六味地黄丸中四种活性成分的HPLC法测定

建立了HPLC法同时测定六味地黄丸中的丹皮酚、马钱苷、莫诺苷和芍药苷.采用C_(18)色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸溶液梯度洗脱,检测波长238 nm,丹皮酚、马钱苷、莫诺苷和芍药苷分别在0.5～20、0.25～10、0.5～20和0.15～6μg/ml浓度范围内线性关系良好,回收率分别为98.10%～105.44%.     

六味地黄丸中马钱苷的薄层鉴别

目的研究建立六味地黄丸中马钱苷的薄层色谱。方法采用硅胶G薄层板,以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)为展开剂。制定了马钱苷的薄层鉴别。结果色谱斑点清晰,重现性好。结论该方法可以快速的鉴别马钱苷,便于基层快速检验。     

RP-HPLC法测定浓缩六味地黄丸中马钱苷的含量

建立浓缩六味地黄丸中马钱苷的含量测定方法。采用高效液相色谱法,以Hypersil ODS2为色谱柱;流动相:0.05mol.L-1磷酸二氢钠-乙腈(85:15);检测波长:238nm。马钱苷在0.0285～5.2250μg范围内,浓度与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9998);回收率:98.39%,RSD=1.2%(n=9)。此方法简便、快速,可作为浓缩六味地黄丸中马钱苷的含量测定方法。     

六味地黄丸中马钱苷大鼠药代动力学研究

目的建立液质联用法测定大鼠血浆中马钱苷浓度的方法,研究健康大鼠灌胃六味地黄丸后马钱苷的药代动力学特征。方法 6只健康雄性Wistar大鼠,分别按10 g·kg-1灌胃给予六味地黄丸混悬液,按设定时间点采集血液样本,采用已建立液质联用法测定血浆中马钱苷浓度。采用DAS 2.0药代动力学软件计算药代动力学参数。结果马钱苷主要药代动力学参数分别为t1/2(4.398±1.633)h,Tmax(2.083±1.021)h,Cmax(369.314±53.452)ng·m L-1,AUC0~24(2 275.174±553.825)ng·m L-1·h,AUC0~∞(2 343.478±601.313)ng·m L-1·h。结论本研究建立的测定大鼠血浆中马钱苷浓度的液质联用法灵敏度高,重现性好,适于大鼠体内马钱苷血浓度测定及药代动力学研究。大鼠灌胃给予六味地黄丸后,马钱苷药时曲线呈双峰。     

匹格列酮对正常人和甲状腺相关眼病患者眼眶前脂肪细胞增殖和分化的影响

目的研究匹格列酮对正常人和甲状腺相关眼病(thyroid-associated ophthalmolpathy,TAO)患者眼眶前脂肪细胞增殖和分化的影响。方法培养正常人和TAO患者眼眶前脂肪细胞,在其增殖和分化的过程中加入匹格列酮。MTT法观察匹格列酮对前脂肪细胞增殖的影响,油红O染色定量的方法观察匹格列酮对前脂肪细胞分化的影响。结果浓度为1μmol.L-1的匹格列酮能够促进眼眶前脂肪细胞的增殖。在各个实验时间段,匹格列酮对眼眶前脂肪细胞有促分化作用,在48 h时作用最明显。与正常人比较,匹格列酮对TAO患者眼眶前脂肪细胞的促分化作用更明显。结论匹格列酮可能通过增加成熟脂肪细胞的数量改善胰岛素抵抗。对伴有糖尿病的TAO患者,匹格列酮治疗可能诱发眼部病变的加重。     

7β-甲氧基莫诺苷转化为莫诺苷影响因素的研究

目的：考察7β-甲氧基莫诺苷转化为莫诺苷的影响因素,为研究山萸肉饮片中有效成分的变化规律提供参考。方法：以7β-甲氧基莫诺苷和莫诺苷为检测指标成分,考察在单体成分情况下,溶液的pH、加热温度、加热时间等因素的影响。结果与结论：当pH=2,甲醇含量为5%时,7β-甲氧基莫诺苷向莫诺苷转变的转化率较高;加热温度大于100℃的条件下,加热时间（≤240 min）对7β-甲氧基莫诺苷的转化也有影响。     

前脂肪细胞的增殖、分化及其调控

脂肪组织(adipose tissue,AT)是哺乳动物体内重要的能量贮库和赋形组织,其形态功能受到各种因素的调节,例如激素,营养,温度,神经反射等.这些机制涉及脂肪细胞(Adipocyte)在转录后的蛋白水平的改变以及由此而导致的细胞新陈代谢的改变.而前脂肪细胞(Preadipocyte)是脂肪细胞的一种,由多能干细胞(multipotential stem cell,MSC)或胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)分化而来[1],细胞体积小,呈梭型,间质少,胞浆内不含脂滴,但是具有向胞浆内聚集脂滴的潜力.前脂肪细胞还具有分裂增殖的能力和促进血管生成的特性,对外界机械损伤的抵抗力较强,因此在细胞的收集与移植过程中比成熟的脂肪细胞更能耐受缺血和创伤,而且前脂肪细胞在常规培养条件下即可生长[2],在体内和体外都可以分裂增殖并在胞浆内聚集脂滴而分化为成熟的脂肪细胞.     

