腺苷酸环化酶及蛋白激酶A在a受体激动增加eNOS活性信号通路中的作用

目的 阐明a受体激动增加内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性信号通路中腺苷酸环化酶(AC)及蛋白激酶A(PKA)的作用.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞;运用同位素两步色谱法([3H]-L-精氨酸转化法)检测eNOS活性.本研究设置空白对照组、AC组和PKA组,每组因素下再分ISO及BSS两个干预因素组,观察AC特异性阻断剂SQ-2256(5×10-5 mol/L)及PKA特异性阻断剂H-89(1×10-7 mol/L)分别与人脐静脉内皮细胞孵育10 min,再与异丙肾上腺素(ISO)孵育30 min后eNOS活性变化.结果 ISO明显增加eNOS活性(30 7±3 9)%,P<0 01;分别阻断AC、PKA,ISO诱导的eNOS活性增加均受到抑制(12 1±3 53)%、(4 73±2 19)%,P<0 01.结论 ISO激活eNOS活性的信号通路上,AC和PKA均有参与.     

β肾上腺素受体激动对人脐静脉内皮细胞一氧化氮合酶磷酸化的影响

目的：观察血管内皮β肾上腺素受体激动对内皮一氧化氮合酶（eNOS）蛋白表达及磷酸化水平的影响,阐明β受体激动后eNOS调节的分子机制。方法：异丙肾上腺素（ISO）1μmol/L与培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）孵育30min后,裂解细胞并用免疫沉淀法分离eNOS蛋白,运用同位素两步色谱法（L-[^3H]精氨酸转化法）检测eNOS活性;蛋白免疫印迹增强化学发光法检测eNOS表达水平和eNOS蛋白丝氨酸磷酸化水平,并观察高选择性β1或β2肾上腺素受体阻断剂对上述作用的影响。结果：ISO与内皮细胞孵育30min引起eNOS活性增高;不影响eNOS蛋白表达,但丝氨酸磷酸化水平明显增加;选择性β2受体阻断剂ICI 118551可完全阻断ISO的作用,而选择性β1受体阻断剂CGP 20712A无影响。结论：ISO通过提高eNOS丝氨酸磷酸化水平增加eNOS活性,这种作用是通过β2肾上腺素受体介导的。     

纳他卡林激活内皮细胞ATP敏感性钾通道SUR2B/Kir6.1亚型对eNOS磷酸化的调节作用

目的纳他卡林可选择性激活ATP敏感性钾通道(K ATP)SUR2B/Kir6.1亚型,引起胞内Ca2+浓度升高,一氧化氮合酶(eNOS)活性增强,NO释放增加。eNOS活性与eNOS磷酸化密切相关,研究表明eNOS-Ser1177、eNOSSer635、eNOS-Ser615磷酸化增强eNOS活性,eNOS-Thr495、eNOS-Ser116磷酸化抑制eNOS活性。本文研究纳他卡林激活K ATP对eNOS各磷酸化位点的影响,以此认识纳他卡林增强eNOS活性的作用特点。方法在培养的内皮细胞上给予(1)10-9¹0-5mol·L-1不同浓度的纳他卡林孵育5 min,(2)预孵育0.0110-5mol·L-1不同浓度的纳他卡林孵育5 min,(2)预孵育0.01¹μmol·L-1格列苯脲30 min,给予1μmol·L-1纳他卡林孵育5 min,提取细胞总蛋白,用Western blot法检测eNOS-Ser1177、eNOS-Ser635、eNOS-Ser615、eNOSThr495、eNOS-Ser116磷酸化的变化。结果纳他卡林可浓度依赖性的升高eNOS-Ser1177、eNOS-Ser635的磷酸化及eNOS-Thr495的去磷酸化,而对eNOS-Ser615和eNOS-Ser116磷酸化无影响。此作用可被K ATP特异性阻断剂格列苯脲拮抗。结论纳他卡林通过激活内皮细胞K ATP,调节eNOSSer1177、eNOS-Ser635的磷酸化及eNOS-Thr495的去磷酸化,但不影响eNOS-Ser615和eNOS-Ser116磷酸化,从而增强eNOS活性。     

