DEK基因在胃癌中的表达及调控Notch1信号通路对胃癌细胞增殖及侵袭的影响

目的探讨DEK基因的表达对胃癌细胞增殖及侵袭的影响及机制。方法 RT-PCR检测胃癌细胞中DEK mRNA的表达;DEK-siRNA、NC-siRNA转染人胃癌BGC-823细胞,不作任何处理的细胞作为对照组,转染48 h后,Western blotting检测DEK、MMP-2、MMP-9、Notch1、Hes1蛋白表达;CCK8实验检测细胞增殖情况;Transwell小室检测细胞的侵袭能力。结果 DEK基因在人胃癌MNK-28、SGC-7901、BGC-823细胞中的mRNA表达均显著高于GES-1细胞(P0.01),DEK基因在胃癌BGC-823细胞的mRNA表达最高,选择作为后续研究对象;DEK-siRNA转染BGC-823细胞后DEK的蛋白表达显著降低(P0.01);与对照组及NC-siRNA组比较,DEK-siRNA组细胞存活率、细胞侵袭数及MMP-2、MMP-9、Notch1、Hes1蛋白表达均显著降低(P0.01)。结论 RNA干扰(RNAi)抑制胃癌细胞中DEK基因的表达后可抑制细胞的增殖及侵袭能力,其机制与Notch1信号通路的调控有关。     

节律基因Bmal1对胃癌细胞BGC-823增殖及凋亡的影响

目的 探讨节律基因Bmal1对胃癌细胞BGC-823增殖及凋亡的影响.方法 构建针对Bmal1序列的shRNA,用脂质体介导转染入胃癌细胞BGC-823,G418筛选稳定细胞株(转染组),同时设对照组(空白组).用克隆形成率检测细胞生长,用流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,RT-PCR及Western blot法检测相关基因及蛋白表达.结果 转染组克隆形成率低于对照组(P＜0.05).与对照组比较,转染组Bmal1总凋亡率升高(P＜0.05),其细胞周期再分布出现G1期缩短(P＜0.05),G2期延长(P＜0.05),同时发现Bcl-2 mRNA表达下调(P＜0.05),c-Myc mRNA表达上调(P＜0.05).结论 Bmal1可以抑制胃癌细胞BGC-823增殖,促进细胞凋亡,有可能成为诱导胃癌细胞凋亡的新靶点.     

AKT靶向miRNA表达载体的构建及其对胃癌细胞增殖侵袭的影响

目的构建靶向AKT基因的miRNA真核表达载体,观察其转染胃癌BGC-823细胞后对胃癌细胞增殖及侵袭的影响。方法设计并合成两条针对AKT基因的特异性miRNA干扰序列,与载体pcDNATM6．2-GW／EmGFP—miR连接,转化大肠杆菌,纯化并鉴定后转染BGC-823细胞,实时定量PCR及Westernblot技术鉴定重组体对AKT基因表达的干扰效果。使用M1Tr法检测细胞增殖能力,Transwell法检测细胞的侵袭能力。结果针对AKT基因的miRNA干扰质粒构建成功,BGC-825细胞转染该质粒后AKTmRNA及AKT蛋白表达明显受抑制,细胞增殖和侵袭能力均显著下降（P均〈0．05）。结论AKT靶向miRNA真核表达载体构建成功;其可有效抑制胃癌细胞的增殖和侵袭能力。     