HPLC法测定杞菊地黄丸中莫诺苷、马钱苷和丹皮酚的含量

目的:建立一种快速、准确和实用的HPLC方法,用于同时测定杞菊地黄丸中莫诺苷、马钱苷和丹皮酚的含量。方法:采用Phenomenex Gemini C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.3%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱,流速1.0 m L·min-1,柱温40℃,检测波长为240 nm(莫诺苷、马钱苷)和274 nm(丹皮酚)。结果:莫诺苷、马钱苷、丹皮酚质量浓度分别在2.242~44.84μg·m L-1(r=0.999 9)、2.130~42.60μg·m L-1(r=1.000)、5.068~101.4μg·m L-1(r=1.000)范围内,与峰面积线性关系良好;平均回收率分别为96.2%(RSD=0.44%)、96.0%(RSD=0.21%)、103.0%(RSD=0.65%)。结论:本方法可作为杞菊地黄丸中莫诺苷、马钱苷和丹皮酚含量同时测定的方法,适用于杞菊地黄丸的质量控制。     

六味地黄丸对环孢素血药浓度的影响

环孢素是目前广泛应用于临床的免疫抑制药,用于器官移植后抗排斥反应从而提高患者存活率。因其药动学个体差异大,术后的排异反应与肝肾的毒性反应难以区别。而影响环孢素血药浓度因素很多,需通过监测血药浓度调整服药剂量,提高患者生存质量。     

HPLC法同时测定六味地黄丸中3种成分含量

目的建立同时测定六味地黄丸中马钱苷、芍药苷和丹皮酚3种成分含量的高效液相色谱法(HPLC)。方法以VP-ODS柱为分析柱,乙腈—水为流动相进行梯度洗脱,流速为0.8ml/min,检测波长为230nm,柱温为25℃。结果马钱苷、芍药苷、丹皮酚分别在1.56～50.00、0.47～15.00、6.25～200.00μg/ml浓度范围内具有良好线性关系,r值均≥0.9992;HPLC法精密度相对标准偏差(RSD)均≤2.54%;3种分析物的加样回收率均≥99.17%。结论 HPLC法简便,结果准确可靠,可有效地用于六味地黄丸的质量控制。     

肾上腺素对大鼠前脂肪细胞增殖、分化及其细胞内cAMP的影响

目的研究肾上腺素对大鼠前脂肪细胞增殖、分化及其细胞内cAMP水平的影响,探讨肾上腺素对大鼠前脂肪细胞的作用机制。方法原代培养大鼠前脂肪细胞,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测六味地黄超微饮片含药血清对前脂肪细胞的增殖,以酶组织化学法检测其对前脂肪细胞分化过程中的磷酸甘油脱氢酶(GPDH)的影响,油红O染色方法测定其对细胞内脂肪积聚的影响。在大鼠前脂肪细胞生长旺盛时加入肾上腺素,以该细胞内的cAMP水平作为评价指标,利用cAMP与125I-cAMP和特异性蛋白激酶竞争结合原理测定该细胞内cAMP浓度。结果肾上腺素促进大鼠前脂肪细胞的增殖,抑制分化过程中GPDH的升高及脂肪积聚;升高大鼠前脂肪细胞内cAMP水平。结论肾上腺素-β受体-cAMP系统可能参与大鼠前脂肪细胞的增殖与分化。     

西红花酸对3T3-L1前脂细胞增殖和分化的影响

目的：观察西红花酸对3T3-L1前脂细胞增殖分化的影响,并探讨其影响3T3-L1细胞分化的可能作用机制。方法：培养前脂肪细胞3T3-L1,四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测西红花酸对其生长活性和增殖的影响;油红O染色和染色比色法分析脂肪细胞的分化程度;逆转录多聚酶联反应（RT-PCR）检测腺苷酸激活蛋白激酶（AMP-activated protein kinase,AMPK）mRNA的表达;Western blot法检测p-AMPK蛋白表达水平。结果：西红花酸高、中剂量（10-5、10-6mol/L）组均可以显著抑制前脂细胞的增殖和分化（P〈0.01）,而低剂量组（10-7mol/L）也可以抑制其增殖、分化（P〈0.05）;各剂量的西红花酸都能够增加AMPK的mRNA的表达、提高p-AMPK蛋白表达水平（P〈0.05）。结论：西红花酸具有抑制前脂细胞增殖分化的作用,可能和增强AMPK的表达有关。     

