超声造影剂促进野生型p53基因转染抑制大鼠卵巢癌生长的实验研究

目的 探讨超声辐照造影剂微泡促进野生型p53基因转染进而抑制大鼠卵巢癌生长的有效性。方法构建野生型p53真核质粒表达载体pcDNA3．1＋／p53，将40只卵巢癌荷瘤大鼠分成4组。第1组瘤体内注入造影剂微泡和野生型p53质粒混合物，并用超声辐照大鼠腹部瘤区；第2组注入裸质粒后予以超声辐照瘤体；第3组注射超声造影剂和基因混合物后无超声辐照；第4组仅注入裸质粒而无超声辐照。每组进行基因转染每周1次，共进行8次。2月后用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测野生型p53 mRNA在卵巢癌组织中的表达，Western Blot检测野生型p53基因蛋白表达。结果成功构建野生型p53真核质粒表达载体pcDNA3．1＋／p53，埋线法建立卵巢癌动物模型；用超声波辐照微泡促进基因转染后见p53基因转录及表达。第1组p53 mRNA的表达明显增强，高于其他3组，约是第2组的2．65倍，第4组的5．95倍。第2组高于未行超声辐照组，是第4组的2．23倍。第3、4组基因表达差异无统计学意义；Western Blot分析示p53基因蛋白表达的差异模式基本同mRNA，即第1组p53 mRNA的表达增强，高于其他3组，约是第2组的1．75倍，第4组的3．13倍；第2组高于未行超声辐照组，是第4组的1．79倍；第3、4组基因表达差异无统计学意义。结论瘤体内注射造影剂微泡和野生型p53质粒混合物后行超声辐照，可明显增加质粒基因在癌瘤组织中的导人及表达，超声联合造影剂微泡可作为卵巢癌基因治疗中促进基因转移的辅助方法。     

外周静脉注入超声造影剂介导p53基因治疗大鼠肝癌的实验研究

目的 :研究超声参数和超声造影剂对人野生型 p5 3基因导入大鼠肝癌细胞效果的影响 ,以探讨一种新型、高效的基因导入方法。方法 :采用免疫抑制法建立大鼠原位肝癌模型。将一定体积造影剂和一定数量的 p5 3质粒经股静脉注入后 ,立刻用二次谐波模式的超声经体表照射瘤区 ,并选用不同的时间和机械指数。 2 d后用半定量 RT-PCR法检测大鼠肝癌细胞内 p5 3m RNA的相对表达量。结果 :未导入 p5 3质粒的肝癌细胞内没有 p5 3m RNA的表达 ,随着质粒注入量的增加 ,基因表达量明显增多。造影剂能明显促进基因表达 ,与未注入者相比有显著性差异 (P<0 .0 0 1) ,并与造影剂的体积有关。超声照射可提高基因的转化率 ,并与照射时间和机械指数有关。结论 :经外周静脉注入超声造影剂和基因后用超声照射靶组织 ,是一种新型的基因导入方法 ,既可控制肝癌基因治疗的靶向性 ,又能提高外源基因的表达水平。     

超声引导下瘤体内注入超声造影剂和P53基因治疗大鼠肝癌的初步研究

目的　探讨超声引导下将超声造影剂和人野生型 p5 3基因直接注入瘤体内对大鼠肝癌基因表达的影响。方法　采用免疫抑制法建立大鼠原位肝癌模型。 2 4只实验Wistar大鼠随机分成 4组。第 1组 :超声引导下将基因直接注入瘤体内并不用超声照射 ;第 2组 :注入基因后用超声照射瘤体 ;第 3组 :注入造影剂和p5 3基因后不行超声照射 ;第 4组 :用超声照射注入造影剂和基因的瘤体。 48h后用半定量逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)测定肝癌细胞内 p5 3mRNA的表达情况。 结果　超声引导下可准确地将基因注入肝癌内 ,4组肝癌细胞内均有 p5 3mRNA的表达 ,第 4组的表达量最高 ,明显高于其他三组 ( P <0 .0 0 1)。第 2组的基因表达量次之 ,高于另外两组 (P <0 .0 5 )。第 1、3组间在外源基因表达上的差异没有显著性意义 (P >0 .0 5 )。结论　超声引导下瘤体内注射超声造影剂和p5 3基因后用超声照射 ,既可有效地控制肝癌基因治疗的靶向性 ,又能提高外源基因的表达量。     

