PI-103对胃癌细胞BGC-823增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨PI-103对胃癌细胞BGC-823增殖、迁移及侵袭的影响及机制。方法常规培养胃癌细胞BGC-823,实验组分别加入0.1、0.5、1、1.5、2.5μM的PI-103进行干预,对照组加入等体积培养液。MTT法检测BGC-823细胞增殖情况,划痕法迁移实验观察划痕细胞愈合时间,Transwell小室侵袭试验观察其侵袭能力。结果实验组随PI-103作用剂量增加增殖抑制率明显升高,呈剂量依赖性;划痕法迁移试验显示实验组划痕愈合时间慢于对照组,侵袭细胞数量明显低于对照组,P〈0.05。结论PI-103能抑制BGC-823细胞增殖,显著降低其迁移与侵袭能力,其机制可能为阻断PI3K/Akt/mTOR信号通路。     

Akt抑制剂SH-5对胃癌细胞系BGC-823增殖的影响

目的探讨Akt在胃癌细胞系BGC-823中的表达及其与胃癌细胞增殖的关系。方法应用实时PCR检测BGC-823中Akt各亚型的mRNA水平;应用Akt特异性的抑制剂SH-5培养BGC-823,检测其对胃癌细胞增殖的影响;应用ELISA方法检测细胞上清中VEGF的表达。结果SH-5显著抑制了胃癌细胞的增殖,抑制VEGF的表达(P<0.05),而且呈一定程度的剂量依赖性。结论 Akt与胃癌细胞的增殖密切相关,其机制可能与其对VEGF的调控有关。     

白藜芦醇对BGC-823胃癌细胞株增殖抑制作用的体外研究

目的研究白藜芦醇对胃癌BGC-823细胞增殖抑制的影响及其可能的机制。方法体外培养胃癌BGC-823细胞,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测白藜芦醇对BGC-823细胞的增殖抑制情况,采用RT-PCR方法检测BGC-823细胞中bax和bcl-2 mRNA的表达情况及蛋白免疫印迹(Western blotting)方法检测BGC-823细胞中bax和bcl-2蛋白表达情况。结果白藜芦醇对胃癌BGC-823细胞的增殖有明显的抑制作用,并且在一定浓度范围内,随着浓度的增加,抑制作用逐渐加强;白藜芦醇能明显上调BGC-823细胞中bax蛋白的表达,下调细胞中bcl-2蛋白的表达,并且使BGC-823细胞中bax mRNA的表达增强,bcl-2 mRNA的表达降低。结论白藜芦醇能够抑制胃癌细胞BGC-823的增殖,其抑制机制可能与白藜芦醇增强胃癌BGC-823细胞中bax的表达及降低bcl-2的表达有关。     

三叶青水提取物对NK细胞杀伤胃癌BGC-823细胞的影响

目的探讨三叶青水提取物对人NK细胞杀伤胃癌BGC-823细胞的影响及机制。方法采用干细胞生长培养基(SCGM)体外扩增人外周血NK细胞,不同浓度三叶青水提取物作用于NK细胞后,采用CCK8法检测三叶青水提取物对NK细胞增殖率的影响,流式细胞术(FCM)检测NK细胞穿孔素(PFP)、颗粒酶B(Gra B)及CD107a的表达,乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测NK细胞对胃癌BGC-823细胞的杀伤活性。结果三叶青水提取物作用人NK细胞48 h后,三叶青水提取物0.0003~78.125μg/ml浓度组的NK细胞增殖明显(P0.05);三叶青水提取物0.305~4.883μg/ml浓度组人NK细胞PFP、Gra B及CD107a表达高于对照组(P0.05);三叶青水提取物0.305~19.531μg/ml浓度组人NK细胞对胃癌BGC-823细胞杀伤活性较对照组增强,差异有统计学意义(P0.05)。结论三叶青水提取物能促进NK细胞的增殖,能增强NK细胞对胃癌BGC-823细胞的杀伤活性,这可能与三叶青水提取物上调NK细胞PFP、Gra B及CD107a表达有关。     

