IGF-ⅠR和IR在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达

本研究的目的是探讨胰岛素样生长因子Ⅰ受体(insulin-like growth factor-Ⅰreceptor,IGF-ⅠR)、胰岛素受体(insulin receptor,IR)在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)患者的外周血淋巴细胞表面的表达及其与临床特征的关系。收集43例儿童ALL和14例健康儿童外周血标本,采用实时定量PCR检测IGF-ⅠR和IR mRNA的表达。结果表明:儿童ALL和正常儿童的外周血淋巴细胞表面均表达IGF-ⅠR mRNA。ALL初发组、复发组及高血糖组的IGF-ⅠR mRNA表达水平与正常对照组相比明显升高(P=0.000,P=0.002和P=0.05)。完全缓解组与初发组和复发组相比,IGF-ⅠR mRNA表达水平明显减低(P=0.000和P=0.018)。初发组和复发组ALL患儿外周血淋巴细胞IR mRNA表达水平明显低于正常对照组(P=0.001和P=0.018)。完全缓解组与初发组和复发组相比表达量升高,差异有统计学意义(P=0.000和P=0.001)。ALL儿童外周血淋巴细胞IGF-ⅠR mRNA和IR mRNA在不同病程阶段的表达差异有统计学意义,但表达水平与性别、年龄及初诊时白血病计数无关。结论:IGF-ⅠR的表达与儿童ALL病程相关,病情进展时(初发、复发)表达升高,病情缓解(CR)时则降低,提示IGF-ⅠR在ALL增殖中起重要作用,其表达量增高可能反映了ALL细胞恶性增殖倾向。     

胰岛素样生长因子Ⅰ对A549细胞和淋巴细胞IGF-Ⅰ受体mRNA表达调控的研究

目的研究肺腺癌细胞株A549和淋巴细胞在外源性胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)作用下,各自IGF-Ⅰ受体(IGF-ⅠR) mRNA的表达情况.方法采用多重RT-PCR对IGF-ⅠR mRNA进行半定量检测,研究0、5、20、 80、 160、320 ng/ml不同浓度的重组人胰岛素样生长因子Ⅰ(rIGF-Ⅰ)及在某一特定浓度下作用不同时间对培养的A549细胞和淋巴细胞IGF-ⅠR mRNA表达的影响.结果当IGF-Ⅰ增加至20 ng/ml以上,淋巴细胞IGF-ⅠR mRNA的表达显著降低,而A549细胞IGF-ⅠR mRNA的表达未见明显改变.结论外源性IGF-Ⅰ不能显著降低肺腺癌细胞IGF-ⅠR的转录水平,提示IGF-ⅠR在肺腺癌的恶性增殖过程中可能起重要作用.     

转基因小鼠胰岛β细胞株胰岛素样生长因子1受体和胰岛素受体表达与小檗碱的干预效应

目的:观察小檗碱对转基因小鼠胰岛β细胞株胰岛素受体和胰岛素样生长因子1受体mRNA表达的影响。方法:实验于2005-09/2006-10在华中科技大学同济医学院附属同济医院中西医结合研究所完成。①实验材料:培养NIT-1细胞,在低糖(5.5mmol/L)和高糖(11.1mmol/L)环境下,分别加入0,1,3,10,30μmol/L的小檗碱和1μmol/L的格列苯脲,0μmol/L小檗碱组为空白对照组。②实验评估:培养24h后,采用四甲基偶氮唑盐法检测小檗碱NIT-1细胞增殖抑制作用;逆转录-聚合酶链反应测定NIT-1细胞胰岛素受体和胰岛素样生长因子1受体mRNA表达。结果:①四甲基偶氮唑盐法检测发现,不同浓度小檗碱(1～30μmol/L)与NIT-1细胞作用24h后,小檗碱组吸光度值比空白对照组低,随着小檗碱浓度的增加,吸光度值逐渐从0.356±0.061降低至0.162±0.014,而且在各组之间有显著性差异。②在低糖及高糖环境下,与空白对照组相比,小檗碱能促进NIT-1细胞胰岛素受体mRNA的表达(低糖环境:0.27±0.04,0.49±0.02;高糖环境:0.22±0.04,0.42±0.03;P<0.01),但仍低于格列苯脲组(低糖环境:0.75±0.22;高糖环境:0.78±0.01;P<0.01);而且随着小檗碱浓度的升高,NIT-1细胞胰岛素受体mRNA表达的增加更为明显,分别从0.49±0.02增高至0.68±0.44及从0.42±0.03增高至0.71±0.01。与空白对照组相比,小檗碱组胰岛素样生长因子1受体mRNA的表达无明显改变。结论:小檗碱促进胰岛素分泌,其作用机制可能与促进胰岛β细胞胰岛素受体mRNA表达有关。     