超声造影剂无创性介导P53基因治疗肝癌的探讨

目的探讨超声破坏造影剂微气泡介导人野生型P53基因治疗大鼠肝癌的效果.方法将24只患有原位肝癌的Wistar大鼠随机分为4组:第1组:仅经股静脉注入P53质粒;第2组:输入P53质粒后,立刻用二次谐波超声经体表照射瘤区;第3组:注入造影剂和P53基因后不行超声照射;第4组:注入造影剂和基因后,立刻用超声照射瘤区. 48 h后用半定量RT-PCR法检测肝癌细胞、肺、肾细胞内P53 mRNA的相对表达量.结果 RT-PCR检测各实验组细胞内均有P53 mRNA的表达.第4组肝癌细胞内的基因表达量最高,与第1、2、3组间有显著性差异(P＜0.001);第2组与第1、3 组间有显著性差异(P＜0.05).超声照射的肝癌细胞内P53基因表达量增大,而未行超声照射的肝、肾细胞内则没有显著性变化.结论经外周静脉注入超声造影剂和治疗基因后用超声照射靶组织,是一种无创、高效、安全的靶向性基因导入技术.     

氟烷微气泡声学造影剂增强转移性肝癌声像图的初步研究

目的　应用经静脉二次谐波声学造影方法探讨转移性肝癌血供特点。方法　 3 5例患者共 79个转移性肝癌结节进行经静脉二次谐波声学造影检查。间歇成像由心电图R波触发 ,触发间隔为 1～ 3个心动周期。声学造影剂经左前臂静脉“弹丸式”注射。结果　注射造影剂后 15～ 18s[平均 (16.8± 1.5 )s]肝组织显影。肝动脉相 ,肿块区域早于周围肝组织 1～ 2个心动周期显影 ,造影剂迅速充盈 ,呈“淹没征”。增强效果 :I级 2 1个 ,II级 42个 ,III级 16个。 13个直径 >3 .0cm的瘤体内均有“蜘蛛网”样异常血管结构 ,66个直径 <3 .0cm瘤体中仅 15个显示“蜘蛛网”样血管。动态观察 ,肿块区域造影剂早于周围肝组织 10～ 15个心动周期消退。延迟成像 ,肝实质与瘤体回声对比度增大。结论　二次谐波声学造影是检测低速血流的敏感方法 ,有助于了解转移性肝癌的血供状况 ,对其诊断或鉴别诊断也有一定价值     

微泡造影剂联合超声介导KDR启动子-胸苷激酶基因靶向血管治疗小鼠肝癌

目的评估微泡造影剂SonoVue联合超声辐照介导KDR启动子-单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV-TK)系统(KDR-TK)结合更昔洛韦(GCV)靶向血管治疗小鼠肝癌的有效性。方法建立小鼠(C57BL/6J)肝癌皮下移植瘤模型40只,随机分为4组,分别经尾静脉团注磷酸缓冲盐溶液(PBS)、KDR-TK、KDR-TK、KDR-TK+SonoVue,后两组分别给予1MHz、2W/cm2、5min的超声辐照,24h后治疗组分别腹腔注射GCV0.1ml(100mg·kg-1·d-1),连续10d,检测肿瘤大小,计算抑瘤率,28d后处死小鼠行肿瘤微血管密度及组织病理学检查。结果抑瘤率在PBS组(A组)、KDR-TK/GCV组(B组)、KDR-TK+超声/GCV组(C组)、KDR-TK+超声+SonoVue/GCV组(D组)分别为0%、3.6%±2.7%、21.4%±2.9%和40.7%±4.5%(D组与B组,P<0.01;D组与C组,P<0.05;C组与B组,P<0.05);肿瘤微血管密度分别为48.8±5.1、44.2±6.4、27.4±3.2和12.3±1.4(B组与A组,P>0.05;C组与A组,P<0.05;D组与A组,P<0.01;D组与C组,P<0.05);HE染色C组、D组坏死病变明显。结论微泡造影剂增强超声辐照介导的KDR-TK基因靶向破坏小鼠肝癌微血管的效应,为肝癌的基因治疗提供一种可行、有效的方法。     

超声造影剂介导PTEN基因影响卵巢癌侵袭的实验研究

目的 研究超声介导造影剂增效PTEN基因在卵巢癌细胞中的转染，探讨该基因抑制肿瘤细胞侵袭的机制。方法分别于接种人卵巢黏液性囊腺癌细胞（SKOV3）的6孔板中每孔加入200μl造影剂和5μl脂质体，以诊断超声剂量辐照60s，细胞转化48h后，采用重组基底膜侵袭模型，观察转染前后SKOV3细胞侵袭力的变化。结果转染PTEN基因可以明显抑制肿瘤细胞的侵袭力。结论PTEN基因可以通过抑制肿瘤细胞侵袭力而抑制卵巢肿瘤的生长；超声介导造影剂增效基因转染，可望成为临床基因治疗的新手段。     