血管内皮生长因子165基因对人胃癌细胞体外侵袭转移的影响

目的:探讨血管内皮生长因子165基因(vascular endothelial growth factor 165,VEGF165)对胃癌侵袭转移的影响及可能的机制.方法:通过体外培养人胃癌细胞BGC-823,分别转染Ad-GFP及Ad-VEGF165*应用Millicell小室分析VEGF165转染前后胃癌细胞迁移能力的变化:逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)研究VEGF懈转染前后BGC-823细胞MMP-2、u-PAmRNA表达变化.结果:迁移实验结果显示Ad-VEGF15组胃癌细胞迁移能力高于Ad-GFP组及对照组(217.53±15.77vs174.07±13.83,167.5±11.5,P＜0.05);RT-PCR结果显示VEGF懈转染后促进了BGC-823细胞MMP-2、u-PA的mRNA表达,Ad-VEGF165组MMP-2、u-PA的mRNA水平明显高于对照组及d-GFP组((MMP-2mRNA:0.6646±0.0486 vs 0.3803±0.0254.0.4096±0.0668;u-PA mRNA:0.8216±0.0798vs0.4043±0.0620,0.406±0.1158,均P＜0.05).结论:经VEGF165转染后,胃癌细胞迁移能力增强,MMP-2、u-PA的mRNA表达增加,MMP-2、u-PA表达的增加可能为VEGF促进胃癌侵袭转移机制.     

siRNA沉默PKM2对胃癌BGC-823细胞增殖和迁移的抑制作用

在恶性肿瘤组织中,丙酮酸激酶（PK）的组织特异性同工酶（L型、R型、M1型PK）表达减少,而PKM2表达升高,在肿瘤细胞生长、增殖、迁移等方面发挥重要作用。目的：探讨siRNA沉默PKM2对胃癌BGC-823细胞增殖和迁移的抑制作用。方法：以蛋白质印迹法筛选出高表达PKM2的胃癌细胞株BGC-823。构建PKM2siRNA干扰质粒,稳定转染胃癌BGC-823细胞,同时以转染空质粒pU6作为阴性对照组。以荧光定量PCR和蛋白质印迹法在mRNA和蛋白质水平上验证干扰效果,以CCK8法和细胞迁移实验检测细胞增殖和迁移能力。结果：与阴性对照组相比,PKM2siRNA转染组PKM2mRNA和蛋白表达明显下降,细胞增殖能力和迁移能力明显下降（P〈0．05）。结论：PKM2在人胃癌的发展中发挥重要作用,并对胃癌BGC-823细胞增殖和迁移有一定的促进作用。     

miR-302a靶向E2F1抑制胃癌BGC-823细胞EMT并降低细胞侵袭和迁移能力的实验研究

目的探讨miR-302a对胃癌BGC-823细胞上皮间质转化(EMT)、侵袭和迁移能力的影响和机制。方法在胃癌BGC-823细胞中转染miR-302a mimics,CCK-8测定细胞增殖变化,Transwell小室测定迁移和侵袭,Western blotting检测E-cadherin、Vimentin、N-cadherin蛋白表达。靶基因预测软件预测E2F1可能为miR-302a的靶基因,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。在胃癌BGC-823细胞中共转染pcDNA 3.1-E2F1和miR-302a mimics,按照上述方法测定细胞增殖、侵袭、迁移和E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、E2F1蛋白表达水平。结果miR-302a mimics降低胃癌BGC-823细胞增殖、侵袭和迁移能力,下调细胞中Vimentin、N-cadherin蛋白表达水平,促进细胞中E-cadherin蛋白表达。miR-302a靶向负调控E2F1表达。pcDNA 3.1-E2F1能够提高miR-302a mimics条件下胃癌BGC-823细胞中E2F1蛋白表达水平,促进细胞增殖、侵袭和迁移,促进细胞中Vimentin、N-cadherin蛋白表达,减少细胞中E-cadherin蛋白表达。结论miR-302a靶向E2F1抑制胃癌BGC-823细胞EMT并降低细胞侵袭和迁移能力。     