胰岛素影响白血病细胞增殖信号通路研究的新进展

胰岛素在肿瘤发生发展中的作用日益得到肯定,而胰岛素受体(IR)和胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)在结构上具有高度同源性,它们在白血病细胞中表达增高.研究证实,胰岛素能促进白血病肿瘤细胞增殖,其机制可能是通过结合IR、IGF-1R或IR-IGF-1R杂合受体,激活PI3K/Akt信号通路而起作用.然而,大剂量胰岛素有可能抑制白血病细胞增殖,其机制不清楚.通过阻断IR、IGF-1R可抑制白血病细胞增殖,因而IR、IGF-1R有可能成为白血病靶向治疗的新靶点.本文主要对胰岛素影响白血病细胞增殖信号传导通路的最新进展做一综述.     

骨髓增生异常综合征克隆细胞胰岛素样生长因子Ⅰ型受体的表达

目的 探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓克隆细胞表面胰岛素样生长因子Ⅰ型受体(IGF-Ⅰ R)的表达状况.方法 联合应用DNA荧光原位杂交(FISH)、免疫细胞化学(碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶系统,APAAP)技术检测40例MDS患者骨髓克隆细胞的IGF-Ⅰ R表达.结果 MDS患者骨髓克隆细胞表面IGF-Ⅰ R表达明显高于正常细胞[分别为(84.5±14.2)％和(11.4±12.1)％](P＜0.01).MDS患者骨髓克隆细胞阳性率与有核细胞IGF-Ⅰ R表达率明显相关(r=0.929,P＜0.01).高危组MDS患者骨髓克隆细胞IGF-Ⅰ R表达与低危组差异无统计学意义.不同异常核型的克隆细胞IGF-Ⅰ R表达率差异也无统计学意义.结论 IGF-Ⅰ R表达阳性提示细胞的恶性增殖倾向,可能作为MDS骨髓恶性克隆细胞的标志物.     

胰岛素影响白血病细胞增殖信号通路研究的新进展

胰岛素在肿瘤发生发展中的作用日益得到肯定,而胰岛素受体(IR)和胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)在结构上具有高度同源性,它们在白血病细胞中表达增高。研究证实,胰岛素能促进白血病肿瘤细胞增殖,其机制可能是通过结合IR、IGF-1R或IR-IGF-1R杂合受体,激活PI3K/Akt信号通路而起作用。然而,大剂量胰岛素有可能抑制白血病细胞增殖,其机制不清楚。通过阻断IR、IGF-1R可抑制白血病细胞增殖,因而IR、IGF-1R有可能成为白血病靶向治疗的新靶点。本文主要对胰岛素影响白血病细胞增殖信号传导通路的最新进展做一综述。     

胰岛素对人白血病细胞增殖的影响

胰岛素(INS)作为-种具有多项生物学效应的激素,除了经典的代谢调节作用外,还具有调控细胞增殖、分化,保证胚胎及未成年个体的生长发育等方面的作用.胰岛素在体外能刺激细胞的增殖及分化,越来越多的研究证明其在体内也是-种重要的生长调节因子.胰岛素在细胞水平的作用是由姨岛素与细胞表面的胰岛素受体的结合所启动,但在较高的胰岛素浓度下也可以通过胰岛素样生长因子-1(IGF-1)受体途径而发挥作用,在不同细胞体系中可能会有所不同.人急性髓系白血病(AML)和骨髓增生异常综合征(MDS)细胞膜上广泛表达胰岛素受体(INSR)和胰岛素样生长因子受体-1(IGF-I R).最近,高姨岛素血症与肿瘤关系的研究屡见报告.本文就胰岛素促人白血病细胞增殖的作用及其可能机制、抑制肿瘤细胞增殖的作用及其可能机制、胰岛素类似物潜在的应用前景等方面作-综述.     

