快速进入高海拔地区对大鼠小肠Cajal间质细胞和缝隙连接蛋白43的表达影响

目的通过观察快速进入高海拔地区大鼠小肠动力紊乱发生过程中,小肠Cajal间质细胞(interstitial cell of Cajal,ICC)与缝隙连接蛋白43(Connexin 43,Cx43)的表达变化,探讨其发病机制。方法 30只SD雄性大鼠以低海拔地区(海拔400 m)为对照组,并以进入高海拔地区(海拔4 300 m)后的时间节点依次分为3 d和14 d组,每组10只。测定各组大鼠小肠电活动数据,应用电子显微镜观察ICC的微观结构变化,应用双重免疫荧光组织化学染色法观察同区域ICC和Cx43的表达变化。结果大鼠快速进入高海拔地区后,其小肠电波幅及波频于3 d组下降到最低点(P0.05)。使用双重免疫荧光组织化学染色法同步标记小肠电起搏区ICC和Cx43,所得免疫荧光强度同样在高海拔地区3 d组表达下降到最低点(P0.05)。结论 ICC细胞缝隙连接受损及其与Cx43的表达异常导致ICC细胞间、ICC与消化道平滑肌(smooth muscle cell,SMC)间物质及电信号传递障碍,可能是快速进入高海拔地区胃动力紊乱形成的重要机制之一。     

快速进入高海拔地区小肠动力紊乱大鼠Cajal间质细胞及P物质表达的变化

目的探讨快速进入高海拔地区发生小肠动力紊乱过程中Cajal间质细胞(interstitial cell of Cajal,ICC)的作用机制。方法50只SD大鼠以低海拔地区(海拔400 m)为对照组,并以进入高海拔地区(海拔4 300 m)后的时间节点依次分为1 d、3 d、7 d和14 d组,每组10只。测定各组大鼠小肠电活动数据,应用电子显微镜观察小肠ICC的微观结构变化,应用双重免疫荧光组织化学染色的方法观察同区域ICC的功能与P物质(substance P,SP)的表达变化。结果快速进入高海拔地区后,大鼠小肠电波幅及波频受损明显,于高海拔区3 d组下行到最低点(P0.05)。其小肠ICC的微观结构也可观察到类似改变。使用双重免疫荧光组织化学染色可发现,ICC与SP的表达呈同步变化,同样在高海拔区3 d组表达下降到最低点(P0.05)。结论快速进入高海拔地区所致小肠动力紊乱的发生,可能与小肠ICC及SP的表达变化有密切关系。     

快速进入高海拔地区对大鼠小肠肠神经系统-Cajal间质细胞——消化道平滑肌网络超微结构的影响

目的探讨快速进入高海拔地区大鼠小肠动力紊乱发生过程中,肠神经系统(enteric nervous system,ENS)-Cajal间质细胞(interstitial cell of Cajal,ICC)-消化道平滑肌(smooth muscle cell,SMC)网络超微结构的改变,及其作用机制。方法选取50只SD大鼠,以低海拔地区(海拔400 m)为对照组(10只),并以进入高海拔地区(海拔4 300 m)后的时间节点依次分为1 d、3 d、7 d和14 d组,每组10只。应用电子显微镜观察小肠ICC细胞的微观结构变化,以双重免疫荧光组织化学染色法,用c-kit标记ICC,将其与胆碱乙酰转移酶抗体(Ch AT)及神经型一氧化氮合酶抗体(n NOS)双标记观察其表达变化。结果电镜下可见急进高原后,大鼠小肠ICC细胞之间,ICC与SMC之间的缝隙连接明显减少,ICC内细胞器减少并出现凋亡小体等,尤以3 d组最显著。免疫荧光双标记结果显示,大鼠氮能神经元表达量于3 d组显著上升(P0.05),而胆碱能神经元表达量则显著下降(P0.05),ICC网络围绕着胆碱能/氮能神经网络,受兴奋性/抑制性神经元支配,呈对应变化,同样在3 d组表达量降到最低(P0.05)。结论 ENS-ICCSMC网络结构在快速进入高海拔地区小肠动力紊乱过程中发挥重要作用,胆碱能/氮能神经元的兴奋性发生对应性改变,并通过对ICC细胞功能的干预调控胃肠动力。     