超声声学造影剂介导肝细胞生长因子基因转染的体外实验

目的 研究超声声学造影剂促进肝细胞生长因子(HGF)基因在大鼠肝星状细胞株(HSC-T6)中的转染效果.方法 将HSC-T6接种在24孔板中,随机分为5组:①空白对照组(C);②单纯质粒组(P);③载基因超声声学造影剂组(M);④质粒+超声组(P+U);⑤载基因超声声学造影剂+超声组(M+U).荧光显微镜及流式细胞仪检测pIRES2-EGFP/HGF在细胞内的表达及转染效率;MTT法检测该方法 对HSC-T6生长活性的影响;Western Blotting检测HGF蛋白的表达.结果 M+U组的绿色荧光强度及转染率均高于其他各组,并对细胞活性无明显影响,且HGF蛋白的表达均高于其他各组(P＜0.05).结论 超声声学造影剂可提高基因在体外培养HSC-T6的转染效率,并对细胞活性无明显影响,为提高非病毒载体的转染效率提供一个新策略.     

靶向声学造影剂的研究进展

关于声学造影剂的研究 ,196 8年Gramiak和Shah[1] 首次报道了注射盐水后用M型超声使主动脉根部结构显影增强 ,之后 ,开始研制出各种能增强灰阶信号和多普勒信号的造影剂应用于心脏及非心脏领域。第一代声学造影剂只能在右心系统显影。第二代造影剂经静脉注射后可通过肺循环达左心 ,使左心腔显影。第三代造影剂使用低弥散度、高分子量的气体成分 ,提高了在循环中的稳定性 ,可通过冠脉循环达到心肌显影的目的。而与微泡造影剂相关的各种新型超声显像技术也得到发展 ,如 :二次谐波显像、间歇式超声显像、多普勒组织成像等 ,提高了图像质量和…     

超声微泡造影剂介导EGFP质粒转染大鼠骨骼肌

目的 探讨增强型绿色荧光蛋白质粒(EGFP)在大鼠骨骼肌微血管通透性增加的条件下表达的可行性.方法 20只清洁级Sprague-Dawley(SD)大鼠,随机均分为裸质粒组(P)、质粒 超声组(P U)、质粒 微泡组(P M)和质粒 超声 微泡组(P U M)共4组进行实验.选择增强绿色荧光蛋白质粒与白蛋白微泡相混合,以超声介导白蛋白微泡破裂的方法 对大鼠骨骼肌行基因转染,转染7 d后,荧光显微镜下观察质粒在大鼠脊斜肌组织中的表达情况.结果 P、P M组大鼠脊斜肌组织中均未见增强型绿色荧光蛋白表达;P U组可见少量微弱绿色荧光,荧光强度较P和P M组明显增强(P<0.05),P U M组可见明显特异性增强型绿色荧光蛋白表达,荧光强度约为P、P M组的10倍,P U组的3倍(P<0.05);P U M组转染率为(42.72±10.07)%较之P U组(13.62±6.17)%明显增高(P<0.05).结论 超声介导微泡造影剂破裂造成的脊斜肌组织毛细血管通透性的增加,是血管内基因成功跨越内膜屏障的主要途径之一.     

超声造影剂在肝癌基因治疗中的靶向性实验研究

目的 探讨结合了肝细胞配体的超声造影剂在超声辐照下介导目的 基因转染肝癌细胞的可行性,寻找一种新的基因靶向导入方法.方法 制备肝细胞表面特异性配体半乳糖基化多聚赖氨酸(GPLL),并对产物进行红外光谱分析.将c-myc基因反义寡核苷酸(ASODN)、G-PLL与SonoVue微泡三者偶联,在超声波介导下,促使c-myc ASODN转染人肝细胞癌SMMC-7721细胞及肺腺癌A-549细胞(作对照),实验结束后行半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)以观察不同组问c-myc基因的表达情况.结果 超声介导微泡破裂可增加c-myc ASODN在SMMC-7721细胞和A-549细胞中的表达;SMMC-7721细胞加入G-PLL组中c-myc基因表达水平显著降低,差异有统计学意义(P＜0.01),而A-549细胞中加入与未加入G-PLL组间c-myc基因表达量的差异无统计学性意义(P＞0.05).结论 超声介导微泡造影剂破裂的方法可促进基因的转染,而超声联合肝细胞受体介导的微泡造影剂则更具有肝细胞靶向性,能有效地促进目的 基因在肝癌细胞中的表达,为肝癌基因治疗提供了新的途径.     