慢性乙型肝炎患者肝组织胰岛素受体底物2的表达及其酪氨酸磷酸化的研究

目的 观察慢性乙型肝炎(CHB)患者肝组织胰岛素受体底物2(IRS-2)的mRNA和蛋白表达及其酪氨酸磷酸化程度,探讨IRS-2在CHB患者胰岛素抵抗(IR)发生中的作用.方法 选择6例肝功能正常者(对照组)及18例CHB患者,CHB患者再按HOMA模型计算的胰岛素抵抗指数分为CHB非IR(＜2.69)组(10例)和CHB合并IR(＞2.69)组(8例).所有患者于术中及肝穿刺后留取肝组织,采用逆转录-聚合酶链反应检测IRS-2 mRNA表达;采用蛋白质免疫印迹法检测IRS-2蛋白表达;采用免疫沉淀及增强化学发光法检测IRS-2酪氨酸磷酸化程度.结果 CHB非IR组肝组织IRS-2 mRNA(0.38±0.06)、蛋白(0.94±0.18)表达及酪氨酸磷酸化程度(0.78±0.09)较对照组(分别为0.45±0.11、0.99±0.20、1.00±0.23)有所降低,但差异无统计学意义(均P＞0.05);CHB合并IR组IRS-2mRNA(0.26±0.08)、蛋白(0.67±0.11)表达及酪氨酸磷酸化程度(0.63±0.14)均较对照组明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 CHB合并IR患者肝组织IRS-2的mRNA和蛋白表达及酪氨酸磷酸化程度的降低可能是产生IR的机制之一.     

胰岛素样生长因子及其受体在难愈性溃疡组织中的表达特征

目的探讨IGF-Ⅰ与其受体两亚基(α,β)在正常皮肤和溃疡中的分布和表达特征。方法溃疡8例和正常皮肤8例用免疫组化方法确定3种蛋白定位和表达量。结果在溃疡组织中,与正常皮肤相比IGF-Ⅰ表达虽有所升高,但增加不显著(P>0.05),蛋白定位差异无显著性意义。含有IGF-ⅠRα和IGF-Ⅰβ蛋白的阳性细胞主要为部分表皮细胞、单核细胞和巨噬细胞,两种蛋白的阳性表达率分别降至正常皮肤的43.9%和50.0%(P<0.05)。结论在IGF-Ⅰ因子高浓度环境中,溃疡创面难愈性修复可能与IGF-Rα和IGF-Ⅰβ蛋白表达下降,引起因子与受体结合发生障碍相关。     

胰岛素样生长因子系统与骨代谢

胰岛素样生长因子（IGF）系统是调节胚胎分化、个体发育的重要组成部分,也是营养物质代谢的重要调控因子。整个系统包括胰岛素（INS）,胰岛素样生长因子Ⅰ（IGF-Ⅰ）与胰岛素样生长因子Ⅱ（IGF-Ⅱ）,均为肽类家族激素;其对应受体：胰岛素受体（IR）、IGF-Ⅰ受体、IGF-Ⅱ受体,为酪氨酸激酶受体;6个具有结合、贮存和转运IGF的作用的结合蛋白（IGFBPs）。     

拮抗醛固酮受体对大鼠心肌细胞胰岛素敏感性的影响

目的 观察螺内酯对胰岛素诱导的心肌细胞3 H-D-葡萄糖掺入率以及脂联素、炎性因子表达的影响.方法 原代培养心肌细胞,分为对照组、胰岛素组、螺内酯10-7 mmol/L组,螺内酯10-6 mmol/L组,螺内酯10-5mmol/L组,干预24小时.检测3 H-D-葡萄糖掺入率以及心肌细胞脂联素、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)的表达变化.结果 螺内酯10-7 mmol/L、10-6 mmol/L、10-5mmol/L组心肌细胞与胰岛素组比较,其3 H-D-葡萄糖掺入率增加(12.35±1.12)nmol·mg-1·h-1、(13.07±0.62)nmol·mg-1·h-1、(13.87±0.13)nmol·mg-1·h-1 vs (10.61±1.14)nmol·mg-1·h-1,差异有统计学意义(P＜0.01);脂联素mRNA和蛋白表达量亦增加0.76±0.08、0.95±0.14、1.28±0.21 vs0.35±0.04,0.14±0.03、0.16±0.03、0.18±0.02 vs 0.22±0.08(P均＜0.01);TNFαmRNA表达量下降,0.29±0.03、0.28±0.01、0.18±0.03 vs0.33±0.05,差异有统计学意义(P＜0.01).螺内酯10-6、10-5组心肌细胞与胰岛素组比较,IL-6 mRNA表达量下降(0.24±0.02)、(0.20±0.04)vs (0.27±0.03),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 拮抗醛固酮受体可明显逆转胰岛素诱导的心肌细胞脂联素的表达下降,降低炎性因子水平,改善胰岛素敏感性.     