siRNA沉默PKM2对胃癌BGC-823细胞增殖和迁移的抑制作用

在恶性肿瘤组织中,丙酮酸激酶（PK）的组织特异性同工酶（L型、R型、M1型PK）表达减少,而PKM2表达升高,在肿瘤细胞生长、增殖、迁移等方面发挥重要作用。目的：探讨siRNA沉默PKM2对胃癌BGC-823细胞增殖和迁移的抑制作用。方法：以蛋白质印迹法筛选出高表达PKM2的胃癌细胞株BGC-823。构建PKM2siRNA干扰质粒,稳定转染胃癌BGC-823细胞,同时以转染空质粒pU6作为阴性对照组。以荧光定量PCR和蛋白质印迹法在mRNA和蛋白质水平上验证干扰效果,以CCK8法和细胞迁移实验检测细胞增殖和迁移能力。结果：与阴性对照组相比,PKM2siRNA转染组PKM2mRNA和蛋白表达明显下降,细胞增殖能力和迁移能力明显下降（P〈0．05）。结论：PKM2在人胃癌的发展中发挥重要作用,并对胃癌BGC-823细胞增殖和迁移有一定的促进作用。     

奥沙利铂联合rmhTNF对胃癌BGC-823细胞凋亡的影响

目的观察奥沙利铂（OXA）联合重组改构人肿瘤坏死因子（rmhTNF）对胃癌BGC-823细胞系凋亡的影响。方法将胃癌BGC423细胞随机分为A、B、c、D组,分别加入含500U／ml rmhTNF、12．5μg／ml OXA、500U／ml rmhTNF＋12．5μg／ml OXA及不加药物的培养液培养72h,用流式细胞仪检测各组的细胞周期分布及凋亡率。结果A组细胞处于G0／1期占25．49％±0．83％,S期31．37％±0．68％,G2／M期45．32％±0．97％,细胞凋亡率39．52％±0．95％;B组分别为47．29％±0．98％、30．02％±0．53％、23．44％±0．93％、15．29％±0．91％,C组分别为19．45％±0．94％、10．60％±0．79％、71．47％±1．32％、71．47％±1．32％,D组分别为55．28％±1．24％、19．55％±0．70％、26．71％±0．43％、3．42％±0．64％。A、B、C组与D组比较,P均〈0．05;C组与A、B、D组比较,P均〈0．05。结论OXA联合rmhTNF可协同阻滞胃癌细胞处于G2／M期诱导细胞凋亡。     

ABCE1基因对小细胞肺癌增殖、侵袭、迁移能力的影响

目的构建ABCE1基因的SiRNA表达载体,通过将载体转染入小细胞肺癌细胞株NCI-H446,研究ABCE1基因对小细胞肺癌增殖、侵袭、迁移能力的影响。方法根据ABCE1的DNA序列设计3对SiRNA引物,构建携带红色荧光的重组质粒ABCE1-SiRNA-1、ABCE1-SiRNA-2、ABCE1-SiRNA-N。采用lipofect2000法将载体ABCE1-SiRNA-1、ABCE1-SiRNA-2、ABCE1-SiRNA-N转染入小细胞肺癌细胞中。转染48 h后应用West-ern印迹法检测转染后ABCE1蛋白表达。MTT法、Transwell小室、划痕实验检测NCI-H446细胞在转染前后的增殖能力、侵袭能力、迁移能力的改变。结果经酶切和DNA测序验证,证实ABCE1-SiRNA表达载体构建成功。转染ABCE1-SiRNA后的小细胞肺癌细胞内可见红色荧光。在转染ABCE1-SiRNA-N的NCI-H446细胞中ABCE1基因呈高表达,而转染ABCE1-SiRNA-1、ABCE1-SiRNA-2的细胞呈低表达。MTT实验提示,转染ABCE1-SiRNA-1、ABCE1-SiRNA-2的小细胞肺癌细胞与转染ABCE1-SiRNA-N的同类细胞相比增殖能力受到明显抑制。Transwell实验发现转染ABCE1-SiRNA-1、ABCE1-SiRNA-2后的小细胞肺癌细胞穿膜细胞数较未转染和转染ABCE1-SiRNA-N组细胞明显减少。划痕实验显示转染ABCE1-SiRNA-1、ABCE1-SiRNA-2后的小细胞肺癌细胞迁移速度明显慢于转染ABCE1-SiRNA-N的细胞和对照组细胞。结论成功构建了ABCE1基因SiRNA表达载体ABCE1-SiRNA。ABCE1基因SiRNA表达载体ABCE1-SiRNA-1、ABCE1-SiRNA-2转染人小细胞肺癌细胞后不仅可抑制ABCE1基因的表达,而且还能明显的抑制细胞生长,使其增殖能力下降,降低其侵袭、迁移能力。     