干细胞因子对糖尿病小鼠小肠Cajal间质细胞的影响

目的探讨外源性干细胞因子（stem cell factor,SCF）对糖尿病（diabetes mellitus,DM）小鼠小肠Cajal间质细胞的影响。方法将雄性Balb/c小鼠随机分为正常对照组、糖尿病组（DM组）、糖尿病＋外源性SCF组（DM＋SCF组）,DM组和DM＋SCF组一次性腹腔注射（ip）链脲佐菌素（STZ,150 mg/kg）造模,选取成功模型;DM＋SCF组再ip SCF 0.2μg/（kg.d）;正常组和DM组每天ip等量的磷酸盐缓冲液（pH=7.4）。所有小鼠干预6周结束后,给予印度墨水灌胃测定小肠传输速率,免疫组化观察小肠c-kit的表达,Western blot观察c-kit蛋白的表达。结果饲养6周后,DM＋SCF组的体质量（g）、推进率、c-kit阳性细胞数（个/hpf）、c-kit蛋白的表达均比DM组明显增加（P均〈0.05）,仍低于正常组（P均〈0.05）;DM＋SCF组的血糖（mmol/L）比DM组明显降低（P〈0.01）,仍高于正常组（P〈0.05）。结论外源性SCF可以逆转Cajal间质细胞的异常改变,并对糖尿病小鼠的小肠动力障碍有一定的改善作用。     

糖尿病大鼠肠道Cajal间质细胞结构变化的研究

目的：明确糖尿病时肠道Cajal间质细胞超微结构的变化。方法：对12周四氧嘧淀糖尿病大鼠模型的小肠、结肠组织进行透射电镜观察。结果：实验观察发现糖尿病时Cajal间质细胞与其他细胞间的缝隙连接显著减少、结构破坏、连接松散;线粒体肿胀、空泡样变、溶解;胞质广泛溶解,细胞器减少。结论：糖尿病时肠道Cajal间质细胞的超微结构发生了显著的变化,这些结构的改变与其功能的改变密切相关,Cajal间质细胞超微结构的变化很可能是糖尿病胃肠功能紊乱的病因之一。     

电针对糖尿病胃轻瘫大鼠胃窦Cajal间质细胞凋亡的影响

目的:探讨电针对糖尿病胃轻瘫大鼠胃窦Cajal间质细胞（ICC）凋亡的影响。方法:取32只SD大鼠,分为空白对照组、模型组、电针组、胃复安组4组,每组8只。采用血糖仪测量大鼠血糖;酚红灌胃法测量计算胃排空率、小肠推进率;提取胃窦ICC原代细胞培养,用Western blot方法检测B细胞淋巴瘤蛋白质2（Bcl-2）、B...     

胃电刺激对大鼠胃窦肌间神经丛Cajal间质细胞超微结构的影响

背景：前期研究发现胃窦肌间神经丛Caial间质细胞（ICC-MY）数量增多参与了长时程长脉冲胃电刺激（GES）对胃慢波的调控。目的：观察不同时程长脉冲GES对大鼠胃窦ICC-MY数量和超微结构的影响,进一步探讨GES调控胃慢波的可能机制。方法：建立Wistar大鼠GES模型。将模型大鼠分为3组,GES1组和GES2组选用适宜的刺激参数控制胃慢波,对照组不予GES。GES1组仅予刺激一次;GES2组每天刺激一次,连续20 d。完成GES后处死大鼠,取胃窦组织,行透射电子显微镜观察。结果：GES1组胃窦ICC-MY数量与对照组相比未见明显变化,GES2组ICC-MY数量较GES1组和对照组明显增多。GES1组和GES2组ICC胞质内线粒体和核糖体均较对照组增多。GES1组ICC突起与周围平滑肌细胞（SMC）直接相连,GES2组ICC与周围SMC紧密相连,对照组ICC与周围SMC之间未见明显连接。结论：胃窦ICC-MY数量和超微结构改变参与了长时程长脉冲GES对胃慢波的调控。     