硫化氢下调大鼠主动脉L-精氨酸/一氧化氮合酶/一氧化氮通路

目的观察H2S对血管L-精氨酸/一氧化氮(L-Arg/NO)通路的影响以探讨H2S和NO这两种气体信号分子间的相互作用。方法离体孵育大鼠主动脉薄片,加入H2S供体NaHS(10-7~10-4mol.L-1)孵育4 h,及50μmol.L-1NaHS分别孵育2、4和6 h。采用G re iss法测定血管亚硝酸盐含量;同位素示踪法检测血管组织一氧化氮合酶(NOS)活性及L-Arg转运,RT-PCR检测eNOS、CAT1基因表达。结果一次性给予50μmol.L-1NaHS,孵育2 h,孵育液中NO2-含量比对照组低62%,血管NOS活性下降48%,L-Arg转运减少50%(P<0.01);孵育6 h,NO2-含量比对照组低19%(P<0.05),而NOS活性和L-Arg转运已基本恢复(P>0.05)。NaHS(10-7~10-4mol.L-1),呈浓度依赖的抑制了L-Arg/NOS/NO通路,IC50分别为0.499、3.198及3.927μmol.L-1(P<0.01);而给予50μmol.L-1NaHS后,eNOS和CAT-1A的mRNA表达分别减少34.3%和55.1%(P<0.01)。结论H2S通过抑制血管组织L-Arg转运和NOS活性和基因表达,下调L-Arg/NOS/NO通路,从而减少血管NO生成。     

汉黄芩素增强乙酰胆碱对大鼠胸主动脉血管的舒张作用研究

目的探讨汉黄芩素增强乙酰胆碱对大鼠胸主动脉血管的舒张作用及其作用机制。方法实验分为对照组和加药组,加药组使用含有不同浓度汉黄芩素的DMEM/F12培养基作用;对照组使用含有与加药组相同体积二甲基亚砜(DMSO)的DMEM/F12培养基作用。汉黄芩素孵育大鼠心脏微血管内皮细胞24 h,MTT法检测细胞活力;硝酸还原酶法检测细胞上清NO含量;ELISA法检测细胞内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表达。汉黄芩素孵育大鼠胸主动脉环24h,去甲肾上腺素(1×10~(-6) mol/L)收缩血管后应用乙酰胆碱(1×10~(-8)、1×10~(-7)、1×10~(-6)、1×10~(-5)mol/L)舒张血管,检测血管张力变化。结果与对照组比较,汉黄芩素处理细胞后,各组细胞活力没有显著变化。与对照组比较,汉黄芩素(5、20μmol/L)显著促进NO的产生(P0.01),但亚硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAME)可以抑制汉黄芩素的这种作用(P0.01)。汉黄芩素(0.5、5、20μmol/L)可以浓度相关性地促进心脏微血管内皮细胞eNOS蛋白表达,与对照组比较,汉黄芩素产生的eNOS蛋白水平差异非常显著(P0.01)。乙酰胆碱(1×10~(-8)、1×10~(-7)、1×10~(-6)、1×10~(-5)mol/L)能够浓度相关性地舒张离体大鼠胸主动脉环。与对照组比较,汉黄芩素(20μmol/L)孵育血管24h,能显著增加乙酰胆碱对大鼠胸主动脉血管环的舒张程度,降低胸主动脉血管环的收缩率(P0.01、0.05)。结论汉黄芩素可能通过促进血管内皮细胞eNOS蛋白表达和NO产生这一途径增强乙酰胆碱对血管的舒张作用。     