阿司匹林、塞莱昔布对胃癌BGC-823细胞株增殖的影响及机制探讨

目的观察阿司匹林、塞莱昔布对胃癌BGC-823细胞株增殖的影响,并探讨其机制。方法采用MTT法检测阿司匹林和塞莱昔布对胃癌BGC-823细胞株增殖的影响;采用流式细胞术检测二者对BGC-823细胞株凋亡和细胞周期分布的影响;采用间接免疫荧光法检测二者对BGC-823细胞株环氧化酶-2蛋白表达的影响。结果阿司匹林、塞莱昔布以剂量依赖方式抑制BGC-823细胞增殖,促进细胞凋亡和细胞中环氧化酶-2蛋白的表达,并使细胞处于G2、M、S期。结论阿司匹林和塞莱昔布可通过诱导胃癌BGC-823细胞株和影响其细胞周期分布而抑制细胞增殖,其机制可能与抑制环氧化酶-2蛋白表达有关。     

干扰Wnt1基因表达对乳腺癌细胞侵袭、迁移能力的影响

目的探讨干扰Wnt1基因表达对乳腺癌细胞侵袭、迁移的影响及可能的作用机制。方法采用RNA干扰技术下调Wnt1基因表达,实验分为对照组(未做处理的细胞)、shRNA NC组(转染siRNA-NC)、shRNA Wnt1组(转染siRNA-Wnt1)。细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,Transwell法检测细胞的侵袭能力,免疫印迹实验(Western印迹)观察细胞中Wnt1、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期素(cyclin)-D1蛋白的表达量。结果转染siRNA-Wnt1到MCF-7细胞后,Wnt1蛋白的表达量受到显著抑制(P0.05);细胞的侵袭、迁移能力受到显著抑制(P0.05);β-catenin、cyclin-D1蛋白的表达下调(P0.05)。结论干扰Wnt1基因表达可以抑制MCF-7细胞的迁移和侵袭,其机制可能与Wnt1/β-catenin信号通路及其下游靶基因cyclin-D1蛋白表达下调有关。     

舒林酸诱导胃癌BGC-823细胞凋亡的研究

目的 探讨舒林酸诱导人胃癌BGC-823细胞株凋亡的作用及其机制。方法将舒林酸作用于人胃癌BGC-823细胞,并设置不同的作用浓度和作用时间,应用流式细胞术、TUNEL法检测胃癌细胞的凋亡率;免疫组化（S-P）法检测凋亡基因蛋白bcl-2、Sru—vivin的表达以及环氧合酶-2（COX-2）蛋白的表达情况。结果 流式细胞仪检测出凋亡峰;其凋亡检测率及TUNEL法检测的细胞凋亡率均高于对照组（P〈0.05）;免疫组化结果显示凋亡基因蛋白bcl-2、survivin等在胃癌细胞表达下降,COX-2蛋白的表达阳性率也显著低于对照组,均呈时间和剂量依赖性（P〈O.05）。结论舒林酸可诱导胃癌BGC-823细胞凋亡,其机制与抑制凋亡抑制基因bcl-2和survivin的表达及下凋COX-2蛋白的表达有关。     