β-arrestin1在胃癌细胞BGC-823中的生物学功能

目的 探讨β-arrestin1对胃癌细胞BGC-823增殖、迁移、侵袭及凋亡能力的影响.方法 用实时定量PCR技术及Western印迹法检测人胃黏膜上皮细胞GES和人胃癌细胞株BGC-823、MKN-28、SGC-7901中β-arrestin1的表达水平.应用RNA干扰技术构建稳定干扰β-arrestin1和阴性对照组(pU6空载体)的BGC-823细胞株.进一步应用细胞计数法、划痕实验、Transwell小室实验及流式细胞术分析干扰β-arrestin1和阴性对照组的BGC-823细胞株的增殖、迁移、侵袭能力及凋亡水平的变化.统计学处理采用t检验.结果 β-arrestin1在GES表达量为0.001±0.001,MKN-28表达量为0.002±0.000,SGC-7901表达量为0.003±0.002,BGC-823中表达量为0.005±0.000.干扰β-arrestin1和阴性对照的BGC-823细胞增殖抑制率分别为-30.2％和100.0％.迁移能力受到抑制,穿过基质膜细胞数分别为126.25±3.24和213.50±6.27(t=0.000,P＜0.01),凋亡率为(41.350±1.053)％和(11.497±0.589)％(t=0.015,P＜0.05).结论 β-arrestin1在胃癌细胞中高水平表达,并且随着胃癌细胞恶性度增高而表达量增加,在BGC-823细胞中干扰β-arrestin1后能抑制细胞的生长、迁移、侵袭,并提高凋亡水平.     

miR-215对胃癌细胞侵袭转移能力的影响及机制

目的探讨miR-215对胃癌细胞侵袭转移能力的影响及作用机制。方法通过RT-PCR检测miR-215在高转移胃癌细胞株NCIN87,BGC-823,RF-48及低转移细胞株HGC-27及MKN-28中的表达;Transwell迁移及侵袭实验检测miR-215抑制剂对胃癌细胞迁移及侵袭能力的影响;Western印迹检测miR-215抑制剂对胃癌细胞活化白细胞黏附分子(ALCAM),基质金属蛋白酶(MMP)-2,MMP-9,上皮细胞-间充质转化(EMT)相关蛋白E-钙黏附素(E-cadherin),波形蛋白(Vimentin)表达量的影响。结果 RT-PCR结果证实miR-215在高转移胃癌细胞株中的表达高于低转移胃癌细胞中的表达,且miR-215在BGC-823细胞中的表达最高,因此选用BGC-823作为后续实验细胞株。miR-215抑制剂转染BGC-823细胞48 h后,发现下调miR-215表达能显著抑制BGC-823细胞迁移及侵袭能力,并能下调ALCAM,MMP-2,MMP-9及Vimentin表达,上调E-cadherin表达。结论miR-215低表达能显著抑制胃癌细胞BGC-823侵袭及转移能力,与下调MMPs及抑制EMT生成有关。     

慢病毒介导的SUMO1P3基因表达对胃癌细胞侵袭、迁移、黏附能力及EMT的影响

目的探讨小泛素样修饰物基因(SUMO)1P3基因siRNA慢病毒对胃癌细胞侵袭、迁移、黏附能力及上皮细胞间质转化(EMT)的影响。方法将人胃癌BGC-823细胞分为空白组、NC组(转染阴性对照慢病毒载体)和si-SUMO1P3组(转染SUMO1P3基因的siRNA慢病毒载体)。Western印迹检测SUMO1P3下调效果及EMT相关E-钙黏蛋白(cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和α-SMA蛋白表达。噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力及黏附能力;Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力。结果 si-SUMO1P3的组SUMO1P3蛋白表达明显低于空白组(P<0.05)。si-SUMO1P3组BGC-823细胞24～72 h细胞活力均明显低于空白组(P<0.05);si-SUMO1P3组在接种的30 min和60 min细胞黏附能力均明显低于空白组(P<0.05);si-SUMO1P3组细胞侵袭能力、迁移能力均显著低于空白组,E-cadherin蛋白表达显著高于空白组,Vimentin和α-SMA蛋白显著表达低于空白组(P<0.05)。结论抑制SUMO1P3基因表达可能通过阻碍EMT降低胃癌细胞侵袭、迁移和黏附能力。     