CCK-8抗炎作用中DAG-PKC信号通路对cAMP-PKA信号通路的影响

目的探讨CCK-8抗炎作用中DAG-PKC信号通路对cAMP-PKA信号通路的影响。方法分离纯化大鼠PIMs,分别用LPS、CCK、LPS+CCK、PMA、SC-3088、LPS+PMA、LPS+SC-3088、CCK+PMA、CCK+SC-3088、LPS+CCK+PMA、LPS+CCK+SC-3088孵育一定时间,采用125I-cAMP放射免疫分析法测定细胞内cAMP含量,用放射激酶法测定PKA活性。结果单独应用PMA和SC-3088孵育大鼠PIMs,细胞内cAMP含量和PKA活性与正常对照组相比无明显变化(P>0.05)。PMA可升高LPS作用下的细胞内cAMP含量和PKA活性(P<0.01),SC-3088则可使LPS作用下的细胞内cAMP含量和PKA活性降低(P<0.01)。分别应用PMA、SC-3088与CCK共同孵育,则CCK+PMA组细胞内cAMP含量和PKA活性高于单独应用CCK组(P<0.01),CCK+SC-3088组则降低(P<0.01)。与LPS+CCK组相比,PMA+LPS+CCK组细胞内cAMP含量和PKA活性升高(P<0.01),而SC-3088+LPS+CCK组细胞内cAMP含量和PKA活性降低(P<0.01)。结论在LPS诱导的大鼠PIMs,CCK-8可通过激活cAMP-PKA信号通路发挥抗炎作用;DAG-PKC信号通路的活化对cAMP-PKA信号通路有正性调节作用。     

蛋白激酶C参与内源性大麻素1型受体对心肌L型钙电流的抑制作用

目的研究激活心肌内源性大麻素1型(CB1)受体是否通过改变蛋白激酶C(PKC)活性从而抑制L型钙电流,探讨激活CB1受体导致PKC活性变化的信号途径。方法利用酶解法制备大鼠心室肌细胞,分别单独应用CB1受体特异性激动剂2-氯乙胺花生四烯酸(ACEA)100 nmol·L-1、CB1受体阻断剂AM251 100 nmol·L-1或PKC非特异性激动剂十四烷酸乙酸大戟二萜醇酯(PMA)500 nmol·L-1孵育细胞10 min;此外提前应用AM251或PMA孵育细胞5 min后,再用ACEA孵育细胞10 min。应用全细胞膜片钳技术记录单个心肌细胞的L型钙电流;应用Pep Tag非放射性蛋白激酶C检测系统检测细胞PKC活性;ELISA试剂盒测定细胞中二酰甘油(DAG)的含量;Western蛋白印迹法测定磷脂酶Cβ(PLCβ)和磷酸化磷脂酶Cβ(p-PLCβ)表达。结果给予ACEA激动大鼠心肌细胞的CB1受体,可显著抑制L型钙电流,最大峰值电流密度由11.4±0.8降至(6.4±1.5)p A·p F-1;预先给予AM251或PMA可以完全阻断此抑制效应。检测心肌细胞PKC活性发现,与正常对照组(1.59±0.50)μmol·min-1·L-1相比,ACEA组心肌细胞PKC活性为(0.69±0.48)μmol·min-1·L-1,明显降低;同样预先给予AM251或PMA完全阻断ACEA对PKC活性的抑制效应。而给予ACEA没有影响心肌细胞DAG含量和PLCβ的磷酸化。结论激活心肌细胞CB1受体后抑制细胞PKC的活性,从而抑制L型钙电流,此过程没有PLCβ-DAG途径参与。     

葛根素促进体外培养大鼠颅骨成骨细胞增殖和分化过程中对cAMP/PKA信号通路的影响

目的 研究葛根素对体外培养大鼠颅骨成骨细胞(rats osteoblast,ROBs)增殖和分化及cAMP/PKA信号通路的影响.方法 体外分离培养ROBs,观察不同浓度(1×10-4～1 ×10-8 mol/L)葛根素对ROBs增殖和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的影响;分析葛根素对骨形态发生蛋白(Bone morphogenetic protein,BMP-2)、Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)、成骨特异性转录因子-2(Runx-2)和Oxterix mRNA表达水平的影响;观察1×10-6 mol/L葛根素对BMP-2、Col-Ⅰ、Runx-2、Oxterix、PKA和磷酸化PKA(p-PKA)蛋白表达水平,测定细胞中cAMP的变化.结果 细胞增殖结果显示1×10-7 mol/L ROBs细胞浓度高于对照组,1×10-4 mol/L组ROBs细胞浓度低于对照组(P＜0.01).1×10-5、1×10-6、1×10-7mol/L组ROBs ALP活性均高于对照组(P＜0.05,P＜0.01).1×10-6 mol/L葛根素处理ROBsRunx-2、Oxterix、BMP-2、Col Ⅰ mRNA和蛋白及p-PKA、cAMP表达水平均高于对照组(P＜0.05,P＜0.01).结论 1×10-6 mol/L葛根素为促进ROBs增殖和分化的最适浓度,其可促进体外培养ROBs分化过程中cAMP/PKA信号通路的激活.     

