在细粒棘球蚴感染小鼠中抗独特型抗体的调节

此项工作的目的是研究用抗独特型抗体(Ab_2)免疫后能否调节抗寄生虫的抗体反应。为此,作者比较观察了经Ab_2和人包虫囊液抗原免疫的小鼠对感染的抗体反应。 将具有高抗体滴度和能识别多抗原组分的一包虫病病人的血清(Ab_1)用包虫囊液抗原(HCFA)亲和纯化,作为独特型抗原免疫兔。经吸附去除非抗独特型抗体及类风湿因子后的兔免疫血清即为抗独特型抗体Ab_2。作者分析了通过Ab_2处理后对细粒棘球绦虫抗原的抗体应答的调节。     

日本血吸虫重组Sj26抗原抽提、纯化及初步应用

从 Mitchell 实验室引进与我们报告的24—26kD 抗原类似的重组 Sj26抗原基因的 E coil,从中抽提并纯化出 rSj26抗原。重组 Sj26抗原初步应用的结果表明:(1)rSj26抗原 ELISA 可以检测日本血吸虫大陆株感染鼠血清中特异性抗体,最高滴度1:320,不比同种24—26kD 抗原检测的效果差;(2)用24—26kD 抗原检测 rsj26免疫鼠血清中的抗体水平,和以 rSj26抗原检测的水平相似,而用 SEA 测抗 rSj26抗体水平较差}(3)用 rSj26免疫鼠后以大陆株尾蚴攻击感染,减虫率可达44.4%,表明 rSj26可诱导一定程度保护性免疫力预防日本血吸虫大陆株尾蚴感染。对 rSj26抗原引进的重要意义进行了讨论。     

IFA和HRP—SPA用于狂犬病疫苗免疫后抗体水平测定

狂犬病是一种严重危害人民生命安全的传染病。为探求狂犬病疫苗免疫后抗体水平测定的有效方法。我们在用鼠脑抗原中检测狂犬病毒抗体的基础上,进一步在细胞抗原中,用免疫荧光法(IFA)和酶标SPA组化法(HRP-SPA)作狂苗免疫后抗体测定,收到了较好的结果,现将两种方法并用于53例暴露者的检测结果报告如下。 材料和方法 一、抗原片 由本实验室自制,用CVS国际标准毒株感染BHK_(21)细胞灭活点片而成。-70℃保存。     

曼氏血吸虫28kDaGST在感染人群中存在性别依赖的中和体液免疫应答

曼氏血吸虫(Sm)28 kDa GST为世界卫生组织推荐的血吸虫病疫苗候选分子。重组Sm 28 kDa GST免疫动物后引起血吸虫生殖力的降低及免疫人群获得抗感染能力均与特异性抗体抑制GST酶活性有关。近来的研究表明,吡喹酮治疗后可引起特异性抗体应答发生改变,因此对Sm 28 kDa GST及其主要的抗原表位(10—44AA,190—211AA)在感染者化疗前获得中和体液免疫应答进行了研究。     

弓形体抗原的免疫化学研究

本文应用4种免疫血清学方法和免疫印迹技术分析了3种不同毒力弓形体株(RH、Beverley和Fukaya)感染小鼠后诱导血清IgM和IgG抗体产生的速殖子表膜抗原及株间的抗原差异。速殖子膜有3种主要功能性抗原,分子量分别为120、35和27kd。P_(27)除被IgG抗体识别外,同时还可被IgM抗体所识别。用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离并部分纯化的抗原进行ELISA检测发现,含有P_(35)的洗脱抗原组分与小鼠多克隆抗体反应最为强烈,其次为含有P_(27)的洗脱组分。用洗脱各抗原组分免疫小鼠后证明,血清IgG抗体主要与P_(35)和P_(27)结合。用部分纯化的P_(35)抗原免疫小鼠可使受试鼠获得抗攻击感染的部分保护性免疫力。     

在琼脂免疫扩散试验中应用多糖、脂多糖和β—葡聚糖抗原诊断牛布病

迫切需要研究一种能将人工免疫与自然感染布氏菌的牛相区别的方法。因为在标准的血清学试验中,所用的牛种光滑型脂多糖抗原同感染牛和S_(19)免疫牛血清都发生抗原—抗体反应,而且这种反应在免疫后持续很长时间,因此众多学者致力于选择性试验的研究和抗原的研制。这些研究结果表明由羊种菌B_(115)所分离的多糖B(PolyB)与感染牛种菌血清凝集,而与S_(19)菌苗免疫的牛血清不凝集。多     

