香丹注射液对脑缺血再灌注大鼠细胞凋亡与FADD mRNA表达的影响

目的 研究香丹注射液对脑缺血再灌注大鼠细胞凋亡及其相关基因表达的影响.方法 线栓法制备脑缺血再灌注大鼠损伤模型,缺血2h后再灌注3、6、12、24h,采用TUNEL检测(原位末端转移酶标记技术)检测细胞凋亡,提取脑组织RNA检测Fas死亡结构域相关蛋白(FADD) mRNA的表达变化.结果 治疗组大鼠缺血再灌注后FADD mRNA表达水平较模型组均降低(P＜0.05),第24小时与假手术组比较无统计学意义(P＞0.05);治疗组大鼠凋亡细胞凋亡率较模型组明显降低(P＜0.01).结论 香丹注射液能降低脑缺血后脑组织中FADD mRNA蛋白的表达,减轻细胞凋亡.     

乐尔脉对脑缺血再灌注中期大鼠海马神经细胞凋亡作用与机制

目的 探讨乐尔脉对脑缺血再灌注损伤中期大鼠海马神经细胞凋亡和Fas、Bax表达的作用与机制.方法 采用大鼠右侧大脑中动脉内栓线阻断法(MCAO)造成局灶性脑缺血再灌注模型,凋亡细胞原位末端标记法(TUNEL)检测海马神经细胞凋亡,免疫组化与逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测大鼠海马Fas、Bax、Caspase-3、Caspase9 mRNA的表达,并进行图像处理分析结果.结果 在缺血再灌注损伤海马组织可检测到较多的凋亡细胞,主要分布在CA1区.海马Fas mRNA表达上调,海马CA1区锥体层神经元、胶质细胞、室管膜细胞Fas蛋白表达均明显增加,与凋亡呈同样趋势.海马Bax mRNA上调,但与假手术组比较无统计学意义(P>0.05),Bax蛋白水平却显著增加,下游Caspase -3、Caspase-9 mRNA显著上调.乐尔脉和氟桂利嗪可明显降低缺血再灌注损伤大鼠海马神经元细胞凋亡,降低Fas mRNA和Fas蛋白表达,但不降低Bax mRNA和Bax蛋白表达.结论 乐尔脉限制和减少脑缺血再灌注损伤中期神经细胞凋亡的发生和发展,对局灶性脑缺血再灌注损伤具有保护作用,其作用机制可能与乐尔脉降低海马Fas mRNA表达而抑制神经细胞凋亡有关.     

参芎注射液对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及Fas死亡结构域蛋白表达的影响

目的:探讨参芎注射液对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及Fas相关死亡结构域蛋白(FADD)及其mRNA表达的影响.方法:100只SD大鼠随机分为正常组(n=10)、假手术组(n=10)、脑缺血再灌注组(n=40)和参芎注射液组(n40).线栓法制备大脑中动脉闭塞模型,TUNEL法检测神经细胞凋亡,分别应用免疫组织化学染色和逆转录-聚合酶链式反应检测FADD蛋白和mRNA表达.结果:与正常组和假手术组相比,脑缺血再灌注组凋亡神经细胞计数显著增加(P＜0.01),FADD蛋白和mRNA表达均显著增强(P均＜0.01).与脑缺血再灌注组比较,参芎注射液组凋亡神经细胞显著减少(P＜0.05,P＜0.01),FADD蛋白和mRNA表达显著减弱(P＜0.05,P＜0.01).结论:参芎注射液能通过下调FADD表达抑制大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡.     