沉默TSPAN13对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨TSPAN13对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 将PC3细胞、22Rv1细胞、LNCAP细胞、DU145细胞用含10%胎牛血清和1%青链霉素双抗的RPMI1640培养基培养,BPH-1细胞用含10%胎牛血清和1%青链霉素双抗的DMEM培养基培养,培养环境均为37℃、5%CO2、饱和湿度。采用RT-PCR和Western blotting实验检测TSPAN13表达;通过si-RNA沉默TSPAN13检测TSPAN13功能;通过CCK-8实验和集落形成实验检测细胞的增殖和克隆形成能力;通过划痕实验和Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力。结果 TSPAN13蛋白在前列腺癌中高表达(P<0.01);TSPAN13 mRNA和蛋白在PC3和DU145细胞中的表达高于BPH-1细胞(P均<0.01);沉默TSPAN13,PC3和DU145细胞中TSPAN13 mRNA和蛋白表达降低;CCK-8和集落形成实验显示,PC3和DU145细胞增殖能力和克隆生成能力下降(P均<0.01);划痕实验和Transwell实验显示,PC3和DU145细胞的迁移和侵袭...     

siRNA干扰LOX基因对乳腺癌细胞株侵袭性影响的研究

目的检测赖氨酰氧化酶（LOX）基因在低侵袭性乳腺癌细胞MCF-7和高侵袭性乳腺癌细胞MDA-MB-231中的表达差异,并探讨LOX基因对乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法 RT-PCR扩增MCF-7和MDA-MB-231LOX基因,采用SYBR G reen I实时荧光定量RT-RCR技术相对定量两种细胞的LOX基因表达。瞬转MDA-MB-231,并于转染后24、48、72 h行体外运动试验侵袭实验,观察干扰LOX基因表达后对MDA-MB-231侵袭的影响。结果 MDA-MB-231较MCF-7高表达LOX基因（P〈0.05）。MDA-MB-231细胞中LOX mRNA在转染48 h表达下降明显。干扰LOX表达后,体外运动实验结果显示RNA i组中MDA-MB-231细胞穿过微孔滤膜到达下室面的细胞数少于未转染组和阴性对照组（P均〈0.05）。结论 MDA-MB-231细胞高表达LOX基因,干扰其LOX基因表达后细胞的侵袭运动能力明显减弱。     

节律基因Bmal1对胃癌细胞BGC-823增殖及凋亡的影响

目的 探讨节律基因Bmal1对胃癌细胞BGC-823增殖及凋亡的影响.方法 构建针对Bmal1序列的shRNA,用脂质体介导转染入胃癌细胞BGC-823,G418筛选稳定细胞株(转染组),同时设对照组(空白组).用克隆形成率检测细胞生长,用流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,RT-PCR及Western blot法检测相关基因及蛋白表达.结果 转染组克隆形成率低于对照组(P＜0.05).与对照组比较,转染组Bmal1总凋亡率升高(P＜0.05),其细胞周期再分布出现G1期缩短(P＜0.05),G2期延长(P＜0.05),同时发现Bcl-2 mRNA表达下调(P＜0.05),c-Myc mRNA表达上调(P＜0.05).结论 Bmal1可以抑制胃癌细胞BGC-823增殖,促进细胞凋亡,有可能成为诱导胃癌细胞凋亡的新靶点.     

TROP-2基因小干扰RNA转染对前列腺癌细胞黏附、迁移和侵袭的影响

目的观察肿瘤相关钙信号转导蛋白-2(TROP-2)基因小干扰RNA(siRNA)转染对前列腺癌细胞黏附、迁移和侵袭的影响。方法以TROP-2基因siRNA转染人前列腺癌PC-3细胞后,分别用实时荧光定量PCR和Western blot法检测细胞TROP-2 mRNA和蛋白,用MTT法检测PC-3细胞吸光度值(以此判断细胞黏附力),以Tr-answell小室实验观察细胞的迁移、侵袭情况。结果与空载对照组相比,TROP-2 siRNA组TROP-2 mRNA的表达明显下降(P均<0.01)并呈浓度和时间依赖性(P均<0.01);与空白对照组及空载对照组相比,TROP-2 siRNA组TROP-2蛋白的表达明显下降(P均<0.01)并呈浓度和时间依赖性(P均<0.01);与空白对照组相比,TROP-2 siR-NA组细胞黏附力下降(P<0.01)并呈浓度、时间依赖性(P均<0.05);与空白对照组及空载对照组相比,TROP-2siRNA组细胞迁移、侵袭数明显减少(P均<0.01)并呈浓度依赖性(P均<0.01)。结论 TROP-2基因siRNA转染可抑制前列腺癌PC-3细胞黏附、迁移和侵袭。     

