）10mg／L培养液，第二组给予更昔洛韦（ganeiclovir,GCV）5mg／L培养液，光镜观察细胞形态，台盼蓝染色检测细胞活力。结果转染病毒的Lovo细胞及Hela细胞均可见绿色荧光，PCR均可扩增出Cp、CD和TK。5-Fc和GCV对Lovo细胞具有很强的杀伤作用，对Hela细胞则微弱，5-Fc实验组Lnvo细胞活力平均为8．54％±1．34％．Hela细胞平均为95．05％±2．18％（P〈0.01）。GCV实验组Lovo细胞活力平均为8．38％±1．22％，Hela细胞平均为95．39％±1．64％（P〈0．01）。结论RA-Cp．C．T靶向性杀伤CEA＋的Lovo结肠癌细胞，而对CEA-的Hela子宫颈癌细胞生长无影响。     

CD133与胃癌细胞化疗耐药的关系及其机制

目的探讨CDl33阳性胃癌起始细胞对常规化疗药物氟尿嘧啶（5．FU）的敏感性及其耐药机制。方法免疫磁珠法分选KATO—III、SGC7901和MKN-45胃癌细胞株并分为未分选组、CDl33＋组及CDl33一组。Westernblot法和RT—PCR法分别检测分选后胃癌细胞CDl33、P—gP、Bax和Bcl-2蛋白及mRNA表达水平。免疫荧光法检测各组细胞P-gP及Bcl-2蛋白的表达。CCK-8法和Hoechest染色检测各组细胞对5．FU的敏感性。siRNA干扰MKN45细胞CDl33表达后，检测CDl33、P-gP、Bcl-2、Akt及p-Akt蛋白及mRNA表达。结果CDl33＋组胃癌细胞中CDl33、P—gP及Bcl-2蛋白和mRNA表达水平均显著高于未分选组及CDl33-组（均P〈0．05），而促凋亡因子Bax的表达水平则明显降低（P〈0．05）。在相同药物浓度下，5-Fu对CDl33＋组的抑制率显著低于CDl33一组（P〈0．05）。5-FU处理胃癌细胞后，CDl33＋组胃癌细胞中凋亡细胞比率明显低于CDl33-组及未分选组（P〈0．05）。CDl33特异siRNA干扰胃癌细胞后，干扰组P—gP、Bcl-2和p-Akt蛋白及mRNA表达显著降低（均P〈0．05），而Bax表达水平则显著增加（P〈0．05）。结论CDl33可能通过调节P-gp和Bcl-2的表达来促进胃癌的化疗耐药；在胃癌化疗耐药产生中，CDl33＋细胞可通过P13K／Akt通路起作用。     

干扰素α2a对人结肠癌细胞胸苷磷酸化酶表达和5＇脱氧氟尿苷抗癌活性的影响

目的探讨干扰素-α2a（IFN-αt2a）对人结肠癌细胞胸苷磷酸化酶（TP）mRNA表达水平以及5＇-脱氧氟尿苷（5’-DFUR）和氟尿嘧啶（5-FU）抗癌效应的影响。方法不同剂量IFN-α2a分别处理人结肠癌细胞LOVO和SW480．荧光定量PCR检测TPmRNA表达水平：MTT法检测联合应用IFN-α2a前后5．FU和5＇-DFUR对LOVO和SW480抑制作用的半数有效浓度（IC50）变化情况。结果与0U／mlIFN-α2a浓度组相比．500U／ml及5000U／ml组可明显上调LOVO和SW480细胞TPmRNA表达（P〈0．01）,而50U／ml则对上述两种细胞TPmRNA表达水平无明显影响（P〉0．05）。联合应用浓度为20U／ml的IFN-α2a后．5．FU对LOVO和SW480细胞的IC50无明显改变（P〉0．05）．但5’-DFUR的IC50则明显降低（P〈0．05）。结论IFN-α2a能上调结肠癌细胞TPmRNA的表汰水平并可使5＇-DFIIR对结肠痛细胞的1C50明显下降而对5-FI7则无明显影响。     

SiRNA联合介导Livin和Survivin基因沉默诱导人肾癌细胞786-O化疗敏感性的实验研究

目的:观察siRNA联合介导Livin和Survivin基因的沉默诱导人肾癌细胞786-O化疗敏感性的作用。方法:构建Livin和Suvivin联合靶向的小干扰RNA(siRNA)重组表达载体shRNA,然后将目的载体转染于人肾癌细胞株786-O。应用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)及Western blot方法分别检测转染前细胞经顺铂、5-FU和丝裂霉素处理后的Livin和Survivin基因的mRNA与蛋白水平的变化。应用CCK-8试验检测转染前后细胞对顺铂、5-氟尿嘧啶(5-FU)和丝裂霉素的半数致死量(IC50)、细胞增殖的变化。结果:CCK-8结果显示,联合介导Livin和Survivin基因沉默组细胞较分别单独介导细胞组化疗的敏感性明显增强(P0.05),且转染前后细胞对顺铂、5-FU和丝裂霉素的IC50发生显著变化(P0.05)。结论:SiRNA联合介导Livin和Survivin基因表达下调,发挥协同增强的siRNA作用。     