米诺环素抑制大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区神经元凋亡及Caspase-12的表达

目的 探讨米诺环素对大鼠局灶性脑缺血再灌注后海马CA1区神经元凋亡及半胱天冬酶-12(Caspase-12)表达的影响.方法 用大脑中动脉栓塞(线栓)法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型.18只健康雄性Wistar大鼠,随机分为假手术组、缺血再灌注组和米诺环素干预组.应用DNA原位末端缺口标记(TUNEL)法检测神经元凋亡,免疫组化法检测组织Caspase-12蛋白的表达.结果 与假手术组相比,缺血再灌注组海马CA1区凋亡神经元数增加(P<0.05),Caspase-12表达增加(P<0.05);米诺环素处理后显著缓解凋亡神经元数的增加,抑制Caspase-12的表达(P<0.05),但仍高于假手术组(P<0.05).结论 抑制Caspase-12介导的Caspase介导的级联反应凋亡途径的激活是米诺环素减少缺血再灌注损伤神经元凋亡的机制之一.     

珍龙醒脑胶囊对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤细胞凋亡及Bcl-2、Caspase-3蛋白表达的影响

目的探讨珍龙醒脑胶囊对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤细胞凋亡及Bcl-2、Caspase-3表达的影响。方法健康SD大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注损伤模型组、珍龙醒脑低(50 mg·kg~(-1)·d~(-1))、中(100 mg·kg~(-1)·d~(-1))和高剂量组(200 mg·kg~(-1)·d~(-1))。每组6只。术前实验性灌胃给药,珍龙醒脑组分别灌注不同剂量药液,假手术组和模型组灌注等量生理盐水。连续给药7 d后采用线栓法制作大鼠脑缺血再灌注损伤模型。假手术组和模型组给予生理盐水。术后6、12、24、48、72 h断头取脑。用TUNEL法检测大鼠皮质和海马神经细胞凋亡率,免疫组化法观察Bcl-2、Caspase-3蛋白表达。结果与模型组比较,珍龙醒脑组神经细胞凋亡率降低,Bcl-2蛋白表达上调、Caspase-3蛋白表达下调(P均0.01),珍龙醒脑中、高剂量组与低剂量组比较,神经细胞凋亡率降低,Bcl-2蛋白表达上调、Caspase-3蛋白表达下调(P均0.01)。结论珍龙醒脑可抑制大鼠神经细胞凋亡,促进缺血脑组织Bcl-2表达、抑制Caspase-3表达,以珍龙醒脑中、高剂量效果明显。     

依达拉奉对局灶性脑缺血再灌注大鼠大脑皮层细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的探讨依达拉奉对局灶性脑缺血再灌注大鼠大脑皮层细胞凋亡及相关蛋白表达的影响。方法 Wistar大鼠随机分为:假手术组、缺血再灌注模型组(模型组)、依达拉奉治疗组(依达拉奉组)。采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,观察不同组大鼠的神经功能症状评分。分别于缺血后2 h进行再灌注。依达拉奉组于缺血再灌注后1 h及1.5 h在腹腔内注射依达拉奉注射液(按照3 mg/kg)2次,在缺血再灌注后6、12、48 h处死大鼠。TUNEL法原位检测凋亡细胞,免疫组化法检测脑组织Caspase-3表达的阳性细胞数。结果模型组在再灌注48 h梗死体积最大,12 h凋亡细胞数最多。缺血再灌注后6 h在大脑额叶和海马即可见到Caspase-3蛋白表达的阳性细胞,12 h组最高。依达拉奉组各时间点脑梗死体积、Caspase-3表达水平较模型组明显降低(P<0.01)。结论依达拉奉对缺血再灌注大鼠皮层脑细胞具有保护作用,其机制可能与抑制Caspase-3表达,从而抑制皮层细胞凋亡有关。     

白蛋白治疗对大鼠脑缺血后海马血管内皮生长因子及其受体1的影响

目的探讨人血白蛋白治疗对大鼠脑缺血早期海马血管内皮生长因子(VEGF)及fam样酪氨酸激酶受体1(flt-1)表达的影响。方法雄性SD大鼠40只,采用大脑中动脉线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,随机分为假手术组10只、生理盐水组15只和白蛋白组15只。采用溴甲酚绿法测定血清白蛋白水平,RT-PCR检测脑缺血再灌注后6、24、48h大鼠海马VEGF和flt-1mRNA表达,免疫组织化学和Western blot法检测脑缺血再灌注24h海马VEGF蛋白表达。结果与生理盐水组比较,白蛋白组大鼠神经功能缺损评分于脑缺血再灌注后24、48h明显降低(P<0.05),海马VEGF mRNA和flt-1mRNA表达于脑缺血再灌注后6、24h明显降低(P<0.05,P<0.01),海马VEGF蛋白表达于脑缺血再灌注后24h明显降低(P<0.05)。结论白蛋白治疗可下调脑缺血早期海马VEGF和flt-1mRNA表达,降低海马VEGF蛋白表达水平,改善神经功能缺损。     

