肺癌组织中经典Wnt信号途径相关基因异常甲基化的检测

目的 检测肺癌组织中经典wnt信号途径相关基因(WIF-1、sFRP-1、DKK-3)启动子的甲基化状态及其与患者临床病理特征问的关系,探讨其在肺癌发生中的作用.方法 应用巢式甲基化特异性聚合酶链反应(nMSP),检测30例纤维支气管镜活检肺癌组织、11例石蜡包埋肺癌组织和10例肺良性疾病患者的纤支镜活检标本以及肺腺癌A549细胞株中WIF-1、sFRP-1和DKK-3基因启动子区域的甲基化.结果 肺良性疾病患者活检标本未检测到所选基因的甲基化,肺癌患者活检标本WIF-1、sFRP-1、DKX-3基因启动子甲基化的发生率分别为:46.3%、29.3%和36.6%;重度吸烟患者肺癌组织3个基因的甲基化发生率明显增高(P<0.05).肺腺癌A549细胞株中WIF-1和DKK-3基因呈甲基化状态,而sFRP-1基因呈未甲基化状态.结论 经典wnt信号途径相关基因启动子甲基化可能与吸烟引起的肺癌有关,甲基化的WIF-1、sFRP-1和DKK-3基因可能成为肺癌袁观遗传干预治疗的新靶点.     

经典Wnt信号途径相关基因异常甲基化与肺癌发生关系的探讨＊

[摘要] 目的 检测肺癌中经典Wnt信号途径相关基因(WIF-1,sFRP-1,DKK-3)启动子的甲基化状态及β-连环蛋白(β-catenin)的表达情况,探讨其在肺癌发病中的作用。方法 应用巢式甲基化特异性聚合酶链反应(nMSP),检测66例肺癌组织、25例相应的癌旁组织和10例正常肺组织以及肺腺癌A549细胞株中WIF-1,sFRP-1和DKK-3基因启动子区域的甲基化;免疫组化SP法检测β-catenin的表达情况。结果 正常肺组织均未检测到所选基因的甲基化,肿瘤组织和癌旁组织中WIF-1、sFRP-1、DKK-3基因启动子甲基化的发生率分别为：50.0% vs 24.0% (P＜0.05)、36.4% vs 12.0% (P＜0.05)和36.4% vs 8.0% (P＜0.01);重度吸烟患者肿瘤组织3个基因的甲基化发生率明显增高(P＜0.05)。肺腺癌A549细胞株中WIF-1和DKK-3基因呈甲基化状态,而sFRP-1基因呈未甲基化状态。免疫组织化学显示肺癌组织中β-catenin的阳性表达率为81.2%,异常表达率为64.4%,且与组织学类型无关(P＞0.05)。结论 经典Wnt信号途径相关基因启动子甲基化可能与吸烟引起的肺癌有关,甲基化的WIF-1、sFRP-1和DKK-3基因可能成为肺癌表观遗传干预治疗的新靶点。 [关键词] 肺肿瘤 经典Wnt信号途径相关基因 β-连环蛋白     

经典Wnt信号途径相关基因异常甲基化与肺癌发生的关系

目的检测肺癌中经典Wnt信号途径相关基因(WIF-1,sFRP-1,DKK-3)启动子的甲基化状态及β-连环蛋白(β-catenin)的表达情况,探讨其在肺癌发病中的作用。方法应用巢式甲基化特异性聚合酶链反应(nMSP),检测66例肺癌组织、25例相应的癌旁组织和10例正常肺组织以及肺腺癌A549细胞株中WIF-1,sFRP-1和DKK-3基因启动子区域的甲基化;免疫组化SP法检测β-catenin的表达情况。结果正常肺组织均未检测到所选基因的甲基化,肿瘤组织和癌旁组织中WIF-1,sFRP-1,DKK-3基因启动子甲基化的发生率分别为:50·0%vs24·0%(P<0·05),36·4%vs12·0%(P<0·05)和36·4%vs8·0%(P<0·01);重度吸烟患者肿瘤组织3个基因的甲基化发生率明显增高(P<0·05)。肺腺癌A549细胞株中WIF-1和DKK-3基因呈甲基化状态,而sFRP-1基因呈未甲基化状态。免疫组织化学显示肺癌组织中β-catenin的阳性表达率为81·2%,异常表达率为64·4%,且与组织学类型无关(P>0·05)。结论经典Wnt信号途径相关基因启动子甲基化可能与吸烟引起的肺癌有关,甲基化的WIF-1,sFRP-1和DKK-3基因可能成为肺癌表观遗传干预治疗的新靶点。     

