用乳酸脱氢酶为靶分子的免疫层析技术检测恶性疟原虫

目的建立一种免疫胶体金层析(GICA)法用于恶性疟原虫的检测。方法采用杂交瘤技术制备恶性疟原虫乳酸脱氢酶(LDHpf)单抗，利用筛选出来的单抗制成诊断恶性疟原虫的免疫层析条，以镜检和PCR法为对照，用GICA条检测门诊“四热”病人血样，评价其敏感性和特异性，并对其稳定性进行了初步研究。结果筛选出4株抗LDHpf单抗．间接ELISA表明4株单抗仅与恶性疟原虫发生反应，而与间日疟原虫、红细胞蛋白、刚地弓形虫和日本血吸虫不发生交叉反应。Western—blot结果显示4株单抗能识别恶性疟原虫相对分子质量约为33000处的虫源蛋白。以镜检法和PCR法为标准，CICA条检测恶性疟原虫的敏感性分别为88.37％和86．67％．DICA与镜检法的符合率均为91．55％。结论GICA检测恶性疟原虫简易快速、灵敏度高，无需特殊仪器设备，有望成为一种恶性疟原虫快速免疫诊断试剂盒。     

用乳酸脱氢酶为靶分子的免疫层析技术检测恶性疟原虫

目的 建立一种免疫胶体金层析(GICA)法用于恶性疟原虫的检测。方法 采用杂交瘤技术制备恶性疟原虫乳酸脱氢酶(LDHpf)单抗,利用筛选出来的单抗制成诊断恶性疟原虫的免疫层析条,以镜检和PCR法为对照,用GICA条检测门诊"四热"病人血样,评价其敏感性和特异性,并对其稳定性进行了初步研究。结果 筛选出4株抗LDHpf单抗,间接ELISA表明4株单抗仅与恶性疟原虫发生反应,而与间日疟原虫、红细胞蛋白、刚地弓形虫和日本血吸虫不发生交叉反应。Western-blot结果显示4株单抗能识别恶性疟原虫相对分子质量约为33000处的虫源蛋白。以镜检法和PCR法为标准,GICA条检测恶性疟原虫的敏感性分别为88.37%和86.67%,GICA与镜检法的符合率均为91.55%。结论 GICA检测恶性疟原虫简易快速、灵敏度高,无需特殊仪器设备,有望成为一种恶性疟原虫快速免疫诊断试剂盒。     

间日疟原虫乳酸脱氢酶单克隆抗体的制备及其鉴定

目的研制间日疟原虫乳酸脱氢酶(PvLDH)单克隆抗体,并对抗体特性进行了初步鉴定。方法用纯化的重组PvLDH蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞,测定其免疫球蛋白亚类及效价,结合ELISA、Western blot试验分析其特异性。结果共获得5株稳定分泌抗PvLDH重组蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别为6D1、6D2、5A10、5C7、4A8。5株单抗培养上清的ELISA效价为1∶512～1∶1024,腹水效价为1∶12800～1∶25600,其中5C7、6D1经Western-blot鉴定能与天然的恶性疟原虫和间日疟原虫的LDH发生特异性反应。结论本研究方法成功制备并获得了针对PvLDH的单克隆抗体,为进一步研究疟疾诊断试剂奠定了基础。     

恶性疟原虫乳酸脱氢酶单克隆抗体的制备及其特性鉴定

为制备抗恶性疟原虫乳酸脱氢酶（LDHp）单克隆抗体（McAb）,并对其特异性进行鉴定,用纯化的LDHp重组抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备McAb,筛选出分泌高滴度McAb的杂交瘤细胞株,测定其免疫球蛋白亚类及其效价,ELISA、Westen blotting试验分析其特导性。结果,制备出2A5和 1H10两株能稳定分泌抗LDHp　McAb的杂交瘤细胞株,两株单抗均为IgG2b,2A5和1H10培养上清的ELISA效价分别为1:512和1:256,腹水效价分别为1:25600和1:12800,两株单抗与间日疟、红细胞、弓形虫、日本血吸虫等抗原均不发生交叉反应,能识别恶性疟原虫的33Kda虫源蛋白。证明制备的抗LDHp杂交瘤细胞株能分泌高滴度和高特异性的单抗。     