糖尿病大鼠小肠Cajal间质细胞及干细胞因子的变化及半夏泻心汤的干预作用

[目的]观察糖尿病（diabetes mellitus,DM）大鼠小肠Cajal间质细胞（ICC）及干细胞因子（stem cell faetor,SCF）表达的变化及半夏泻心汤的干预作用。[方法]除10只大鼠作为正常组外,其他大鼠采用腹腔注射STZ复制DM模型后随机分为DM组、半夏泻心汤组及西药组。半固体营养糊灌胃测定各组大鼠小肠推进率,免疫组化检测c-Kit及SCF在小肠组织中的表达;Western blot检测小肠组织c-Kit蛋白、SCF蛋白表达。[结果]半夏泻心汤组与西药组大鼠的体质量、小肠推进率、c-Kit及SCF阳性细胞数、c-Kit蛋白及SCF蛋白的表达均较DM组明显增加（均P〈o．05）;半夏泻心汤组与西药组大鼠的血糖值较DM组明显降低（P〈0．05）。半夏泻心汤组与西药组之间差异无统计学意义（均P〉0．05）。[结论]半夏泻心汤可以促进DM大鼠小肠肌间神经丛c-Kit、SCF的表达,提示对受损的DM大鼠小肠ICC、SCF有部分恢复作用,从而对DM大鼠的小肠动力障碍有一定的改善作用。     

培养的小鼠小肠和胃Cajal间质细胞起搏电流的特性

目的:探讨培养的小鼠小肠和胃Cajal间质细胞(ICC)起搏电流的特性.方法:用二型胶原酶分离ICC并在含有干细胞因子的培养液中培养,72 h后通过免疫组织化学方法进行鉴定.利用传统全细胞模式膜片钳技术记录胃窦和小肠ICC的起搏电流.把电极内液的钙螯合剂EGTA浓度由0.1 mmol/L增加到10 mmol/L,使游离钙浓度降低,观察细胞内低钙对起搏电流的影响.结果:培养72 h后的ICC在光镜下表现出自胞体发出2-4条长突起,并与邻近ICC突起相互连接成网络状;激光共聚焦显微镜下观察到ICC表面酪氨酸激酶受体c-kit表达呈阳性;膜电位钳制在-60 mV的条件下,ICC上可以记录到自发而节律性内向电流,即起搏电流.在胃和小肠ICC之间以及单个ICC和ICC网络之间,电流幅度、频率有差异.在传统的全细胞膜片钳模式下,通过增加电极内液中EGTA浓度使细胞内游离钙降低时,可以激活ICC的内向电流;在细胞外给予钙调蛋白抑制剂W-7时,可以激活ICC内向电流的同时明显增加起搏电流的幅度.结论:小鼠胃和小肠ICC产生的起搏电流频率与小鼠胃和小肠自律运动的频率非常接近;网络ICC产生的起搏电流比单个ICC稳定、幅度高、频率快;ICC内游离钙浓度的降低是产生起搏电流的重要因素;钙调蛋白在ICC内参与起搏电流的抑制性调节.     

调中颗粒对胃肌间Cajal间质细胞功能及数量的影响

[目的]观察功能性消化不良（FD）大鼠胃肌间Cajal间质细胞（ICC）超微形态结构、分布特点和密度变化,探讨调中颗粒治疗FD的机制。[方法]将40只大鼠随机分为5组,各8只,除正常组外,其余采用夹尾法制备FD模型,胃电图的方法检测造模是否成功,电镜观察胃肌间ICC的超微结构。酪氨酸激酶受体c-kit免疫组化法观察不同药物治疗后胃肌间阳性ICC的分布和水平变化。[结果]模型组大鼠胃电参数低于正常组（P〈0．05）;ICC的超微结构证实ICC与胃平滑肌运动具有密切相关性;调中颗粒能明显升高胃窦ICC水平（P〈0．05）,优于多潘立酮（P〈0．05）。[结论]调中颗粒能通过调节ICC的分布和数量,升高胃窦ICC的表达,促进胃蠕动,改善FD大鼠胃电节律。调中颗粒疗效优于半夏泻心汤和多潘立酮,具有整体调节作用。     