甲状腺及乳房多原发癌病人甲状腺癌组织WIF-1基因mRNA表达及其启动子甲基化状态分析

目的探讨甲状腺、乳房多原发癌病人甲状腺癌组织WIF-1基因mRNA表达及其启动子的甲基化状态。方法采用RT-PCR及甲基化特异性PCR(MSP)方法检测33例甲状腺、乳房多原发癌病人甲状腺癌组织WIF-1基因mRNA表达及其启动子甲基化状态,以30例单纯甲状腺乳头状癌和20例甲状腺良性病变组织作为对照。结果多原发癌病人甲状腺癌组织、单纯甲状腺乳头状癌组织和甲状腺良性病变组织WIF-1基因的表达缺失率分别为51.5%(17/33)、36.7%(11/30)、15.0%(3/20),3组比较差异有统计学意义(χ2=7.105,P<0.05)。多原发癌病人甲状腺癌组织、单纯甲状腺乳头状癌组织WIF-1基因的甲基化率分别为45%(15/33)、43%(13/30),高于甲状腺良性病变组织的10%(2/20),差异有显著性(χ2=6.349、7.185,P<0.01),但多原发癌病人甲状腺癌组织与单纯甲状腺乳头状癌组织相比差异无显著性(P>0.05)。结论 WIF-1基因mRNA表达缺失在甲状腺、乳房多原发癌的发生过程中起关键作用;WIF-1基因启动子区的高甲基化状态可能是其mRNA低表达的机制之一。     

p16、DAPK和APC基因甲基化在肺癌早期诊断中的价值

目的检测肺癌患者外周血中p16、死亡相关蛋白激酶(DAPK)和结肠腺瘤样息肉蛋白(APC)基因启动子异常甲基化情况并分析其在肺癌早期诊断中的意义。方法收集79例原发性肺癌患者(肺癌组)、40例肺良性病变患者(对照组)的外周血标本,应用甲基化特异性PCR(MSP)法检测两组p16、DAPK和APC基因启动子的甲基化情况,并分析3个基因与肺癌患者的各项临床特征的关联情况。结果肺癌组血清中p16、DAPK和APC的甲基化率分别为51.9%(41/79)、50.6%(40/79)、35.4%(28/79),对照组中分别为2.5%(1/40)、5.0%(2/40)、2.5%(1/40),两组比较差异均有统计学意义(P均0.05)。p16、DAPK和APC基因甲基化单项鉴别肺癌的灵敏度分别为51.9%(41/79)、50.6%(40/79)、35.4%(28/79)。3种基因甲基化联合鉴别肺癌的灵敏度为73.4%(58/79),高于单项指标。3个基因的甲基化与肺癌患者性别、年龄、吸烟史、组织学类型、肿瘤分期和淋巴结转移等多项临床资料均无相关性(P0.05)。结论外周血p16、DAPK和APC基因启动子甲基化与肺癌有关,联合检测p16、DAPK和APC基因甲基化可提高肺癌诊断的准确性。     

RUNX3基因甲基化在胃肠肿瘤患者血清中的检测及临床意义

目的新型抑癌基因RUNX3是转化生长因子β(transforming growth factor beta,TGF-β)信号转导途径的关键因子,实验检测胃癌、大肠癌患者血清DNA中RUNX3基因启动子区域甲基化状态,探讨其用于肿瘤早期诊断的临床意义。方法留取42例胃癌、45例大肠癌、20例胃肠道良性病变及10例健康志愿者血清标本,甲基化特异性聚合酶链反应(methyla-tion-specific PCR,MSP)检测RUNX3基因启动子区域甲基化情况,并分析其与临床病理参数之间的相关性。结果血清RUNX3基因异常甲基化在胃癌中检出率为47.6%(20/42),在大肠癌中为40.0%(18/45),而20例胃肠道良性病变患者中仅有1例为不完全甲基化,占5.0%,10例健康志愿者中检出率为0,差异有显著性统计学意义(P<0.01);血清RUNX3基因启动子甲基化与患者临床病理特征及癌胚抗原(carcinoembtyonic antigen,CEA)、糖链抗原19-9(CA19-9)水平之间无相关性。结论RUNX3基因启动子甲基化在胃癌和大肠癌患者血清中有较高的检出率,可望成为胃肠肿瘤早期诊断的新型分子标记。     