Mi-2抗原的制备抗Mi-2抗体的检测及其意义

目的　制备Mi 2抗原 ,测定自身免疫性结缔组织疾病 (CTD)中的抗Mi 2抗体 ,并初步探讨其临床意义。方法　制备兔胸腺丙酮粉 ,提取粗Mi 2抗原 ,用离子交换层析法纯化抗原。应用免疫双扩散法检测 315份CTD和 4 0份正常对照血清中的抗Mi 2抗体。分析抗Mi 2抗体在CTD中的分布 ,并比较皮肌炎 (DM)患者中抗Mi 2抗体阳性组与阴性组的临床特点。结果　自制的Mi 2抗原与标准Mi 2抗血清免疫双扩散出现清晰的沉淀线。经DE5 2离子交换层析 ,Mi 2抗原在 0 1～0 2mmol LNaCl洗脱组分中被检出。抗Mi 2抗体在DM和多发性肌炎中的阳性率分别为 2 6 1%(12 4 6 )和 4 5 %(2 4 4 )。在其他CTD和正常人均未检测到抗Mi 2抗体。抗Mi 2抗体对DM的特异性为 99 4 %。对DM而言 ,阳性组多以皮肤损害为首发表现 ,病程中多出现V型或围巾型皮疹 ;而阴性组常以肌肉症状首发 ,病程中发热多见 ,两组间差异有显著性 (P <0 0 5 )。结论　兔胸腺丙酮粉中含有Mi 2抗原成分。抗Mi 2抗体是一种对DM诊断较为特异的自身抗体 ,该抗体阳性的DM可能是DM中的另一亚型。     

用ELISA法检测献血者肝炎病毒、巨细胞病毒标志物

采用酶联免疫吸附法(ELISA)对990例献血者进行了乙肝表面抗原(HBsAg)、抗体(HBsAb)、e抗原(HBeAg)、e抗体(HBeAb)、核心抗体(HBcAb)、丙肝抗体(抗-HCV)、丁肝抗原(HDV-Ag)、巨细胞病毒抗体(抗-CMV-IgM)的检测,并同时采用速率法进行ALT的测定,现报告如下。 1 对象和方法 1.1 对象 献血者990例,男639例,女351例,年龄18—50岁,平均35.5岁。献血1—52次,每次献血前RPHA法     

他巴唑对Graves病免疫功能的影响

Graves病是一自身免疫性疾病,在患者血循环中存在有异常的刺激因子—抗甲状腺刺激激素(TSH)受体抗体(TRa)为其特征。Graves病患者抗DNA抗体(DNAa)阳性率较高,并有HLADR抗原的异常表达。本文检测了上述三种免疫指标     

免疫组织化学技术在我国寄生虫学研究中的应用

免疫组织化学 ( Immunohistochemistry)又称免疫细胞化学( Immunocytochemistry) ,是组织化学的分支。它是用标记的特异性抗体 (或抗原 )对组织内抗原 (或抗体 )的分布进行细胞和组织原位的检测技术。194 1年首次用荧光素标记抗体检测肺组织内肺炎双球菌获得成功 ,开创了细胞化学中“免疫细胞化学”的新篇章。近年来免疫细胞化学迅猛发展 ,继酶标记抗体技术后 ,建立了辣根过氧化物酶 -抗过氧化物酶 ( PAP)技术。使免疫细胞化学得到了日益广泛的应用。 80年代 ,抗生物素 -生物素 ( ABC)法建立后 ,免疫金 -银染色法、半抗原标记法、免疫电…     

应用共同抗原的多克隆与单克隆抗体进行肠道病毒诊断的研究

目的制备肠道病毒可能的共同抗原多克隆与单克隆抗体,用于早期诊断肠道病毒。方法RT-PCR扩增VP1N端122氨基酸这一可能的共同抗原基因片段,连接至PET-30a表达载体,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行体外表达,表达重组蛋白经Western-blot活性鉴定后用电洗脱法进行纯化。纯化蛋白免疫昆明鼠获取多克隆抗体,多克隆抗体用饱和硫铵沉淀法进行纯化。纯化蛋白免疫BALB/c鼠,用杂交瘤技术进行单克隆抗体制备,并用Protein A/G亲和柱进行纯化。制备的抗体用间接免疫荧光法(IFA)检测肠道病毒。结果重组蛋白经Western blot检测,能被国外商品化的肠道病毒组特异性的5-D8/1单克隆抗体、含脊髓灰质炎病毒抗体的人血清与分别代表肠道病毒A、B、C三组的单型血清所识别。制备其相应的多克隆和单克隆抗体,与5-D8/1单克隆抗体同时应用间接免疫荧光法(IFA)检测29株(27型)福建分离株病毒抗原,显示:制备的多抗或单抗的检出率比5-D8/1单抗高约10%~40%。结论结合福建省当地株制备肠道病毒共同抗原的抗体检测变异较大的当地株,更具优势。     