淫羊藿甙对HL－60细胞增殖与分化的影响

为寻找新的肿瘤细胞诱导分化剂，采用ＭＴＴ比色分析法和形态定量分析技术检测了淫羊藿甙对人急性早幼粒白血病细胞（ＨＬ－６０）增殖与分化的影响。结果表明：淫羊藿甙可以抑制ＨＬ－６０细胞的增殖，呈剂量依赖关系；选择６２．５、１２５、２５０ｍｇ·Ｌ－１进行动态观察，发现１２ｈ后即可发挥抑制作用。淫羊藿甙１００ｍｇ·Ｌ－１作用４８ｈ后ＨＬ－６０细胞ＮＢＴ还原能力明显增强（Ｐ＜０．０１），细胞核面积减小，平均光密度（ＭＯＤ）增加，积分光密度减小（ＩＯＤ）；光镜观察结果显示，淫羊藿甙作用后的ＨＬ－６０细胞发生明显变化，细胞核体积减小，细胞核呈杆状或分叶状。上述结果提示，淫羊藿甙对ＨＬ－６０细胞有诱导分化作用。     

淫羊藿甙对HL－60细胞增殖与分化的影响

为寻找新的肿瘤细胞诱导分化剂，采用ＭＴＴ比色分析法和形态定量分析技术检测了淫羊藿甙对人急性早幼粒白血病细胞（ＨＬ－６０）增殖与分化的影响。结果表明：淫羊藿甙可以抑制ＨＬ－６０细胞的增殖，呈剂量依赖关系；选择６２．５、１２５、２５０ｍｇ·Ｌ－１进行动态观察，发现１２ｈ后即可发挥抑制作用。淫羊藿甙１００ｍｇ·Ｌ－１作用４８ｈ后ＨＬ－６０细胞ＮＢＴ还原能力明显增强（Ｐ＜０．０１），细胞核面积减小，平均光密度（ＭＯＤ）增加，积分光密度减小（ＩＯＤ）；光镜观察结果显示，淫羊藿甙作用后的ＨＬ－６０细胞发生明显变化，细胞核体积减小，细胞核呈杆状或分叶状。上述结果提示，淫羊藿甙对ＨＬ－６０细胞有诱导分化作用。     

南蛇勒蛋白对黑色素瘤细胞的抑制及分化作用

目的从南蛇勒中分离纯化具有抑制黑色素瘤作用的蛋白质———南蛇勒蛋白 (CMP) ,并对黑色素瘤细胞KI735M2增殖的抑制及细胞的分化进行研究。方法采用盐析、凝胶色谱的方法对CMP进行分离纯化 ,溴化四唑蓝法检测CMP对黑色素瘤细胞KI735M2增殖的抑制作用的量效和时效关系 ,形态学观察法检测细胞的分化。结果CMP相对分子质量为 1980 0 ,2 2 .0 μg/mlCMP抑制黑色素瘤细胞增殖 6 0 % (P <0 .0 5 ) ,使细胞增殖第 5天处于停顿 ,抑制率为 96 % (P <0 .0 5 ) ,不同浓度的CMP使黑色素瘤细胞形成具有分化特征的树突状结构。结论CMP对黑色素瘤细胞KI735M2的增殖具有抑制作用。     

Effects of nitric oxide on proliferation and differentiation of rat brown adipocytes in primary cultures