恶性疟原虫乳酸脱氢酶活性的初步检测

以３－乙酰吡啶（ＡＰＡＤ）作为辅酶而设计的数量酶比色法检测恶性疟原虫乳胶脱氢酶活性。结果显示：ＰＬＤＨ的ＯＤ值随恶性疟原虫率的提高而明显升高,特别是当原虫率达１％以上时,ＰＬＤＨ的ＯＤ值更显著,但在低原虫率（０．４％以下）时,阳性血样与阴性血样ＯＤ值有时错位或不能区别。同时显示,同样的原虫率血样裂殖体（Ｓ）和大滋养体（Ｔ）期比环状体（Ｒ）期ＰＬＤＨ的ＯＤ值明显升高。     

抗恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶单克隆抗体的研制与胶体金免疫层析方法的建立

OBJECTIVE: To prepare a monoclonal antibodies (mAbs) against glutamate dehydrogenase (GDH) of Plasmodium falciparum (FCC1/HN strain) and establish colloidal gold-immunochromatographic assay (GICA) for diagnosis of Plasmodium falciparum malaria. METHODS: Recombinant GDH was used to immunize Balb/C mice and the mAbs against GDH were prepared using hybridoma technique followed by identification of IgG isotype and its affinity. Protein-G affinity chromatography was employed to purify the antibodies, which were labeled with colloidal gold for establishment of GICA for Plasmodium falciparum detection. RESULTS: Six mAbs were obtained and identified as IgG1(kappa) of IgG isotypes with affinity constants (Kaff) ranging from 1 x 10(-8) to 2.8 x 10(-10). GICA had a sensitivity of 86.66%; and specificity of 96.43%; for Plasmodium falciparum detection compared with routine microscopic examination. CONCLUSION: The established GICA is rapid and accurate for Plasmodium falciparum detection with such potential utility as for instant diagnosis of Plasmodium falciparum malaria.     

伯氏疟原虫抗氯喹株与氯喹敏感株在乳酸脱氢酶同功酶和蛋白谱上的差异

本研究观察了抗氯喹株及氯喹敏感株伯氏疟原虫在代谢方面的差异。纯分离的疟原虫经Disk-电泳分离后,用乳酸脱氢酶活力染色,氯喹敏感株疟原虫可见两个主带,抗氯喹株疟原虫只呈现一个主带。经SDS一电泳分离的标本以硝酸银染色后,氯喹敏感株疟原虫的蛋白分带显著多于抗氯喹株疟原虫,提示疟原虫对氯喹产生抗药性后,在代谢方面亦发生了相应的变化。     

乳酸脱氢酶和肌酸激酶在肺癌诊断中的意义

乳酸脱氢酶和肌酸激酶在肺癌诊断中的意义总医院心胸外科宋世辉赵作芬鄢盛尧通过检测乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）和肌酸激酶（ＣＫ）以及它们的同功酶诊断心脏疾病，早已在临床广泛应用［１］。目前认为利用血清ＬＤＨ、ＣＫ及同功酶的检测也有助于恶性肿瘤的诊断和判断治疗方法...     

间日疟原虫乳酸脱氢酶的表达、纯化及免疫活性的鉴定

目的 在大肠杆菌中表达间日疟原虫乳酸脱氢酶(PvLDH)与谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合蛋白,对重组蛋白进行纯化并测定其免疫活性.方法 将构建的LDH/pGEX-4T-1重组菌BL21接种于LB培养基中,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组融合蛋白的表达,重组蛋白纯化后免疫小鼠制备特异性血清,ELISA检测血清效价,Western-blotting鉴定其免疫活性.结果 重组质粒在大肠杆菌中表达PvLDH与谷胱甘肽S-转移酶(GST)的融合蛋白,表达产物主要以包涵体形式存在,经复性、纯化后免疫小鼠,能诱导小鼠产生特异性体液免疫应答,ELISA法测效价为1:51200,Western-blotting结果显示该血清能特异性与间日疟和恶性疟患者全血发生反应,而不能与正常人起交叉反应.结论 PvLDH在大肠杆菌中获得高效表达且表达产物具有良好的抗原性和免疫原性.     