SIRT1信号通路在白藜芦醇保护脑缺血再灌注损伤中的作用机制

目的探讨白藜芦醇(Res)对大脑缺血再灌注损伤后大鼠神经元凋亡的影响及其作用机制。方法采用线栓法制作短暂性大脑中动脉栓塞(MCAO)模型。将60只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、脑缺血再灌注模型组(MCAO组)、白藜芦醇低剂量(10 mg/kg)组(Res 10组)、白藜芦醇高剂量(30 mg/kg)组(Res 30组)。栓塞缺血2 h、再灌注24 h后对各组大鼠进行神经功能损伤评分、脑组织含水量及脑梗死体积评估,TUNEL染色检测细胞凋亡,同时测定缺血再灌注损伤缺血测脑组织中SIRT1、Bax、Caspase-3 mRNA表达水平。结果脑缺血再灌注后24 h,MCAO组脑梗死体积大于Sham组(P0.01),神经功能损伤评分、脑组织含水量、TUNEL(+)细胞数及Bax mRNA、Caspase-3 mRNA表达量均明显高于Sham组(P0.01),而SIRT1 mRNA表达量较Sham组明显降低(P0.01)。与MCAO组比较,Res 10组、Res 30组脑梗死体积明显缩小(P0.01),神经功能损伤评分、脑组织含水量、TUNEL(+)细胞数以及脑组织中Bax mRNA、Caspase-3 mRNA表达量明显降低(P0.01),SIRT1 mRNA表达明显增加(P0.01)。结论白藜芦醇可通过减轻缺血脑组织神经元凋亡对大鼠脑缺血再灌注损伤发挥神经保护作用,其可能通过激活SIRT1信号通路从而抑制或逆转脑缺血再灌注神经损伤的发生。     

参芎注射液对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的相关研究

目的探讨参芎注射液对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及凋亡相关因子caspase-8、抗凋亡因子FLIP的蛋白及其mRNA表达的影响。方法选择SD大鼠100只随机分为正常组(10只)、假手术组(10只)、模型组(40只)和参芎注射液治疗组(干预组,40只),采用TUNEL法检测神经细胞凋亡,免疫组织化学及RT-PCR法分别检测caspase-8、FLIP的蛋白和mRNA表达。结果与正常组和假手术组比较,模型组大鼠各时间点凋亡细胞明显增加(P<0.01),caspase-8、FLIP的蛋白和mRNA表达明显增强(P<0.05,P<0.01)。与同时间点模型组比较,干预组大鼠凋亡细胞明显减少,caspase-8蛋白和mRNA表达明显减弱(P<0.05,P<0.01),FLIP蛋白和mRNA表达分别于再灌注6 h和12 h时间点明显增强(P<0.05)。结论参芎注射液能通过减弱caspase-8表达及增强FLIP表达,从而拮抗大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡。     