上调FBP1表达对胃癌细胞生长的抑制作用

目的探讨上调果糖-1,6-二磷酸酶1(fructose-1,6-bisphosphatase 1,FBP1)表达对胃癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法以实时定量PCR和Western blotting检测胃癌BGC-823、SGC-7901细胞中FBP1 mRNA和蛋白的表达;将培养的BGC-823细胞随机分为对照组(未转染)、阴性组(转染pc DNA3.1质粒)和实验组(转染pc DNA3.1-Flag-FBP1质粒),以实时定量PCR检测FBP1 mRNA表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blotting检测FBP1、Cyclin D1、c-Myc和Cleaved caspase-3蛋白表达。结果与正常胃黏膜上皮GES-1细胞相比,胃癌BGC-823、SGC-7901细胞中FBP1蛋白及mRNA的相对表达水平均显著降低,且BGC-823细胞较SGC-7901细胞下降更为明显;转染后,与对照组相比,实验组细胞中FBP1蛋白及mRNA、细胞的增殖能力和Cyclin D1、c-Myc蛋白表达水平均显著降低,细胞凋亡能力和Cleaved caspase-3蛋白表达水平均显著升高,差异有统计学意义(P0.05);阴性组与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论 FBP1在胃癌细胞中低表达,上调其表达能够抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与上调Cleaved caspase-3蛋白和下调Cyclin D1、c-Myc蛋白表达有关。     

HHLA2过表达胃癌细胞株构建及细胞功能的初步研究

目的 使用慢病毒载体构建稳定过表达人内源性逆转录病毒H-长末端重复关联蛋白2(HHLA2)的胃癌细胞系,探讨细胞发生的生物学功能改变。方法 由目的基因以及Lipo2000转染试剂构建重组质粒,将该质粒转染293T细胞,浓缩其细胞上清液并测定浓度,再将浓缩液转染胃癌细胞株BGC-823和MGC80-3,利用流式细胞术分选并验证GFP+稳定过表达的细胞株。开展细胞功能实验(含迁移试验和增殖试验等)以分析过表达HHLA2胃癌细胞株的生物学功能。结果 酶切及测序结果示,重组慢病毒载体成功构建。流式分选及验证示,HHLA2过表达胃癌稳转株。过表达HHLA2可使胃癌细胞株MGC80-3和BGC-823加快增殖,其24 h、48 h、72 h吸光度值均较对照细胞株升高(P<0.05)。过表达HHLA2可增强胃癌细胞株BGC-823的迁移能力,其24 h、48 h迁移率均较对照细胞株升高(P<0.05);MGC80-3细胞迁移距离未明显变长(P>0.05)。结论 HHLA2过表达能够提高胃癌细胞的增殖和迁移能力。     

hnRNPA1在人胃癌细胞株BGC-823中的生物学功能

核不均一核糖核蛋白A1（hnRNPAl）是体内重要的RNA结合蛋白,通过调节pre-mRNA和mRNA参与转录和转录后调控过程,与肿瘤发生、发展密切相关。目前对hnRNPAl与胃癌的关系尚不十分清楚。目的：探讨hnRNPAl在人胃癌细胞中的生物学功能,明确其与胃癌的关系。方法：以蛋白质印迹法检测正常人胃黏膜上皮细胞株GES一1和人胃癌细胞株MKN-28、SGC-7901、BGC-823中的hnRNPAl表达。构建靶向hnRNPAl基因的siRNA重组质粒并稳定转染BGC一823细胞,以稳转空质粒pU6的细胞株作为对照,蛋白质印迹法验证干扰效果。分别以CCK一8实验、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验和流式细胞术分析各组BGC-823细胞的增殖、迁移、侵袭能力和细胞凋亡情况。结果：hnRNPA1在3株人胃癌细胞株中均呈高表达,BGC-823细胞表达水平最高。与pU6稳转组相比,siRNAhnRNPAl稳转组BGC．823细胞增殖抑制率为36．3％,细胞迁移[（5．44±0．25）斗In／h对（9．37±0．49）μm／h,P〈0．01]和侵袭（穿膜细胞数146．30±12．56对312．51±9．62,P〈0．01）受抑,细胞凋亡率降低（3．6％±0．3％对12．7％±0．2％,P〈0．01）。结论：hnRNPAl在人胃癌细胞中呈高表达,其可能通过促进肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭,在胃癌侵袭和转移过程中发挥作用。     