乳酸脱氢酶同工酶分析在心脏病诊疗中的探讨

目的 比较分析乳酸脱氢酶（LDH）同工酶1与2的百分比在心肌梗死、心肌炎、不稳定型心绞痛型冠心病与非心脏疾病中的差别,从而阐述LDH同工酶1与2的检测在心脏病诊断中的临床意义。方法 用常规的琼脂糖电泳法。组间差异的统计分析方法用方差分析。结果 LDH1百分比在心肌梗死型冠心病组与心肌炎组、不稳定型心绞痛型冠心病组和非心脏病对照组间具有显著性差别（P＜0．05,F检验）。而它在心肌炎组、不稳定型心绞痛型冠心病组和非心脏病对照组间无显著性差别（P＞0．2,F检验）。而它在心肌炎组、不稳定型心绞痛型冠心病组和非心脏病对照组间则无显著性差别（P＞0．2,F检验）。LDH2的百分比在4个实验组中无显著性差别（P＞0．2,F检验）。结论 从实验结果的统计分析和8例心脏手术病人LDH1动态性检测结果表明,对临床上有心肌损伤的心脏病,LDH1可作为监测疗效、判断预后的生化指标。     

血清淀粉酶、脂肪酶、乳酸脱氢酶在急性胰腺炎的临床诊断意义

目的探讨急性胰腺炎（AP）中血清淀粉酶（AMY）、脂肪酶（LIP）、乳酸脱氢酶（LDH）的敏感性和特异性及相互关系,为临床诊断提供实验依据。方法采用强生VIROS 5600干化学分析仪速率法检测血清AMY、LIP、LDH。结果发病时重型胰腺炎（SAP）组和轻型胰腺炎（MAP）组及非胰腺炎急腹症组血清AMY、LIP、LDH明显高于对照组,在疾病早期（48 h内）联合测定血清AMY、LIP、LDH,诊断AP的阳性率显著高于单项检测,且AMY、LIP、LDH呈正相关。结论联合检测有助于AP的早期诊断、病变程度判定、治疗效果观察及预后判断。     

胸水ADA与LDH检测在鉴别恶性与结核性渗出性胸水中的作用

目的:评价胸腔积液腺苷脱氨酶(ADA)、乳酸脱氢酶(LDH)在支气管肺癌胸水及结核性胸水的诊断价值。方法:对119例患者(支气管肺癌54例,结核性65例),每例均检测患者胸水ADA和LDH。结果:肺癌患者胸水LDH水平显著高于结核组(P<0.001),而其ADA显著低于结核患者(P<0.001)。胸水ADA与LDH联合检测,对肺癌所致胸水判别正确率为96.3%。结论:高PLDH和低PADA水平提示恶性胸水,仅有高水平PADA是结核性胸水的特征。     

Production and Characterization of Anti—estrone Monoclonal Antibody

Objective Determination of estrone (E1) levels has a significant meaning in evaluating physiological effect and diagnosing some diseases. In order to detect free E1 in biological fluids, a monoclonal antibody specific for E1 was prepared after the complete antigen of E1 was synthesized. The purified monoclonal antibody was fully characterized for later immunoassay. Methods 3-O-carboxymethyl ether derivative of E1 was synthesized and in turn coupled to bovine serum albumin (BSA) to form complete antigen E1-BSA. A monoclonal antibody (McAb) specific for E1 was produced both in vitro and in vivo by a hybridoma anti-E1. Anti-E1 was prepared by fusion of SP2/0 murine myeloma cells with spleen cells isolated from immunized BALB/c mouse. The McAb was characterized by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), SDS-PAGE and Western-blotting. The specificity of the immunoassay was investigated by determining the cross-reactions of E1 analogs when free E1 was detected by competitive indirect enzyme-linked immunosorbent assay (CI-ELISA). Results Analysis revealed that anti-E1 McAb (E1-McAb) was of the IgG1 type, the molecular weight of E1-McAb was 164 000 daltons. The affinity constant of E1-McAb with coated complete antigen was 8.2′108L/mol. The linear range for free E1 determined by CI-ELISA was 10pg/mL~10ng/mL. The detection limit was 21.4 pg/mL (defined as twice the standard deviation of the blank). Conclusion The CI-ELISA developed with E1-McAb was both sensitive and specific. The prepared E1-McAb can be used in some immunoassays.     