淫羊藿苷通过PI3K/AKT-eNOS信号途径促进大鼠骨髓基质细胞的成骨性分化

目的研究淫羊藿苷(Icariin,ICA)促进体外培养大鼠骨髓基质细胞(rat bone marrow stromal cells,rBMSCs)成骨性分化的信号传导机制。方法贴壁分离法培养rBMSCs,传至第2代后用流式法鉴定细胞纯度并用于机制研究。细胞铺满皿底后分为ICA组(1×10-5mol.L-1)、LY294002组(5×10-5 mol.L-1)、ICA+LY294002组和空白对照组。不同处理24 h后分别用Real-time PCR法检测ALP、eNOS和iNOS的基因表达水平,用Western blot法检测p-AKT、eNOS和iNOS蛋白表达量,同时测定TNOS、iNOS活性和NO生成量。结果基因表达和蛋白质检测结果均显示,10-5mol.L-1ICA明显提高rBMSCs的ALP表达水平(P<0.01),PI3K的特异性阻断剂LY294002可抑制ICA对ALP的提高作用,亦明显降低p-AKT的表达水平。ICA可提高rBMSCs的eNOS和iNOS表达水平,但LY294002只能抑制eNOS的增加,对iNOS无影响。TNOS和NO与eNOS和ALP的变化趋势一致,iNOS活性不受LY294002的影响。结论 ICA通过PI3K/AKT-eNOS途径促进rBMSCs的成骨性分化。     

基于cAMP-PKA信号通路的淫羊藿苷促进骨形成研究

目的研究淫羊藿苷是否通过c AMP-PKA信号通路来促进成骨细胞(osteoblast,OB)成熟矿化。方法以1×10?5 mol·L?1淫羊藿苷分别处理体外培养的大鼠颅骨OB细胞和人类乳腺癌细胞(MCF-7)不同时间后,免疫荧光染色法检测2种细胞内雌激素受体(ERα)的核转位情况。待P1代OB细胞铺满80%皿底后,采用1×10?5 mol·L?1的2’,3’-双脱氧腺苷(2’,3’-dideoxyadenosine,DDA)抑制胞内腺苷酸环化酶(adenylate cyclase,AC),同时以1×10?5 mol·L?1淫羊藿苷分别作用于正常组和信号阻断组不同时间后,ELISA检测细胞内c AMP的含量。以终浓度为1×10?6 mol·L?1蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)抑制剂KT5720处理细胞,同时以1×10?5 mol·L?1淫羊藿苷分别作用于信号阻断组和正常组,3 d和6 d后检测胞内碱性磷酸酶(ALP)活性;药物处理48 h后,Real-time PCR检测I型胶原(collagen I,COL I)、Runx-2、ALP m RNA的表达量;Western blot检测COL I、Runx-2蛋白表达量。结果淫羊藿苷作用于细胞4 h后,MCF-7胞内ERα发生明显的核转位,而OB细胞在所有时间点都未检测到明显核转位现象,结合本课题组前期的淫羊藿苷雌激素比较试验说明,淫羊藿苷促进成骨细胞成骨性分化并不主要依赖于其雌激素活性。淫羊藿苷促OB细胞后,胞内c AMP迅速升高,处理1 h后与对照组相比具有显著性差异。加入DDA阻断AC后,淫羊藿苷促胞内c AMP升高的作用消失。1×10?5 mol·L?1淫羊藿苷能够显著地促进胞内ALP的活性,成骨性分化相关的因子COL I、Runx-2和ALP的基因表达也相应增高,同时COL I和Runx-2蛋白表达量也显著增加。当采用KT5720抑制PKA的活性之后,ALP活性下降,成骨性分化的指标也随之降低。结论淫羊藿苷促进OB细胞成骨性分化并不主要依赖于其雌激素活性,而是通过迅速提高成骨细胞内c AMP的含量,激活胞内c AMP-PKA信号通路,进而促进成骨性相关因子的表达,来促进OB细胞成熟矿化。     