肺腺癌组织与血清中半胱氨酸双加氧酶1基因启动子区甲基化在早期肺癌诊断中的意义

目的观察肺腺癌患者肿瘤组织和血清中半胱氨酸双加氧酶1(CDO1)启动子区甲基化状态,探索其与肺腺癌发生进展的关联,及CDO1基因甲基化作为肺腺癌血清学标记物的可能性。方法收集早期肺腺癌患者和肺部良性肿瘤组织及血清样本,采用基于磁珠的DNA提取和亚硫酸氢钠修饰技术,结合实时荧光定量PCR技术检测CDO1基因启动子区甲基化状态。结果肺腺癌组织中CDO1基因甲基化检测率为71.4%(25/35),对应的血清检出率为51.4%(18/35)。对照组中CDO1基因甲基化率为10.0%(2/20),对应的血清检出率为5.0%(1/20),肿瘤组与对照组之间比较差异有统计学意义(P0.05)。从肺腺癌患者血清检测CDO1启动子区甲基化与从肿瘤组织中直接检测其结果具有很高的一致性(r=0.732,P0.05)。结论肺腺癌组织和血清DNA中存在CDO1基因启动子区的异常甲基化状态,且具有极高的特异性。血清游离DNA的甲基化检测可能为肺腺癌的早期诊断、复发监测和预后判断提供全新的临床思路。     

DLEC1基因在结直肠癌中的甲基化水平及临床意义

目的 检测DLEC1 (deleted in lung and esophageal cancer 1) 基因在结直肠癌 (colorectal cancer, CRC) 患者组织和血清中的甲基化状态,分析其临床意义。方法 留取71例CRC患者癌组织、相应正常组织及术前血清标本,20例肠道良性病变及20例健康志愿者血清标本,甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测DLEC1基因启动子区域甲基化情况。结果 71例CRC组织中,DLEC1基因启动子甲基化比例为45.1%(32/71),而正常组织为7.1%(4/56),差异有统计学意义(P<0.001);DLEC1基因启动子甲基化与患者临床病理特征及CEA、CA19-9水平之间无相关性。相应CRC血清DNA中DLEC1甲基化比例为39.4%(28/71),而对照组为2.5%(1/40),差异有统计学意义(P<0.001),且血清DNA甲基化状况与组织中具有良好的一致性。结论 DLEC1基因启动子甲基化在CRC患者中有着较高的检出率,可望成为CRC辅助诊断的新型分子标记。     

支气管肺泡灌洗液MGMT基因甲基化检测在非小细胞肺癌诊断中的价值

目的 探讨支气管肺泡灌洗液(BALF)中MGMT基因启动子甲基化水平对于非小细胞肺癌的诊断价值。方法 选取完成胸部手术患者98例为研究对象,经病理确诊非小细胞肺癌患者63例组成试验组,经病理确认为良性病变患者35例为对照组,分别获取试验组及对照组成员血清标本、BALF标本及活组织标本,对不同类型标本中MGMT基因启动子甲基化水平做检测。结果 非小细胞肺癌患者肺癌组织中、BALF中、血清中MGMT基因甲基化发生率分别为58.7%、52.4%和27%;肺癌组织的MGMT基因甲基化率与BALF 中MGMT基因的甲基化率有较好的一致性,其与血清标本中MGMT基因的甲基化一致性较差,其判断肿瘤良恶性的敏感度低于BALF标本;35例肺良性病变对照组的肺组织标本、BALF及血清标本,均未检测到MGMT基因甲基化表达,其甲基化率为0。结论 BALF中MGMT基因甲基化检测在非小细胞肺癌的筛查诊断中具有一定的临床应用价值。     