抗hMOF单克隆抗体的制备与鉴定

目的 制备抗hMOF的单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定.方法 以重组GST-hMOF融合蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,经多次筛选及克隆化,建立可以稳定分泌抗hMOF单克隆抗体的杂交瘤细胞株.用ELISA、Western blot、免疫组化对此抗体特性进行鉴定.结果 筛选到1株能稳...     

LDH活性测试在大鼠肺孢子虫肺炎诊断中的应用

目的寻求一种在活体状态下帮助诊断肺孢子虫肺炎动物模型建立的方法。方法给SD大鼠皮下注射地塞米松建立肺孢子虫动物模型。6wk末,采鼠尾血测定血清LDH含量,LDH升高者为PCP阳性鼠。第9周时剖杀,取肺制作肺组织印片和肺组织切片,分别采用六胺银和苏木素-伊红染色,观察病理学变化。结果血清LDH含量测定结果与病理学结果基本吻合,实验鼠的发病率为89.2%。结论血清LDH测定结合病理学检查两方面结果可提高肺孢子虫肺炎诊断的可靠性,是一项有价值的PCP动物模型建立的辅助诊断指标。     

抗恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶单克隆抗体的研制与胶体金免疫层析方法的建立

目的 制备抗恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶(GDH)的单克隆抗体(McAb),将其标记胶体金,建立一种诊断恶性疟的胶体金免疫层析方法。方法 用基因重组的GDH蛋白免疫Balb/C小鼠,采用杂交瘤细胞技术制备McAb,测定其免疫球蛋白亚类及其亲和力。用protein-G亲和层析纯化抗体并用胶体金标记,建立胶体金免疫层析方法,选择最佳反应模式对疟疾血样进行检测。结果 筛选出6株能稳定分泌抗GDH单克隆抗体的杂交瘤细胞株,单抗亚类均为IgG₁,亲和常数(κ)介于1×10^-8~2.82×10^-10。以镜检法为参照,建立的胶体金免疫层析方法检测恶性疟的敏感性为86.66%,特异性为96.43%。结论 建立的胶体金免疫层析方法检测恶性疟快速、简便、可靠,有望开发成为恶性疟快速诊断试剂盒。     

血清淀粉酶及白蛋白联合乳酸脱氢酶检测在急性胰腺炎临床诊断及病情评估中的作用

目的 探讨血清淀粉酶、白蛋白联合乳酸脱氢酶检测在急性胰腺炎临床诊断、病情评估中的作用。方法 回顾性分析2018年2月～2021年10月于首都医科大学附属北京世纪坛医院治疗的123例急性胰腺炎患者的临床资料,将其设为观察组,同时选取同时期进行健康体检的87例患者设为健康组。根据病情严重程度将观察组分为轻症组(n=44)和重症组(n=79),比较患者不同病情程度者淀粉酶、白蛋白、乳酸脱氢酶水平,分析影响急性胰腺炎发生的危险因素及血清淀粉酶、白蛋白联合乳酸脱氢酶检测对急性胰腺炎的临床诊断价值。结果 观察组患者淀粉酶、乳酸脱氢酶水平均高于健康组,白蛋白水平低于健康组(均P<0.05)。轻症组与重症组淀粉酶水平差异无统计学意义(P>0.05),轻症组患者乳酸脱氢酶水平及白蛋白水平均低于重症组(P<0.05)。经多因素Logistic回归模型分析结果得出,暴饮暴食、酗酒、淀粉酶、白蛋白、乳酸脱氢酶为影响急性胰腺炎发生的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线示：淀粉酶、白蛋白、乳酸脱氢酶单独检测为0.793、0.701、0.725,三者联合检测为0.896,三者联合检测AU...