氟尿嘧啶对人结肠癌SW480细胞ABCG2表达的影响

目的观察氟尿嘧啶（5-FU）对人结肠癌SW480细胞ABCG2表达的影响。方法用不同药物浓度的5-FU处理SW480细胞,用CCK8法检测5-FU在SW480中的IC50,流式细胞仪检测SW480细胞ABCG2的阳性表达率．RT—PCR检测ABCG2的mRNA在SW480细胞中的表达差异。结果5-FU对SW480细胞的IC50随着药物浓度的增加而升高（P〈0．05）。流式细胞仪检测发现,正常SW480细胞（A组）中ABCG2阳性表达率为（6．26±0．86）％;在药物处理48h后即刻检测时（B组）的阳性表达率下降至（3．43±1．18）％（P〈0．05）;在药物处理48h后的第2代细胞检测时（c组）则升高至（12．91±3．42）％（P〈0.05）。3组ABCG2mRNA表达趋势与流式细胞仪检测结果的趋势一致。结论不同浓度的5-FU可以影响人结肠癌SW480细胞ABCG2的表达。     

抑制自噬对5-氟尿嘧啶治疗肝癌疗效的影响及机制研究

目的研究自噬特异性抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）对5-氟尿嘧啶（5-FU）诱导肝癌细胞系SMMC7721凋亡的影响,并初步探讨其机制。方法利用单丹（磺）酰戊二胺（MDC）染色技术,在荧光显微镜下对细胞自噬进行定性观察;以CCK8法检测3-MA抑制细胞自噬前后经5-FU诱导SMMC7721细胞的存活,凋亡以AnnexinⅤ/PI流式细胞分析法检测;以Western blot法分别检测自噬特异性蛋白LC3及凋亡蛋白caspase-3活化片段和PARP裂解片段的表达。结果 5-FU处理肝癌SMMC7721细胞48 h后,可诱导其发生自噬,细胞存活率为（60.73±2.65）%,凋亡率为（40.42±2.34）%;联合应用3-MA处理48 h后,可使肝癌SMMC7721细胞存活率明显降低（P〈0.01）,为（42.31±1.32）%,而细胞凋亡率显著增加（P〈0.01）,为（60.92±2.99）%,同时引起自噬特异性蛋白LC3-Ⅱ及凋亡蛋白caspase-3活化片段和PARP裂解片段表达增加,其灰度值比较差异均有统计学意义（均P〈0.01）。结论自噬在5-FU诱导肝癌细胞系SMMC7721凋亡过程中起保护性作用,抑制自噬可提高肝癌SMMC7721细胞对5-FU的敏感性,其可能主要通过激活caspase-3及剪切PARP来实现的。因此,自噬特异性抑制剂3-MA可能为提高肝癌对5-FU的敏感性提供新思路。     

人结肠癌相关成纤维细胞对结肠癌Lovo细胞生物学行为的影响

目的探讨人结肠癌相关成纤维细胞（CAF）对结肠癌Lovo细胞增殖、黏附、迁移和侵袭等生物学行为的影响。方法收集人结肠CAF及正常成纤维细胞（NF）条件培养基,建立结肠CAF、NF与Lovo细胞间的共培养模型,以无血清培养基处理的Lovo细胞作为空白组．进行细胞增殖、黏附、迁移及Transwell侵袭能力检测。结果Lovo细胞与结肠CAF共培养后。增殖48和72h反映细胞增殖的吸光度（A）值分别为（0．667±0．059）和（0．709±0．030）,明显高于空白组[（0．574±0．031）和（0．593±0．031）]和NF组[（0．597±0．036）和（0．652±0．029）],差异均有统计学意义（P〈0．01）;黏附细胞的A值为（0．588±0．067）,也明显高于空白组（0．226±0．039）和NF组（O．375±0．059）,差异也均有统计学意义（P〈O．01）;12h和24h细胞迁移率分别为（35．2±8．7）％和（64．6±7．1）％,明显高于空白组[（14．7±3．6）％和（26．3±10．3）％]和NF组[（14．1±7．3）％和（35．2±9．8）％]（P〈O．01）;透膜细胞数为（56．2±4．8）个,多于空白组的（14．6±2．2）个和NF组的（22．9~4．5）个（P〈O．01）。结论人结肠CAF具有增强结肠癌Lovo细胞增殖、黏附、迁移和侵袭的能力。