乳腺癌组织及血浆中RASSF1A,CDH1甲基化的检测及临床意义

目的 研究乳腺癌组织、乳腺良性肿瘤组织及相应患者血浆中Ras相关区域家族1A(RASSF1A)、上皮型钙黏附素(CDH1)基因启动子区异常甲基化状态及其临床意义.方法 应用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法对乳腺癌组织、乳腺良性肿瘤组织及相应血浆中RASSF1A,CDH1基因甲基化状态进行检测.结果 34例乳腺癌组织RASSF1A基因启动子甲基化率为73.53%(25/34),CDH1基因启动子甲基化率为50.00%(17/34),相应血浆中RASSF1A的甲基化检出率为55.88%(19/34);CDH1的甲基化检出率为35.29%(12/34);联合检测血浆中RASSF1A和CDH1基因启动子区甲基化的敏感性为64.71%(22/34);而25例良性肿瘤组织RASSF1A基因启动子甲基化率为12.00%(3/25),CDH1基因启动子甲基化率为4.00%(1/25),相应血浆中未检测出甲基化的RASSF1A和CDH1基因.RASSF1A,CDH1甲基化率与肿瘤病理类型、患者年龄、有无淋巴结转移的差异无显著性(P>0.05).结论 联合检测血浆中RASSF1A和CDH1基因启动子区甲基化,可用于乳腺癌的辅助诊断.     

siRNAi沉默DNMT1基因对肺癌细胞WIF-1启动子甲基化的影响

目的 探讨DNA甲基转移酶(DNMT1)siRNAi对人肺癌A549细胞内抑癌基因wnt抑制因子-1(WIF-1)基因启动子高甲基化的影响.方法 利用pSilencer 4.1-CMV neo载体,通过siRNAi表达载体法制备DNMT1 siRNAi.将DNMT1 siRNAi转染肺癌A549细胞,采用RT-PCR和Western blot检测观察转染前后肺癌A549细胞DNMT1内DNMT1基因的表达改变,并利用甲基化PCR,直接测序法检测WIF-1基因启动子甲基化水平.结果 构建的DNMT1 siRNAi转染肺癌A549细胞后,明显抑制DNMT1基因的表达,mRNA表达下降75%,蛋白表达下调82%;同时,WIF-1基因启动子序列较转染前甲基化水平明显降低.结论 靶向DNMT1的siRNAi可明显下调靶基因DNMT1的表达,并逆转WIF-1基因启动子高甲基化水平.     

食管鳞状细胞癌中WIF-1基因启动子区甲基化状态及mRNA表达的研究

目的探讨食管鳞状细胞癌(ESCC)中WIF-1基因启动子甲基化状态及mRNA表达水平及其与病理指标之间的关系。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)技术和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测62例ESCC组织及30例癌旁组织中WIF-1基因启动子区甲基化状态和mRNA的表达水平,应用SPSS13.0探讨其与临床病理资料的关系。结果 WIF-1基因在癌组织中的甲基化率59.7%(37/62)明显高于癌旁组织13.3%(4/30),差异有显著性(P<0.05);其甲基化状态与年龄、分化程度及淋巴结转移情况相关(P<0.05);而与其他临床资料(性别、部位、浸润深度、临床分期)无明显相关性(P>0.05)。WIF-1基因mRNA在ESCC组的表达量(0.565±0.112)显著低于癌旁正常组(0.666±0.107),差异有显著性(P<0.05)。结论 WIF-1基因启动子甲基化在食管鳞癌的进展过程中起着重要的作用;WIF-1基因mRNA表达异常可能与ESCC的发生有关,此基因甲基化与mRNA表达两者之间的关系有待进一步研究。     

肺癌组织p16基因启动子区高甲基化情况分析

目的:了解不同临床病理情况下肺癌组织中p16基因启动子区高甲基化的情况。方法:采用甲基化特异的PCR(MSP)法,根据5-甲基胞嘧啶与胞嘧啶修饰后的不同,设计甲基化与非甲基化等位基因特异的引物,通过PCR扩增检测手术后53例不同临床病理类型肺癌组织中p16基因启动子区高甲基化情况。结果:肿瘤组织标本中p16基因启动子区甲基化比例为占71.7%(38/53),其中鳞状细胞癌占80.0%(20/25),腺癌占66.7%(10/15),小细胞肺癌占61.5%(8/13)。长期吸烟史与鳞状细胞癌p16基因启动子区高甲基化比例增高有关(P<0.001),与小细胞肺癌(P=0.293)、腺癌的(P=1.000)p16基因启动子区高甲基化关系不密切。肿瘤T分期与鳞状细胞癌p16基因启动子区高甲基化比例增高有关(χ2=8.719,P=0.013)。结论:肺癌瘤组织标本中p16基因启动子区高甲基化是比较常见的现象;肿瘤组织基因启动子区高甲基化发生率随TNM分期的提高有升高趋势;基因启动子区甲基化状态与吸烟有关,有长期吸烟史的肺癌病人p16基因启动子区甲基化率增高。肺鳞状细胞癌中随T分期增高p16基因启动子区高甲基化比例增高。     