舒胃汤对功能性消化不良大鼠胃动素及胃窦Cajal间质细胞的影响

[目的]探讨舒胃汤对功能性消化不良( functional dyspepsia,FD)肝郁脾虚证大鼠胃排空、胃动素(Motilin,MOT)、胃窦Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICO的影响.[方法]将60只大鼠随机分为舒胃汤低剂量组(低剂量组)、舒胃汤高剂量组(高剂量组)、木香顺气丸组(中成药组)、莫沙必利组、对照组、模型组,每组10只.采用夹尾刺激方法制造FD模型,造模后第3天各组给予相应药液灌胃,对照组、模型组给予蒸馏水灌胃,持续14d.实验结束后检测胃排空,免疫组化法检测MOT水平,电镜观察胃窦ICC超微结构.[结果]模型组与对照组大鼠比较胃排空延迟,MOT水平明显升高(均P＜0.05).与模型组比较,给药各组大鼠胃排空改善(均P＜0.05);高剂量组和莫沙必利组MOT降低(均P＜0.05);透射电镜观察高剂量组胃窦部ICC与模型组比较结构明显改善,接近对照组.[结论]舒胃汤能够促进胃排空,下调MOT水平,改变胃窦ICC超微结构,恢复胃肠道运动功能可能是舒胃汤治疗FD的作用机制之一.     

硫化氢对肝硬化门脉高压症大鼠胃窦Cajal间质细胞及神经元的影响

正肝硬化门脉高压症患者常伴有胃动力障碍,表现为胃排空延迟、胃电节律紊乱、胃动力相关激素异常等,但目前仍无一致性结论。Cajal间质细胞(ICC)是分布于胃肠道的一种与神经密切联系的间质细胞,主要参与胃肠道慢波电活动,是胃肠道的起搏细胞,与肝硬化胃肠动力障碍有关~([1-2])。硫化氢(H2S)被称为是第三种气体信号分子,近年来的研究发现在消化道中也能产生H2S,且对胃动力具有     

胆道梗阻对胆囊动力及Cajal间质细胞形态的影响

目的 探讨胆道梗阻诱发急性非结石性胆囊炎(AAC)对胆囊Cajal间质细胞超微结构的影响,并初步探究胆囊平滑肌收缩障碍的可能机制.方法 健康成年豚鼠60只,胆总管结扎(BDL)方法构建豚鼠AAC模型.平均分为5组,即假手术对照组(Sham)、BDLl2h(BDL-12)、24h (BDL-24)、48h(BDL-48)以及72h(BDL-72)组.到实验时间后收集胆囊标本,HE染色后光学显微镜观察各组胆囊病理改变.每只胆囊取3条肌条(8 mm×3 mm),固定于恒温浴槽,分别给予不同浓度的八肽胆囊收缩素(CCK-8,1010 mmol/L、109 mmol/L、10-8 mmol/L、107 mmol/L和10-6mmol/L)、乙酰胆碱(Ach,108 mmol/L、107 mmol/L、106 mmol/L、105 mmol/L和10-4 mmol/L)以及KCI(60 mmmol/L),利用张力换能器记录胆囊平滑肌肌条的收缩活动.采用透射电镜检测Sham 组、BDL-12组和BDL-72组豚鼠胆囊Cajal问质细胞的形态学改变.结果 Sham组和BDL-12组未见明显炎性反应;与Sham组相比,BDL-48组及BDL-72组胆囊组织病理学评分差异有统计学意义(P＜0.05).加入CCK-8、Ach和KCI后,各组胆囊平滑肌收缩振幅均增加,且呈浓度依赖性;与Sham组相比,各组效应值均有下降,有统计学意义(P＜0.05).与Sham组相比,BDL-12组胆囊Cajal间质细胞形态发生改变,BDL-72组改变更为明显.结论 胆道梗阻可以诱发AAC.在AAC 早期胆囊炎症尚未发生时便可能有胆囊平滑肌的收缩障碍存在,而胆囊Cajal间质细胞可能是收缩障碍的一个重要中间环节.