MiR-9对人胃癌细胞增殖和迁移的影响

背景:MicroRNA-9(miR-9)参与调控生长、发育、细胞自我更新和多向分化等多种生理过程,而且其表达异常与多种恶性肿瘤密切相关。目的:探讨miR-9对人胃癌细胞生物学行为的影响。方法:以real-time PCR检测人正常胃黏膜上皮细胞株GES-1和人胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901中的miR-9表达。采用瞬时转染法将miR-9类似物、miR-9抑制物和空载体分别转染BGC-823、SGC-7901细胞,并以real-time PCR验证转染效率。CCK-8实验检测细胞增殖能力,Transwell细胞迁移实验和划痕实验检测细胞迁移能力。结果:与正常胃黏膜上皮细胞相比,胃癌细胞miR-9表达显著升高(P0.05)。与空载体对照组相比,miR-9类似物组BGC-823、SGC-7901细胞miR-9表达上调,细胞增殖和迁移能力明显增强(P0.05),miR-9抑制物则可显著抑制胃癌细胞的增殖和迁移能力(P0.05)。结论:上调miR-9表达可促进胃癌细胞增殖和迁移,提示miR-9过表达可能与胃癌进展有关。     

miR-132-3p靶向调控Gab2抑制胃癌细胞增殖、迁移及侵袭分子机制的研究

背景 miR-132-3p在肿瘤中呈低表达,但miR-132-3p在胃癌(gastric cancer,GC)发生过程中的调控机制尚未阐明.Starbase靶基因预测显示Gab2可能是miR-132-3p的靶基因.本研究假设miR-132-3p可能通过调控Gab2表达从而影响GC细胞增殖、迁移及侵袭.目的探讨miR-132-3p对Gab2表达的调控作用及其对GC细胞增殖、迁移及侵袭的影响.方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative realtime polymerase chain reaction,qRT-PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测正常胃黏膜上皮细胞系GES1与人GC细胞系SGC-7901、MKN45、BGC-823中miR-132-3p、Gab2的表达水平;以BGC-823细胞为研究对象,利用脂质体转染法分别将miR-132-3p模拟物(miR-132-3p组)、阴性对照(miR-NC组)、miR-132-3p与pcDNA(miR-132-3p+pcDNA组)、miR-132-3p与pc DNA-Gab2(miR-132-3p+pcDNA-Gab2组)转染至BGC-823细胞,通过qRT-PCR、Western blot验证转染效果.甲基噻唑基四唑检测各组细胞存活率; Transwell小室实验检测各组细胞迁移及侵袭;Starbase预测Gab2为miR-132-3p的靶基因,分别将野生型Gab2基因3’UTR荧光素酶报告基因载体与miR-132-3p靶序列突变型载体及相应的miRNA转染至BGC-823细胞,双荧光素酶报告实验检测荧光素酶活性; Western blot检测细胞周期蛋白1(Cyclin D1)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、P21、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)表达量.结果与GES1细胞相比, SGC-7901、MKN45、BGC-823中miR-132-3p的表达水平显著降低(P0.05), Gab2的表达水平显著升高(P 0.05);与miR-NC组相比,miR-132-3p组细胞存活率显著降低(P 0.05),迁移细胞数与侵袭细胞数显著减少(P0.05), Cyclin D1、N-cadherin蛋白表达水平显著降低(P 0.05),P21、E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P 0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-132-3p能够靶向调控Gab2基因;与miR-132-3p+pcDNA组相比, miR-132-3p+pcDNA-Gab2组细胞存活率显著升高(P 0.05),迁移细胞数与侵袭细胞数显著增多(P0.05), Cyclin D1、N-cadherin蛋白表达水平显著升高(P0.05), P21、E-cadherin蛋白表达水平显著降低(P0.05).结论 miR-132-3p能够通过靶向调控Gab2而抑制GC细胞增殖、迁移及侵袭.     