血清游离p16INK4A基因启动子DNA甲基化用于非小细胞肺癌早期诊断的研究

目的 探讨血清游离p16INK4A基因启动子DNA甲基化用于肺癌早期诊断的临床应用价值.方法 选择32例健康查体者,32例肺部良性疾病患者和32例Ⅰ期(T1N0M0或T2NoM0)非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者血清游离DNA做为研究对象,应用甲基化特异PCR(methylation specific PCR,MSP)对上述标本进行p16INK4A基因启动子DNA甲基化检测,判断各组标本启动子的甲基化水平.评价血清游离DNA启动子异常甲基化对于NSCLC早期诊断的价值.结果 健康对照组血清游离p16INK4A基因启动子DNA甲基化均呈阴性;肺部良性病变组甲基化阳性率为25.0％ (8/32);NSCLC患者组甲基化阳性率为62.5％ (20/32).3组标本血清游离p16INK4A基因启动子DNA甲基化阳性率差别有统计学意义(x2=16.54,P=0.033).以血清游离p16INK4A基因启动子DNA甲基化为肺癌诊断标准,其诊断NSCLC的敏感度和特异性分别为59.4％,87.5％.诊断的ROC(receiver operating characteristic)曲线下面积(AUC)为0.86,95％ CI(0.74～0.95).结论 与健康体检者和肺部良性病变患者相比,NSCLC患者血清游离p16INK4A基因启动子DNA甲基化水平显著增高,检测血清p16INK4A基因启动子甲基化水平可能为肺癌早期诊断提供一种无创的方法.     

急性白血病患者WIF-1基因启动子甲基化及β连环蛋白表达的研究

目的 探讨急性白血病(AL)患者Wnt抑制因子1(WIF-1)基因启动子甲基化及β连环蛋白(β-catenin)的表达在白血病中的意义.方法 采用甲基化特异性PCR检测山东大学附属千佛山医院2009年1月至2010年6月55例AL患者及对照组骨髓单个核细胞WIF-1基因启动子甲基化情况,流式细胞术检测AL患者及对照组骨髓单个核细胞β-catenin表达.结果 32.7％(18/55)的AL患者WIF-1基因启动子区域有异常甲基化,对照组末检测到WIF-1基因甲基化,两组差异有统计学意义(P＜0.05).甲基化组首次诱导治疗完全缓解率(38.9％,7/18)低于非甲基化组(81.1％,30/37),差异有统计学意义(P＜0.05).甲基化组与非甲基化组β-catenin的表达(17.5％±3.3％、15.4％±3.6％)均高于对照组(10.5％±1.5％,均P＜0.05);甲基化组β-catenin的表达高于非甲基化组(P＜0.05).结论 WIF-1基因启动子甲基化及β-catenin过表达可能参与了AL患者Wnt/β-catenin途径的异常激活.     

乳腺癌患者血浆RASSF1A基因启动子甲基化的意义

目的:探讨乳腺癌患者血浆、肿瘤组织中RASSF1A基因启动子甲基化与临床病理等因素的相关性.方法:采用甲基化特异性PCR方法,分别检测68例乳腺癌患者血浆、肿瘤组织及癌旁腺体组织,以及12例良性乳腺疾病患者的血浆和乳腺组织中RASSF1A基因启动子甲基化状况.结果:乳腺癌组织RASSF1A基因启动子甲基化频率47.1%(32/68),患者血浆中同样DNA变异检出率33.8%(23/68).血浆中DNA甲基化状况与乳腺癌组织的甲基化状况显著相关(r=0.906,P=0.001).检测血浆中RASSF1A基因启动子甲基化的敏感性71.8%,特异性97.2%,肿瘤组织及血浆中游离DNA甲基化异常与临床分期,病理类型,肿瘤大小,ER,PR和cerbB-2状况无相关性(P＞0.05).乳腺癌组织中未检测到RASSF1A基因启动子甲基化的血浆中、乳腺良性疾病患者血浆中均未检测到该基因甲基化变异.结论:乳腺癌患者血浆中RASSF1A基因启动子甲基化与肿瘤组织中的变异频率相关.     