1. In the present work, we study the effect of NO on the proliferation and differentiation of brown fat cells in primary cultures.
2. Brown fat precursor cells isolated from rat brown adipose tissue were cultured for 8 days until confluence and treated daily with the NO donating agents, S-nitroso-acetyl penicillamine (SNAP) or S-nitroso-L-glutathione (GSNO). Both agents (300 μM) decreased cell proliferation approximately 8 fold on day 8. The inhibitory effect of NO was unlikely to be due to cytotoxicity since (i) cells never completely lost their proliferation capacity even after 8 days of exposure to repeated additions of SNAP or GSNO, and (ii) the inhibitory effect was reversible after removal of the media containing NO donors.
3. Daily treatment with nitric oxide synthase inhibitors, such as N^G-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME, 300 μM), led to the stimulation of cell proliferation by 44±5%, n=3, suggesting that NO, endogenously produced in brown adipocytes, may be involved in modulating cell growth.
4. Daily treatment with both SNAP or GSNO induced significant mitochondriogenesis, measured as the mitochondrial conversion of 3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl-]-2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT) to formazan, whilst daily treatment with L-NAME was without effect.
5. The inhibition of cell proliferation by NO donors was accompanied by the expression of two genes coding for peroxisome proliferator activated receptor-γ and uncoupling protein-1, which are upregulated during differentiation.
6. Increasing cyclic GMP in cells by 8-bromo-cyclic GMP (100–1000 μM) did not reproduce the observed NO effects on either cell number or gene expression. On the other hand, chronic treatment with the inhibitor of the NO-stimulated guanylyl cyclase, 1H-[1,2,4]oxadiazole[4,3-a]quinoxalin-1-one (ODQ), reduced the expression of peroxisome proliferator activated receptor-γ and uncoupling protein-1.

     

GM-1对新生大鼠神经干细胞增殖和分化的影响

目的:观察不同剂量神经节苷脂(GM—1)对神经干细胞增殖和分化的影响。方法:从新生大鼠海马组织分离出神经干细胞,分别培养于基础培养液(阴性对照组) ,加入三种不同剂量GM—1(实验组)及含有b FGF(阳性对照组)的神经干细胞培养液。采用神经干细胞球直接计数法测定细胞的增殖能力,并应用免疫细胞化学技术对神经干细胞分化情况进行鉴定。结果:3个实验组神经干细胞的增殖能力较阳性对照组无明显差异,较阴性对照组差异显著,贴壁培养细胞分化发现3个实验组分化能力明显低于阳性对照组。结论:GM—1对新生鼠神经干细胞的增殖起促进作用,对神经干细胞无明显的诱导分化作用。     

盐酸小檗碱对HL-60细胞增殖与分化的影响

目的　研究盐酸小檗碱对人早幼粒白血病HL 6 0细胞增殖与分化的影响。方法　应用生长曲线测定法、克隆形成实验检测药物对HL 6 0细胞生长抑制作用 ;细胞分化根据细胞形态、硝基蓝四氮唑 (NBT)还原能力、细胞表面标记的改变来决定 ;细胞周期变化用流式细胞仪测定。结果　HL 6 0细胞经小檗碱处理后生长明显受抑 ,呈时间和浓度依赖性。选择 1、2、4、8mg·L-1小檗碱作用于HL 6 0细胞 ,动态观察发现 ,HL 6 0细胞向成熟细胞分化 :细胞核变小 ,核浆比减少 ;NBT还原能力增强 ;CD11b表达升高。细胞周期分析发现 ,小檗碱处理后细胞阻滞于G0 /G1期 ,S期细胞明显减少。结论　盐酸小檗碱可抑制HL 6 0细胞的增殖 ,并诱导HL 6 0细胞向成熟细胞分化。     

Effects of propylene oxide exposure on rat nasal respiratory cell proliferation.

Long-term exposure of rodents to propylene oxide (PO) induced inflammation, respiratory cell hyperplasia, and nasal tumors at concentrations >/= 300 ppm, suggesting a possible role for cytotoxicity and compensatory cell proliferation in PO carcinogenesis. In this study, the effects of PO exposure on histopathology and cell proliferation in nasal and hepatic tissues were studied in male F344 rats exposed by inhalation for 3 or 20 days (0, 5, 25, 50, 300, and 500 ppm). Histopathology revealed an increase in mucous cell hyperplasia in the anterior nasal passages after 20 days of exposure (>/=300 ppm). This was associated with the formation of goblet cell nests. Cell proliferation was measured in the respiratory epithelium (NRE; mucociliary and transitional) lining the anterior nasal passages, the nasopharyngeal meatus (NPM), and the liver using BrdU administered with 3-day osmotic pumps. Significant increases in cell proliferation occurred (>3.6-fold) in the mucociliary epithelium lining the anterior nasal cavity at and above 300 ppm for both exposure periods. In the mucociliary epithelium, the 20-day labeling was commonly associated with nests of goblet cells. Significant increases in cell proliferation (>2.3-fold) were observed in the transitional epithelium at 500 ppm after 3 days of exposure and at 300 and 500 ppm after 20 days of exposure. Significant increases in cell proliferation in the NPM (>2.8-fold) were evident at 500 ppm PO after 3 days and at 300 and 500 ppm PO after 20 days of exposure. No exposure-related changes in cell proliferation were observed in the liver. These studies demonstrate a clear concordance between the site and exposure concentration for tumor induction and those causing significant increases in cell proliferation in the rat nose.