吗啡对豚鼠心肌电生理的影响

目的观察吗啡对离体豚鼠心肌快反应动作电位(AP)和L-型钙通道的影响。方法采用玻璃微电极技术在豚鼠心室肌细胞上研究吗啡(1×10-5、1×10-4、1×10-3mol/L)对正常及异丙肾上腺素(ISO)致豚鼠心室肌细胞动作电位的作用。结果吗啡1×10-5、1×10-4与1×10-3mol/L,能缩短动作电位时程(n=10,P<0.01),呈剂量依赖性,而动作电位幅值(APA)、0相上升最大速度(Vmax)无明显变化;吗啡又能对抗由异丙肾上腺素(ISO)致豚鼠心室肌细胞动作电位;应用L型钙通道开放剂Bay K8644(0.25μmol)可增加动作电位时程(APD)、复极化50%时间(APD50)、复极化90%时间(APD90)(n=10,P<0.01),加入吗啡可完全逆转Bay K8644(0.25μmol)对乳头肌细胞的兴奋效应。结论吗啡明显缩短APD;并能对抗由ISO引起的早后除极;能对抗L型钙通道开放剂BayK644对乳头肌细胞的兴奋效应,其机理与钙拮抗有关。     

丹酚酸B镁盐对缺氧复氧内皮细胞内钙和一氧化氮的影响

目的:研究丹酚酸B镁盐对缺氧复氧引起的内皮细胞内钙升高和一氧化氮释放增加的影响.方法:培养的人脐静脉内皮细胞(ECV304)暴露在95％ N_2 5％CO_2条件下缺氧30分钟,后在含5％CO_2的空气中复氧30分钟.内皮细胞的损伤用染料排除实验、SOD的活性和MDA的生成来评价.胞内游离钙浓度用钙荧光探针Fura 2-AM测定.一氧化氮含量用一氧化氮试剂盒测定.内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的表达用半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测.结果:缺氧复氧引起内皮细胞的活力由正常条件下(93.1±1.2)％降至(88±3)％(P<0.01),SOD的活性也由(0.24±0.07)kNU/L下降到(0.18±0.03)kNU/L(P>0.05),但其使内皮细胞MDA的生成由(1.12±0.06)mmol/L增至(3.78±0.03)mmol/L(P<0.01).丹酚酸B镁盐2.5,5,10 mg/L能明显降低缺氧复氧引起的内皮细胞MDA生成量的增加,并且显著提高细胞活力和SOD的活性.同时,缺氧复氧还增加内皮细胞的胞内游离钙浓度(F_(340)/F_(380)由 1.65±0.16增至 1.89±0.28)和一氧化氮释放[由(7.5±1.3)μmol/L增至(16±5)μmol/L],并上调其eNOS mRNA的表达,但降低iNOS mRNA的表达(P<0.05).但在无钙的条件下,缺氧复氧对内皮细胞的胞内游离钙浓度、一氧化氮含量、eNOSnRNA和iNOS mRNA表达     