乳腺癌患者外周血浆中RAR-β_2基因启动子异常甲基化分析

目的:探讨RAR-β2基因(retinoic ac id receptorβ2 gene)启动子在散发性乳腺癌患者血浆中异常甲基化状况。方法:用甲基化特异PCR(MSP)法和实时荧光定量PCR法对62例散发性乳腺癌患者血浆和15例良性乳腺增生患者血浆中的RAR-β2基因启动子异常甲基化状况进行检测。结果:散发性乳腺癌患者血清中37%(28/62)发生了RAR-β2基因启动子甲基化,良性乳腺增生患者中均未检测到RAR-β2基因的甲基化。RAR-β2基因启动子甲基化状态与淋巴结转移和临床分期有相关性(P<0.05)。结论:乳腺癌患者外周血浆中RAR-β2基因启动子异常甲基化是散发性乳腺癌发生的早期事件,有望成为乳腺癌早期诊断的指标。     

乳腺癌中RUNX3基因启动子区甲基化及基因表达研究

目的 通过检测乳腺癌中RUNX3基因启动子甲基化状态及其对mRNA表达的影响,探讨RUNX3在乳腺癌发生、发展中的意义.方法 运用甲基化特异性PCR(MSP)检测40例乳腺浸润性导管癌和20例乳腺良性病变标本中RUNX3基因启动子甲基化状态,同时采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测该基因的表达情况.结果 乳腺癌组织中RUNX3基因的甲基化率为47.5%,明显高于乳腺良性病变组织的甲基化率,其差异具有显著性(P<0.05);同时乳腺癌组织中RUNX3基因表达缺失率为40%,明显高于乳腺良性病变,其差异也具有显著性(P<0.05).乳腺癌中RUNX3基因启动子甲基化水平与患者的病理组织学分级有相关性,差异有统计学意义(P<0.05),与患者的年龄、淋巴结转移无相关性.RUNX3基因表达与患者的临床病理特征均无相关性.结论 RUNX3基因启动子的高甲基化可能是乳腺癌中一类重要的分子改变,也是导致RUNX3基因表达下降的原因之一,并参与了肿瘤的演进.     

诱导痰RASSF1A,p16和DAPK基因启动子区甲基化在肺癌诊断中的价值

目的：探讨诱导痰中RASSF1A,p16和DAPK基因启动子区异常甲基化及其联合检测在肺癌诊断中的价值。方法：采用甲基化特异性PCR（MSP）技术,检测82例肺癌患者诱导痰和对应肿瘤组织以及25例肺部良性病变组织中RASSF1A,p16和DAPK3种基因启动子区甲基化改变,并分析三者与临床病理资料的关系。结果：肺癌病理组织中RASSF1A,p16和DAPK基因启动子区甲基化检出率分别为63.4%,59.8%和58.5%,对应的诱导痰三者甲基化检出率分别为54.9%,48.8%和51.2%;肺部良性病变组织中甲基化检出率均为零,两组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）。RASSF1A基因甲基化检出率在中高分化和无淋巴结转移的肺癌中明显低于低分化和未分化及有淋巴结转移者（P〈0.05）,与年龄、性别、吸烟指数、临床分期及病理类型无关,而p16和DAPK基因甲基化检出率与上述因素均无明显相关性（P〉0.05）;联合检测3种基因甲基化的检出率为73.2%。结论：联合检测诱导痰中RASSF1A,p16和DAPK基因启动子区高甲基化有可能作为诊断肺癌及评估预后的简便有效的指标,并能提高检出率。     

肝癌细胞中WIF-1的甲基化状态分析

目的探讨WIF-1基因在肝癌细胞中的甲基化状态及其与蛋白表达的关系,并初步研究了WIF-1与肝癌发生发展的关系。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)和测序方法分析了9种肝癌细胞系中WIF-1启动子区的甲基化状态,用RT-PCR检测了其mRNA的表达。用去甲基化药物5-氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理肝癌细胞株并分析其mRNA和蛋白的表达的变化。结果6种肝癌细胞中检测到异常的甲基化,甲基化率为66.7%。在用5-Aza-CdR处理细胞后,WIF-1表达缺失的肝癌细胞系不同程度地恢复了表达。MTT法分析发现WIF-1对SMMC-7721(7721)细胞生长有较为显著的抑制效果。结论推断WIF-1启动子区频繁甲基化的现象可能是它在肝癌中表达沉默的主要机制,并在肝癌的发生发展起作用。