黄芪皂甙Ⅳ联合BMSCs移植对大鼠脑缺血再灌注海马神经细胞凋亡及Livin、Caspase-9蛋白的影响

目的 探讨黄芪皂甙Ⅳ联合骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对缺血再灌注大鼠海马Livin、Caspase-9蛋白及神经细胞凋亡表达的影响.方法 实验动物随机分为假手术组、模型组、BMSCs组、联合组.采用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)模型,假手术组不予处理.BMSCs组于造模后3 h移植BMSCs.联合组既移植BMSCs,又给予黄芪皂甙Ⅳ治疗.观察缺血72 h后,各组神经功能评分,PKH-26标记的移植BMSCs分布,采用Western blot和免疫组化方法检测大鼠海马Livin、Caspase-9蛋白的表达,TUNEL方法检测细胞凋亡指数.结果 PKH-26标记的BMSCs在海马有表达.各组中联合组神经功能恢复最为明显(P<0.05).与模型组比较,联合组和BMSCs组均可上调Livin蛋白表达(P<0.05),下调Caspase-9蛋白表达(P<0.05),降低神经元细胞凋亡指教(P<0.05),以联合组作用更为显著(P<0.05).结论 黄芪皂甙Ⅳ联合BMsCs移植对脑缺血再灌注神经元细胞凋亡有协同抑制作用,其作用机制可能与黄芪皂甙Ⅳ促进BMSCs上调Livin蛋白表达,下调Caspase-9蛋白表达,抑制细胞凋亡有关.     

Rho激酶抑制剂对大鼠脑缺血再灌注后核转录因子和新型趋化因子表达的影响

目的 探讨Rho激酶抑制剂法舒地尔对大鼠脑缺血再灌注损伤后的保护作用及可能机制.方法 健康成年雄性SD大鼠90只,随机分为3组:假手术组、模型组、法舒地尔组,每组30只,每组再按照再灌注时间不同分为6、1 2、24 h3个时间点,每个时间点10只,线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型.术后对大鼠进行神经功能评分,RT-PCR检测缺血侧脑组织中新型趋化因子mRNA、NF-κB p65 mRNA表达.结果 与假手术组比较,模型组和法舒地尔组大鼠脑缺血再灌注6、12、24 h NF-κB p65 mRNA、新型趋化因子mRNA表达明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);与模型组比较,法舒地尔组大鼠脑缺血再灌注6、12、24 h神经功能缺损评分明显降低,12、24 h NF-κB p65 mRNA、新型趋化因子mRNA表达明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 法舒地尔的脑保护作用可能与其减轻大鼠脑缺血再灌注损伤后的炎性反应有关.     

尤瑞克林对大鼠脑I/R后大脑皮层细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响

目的观察尤瑞克林对大鼠局灶性脑缺血再灌注(I/R)后不同时间点大脑皮层细胞凋亡及Caspase-3、Bcl-2蛋白表达的影响。方法 84只SD雄性大鼠随机分为假手术组,模型1、2、3组及尤瑞克林1、2、3组,各12只。各模型组及尤瑞克林组采用线栓法制作大脑中动脉闭塞(MCAO)模型;假手术组只分离、暴露血管,不结扎血管,不插入尼龙鱼线;尤瑞克林1、2、3组在造模后30 min舌下静脉注射尤瑞克林。模型1、2、3组及尤瑞克林1、2、3组分别于缺血后6、12、48 h小心向外拉鱼线约1 cm使其断端回至颈外动脉内,形成再灌注。对各组大鼠行Zea Longa神经缺损功能评分,以1~3分判定为模型制作成功。每组各取2只大鼠于再灌注24 h采用TUNEL法检测细胞凋亡情况,剩余10只采用免疫组化法检测脑组织Caspase-3、Bcl-2蛋白。结果与假手术组相比,模型组及尤瑞克林组大脑皮层细胞凋亡率及脑组织Caspase-3表达增高,Bcl-2表达降低(P均<0.05);其中,尤瑞克林1、2、3组Caspase-3表达低于模型1、2、3组(P<0.05),尤瑞克林2、3组Bcl-2表达高于模型2、3组。结论尤瑞克林可抑制局灶性脑缺血再灌注大鼠大脑皮层细胞凋亡;该作用可能是通过下调Caspase-3表达、上调Bcl-2表达而实现的。     