Abstract：

Objective To explore the effect of biliary obstruction caused acute acalculous cholecystitis (AAC) on ultrastructure of gallbladder interstitial cells of Cajal (ICCs),and the possible mechanism of impaired contraction of gallbladder smooth muscle. Methods Total 60 healthy adult guinea pigs were in this study. The guinea pigs AAC model was induced by common bile duct ligation (BDL). The guinea pigs were divided into five groups equally,including sham control group (Sham),BDL for 12 hours (BDL-12),24 hours (BDL-24),48 hours (BDL-48) and 72 hours (BDL-72)groups. The gallbladder specimens were collected by the end of study. Gallbladder pathological changes were observed with HE staining under light microscope. Three muscle strips were collected of each gallbladder,fixed in constant temperature water bath with different concentration of eight peptide cholecystokinin agonist (CCK-8,1010 mmol/L,10-9 mmol/L,10-8 mmol/L,10-7 mmol/L and 10-6mmol/L),acetylcholine (Ach,10-8 mmol/L,107 mmol/L,10-6 mmol/L,10-5 mmol/L,10-4 mmol/L)and potassium chloride (KC1) (60 mmol/L). The contraction activity of gallbladder muscle strips was recorded by tonotransducer. The ultrastracture changes of gallbladder ICC in sham,BDL-12 and BDL-72 groups was examined by transmission electron microscopy. Results There was no obvious inflammation in Sham and BDL-12 groups. Compared with sham group,there were significant differences of biology score of gallbladder in BDL-48 and BDL-72 groups (P＜0. 05). After adding CCK-8,Ach and KC1,the contraction amplitude of gallbladder muscle increased in each group,and in dose-dependent manner. Compared with sham group,the effect value of each other groups decreased significantly (P＜0. 05). Compared with sham group,the morphology of ICC changed in BDL-12group,and more obvious in BDL-72 group. Conclusion Biliary obstruction can induce AAC. At the earlier stage of ACC,the impaired contraction of gallbladder smooth muscle present even without gallbladder inflammation occurrence. ICC may play an important role in impaired contraction.     

长期慢性束缚水浸应激对大鼠胃窦Cajal间质细胞数量的影响

目的:研究不同时程低强度束缚水浸应激对大鼠Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC)数量的影响,探讨慢性应激导致胃动力改变与ICC的相关性.方法:雄性SPF级SD大鼠48只被随机分为6组,即实验3 d、7 d、28 d组和对照3 d、7 d、28 d组,每组8只.实验组23℃水域箱内束缚水浸1h/d,对照组自由摄食饮水.4 d、8d、29d晨序贯脱颈处死.取膜胃小弯侧(ICC-1)、腺胃小弯侧(ICC-3)、腺胃大弯侧上1/3处(ICC-5)、腺胃幽门旁0.5 cm处(ICC-7)组织各一块放入固定液中,制成石蜡切片:抗c-kit免疫组织化学染色,观察不同层次ICC计数.结果:正常大鼠胃内ICC主要分布在肌内(ICC-MY)和肌间(ICC-IM),而黏膜下(ICC-SM)和深肌丛(ICC-DMP)较少.实验3 d组的各层ICC数量与对照组相比无明显差异,实验7 d和28 d组大鼠不同部位、不同层次及同一部位不同层次ICC数量明显异于同期对照组.应激时间长短对不同部位不同层次及同一部位不同层次ICC总数有明显影响,其大致规律是先正常后增加再减少,即先升高后降低.应激主要引起ICC-MY及ICC-IM数量发生变化,而本来较少的ICC-SM和ICC-DMP受影响较轻.结论:长时间低强度的慢性束缚水浸应激可以使大鼠胃窦ICC数量发生变化.     