炭疽保护性抗原疫苗的动物免疫效果

本文介绍了作者试制的无菌保护性抗原疫苗的动物免疫效果资料。此苗安全、毒性低,具有良好的免疫原性。家免经钾矾抗原免疫后能耐过250—10,000个MLD强毒炭疽芽孢的攻击,经0.2mlAl(OH)_3吸附抗原2次接种,对250个MLD攻击的保护率为94％。猴经0.5ml或1.0mlAl(OH)_3吸附抗原3次免疫对强毒炭疽芽孢的保护率为87.5％,免疫力可持续1年。兔、猴经吸附抗原免疫后有相应特异性抗体形成。     

日本血吸虫24-26kDa抗原和重组Sj26抗原的抗原性和免疫原性比较研究

本文报告从日本血吸虫大陆株成虫抽提的24—26kDa抗原与源于日本血吸虫菲律宾株的重组Sj26抗原之间在抗原性和免疫原性上所进行的一系列比较研究。ELISA、IFA和Westernblotting等方法观察结果均表明,24—26kDa和rSj26抗原免疫后所诱导的特异性抗体与其对应的抗原之间具有明显的抗原交叉反应,而与其它血吸虫抗原如可溶性虫卵抗原也有交叉反应。若以两种抗原加福氏佐剂分别免疫小鼠,以日本血吸虫大陆株尾蚴攻击感染,减虫率相似(26～32％),表明两种抗原存在一定程度的交叉免疫保护性。这些研究结果为开发rSj26抗原,或是根据已知Sj26 cDNA核苷酸序列制备DNA探针,从已构建的日本血吸虫(大陆株)cDNA库筛选相关目的基因,加速血吸虫疫苗的研制起着重要作用。     

同种和异种丝虫成虫抗原免疫动物后血清特异性抗体动态的研究

应用马来丝虫和牛丝虫成虫冰冻切片抗原作间接免疫荧光抗体试验(IFAT)和免疫酶染色试验(IEST)检测家兔经3种抗原免疫后不同时期血清抗体IgG水平,均能显示免疫动物特异性抗体水平的动态变化。IgG水平高峰(GMRT为76.11～861.08)均在动物免疫后第4wk,在第8wk时,均下降至低水平(GMRT为4.00～32.00);加强免疫后1wk时,又上升至高水平(GMRT为20.11～181.02)。     

抗结核抗体在小儿结核病临床及筛查中的应用研究

本研究应用聚合旧结核菌素(OT)、结核菌纯蛋白衍化物(PPD)和结核杆菌纯化抗原6(Ag6)三种抗原,建立了ELISA和ABC—ELISA平行检测定量微量血中相应抗体的方法,并应用此法对小儿抗结核抗体进行了深入系统的研究。(1)首次探明了抗OTIgG、抗PPDIgG随着年龄增长而增高,而抗Ag6IgG在各年龄组间无显著差异;BCG接种对小儿结     

对常规制备的鼠疫F1抗原、抗体组分及免疫交叉反应的观察

目的对常规方法制备的鼠疫菌F1抗原、抗体的组分进行分析,并观察其免疫交叉反应。方法采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术分析抗原、抗体的组分;应用蛋白印迹观察其与相关细菌的免疫交叉反应。结果常规方法制备的鼠疫F1抗原、抗体组分复杂,混杂有其他多种蛋白;假结核耶尔森菌、小肠结肠炎耶尔森菌、大肠埃希菌、鼠伤寒沙门菌的全膜蛋白与F1抗体存在交叉反应。结论常规方法制备的鼠疫F1抗原、抗体不纯,影响鼠疫免疫学诊断的特异性。     

细粒棘球绦虫Eg95基因疫苗和重组抗原诱导小鼠免疫应答的比较研究

目的观察比较细粒棘球绦虫Eg95重组抗原和基因疫苗诱导小鼠的免疫应答状况。方法实验组和对照组小鼠分别注射Eg95重组抗原(rEg95)、费氏佐剂(FCA)、pcDNA3-Eg95基因疫苗、pcDNA3质粒和生理盐水,收集各组血清用酶联免疫吸附(ELISA法)检测抗体IgG和IgG2a亚类水平;采集脾细胞用四甲基偶氮唑盐试验(MTT法)检测免疫小鼠的脾淋巴细胞增殖反应。结果rEg95免疫组小鼠在第二次免疫后开始检测到抗Eg95抗原的IgG,并随着免疫次数的增多,血清抗体效价升高,在第1次免疫后第10周时,免疫抗体滴度可达到1∶25,600。Eg95基因疫苗免疫的小鼠产生抗体滴度随免疫次数的增加而升高,最高可达1∶3,200,但是低于Eg95重组蛋白免疫小鼠产生的抗体滴度水平。pcDNA3-Eg95免疫组产生IgG2a亚类抗体水平明显高于对照组和rEg95组。在第四次免疫后,进行淋巴细胞转化试验,MTT法检测证实rEg95和pcD-NA3-Eg95免疫的小鼠,其脾细胞均可在体外被特异性刺激增生。结论细粒棘球绦虫Eg95重组抗原和基因疫苗均可诱发小鼠产生特异性免疫应答。     