吡那地尔对大鼠脑缺血再灌注后Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的 探讨吡那地尔对大鼠局灶性脑缺血再灌注后Bcl-2和Bax蛋白表达的影响.方法 20只Wistar雄性大鼠随机分为假手术组、对照组、KATP开放剂组及KATP开放剂+阻断剂组,每组5只.应用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血模型,应用TUNEL法检测神经元凋亡,应用免疫组化方法检测Bcl-2及Bax蛋白表达,同时观察神经功能缺损评分.结果 KATP开放剂组与对照组及KATP开放剂+阻断剂组相比,神经功能缺损程度显著减轻(P＜0.05),神经元凋亡数显著减少(P＜0.01),Bcl-2蛋白表达显著增多,Bax蛋白表达显著减少(P＜0.01),对照组与与KATP开放剂+阻断剂组之间无显著性差异.结论 KATP通道开放剂能显著增加脑缺血再灌注后Bcl-2蛋白表达,减少Bax蛋白表达,抑制神经元凋亡,改善神经功能缺损程度,对脑缺血再灌注损伤发挥保护作用.     

丹星通络汤治疗大鼠脑缺血再灌注Bax蛋白表达的影响

目的 观察丹星通络汤对大鼠脑缺血再灌注损伤海马区细胞凋亡调控基因Bax蛋白表达的影响,探讨丹星通络汤预防与治疗大鼠脑缺血再灌注损伤的作用.方法 SD大鼠40只,随机分成假手术组、模型组、尼莫地平组、丹星通络汤小剂量组、丹星通络汤大剂量组,每组8只.采用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)再灌注模型.HE染色检测大鼠脑组织海马区的病理学变化,免疫组织化学法和医学图像分析法检测大鼠脑组织海马区Bax蛋白的平均光密度(OD)值.结果 与模型组比较,丹星通络汤大、小剂量组大鼠脑组织海马区Bax蛋白的OD值明显减低(P＜0.05),并且丹星通络汤大剂量组与尼莫地平组相比有统计学意义(P＜0.05).结论 丹星通络汤可能通过下调Bax蛋白的表达,从而抑制脑组织的凋亡机制发挥对脑组织的保护作用.     

大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区超微结构及Apaf-1表达的变化

目的 观察大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区超微结构及凋亡相关基因凋亡蛋白激活因子(Apaf)-1表达的变化.方法 健康雄性SD大鼠随机分为假手术组和模型组,其中模型组缺血30 min后再灌注,根据再灌注时间不同又分为2、24、72 h3个亚组.采用Pulsinelli四血管阻断法建立大鼠全脑缺血再灌注模型,透射电镜下观察海马CA1区神经元超微结构变化,免疫组织化学法和Western印迹法检测大鼠海马组织凋亡相关基因Apaf-1蛋白表达的变化.结果 透射电镜结果显示:假手术组海马CA1区神经元胞核较大,呈圆形或椭圆形,核膜清晰完整,常染色质呈细颗粒状均匀分布,胞浆内可见丰富的细胞器.模型2h组海马CA1区神经元核膜凹陷,核染色质密度增高,线粒体轻微肿胀;模型24 h组海马CA1区神经元核膜邹缩严重,核仁物质增多、偏移,线粒体结构松散、空泡状,线粒体嵴断裂,粗面内质网脱颗粒;模型72 h组海马CA1区神经元核固缩,核染色质呈团块状边集于核膜下,线粒体不同程度脱空.免疫组化和Western印迹结果显示:假手术组Apaf-1蛋白仅有少量表达,模型组各时间点Apaf-1蛋白表达均增高(P＜0.05).结论 大鼠脑缺血再灌注可导致海马CA1区神经元的凋亡,这可能与凋亡相关基因Apaf-1的激活有关.     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后Caspase-9蛋白的表达

目的 研究Caspase-9蛋白在大鼠脑缺血再灌注损伤过程中表达水平的动态变化.方法 建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,应用HE染色和免疫组织化学方法观察神经细胞死亡情况,再灌注6 h、12 h、24 h后缺血皮层Caspase-9蛋白表达.结果 与假手术组比较Caspase-9蛋白表达在各手术组明显升高,并随着缺血再灌注时间的延长Caspase-9表达逐渐升高,于再灌注24 h到达最高(P<0.01).结论 Caspase-9蛋白参与了脑缺血再灌注损伤过程.     