miR-135b-5p靶向KLF4基因调控胃癌SGC-7901细胞生物学行为的研究

目的 研究miR-135b-5p通过靶向KLF4基因对人胃癌SGC-7901细胞生物学行为的影响。方法 通过RT-PCR检测人正常胃黏膜上皮细胞株GES-1及胃癌细胞株SGC-7901、MKN-45、BGC-823、AGS中miR-135b-5p表达水平,将miR-135b-5p inhibitor转染至胃癌SGC-7901细胞中,RT-PCR和Western blotting分别检测转染后细胞中miR-135b-5p和KLF4蛋白表达水平,MTT法、流式细胞术、Transwell实验分别检测转染对细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移能力的影响。生物信息学软件预测及双荧光素酶报告基因实验验证KLF4是否为miR-135b-5p的靶基因。结果 胃癌细胞SGC-7901、MKN-45、BGC-823、AGS中miR-135b-5p表达水平显著高于人正常胃黏膜上皮细胞GES-1,且胃癌SGC-7901细胞中miR-135b-5p表达水平最高。在SGC-7901细胞中转染miR-135b-5p inhibitor 48 h后,miR-135b-5p的表达水平显著降低,KLF4 mRNA和蛋白表达水平明显升高。下调miR-135b-5p后SGC-7901细胞增殖能力下降,凋亡率升高,侵袭和迁移能力减弱。双荧光素酶报告基因实验结果显示,KLF4是miR-135b-5p靶基因。结论 miR-135b-5p能够通过靶向KLF4抑制胃癌SGC-7901细胞增殖、侵袭和迁移,诱导细胞凋亡。     

siRNA沉默PKM2抑制人胃腺癌SGC-7901细胞增殖能力和糖酵解水平

背景:M2型丙酮酸激酶(PKM2)在肿瘤组织中呈特异性高表达,与肿瘤的生长和糖酵解水平密切相关,是潜在的治疗靶点。目的:探讨siRNA沉默PKM2对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭以及糖酵解水平的影响。方法:选择未转染SGC-7901细胞、转染空质粒pU6 SGC-7901细胞以及转染PKM2 siRNA的SGC-7901细胞,采用蛋白质印迹法和Real-time PCR检测PKM2 mRNA和蛋白表达;免疫荧光法检测PKM2在细胞内的表达和分布;CCK-8法、流式细胞分析、细胞迁移和细胞侵袭实验检测细胞增殖、凋亡、迁移以及侵袭能力;蛋白质印迹法、分光光度法分别检测葡萄糖转运蛋白-1(Glut-1)、乳酸脱氢酶A(LDHA)蛋白表达以及葡萄糖、乳酸浓度、乳酸脱氢酶(LDH)活性。结果:与其余两组相比,PKM2 siRNA转染组细胞PKM2 mRNA和蛋白表达明显下降(P0.05),胞内表达明显减弱,细胞增殖、迁移和侵袭能力明显下降,细胞凋亡明显增加(P0.05),Glut-1、LDHA蛋白表达明显下降(P0.05),葡萄糖摄取率、乳酸产量、LDH活性明显减低(P0.05)。结论:RNA干扰能抑制胃癌SGC-7901细胞PKM2mRNA和蛋白表达,进而抑制胃癌细胞的增殖能力和糖酵解水平。     

CXCL12/CXCR4轴与胃癌细胞侵袭转移关系的研究

目的研究趋化因子CXCL12对胃癌BGC-823细胞体外侵袭、转移能力的影响,进一步探讨CXCL12/CXCR4轴在胃癌侵袭、转移过程中的机制。方法采用Transwell法、real-time PCR法及免疫荧光法分别检测经不同浓度CXCL12处理后的胃癌BGC-823细胞侵袭能力的变化、MMP-2 mRNA表达量的变化、MMP-2蛋白表达的变化。结果与空白对照组比较,CXCL12不同浓度组穿膜细胞数和MMP-2 mRNA表达量均显著增多(P0.001)。上述指标在CXCL12不同浓度组间比较,除200 ng/ml组与100 ng/ml组间相比,差异无统计学意义(P0.05)外,其余各组间比较,差异均有统计学意义(P0.001);免疫荧光结果显示,随着CXCL12浓度的升高,胃癌BGC-823细胞MMP-2蛋白表达增强。结论 CXCL12能增强胃癌BGC-823细胞的体外侵袭能力,并具有一定的量效关系,其促进胃癌侵袭、转移的机制可能与增强MMP-2的表达有相关性。     