抗猪带绦虫六钩蚴独特型抗体疫苗对猪体免疫保护作用的研究

目的　本研究在证实猪带绦虫六钩蚴抗原具有很高的免疫保护性的基础上 ,探讨六钩蚴抗独特型抗体作为六钩蚴抗原替代物对猪体的保护作用 ,为研制猪体囊虫疫苗提供理论基础。　方法　用六钩蚴粗制抗原免疫家兔 ,制备兔抗六钩蚴抗体 (Ab1) ,再用Ab1免疫昆明小白鼠 ,制备抗独特型抗体 (Ab2 ) ,免疫猪体 ,以 3节猪带绦虫孕卵节片攻击感染 ,90d后剖杀 ,观察感染情况。　结果　 5头试验猪只有 1头在膈肌发现 1个囊虫 ,而 2头阳性对照猪均被感染 ,各检查部位囊虫数平均为 4.5个 /10 0g和 3 .2个 /10 0 g。　 结论　抗猪带绦虫六钩蚴独特性抗体Ab2对猪体有较强的免疫保护作用。     

基于免疫磁分离技术的尿液HIV抗体高敏感性检测方法建立

目的研究建立基于HIV免疫磁分离前处理技术的尿液HIV抗体高敏感性检测方法。方法采用羧基磁珠和HIV特异性抗原通过碳二亚胺缩合反应,优化制备HIV免疫磁珠;采用BCA法对磁珠偶联前后的HIV抗原浓度进行测定,采用ELISA法对HIV免疫磁珠捕获前后的样本中HIV抗体吸光度(OD)值进行检测,采用HRP标记抗原对免疫磁珠捕获后的HIV抗体进行OD值检测,以抗原偶联率与HIV免疫磁珠的抗体捕获效率为指标,建立HIV免疫磁珠在尿液样本中的前处理体系与检测方法;使用100份阴性尿液样本进行Cut-off值设定;使用3套血液确证HIV抗体阳性尿液21～210系列稀释样本进行方法敏感性验证;使用100份血液确证HIV抗体阳性尿液与100份健康人群尿液进行方法初步应用。结果 300 nm羧基磁珠在100∶4的投料比下制备的HIV免疫磁珠的抗原偶联率为79.0%;10μg/mL HIV免疫磁珠在1 mL和5 mL尿液样本中室温捕获15～30 min后的抗体捕获效率为80.42%～93.99%;基于HIV免疫磁珠前处理技术的高敏感性检测方法 Cut-off值为0.56;对3套21～210系列稀释HIV抗体尿液样本的检测敏感性较常规ELISA提高16～512倍;该方法对100份血液确证HIV抗体阳性的尿液检出数(81)高于常规ELISA检出数(52);全部验证与应用实验中均未发现阴性样本的假阳性现象。结论本研究建立的HIV免疫磁珠制备体系与HIV免疫磁珠尿液样本前处理技术,均具有良好的应用稳定性与检测有效性,基于HIV免疫磁分离技术的尿液HIV抗体检测方法敏感性高于目前ELISA检测方法。     

应用合成多肽技术制备肺癌转移相关蛋白1多克隆抗体的研究

目的应用人工合成多肽技术制备肺癌转移相关蛋白1(Lung Cancer Metastasis-Related Protein1,LCMR1)的多克隆抗体。方法运用生物信息学技术和人工合成多肽方法制备LCMR1特异性多肽,鉴定纯度后与牛血清白蛋白、匙孔血蓝蛋白进行偶联制备多肽抗原,然后免疫新西兰雄性白兔,获得抗血清,经亲和层析法纯化后,用ELISA法鉴定抗体效价,用Western Blot鉴定特异性。结果成功获得了LCMR1的多克隆抗体,ELISA检测抗体效价大于1:100 000,Western Blot免疫印迹结果显示其具有抗原特异性识别。结论应用免疫原性肽抗体技术成功制备了LCMR1的多克隆抗体,为今后深入了解LCMR1基因的生物学功能提供了有用的研究工具。