脑缺血再灌注后bcl-2、caspase-3 mRNA水平表达与大脑皮质及纹状体区炎性细胞浸润

目的探讨大鼠脑缺血再灌注后bcl-2蛋白、caspase-3 mRNA的表达及炎性细胞浸润与神经细胞凋亡的关系。方法将54只Wistar大鼠随机分为二组：假手术组，缺血再灌注组。采用原位末端标记(TUNEL)、免疫组化和原位杂交技术分别观察脑缺血再灌注后不同时间点神经细胞凋亡及损伤的变化与bcl-2、caspase-3 mRNA表达。结果bcl-2表达于缺血再灌注12～24h达高峰，再灌注2—4d呈下降趋势，至16d略高于假手术组；caspase-3 mRNA于缺血再灌注12—24h达高峰，2—4d呈降低趋势，至16d略高于假手术组。结论脑缺血再灌注后细胞凋亡介导神经细胞损伤、坏死是一个渐进的动态演变过程。bcl-2蛋白、caspase-3 mRNA表达在抑制细胞凋亡和介导神经细胞损伤等方面起非常重要的作用。     

眼针对急性脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑组织脑源性神经因子表达的影响

目的 探讨眼针治疗急性脑缺血再灌注损伤的机制.方法 应用线栓法复制急性脑缺血再灌注损伤大鼠模型,采用眼针治疗,于再灌注后3h进行神经功能缺损评分,采用免疫组化、Western印迹、实时荧光定量聚合酶链反应(RQ-PCR)方法测定脑组织脑源性神经因子(BDNF)蛋白及mRNA表达的变化.结果 与模型组比较,眼针组大鼠神经功能缺损评分明显下降,脑组织BDNF蛋白及mRNA表达明显上调(P＜0.05).结论 眼针具有明显改善大鼠脑缺血再灌注损伤的作用;其机制与上调脑组织BDNF表达有关.     

脑缺血再灌注后炎症和自由基作用的实验研究

目的 动态观察大鼠脑缺血再灌注后的早期损伤.方法 将100只大鼠随机分为假手术组50只、脑缺血再灌注组50只.采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血模型,脑缺血2 h后再灌注0、6、12、24、48 h取材,假手术组在术后相对应脑缺血再灌注组各时间点取材,免疫组化法测NF-κBp65、IL-1β,化学比色法测MDA、SOD,TUNEL法检测神经细胞凋亡.结果 与假手术组相比,大鼠大脑中动脉缺血2小时后再灌注0～12 h时MDA含量逐渐增加(P＜0.000 1)且12 h达高峰,0～12 hSOD活性逐渐减低(P＜0.000 1),0～24 h NF-κBp65、IL-1β蛋白表达及凋亡细胞数逐渐增加(P＜0.000 1)且24 h达高峰.结论 本实验构建了研究大鼠大脑中动脉缺血2 后再灌注不同时间炎症反应和自由基损伤的实验动物模型,为在最佳时间点观察药物干预自由基和炎症反应提供了实验依据.     

鼠脑缺血后神经元凋亡与P53的关系及碱性成纤维细胞生长因子的影响

目的 研究脑缺血再灌注后P53与细胞凋亡的关系和外源性碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的影响.方法 用原位杂交、免疫组化及原位末端标记的方法观察大鼠大脑中动脉闭塞2 h后再通即刻至72 h脑组织P53基因的表达与凋亡细胞的分布及侧脑室注射外源性bFGF对它们的影响.结果 缺血2 h及再灌注即刻可见P53的表达和凋亡细胞,P53 mRNA及其蛋白的表达高峰在缺血再灌注后24 h,凋亡细胞数高峰在再灌注24～48 h.bFGF组与缺血组相比,6～48 h各时间点P53表达减弱,凋亡细胞数明显减少(P＜0.05,P＜0.01).结论 脑缺血再灌注后诱导P53的表达和细胞凋亡;外源性bFGF能抑制脑缺血再灌注后P53基因的表达和细胞凋亡.