氟伐他汀对尼古丁诱导血管内皮功能障碍的保护作用

目的观察尼古丁对人脐静脉内皮细胞白介素(IL)-8表达的影响,及氟伐他汀对尼古丁诱导人脐静脉内皮细胞表达的干预作用,以及这一过程中核转录因子(NF)-κB的调节机制。方法采用人脐静脉内皮细胞株传代培养,细胞随机分为4组,空白对照组:无血清DMEM培养基代替干预因素;尼古丁组:在无血清培养基中加入100 nmol/L尼古丁孵育内皮细胞24 h;氟伐他汀组:在培养基中10-5mol/L氟伐他汀孵育内皮细胞1 h后,100 nmol/L尼古丁孵育内皮细胞24 h;NF-κB抑制剂组:100μmol/L PDTC和100 nmol/L尼古丁孵育内皮细胞24 h,收集细胞标本及培养液。ELISA法检测内皮细胞培养液中IL-8的蛋白表达水平,Trans AM(tm)NF-κBp50检测试剂盒检测细胞NF-κB的活性。结果尼古丁组NF-κB活性较空白对照组明显升高(P<0.05);氟伐他汀组NF-κB活性较尼古丁组显著下降(P<0.05)。NF-κB抑制剂组较尼古丁组IL-8的蛋白表达明显下降(P<0.05),氟伐他汀组较尼古丁组IL-8的蛋白表达明显下降(P<0.05)。结论尼古丁可通过激活人脐静脉内皮细胞NF-κB的活性,从而诱导IL-8的表达;氟伐他汀可拮抗尼古丁诱发的NF-κB的活化,抑制尼古丁诱导的IL-8的表达,还可拮抗尼古丁引起的内皮功能紊乱,改善内皮细胞功能。     

甲醛诱导内皮细胞ADMA代谢紊乱及其机制

目的观察甲醛对内皮细胞不对称性二甲基精氨酸(ADMA)代谢的影响,分别从氧化损伤及DNA-蛋白质交联两个方面分析甲醛影响ADMA代谢的特征,研究甲醛对内皮细胞损伤的可能机制。方法利用甲醛与人脐静脉内皮细胞共培养建立细胞实验模型,采用DMEM(低糖)培养基培养人脐静脉内皮细胞株(HUVEC-12),取生长良好的3~6代细胞进行实验。分为实验组(分别加入终浓度为6.25、12.5、25、50、100、200和400μmol/L的甲醛)和对照组(加入等体积的PBS溶液),采用丙酮酸二硝基苯腙比色法、二硫代二硝基苯甲酸比色法、黄嘌呤氧化酶法、硫代巴比妥酸法、化学比色法、高效液相色谱法、KCL-SDS沉淀法、SigmaPlot8.0作图。结果(1)甲醛对内皮细胞的损伤,在本研究所用的剂量范围内,表现出2个特点:6.25~25.00μmol/L甲醛组使细胞上清液LDH漏出下降,50.00~400.00μmol/L甲醛组使细胞上清液LDH漏出升高,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05);(2)甲醛诱导氧化损伤,低剂量(<12.50μmol/L)甲醛对细胞内GSH含量和SOD活力的影响与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);高剂量(>12.50μmol/L)甲醛能明显降低细胞内GSH含量和SOD活力,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05);细胞上清液MDA的含量随着甲醛浓度的增加而升高,与对照组相相比差异有统计学意义(P<0.05);(3)甲醛对ADMA/eNOS的影响,甲醛呈浓度依赖性的诱导细胞上清液ADMA产生,并抑制细胞内DDAHⅡ活性,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。低剂量(<12.50μmol/L)甲醛显著提升细胞内eNOS活性,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);高剂量(>12.50μmol/L)甲醛呈浓度依赖性显著降低细胞内eNOS活性(P<0.05)。(4)甲醛诱导DNA-蛋白质交联,6.25~12.50μmol/L甲醛组诱导细胞内DPC交联率与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);25.00~400.00μmol/L甲醛组促进细胞内DNA、蛋白质发生交联,DPC交联率与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论(1)甲醛诱导人脐静脉内皮细胞ADMA代谢紊乱,表现为呈浓度依赖性诱导内皮细胞ADMA产生。(2)甲醛诱导ADMA代谢紊乱可能与氧化损伤和(或)DNA-蛋白质交联所致DDAHⅡ活性降低有关。     

白藜芦醇拮抗游离脂肪酸诱导的胰岛B细胞凋亡机制探讨

目的探讨白藜芦醇拮抗游离脂肪酸诱导的体外培养的胰岛B细胞凋亡的可能机制。方法将10μmol/L白藜芦醇和500μmol/L棕榈酸同时作用于体外培养的胰岛B细胞。共分为3组:空白组(不含棕榈酸)、棕榈酸组(PA组,含500μmol/L棕榈酸的脂性培养基)、白藜芦醇组(Res组,含10μmol/L白藜芦醇+500μmol/L棕榈酸)。以流式细胞术检测细胞凋亡,RT-PCR检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2 mRNA水平。结果与PA组相比,Res能显著降低B细胞凋亡率(95.82%±1.94%vs.11.03%±1.08%,P<0.01),降低Bax mRNA(0.185±0.005 vs.0.161±0.003,P<0.01),升高Bcl-2 mRNA(0.004±0.001 vs.0.008±0.001,P<0.01)。结论白藜芦醇能拮抗棕榈酸诱导的胰岛B细胞凋亡,其机制可能与调节凋亡相关蛋白有关。     