hPOT1 RNA干扰对人胃癌细胞株BGC-823端粒长度和hTERT表达的影响

人端粒保护蛋白1（hPOT1）的主要作用为保护端粒和调节端粒长度。目的：探讨hPOT1在人胃癌细胞中对端粒长度的调节作用及其可能机制。方法：以RNA干扰（RNAi）技术抑制人胃癌细胞株BGC-823中hPOT1的表达．以实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测细胞端粒长度，以半定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测人端粒酶逆转录酶（hTERT）mRNA表达。结果：以RNAi技术抑制hPOT1表达后，BGC-823细胞端粒长度明显缩短，反映端粒相对长度的T／S值显著小于亲本BGC-823细胞组和阴性对照组（1．383±0．091对2．758±0．647和3．043±0．548，P〈0．05），亲本细胞组与阴性对照组之间则无明显差异。hPOT1RNAi组细胞hTERTmRNA表达亦明显下调。结论：在人胃癌细胞中，hPOT1能正性调节端粒长度；在hPOT1下调引起端粒缩短的环节中，hTERT表达下降可能起一定作用。     

甘草甜素对胃癌细胞BGC-823增殖作用的影响

目的:探讨甘草甜素抑制胃癌细胞BGC-823增殖及其相关机制.方法:不同浓度甘草甜素培养后,采用MTT法检测细胞增殖率;流式细胞术检测细胞周期;黏附实验和Transwell小室实验检测细胞的黏附百分比和迁移的变化;免疫印迹法检测β-catenin、Bcl-2、CyclinD1和Survivin的蛋白表达水平.结果:甘草甜素呈浓度依赖性抑制BGC-823细胞增殖,并且抑制细胞从G1期向S期的转变(P0.05).给予40umol/L甘草甜素处理BGC-823细胞后,细胞黏附和迁移的能力减弱,且β-catenin、Bcl-2、CyclinD1和Survivin的蛋白表达水平明显降低(P0.05).结论:甘草甜素通过调控细胞周期抑制BGC-823细胞的增殖、黏附、迁移,其作用机制可能与Wnt/β-catenin信号通路有关.     

细胞外泛素对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的通过体外细胞实验,探讨细胞外泛素对肝细胞癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法利用不同浓度的细胞外泛素(200、400、800 ng/ml),分别干预肝癌细胞(HepG2),采用CCK8法检测细胞的增殖情况;利用Transwell法检测不同浓度泛素对肝癌细胞侵袭能力的影响;利用划痕实验和蛋白免疫印迹检测细胞外泛素对肝癌细胞迁移能力的作用。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 CCK8法检测结果显示,细胞外泛素干预后能明显促进肝癌细胞的增殖能力,并具有明显的浓度依赖性,且泛素干预浓度在400 ng/ml时作用最显著,在48、72、96 h相对吸光度值均明显高于对照组(P值均0. 05)。Transwell实验结果显示,与对照组相比,不同浓度的细胞外泛素均可明显促进肝癌细胞的侵袭,且在400 ng/ml泛素干预组最显著[(134. 00±8. 18)个vs (347. 33±18. 90)个,t=17. 94,P 0. 001]。划痕实验和蛋白免疫印迹结果显示,400 ng/ml泛素能显著增加HepG2肝癌细胞的迁移能力。结论细胞外泛素在体外能明显促进HepG2肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移,且具有浓度依赖性。