环指蛋白6对胰岛素受体底物1泛素化作用的研究

目的：构建环指蛋白6（RNF6）真核表达载体,并探讨其对胰岛素受体底物1（IRS-1）的泛素化作用。方法以人cDNA为模板,PCR 扩增 RNF6全长编码基因,并将其克隆至载体质粒 pcDNA3．1-CHA 中,将重组质粒转染肝癌细胞株 HepG2,利用实时荧光定量 PCR（RT-PCR）、免疫印迹（Western blot）检测细胞内 IRS-1 mRNA 水平及其蛋白表达水平。结果携带RNF6目的基因的质粒转染 HepG2细胞48 h 后 IRS-1的 mRNA 表达水平降低,为对照组的69％,显著低于对照组,差异有统计学意义（P ＜0．01）。结论RNF6引起 IRS-1的表达下调,这一泛素化过程可能导致胰岛素信号转导障碍。     

妊娠糖尿病子代红细胞膜胰岛素受体与胰岛素抵抗关系的研究

目的探讨妊娠糖尿病（GDM）子代红细胞膜胰岛素受体与胰岛素抵抗之间的关系。方法 32例妊娠糖尿病其儿童,22例正常妊娠其儿童,测定空腹血糖（FBG）、空腹胰岛素（FINS）、餐后2 h血糖（2 hBG）、餐后2 h胰岛素（2 hINS）、胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）,并检测高、低亲和力红细胞膜胰岛素受体数目（R1、R2）和亲和力常数（K1、K2）,计算胰岛素抵抗指数（IRI）。结果 GDM组儿童R1、R2低于对照组（P〈0.05）;GDM组儿童体重、BMI、FINS水平高于正常对照组（P〈0.05）。多元线性逐步回归分析结果显示,进入回归方程的因素有BMI（t=3.362,P〈0.05）、R1（t=-2.613,P〈0.05）、R2（t=-2.541,P〈0.05）,提示以上因素是影响GDM组儿童IR的主要危险因素。结论妊娠糖尿病（GDM）子代存在胰岛素抵抗,且与红细胞膜胰岛素受体数目减少、亲和力下降及肥胖有密切关系。     

肺心病患者胰岛素抵抗的临床研究

目的观察肺心病急性期患者空腹血清胰岛素、空腹血糖、胰岛素敏感指数水平变化,探讨肺心病患者是否存在胰岛素抵抗。方法选择2006年11月至2008年12月在我院住院的31例肺心病急性期患者作为实验组,选择同期健康体检31例作为对照组。2组临床基线资料匹配。所有选定的参选者均测定空腹血糖(FBG)、FINS及胰岛素敏感指数(ISI)。FBG采用葡萄糖氧化法测定,FINS采用酶联免疫吸附法测定,ISI采用李光伟等提出的计算方法进行计算。结果实验组FINS水平明显高于对照组〔(16.63±8.74〕vs(6.08±2.53)μIU/ml,P<0.01〕,FBG水平显著高于对照组〔(6.48±2.33)vs(4.79±0.75)mmol/L,P<0.01〕,ISI显著低于对照组〔(-4.26±0.92)vs(-3.26±0.51),P<0.01〕。结论肺心病急性期患者存在胰岛素抵抗,胰岛素抵抗为其重要的危险因素,这为肺心病患者使用胰岛素增敏剂治疗提供了科学依据。     