知母皂苷对脂多糖引起星形胶质细胞炎症因子释放的影响及机制

目的研究知母皂苷(SAaB)对脂多糖(LPS)诱导的星形胶质细胞(AC)炎症因子释放的抑制作用及JNK信号传导通路对其的影响。方法实验设对照组、LPS组、SAaB组和阻断剂组。ELISA法和Griess法分别测定各组AC培养液中TNF-α和NO的含量;Western blot检测AC磷酸化JNK和磷酸化c-Jun蛋白表达水平的改变;免疫荧光染色法观察AC的磷酸化ATF-2蛋白表达水平。结果 AC在LPS(10mg.L-1)刺激下TNF-α和NO的分泌、磷酸化JNK1、磷酸化c-Jun和磷酸化ATF-2蛋白表达水平与正常对照组比较均明显增高。特异性JNK特异性阻断剂SP600125(10μmol.L-1)可明显抑制LPS引起的TNF-α和NO产生增加以及磷酸化ATF-2蛋白表达水平;SAaB(1、10、100μmol.L-1)则可明显降低TNF-α和NO产生,下调磷酸化JNK、磷酸化c-Jun和磷酸化ATF-2的蛋白表达水平。结论 SAaB能明显抑制LPS诱导的大鼠皮层AC炎症因子的释放,这种作用可能与其下调JNK信号转导通路有关。     

A型肉毒毒素抑制Methoxamine和电场刺激引发主动脉肌条的收缩

目的:观察A型肉毒毒素(botulinum toxin type A,BTX-A)对肾上腺素α受体激动剂Methoxamine (MOA) 和电场刺激(electrical field stimulation,EFS)引发主动脉肌条收缩的作用.方法:在95%O_2,和5%CO_2条件下,将不同条件处理的兔腹主动脉0.5 cm×3.0 cm螺旋形肌条悬挂于37℃ Krebs液的浴槽内,记录收缩张力变化.MOA组:MOA 5 μmol/L引发收缩30 min后分别加入Krebs液(对照,n=10)、BTX-A 50(n=10)或100 U/mL(n=10),30 min后再加入MOA5 μmol/L.EFS组:EFS 50 Hz,80 V,1 ms,60 s持续性引发肌条收缩30 min后分别加入Krebs液(对照,n=10)或BTX-A 50 U/mL(n=10),30 min后再加入MOA 5 μmol/L.结果:BTX-A 50、100 U/mL分别导致MOA诱发的肌条收缩张力下降80%(P<0.01)和95%(P<0.01),再加入MOA引发BTX-A干预过肌条的收缩力仅为对照组的35%(P<0.01)和3%(P<0.01),该抑制作用呈剂量依赖关系.BTX-A 50 U/mL导致EFS诱发的肌条收缩张力下降94%(P<0.01),后续加入MOA引发BTX-A处理过的肌条,收缩力下降为对照组的10%(P<0.01).结论:肾上腺素α受体激动剂MOA和EFS引发兔主动脉肌条收缩,BTX-A抑制MOA和EFS引发动脉平滑肌收缩作用机理与抑制NA的释放和其受体有关.     