舒胃方调控SCF/c-Kit通路对功能性消化不良大鼠胃排空功能及Cajal间质细胞的影响

目的:探讨舒胃方调控干细胞生长因子(stem cell factor, SCF)/c-Kit通路对功能性消化不良(functional dyspepsia, FD)大鼠胃排空功能及Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal, ICCs)的影响并进行分子对接,分析其作用机制。方法:32只SD级大鼠,随机取8只为空白组,另外24只通过多因素应激干预法建立FD大鼠模型,随机分为模型组、莫沙比利组及舒胃方组。光学显微镜观察大鼠胃窦组织;酚红法检测大鼠胃排空率;透射电镜观察大鼠ICCs的超微结构;ELISA法检测大鼠腹主动脉SCF含量;Western Blot检测大鼠胃窦组织SCF、c-Kit蛋白的表达;对舒胃方中所含活性成分进行收集与筛选,并对“有效成分-靶点”拓扑分析所得度值较高的有效成分进行分子对接。结果:各组大鼠胃壁组织结构完全,胃黏膜上皮完整,胃腺体结构和排列规整,未见明显炎性细胞浸润。空白组大鼠ICCs超微结构清晰,数量多,体积大,呈圆形、梭形,细胞核占比多,细胞质占比少,线粒体、内质网、核糖体多;模型组大鼠ICCs超微结构改变,数量少,体积小,线粒体...     

干细胞因子对糖尿病结肠Cajal间质细胞的影响

目的 探讨糖尿病(DM)小鼠干细胞因子(SCF)对结肠Cajal间质细胞(ICC)异常的影响.方法 40只雄性C57/BL6小鼠分为正常对照组,DM组、正常+抗-SCF组、DM+SCF组,每组10只.DM成模后6周处死小鼠,以流式细胞仪、透射电镜、Western印迹法观察近端结肠组织中ICC的变化,以Western印迹、酶联免疫吸附实验(ELISA)检测结肠组织和血清中SCF的表达情况.结果 DM小鼠血清和近端结肠组织中SCF均明显降低,伴有结肠中ICC数量减少、超微结构显著破坏;正常+抗-SCF组,血清和近端结肠组织中SCF均明显降低,并伴有结肠中ICC数量减少、超微结构显著破坏(类似DM组);DM+SCF干预后,血清和近端结肠组织中SCF水平增高,ICC的数量以及超微结构病变得到显著改善.结论 DM小鼠血清和近端结肠组织中SCF水平的下降,可能是DM结肠中ICC数量减少和超微结构破坏的原因;外源性SCF能改善DM相关的胃肠道ICC病变.     

影响胃肠Cajal间质细胞起搏功能的体液因子及其作用

胃肠道平滑肌具有自发性、节律性蠕动的特性,其静息电位呈缓慢起伏波动,即周期性去极化和复极化,称为慢波.Cajal间质细胞(inter-stitial cell of Cajal,ICC)是胃肠道的起搏细胞,产生慢波并传导电兴奋.ICC的数量、结构或功能异常与许多胃肠疾病特别是运动障碍性疾病密切相关.体液因子包括激素、神经递质和神经肽、细胞因子以及局部化学介质等,许多体液因子对于ICC及其起搏功能有直接或间接作用,影响胃肠运动.     

参青方对TNBS诱导的大鼠结肠炎模型结肠Cajal间质细胞的影响

背景：近年以Cajal间质细胞（ICC）为核心的肠道动力学与溃疡性结肠炎（UC）的关系逐渐成为UC研究的热点之一。目的：观察中药制剂参青方对三硝基苯磺酸（TNBS）诱导的大鼠结肠炎模型结肠组织中ICC形态和数量的影响，探讨该制剂调节UC肠道动力障碍的作用机制。方法：60只大鼠随机分为正常对照组、模型Ⅰ组、模型Ⅱ组、美沙拉秦组、参青方高剂量组和低剂量组，后5组以TNBS诱导结肠炎模型。模型Ⅰ组于造模后3d取材，其余5组于造模后3d开始予相应药物，连续给药7d后取材。电子显微镜观察病变结肠组织ICC超微结构，免疫组化染色和蛋白质印迹法检测c-kit蛋白表达。结果：模型Ⅰ组结肠组织ICC超微结构破坏明显，c-kit蛋白表达较正常对照组显著降低（P〈0．05）。经参青方或美沙拉秦治疗后，ICC超微结构异常有所改善，c-kit蛋白表达显著增高（P〈0．05），参青方高剂量组作用更为明显。结论：TNBS诱导的结肠炎大鼠结肠组织ICC超微结构损伤，数量减少，而参青方能减轻和修复ICC损伤并恢复其数量，对调节肠道动力起重要作用。