慢性疲劳综合征患者外周血单个核细胞中转化生长因子β1 mRNA及雌二醇受体β野生型mRNA的表达水平

目的 探讨慢性疲劳综合征(CFS)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA及雌二醇受体p野生型(ERβwt)mRNA表达及其与CFS的发病关系.方法 用实时荧光定量逆转录(FQ-RT)-PCR检测63例CFS患者、50例其他疾病患者(疾病对照组)、50名健康体检者(健康对照组)外周血PBMCs中TGF-β1 mRNA和ERβwt mRNA的表达水平和含量.以△Ct=Ct(待测基因)-Ct(内参基因)来比较基因表达水平的变化.结果 CFS患者TGF-β1 mRNA表达水平(△Ct=3.27±0.58)明显高于健康对照组(△Ct=4.37±1.00,t=7.02,P<0.01)和疾病对照组(△Ct=4.54±1.05,t=8.11,P<0.01).CFS患者ERβwt mRNA表达水平(△Ct=9.34±0.92)明显低于健康对照组(△Ct=7.10±0.48,t=15.47,P<0.01)与疾病对照组(△Ct=7.12±0.47,t=15.44,P<0.01);结论CFS患者TGF-β1 mRNA表达水平显著高于健康人和疾病对照组;CFS患者ERβwtmRNA表达水平显著低于健康人和疾病对照组,TGF-β1 mRNA和ERβwt mRNA的表达可能参与了CFS的发病过程.     

Distinct effects of ketone bodies on down-regulation of cell surface insulin receptor and insulin receptor substrate-1 phosphorylation in adrenal chromaffin cells

Treatment (>/=24 h) of cultured bovine adrenal chromaffin cells with ketoacidosis-related concentrations (>/=3 mM) of acetoacetate (but not beta-hydroxybutyrate, acetone, and acidic medium) caused a time- and concentration-dependent reduction of cell surface (125)I-insulin binding by ~38%, with no change in the K(d) value. The reduction of (125)I-insulin binding returned to control nontreated level at 24 h after the washout of acetoacetate-treated cells. Acetoacetate did not increase the internalization rate of cell surface insulin receptor (IR), as measured in the presence of brefeldin A, an inhibitor of cell surface vesicular exit from the trans-Golgi network. Acetoacetate (10 mM for 24 h) lowered cellular levels of the immunoreactive IR precursor molecule (approximately 190 kDa) and IR by 22 and 28%, respectively. Acetoacetate decreased IR mRNA levels by approximately 23% as early as 6 h, producing their maximum plateau reduction at 12 and 24 h. The half-life of IR mRNA was shortened by acetoacetate from 13.6 to 9.5 h. Immunoprecipitation followed by immunoblot analysis revealed that insulin-induced (100 nM for 10 min) tyrosine-phosphorylation of insulin receptor substrate-1 (IRS-1) was attenuated by 56% in acetoacetate-treated cells, with no change in IRS-1 level. These results suggest that chronic treatment with acetoacetate selectively down-regulated the density of cell surface functional IR via lowering IR mRNA levels and IR synthesis, thereby retarding insulin-induced activation of IRS-1.     

强迫游泳大鼠海马组织5-羟色胺受体mRNA的表达

目的探讨强迫游泳大鼠海马组织中5-羟色胺（5-HT1A）受体激活物抑制因子-1（1mRNA）的表达。方法随机将雄性Wistar大鼠分为对照组、1d应激组、14d应激组和28d应激组,建立强迫游泳应激模型。用化学发光法测定血清皮质醇浓度,用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）方法检测海马5-HT1A受体mRNA的变化。结果（1）对照组、1d应激组、14d应激组和28d应激组血清皮质醇浓度分别为（0．64±0．09）μg／dL、（1．14±0．19）μg／dL（1．98±0．40）μg／dL、（0．95±0．14）μg／dL。（2）强迫游泳大鼠海马5HT1A受体mRNA表达相对水平分剐为1．501±0．257、1．141±0．120、0．681±0．056,与对照组相比较,差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论强迫游泳大鼠海马中5-HT1A受体mRNA表达降低。     

胰岛素受体在糖尿病大鼠心肌组织中的表达

目的 通过研究胰岛素受体（insulin receptor,IR）在链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠模型中心肌组织中的表达,探讨IR与糖尿病性心肌病发病机制的关系。方法 成年Sprague—Dawley雄性大鼠20只,成实验组和对照组。实验组用链脲佐菌素诱导产生糖尿病模型,4周后对各组大鼠心肌进行IR免疫组织化学染色,观察IR在糖尿病大鼠和正常大鼠左心室心肌细胞中的表达差异。结果 发现糖尿病大鼠中心肌间质纤维增生,心肌间微血管壁增厚,IR表达阳性心肌细胞的数目为（9．42±2．32）个／mm^2及其光密度均为（66．58±6．32）较正常对照组减少（t分别：17．24、8．75,P均〈0．05）。结论 糖尿病心肌病可作为一种特异性的病变发展为心肌自主神经系统的紊乱和冠脉血流储备的障碍。IR表达阳性心肌细胞减少可能会造成心肌糖代谢的损害与心力衰竭的发生。