垂体腺苷酸环化酶激活肽对MCAO大鼠自体神经干细胞分化影响

目的:研究垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)对MCAO大鼠自体神经干细胞分化影响。方法:将大鼠随机分为不同浓度PACAP治疗组:P8组(1×10-8mol/L),P10组(1×10-10mol/L),P12组(1×10-12mol/L);对照组。免疫荧光双标观察BrdU /NSE 及BrdU /GFAP 细胞的表达变化。结果:各组BrdU /NSE 及BrdU /GFAP 细胞7d时较少,14d显著增加,28d时最高,PACAP治疗组高于对照组(P<0.01);P8组高于P10组,P12组(P<0.05)。结论:PACAP具有诱导神经干细胞分化的作用,以1×10-8mol/L为最佳浓度。     

黄芩苷对肺泡上皮细胞α-ENaC亚基表达调控作用的研究

目的:探讨黄芩苷对脂多糖(LPS)作用于A549细胞肺泡上皮钠通道-α(α-ENaC)亚基蛋白表达的影响。方法:将A549细胞分组为空白对照组、LPS组、LPS+黄芩苷组、LPS+黄芩苷组+腺苷酸环化酶抑制剂(SQ22536)组及LPS+黄芩苷组+蛋白激酶A抑制剂(KT5720)组。LPS浓度为1μg/mL,黄芩苷(30μmo L/L)预处理A549细胞15 min后加入LPS,SQ22536(10μmo L/L)及KT5720(0.3μmo L/L)分别预处理15 min后加入黄芩苷。测定A549细胞内肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及环磷酸腺苷(c AMP)水平。用Western blot法测量α-ENaC蛋白表达水平。结果:与LPS组相比,黄芩苷预处理后在各时间点上A549细胞内TNF-α水平明显降低(P<0.05),而c AMP浓度显著升高(P<0.05)。LPS组α-ENaC蛋白表达(0.32±0.05)明显低于对照组(0.84±0.07);黄芩苷预处理后显著增加α-ENaC蛋白表达(0.65±0.08),与LPS组相比差异有统计学意义(P<0.01)。经SQ22536及KT5720预处理后,黄芩苷对LPS处理A549细胞α-ENaC蛋白表达的增强作用明显减弱(P<0.01)。结论:黄芩苷通过c AMP/PKA信号途径,增加LPS作用的A549细胞α-ENaC蛋白表达水平。     

血管紧张素Ⅱ对平滑肌细胞产生一氧化氮和三磷酸肌醇活性的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和胰岛素对人脐动脉平滑肌细胞产生一氧化氮(NO)、超氧阴离子(O2-)、三磷酸肌醇(IP3)活性的影响。方法不同浓度的AngⅡ和胰岛素加入体外培养的人脐动脉平滑肌细胞,分别测定细胞培养液中一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)活性,NO、环鸟苷酸(cGMP)和O2-浓度,3H标记肌醇-逐步洗脱法测定IP3活性。结果胰岛素(10、100、1000mU/L)使平滑肌细胞NOS活性升高,NO、cGMP产生增加,对SOD活性和O2-水平无影响,对IP3活性无明显影响;0.1、0.5nmol/LAngⅡ对NOS活性、NO和cGMP产生无明显影响,1nmol/LAngⅡ使NOS活性下降(P<0.05),NO、cGMP产生减少(P<0.05或<0.01),0.1、0.5、1nmol/LAngⅡ使SOD活性下降(P<0.05或<0.01),O2-水平升高(P<0.01),使IP3活性升高(P<0.05);胰岛素10mU/L AngⅡ0.1nmol/L、胰岛素100mU/L AngⅡ0.5nmol/L、胰岛素1000mU/L AngⅡ1nmol/L使NOS活性下降(P<0.01),NO和cGMP产生减少(P<0.01),SOD活性下降(P<0.01),O2-水平升高(P<0.01),使IP3活性升高(P<0.05);0.1nmol/LAngⅡ 1μmol/L氯沙坦、0.5nmol/LAngⅡ 5μmol/L氯沙坦、1nmol/LAngⅡ 10μmol/L氯沙坦可以改善AngⅡ引起的NOS、SOD活性下降,NO、cGMP产生减少,O2-水平升高,以及AngⅡ引起的IP3活性升高,但与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论胰岛素使平滑肌细胞NO产生增加,对IP3活性无影响。高浓度AngⅡ使NO产生减少,O2-水平升高,使IP3,活性升高,可以被氯沙坦阻断,胰岛素和AngⅡ同时存在时平滑肌细胞NO产生减少,O2-水平升高,可以使IP3活性升高。