白藜芦醇对BGC-823胃癌细胞株增殖抑制作用的体外研究

目的研究白藜芦醇对胃癌BGC-823细胞增殖抑制的影响及其可能的机制。方法体外培养胃癌BGC-823细胞,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测白藜芦醇对BGC-823细胞的增殖抑制情况,采用RT-PCR方法检测BGC-823细胞中bax和bcl-2 mRNA的表达情况及蛋白免疫印迹(Western blotting)方法检测BGC-823细胞中bax和bcl-2蛋白表达情况。结果白藜芦醇对胃癌BGC-823细胞的增殖有明显的抑制作用,并且在一定浓度范围内,随着浓度的增加,抑制作用逐渐加强;白藜芦醇能明显上调BGC-823细胞中bax蛋白的表达,下调细胞中bcl-2蛋白的表达,并且使BGC-823细胞中bax mRNA的表达增强,bcl-2 mRNA的表达降低。结论白藜芦醇能够抑制胃癌细胞BGC-823的增殖,其抑制机制可能与白藜芦醇增强胃癌BGC-823细胞中bax的表达及降低bcl-2的表达有关。     

胃癌细胞多药耐药相关基因的表达与其侵袭转移能力的相关性研究

目的探讨胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901的多药耐药相关基因的表达与其侵袭转移能力的关系。方法采用实时荧光定量PCR技术检测胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901的多药耐药相关基因(包括ABCB1、MMP2、CDH1、CD44)的mRNA表达水平。采用细胞划痕实验、Transwell迁徙实验评价两株胃癌细胞的侵袭转移能力,进而探讨胃癌细胞多药耐药相关基因的表达与侵袭转移能力的关系。结果荧光定量PCR实验发现胃癌细胞株BGC-823的ABCB1、CDH1、CD44基因表达较SGC-7901高,而MMP2基因的表达在SGC-7901中较高。细胞划痕实验及Transwell迁徙实验显示胃癌细胞株BGC-823的迁徙能力比SGC-7901强。结论胃癌细胞的多药耐药与侵袭转移有一定的关系,CD44的高表达在胃癌细胞的侵袭转移中可能起主要作用。     

微小RNA-424-5P靶向调控HMGA1基因对胃癌细胞生长、侵袭的影响

目的 研究微小RNA(miR)-424-5P对高迁移率族蛋白(HMG)A1的靶向调控及对胃癌细胞增殖、迁移的作用。方法 将人胃癌BGC-823细胞复苏后，应用10%胎牛血清，在5%二氧化碳和37℃培养箱中进行培养，应用miR-424-5P抑制物(inhibitor)转染的BGC-823细胞列为anti-miR-424-5P组。应用阴性对照进行转染的BGC-823细胞列为anti-NC组，不进行转染的BGC-823细胞列为对照组，细胞转染后各组继续在培养箱中培养。应用qRT-聚合酶链反应(PCR)检测各组miR-424-5P的相对表达水平；应用四甲基噻唑蓝(MTT)研究miR-424-5P对细胞增殖的影响；应用划痕实验检测miR-424-5P对细胞迁移的影响；应用transwell实验研究miR-424-5P对细胞侵袭的影响。应用免疫印迹实验对各组HMGA1蛋白相对表达水平进行检测。结果 转染48 h后qRT-PCR结果表明，anti-miR-424-5P组miR-424-5P相对表达量明显低于对照组和anti-NC组(P<0.05)。对BGC-823细胞进行转染48 h后，miR...