间歇式超声显像评价兔肝VX2肿瘤血流灌注的实验研究

目的 探讨应用时间触发间歇式超声显像观察兔肝VX2肿瘤血流灌注的作用。方法 经静脉注射氟碳微泡造影剂后，应用基波显像、间歇式显像观察兔肝VX2肿瘤血流灌注。结果 造影后，增强了正常肝组织显像，而肿瘤显像无明显增强，从而使肝肿瘤显像清晰。应用时间触发的间歇式显像造影增强稳定，持续时间长于常规谐波显像。结论 间歇式显像可明显增强兔肝VX2肿瘤显像效果，延长显像时间。     

自制包裹氟烷气体的表面活性剂类超声造影剂观察肝肿瘤血流实验研究

目的研究含氟烷气体的表面活性剂类超声造影剂对肿瘤血流信号增强的情况。方法5只荷肝VX2肿瘤的新西兰大白兔麻醉后，经腹部探测肝脏，显示肝肿瘤的血流信号。经耳缘静脉注射表面活性剂类超声造影剂，剂量0．1mg／kg，观察肿瘤周围血管及内部血流信号增强情况及持续时间。结果肝肿瘤周边及内部能量多普勒血流信号明显增强，且增强时间较长。结论表面活性剂类超声造影剂经外周静脉注射后血管二维及血流信号增强显著，值得进一步研究。     

低频超声照射SonoVue对绿色荧光蛋白质粒在小鼠肝癌移植瘤中表达的作用

目的 研究物理参数对体内基因转染率的影响,确定最佳剂量-效应关系.方法 建立小鼠(C57BL/6J)肝癌皮下移植瘤模型,经尾静脉注入绿色荧光蛋白质粒(pEGFP)和SonoVue混合物,给予不同辐照声强(1 W/cm2、2 W/cm2、3 W/cm2)、辐照时间(1 min、5 min、10 min)以及不同剂量SonoVue(30μl、60μl、90μl).流式细胞仪和荧光显微镜检测肿瘤细胞内绿色荧光蛋白表达.结果 pEGFP在肿瘤组织内的表达随辐照时间、辐照声强、造影剂剂量的增加而增多,持续增加辐照时间、声强和造影剂剂量并不能有效增加其转染率,2 W/cm2[(21.02±1.45)%]、5 min(23.22±1.91)%]、60μl SonoVue[(21.02±1.45)%]时,pEGFP在肿瘤组织内的表达达到最大.结论 不同物理参数对体内基因转染率有明显影响,2 W/cm2、5 min、60μl SonoVue的参数条件下,可达到最佳剂量-效应关系.     

超声微泡造影剂介导基因治疗卵巢癌的研究进展

卵巢癌基因治疗的关键在于如何安全高效地将外源性基因导入细胞。超声微泡造影剂作为新兴的基因转染载体,有望为卵巢癌基因治疗开辟新的路径。本文就超声微泡造影剂在卵巢癌基因治疗中的研究进展进行综述。     

新型造影剂与灰阶超声造影技术对肝肿瘤的诊断价值

目的探讨新型超声造影剂与实时灰阶造影匹配成像技术观察肝肿瘤的灌注过程及回声变化规律,探讨其对肝恶性肿瘤的诊断价值.方法 35例超声不能完全明确诊断或漏诊的肝占位患者,26例经手术或穿刺病理确诊,9例为造影CT、磁共振等临床资料证实,恶性肿瘤占28例.采用第二代新型造影剂SonoVue以及Technos DU6实时超声造影匹配成像技术.造影剂注射方法分别采用静脉快速团注法和慢注法两种.首先观察了正常肝、肝硬化注射造影剂后各个时相出现的时间及峰值,在此基础上观察了肝占位病变的造影剂灌注过程.结果显示典型的原发性肝癌23例均发生动脉早期强化,21例(91%)呈快速消退即"快进快出"型,另2例＜2 cm的高分化小肝癌表现为动脉早期强化,但消退缓慢.肝转移性肿瘤5例表现多样,呈动脉期或门脉期环状强化或不同程度强化,消退可快可慢.肝血管瘤3例动脉期瘤内无强化,门静脉期呈向心性填充增强,持续时间长,数分钟后消退.对原发性肝癌23例进行了两种不同注射方法的比较,发现团注法使肝癌病灶更快达到增强峰值,更有利于肝癌特征的显示.本组中31例进行了超声造影前、造影后、增强CT的诊断结果比较,肿瘤病灶的显示分别为76灶、99灶、75灶.11例恶性肿瘤病灶数目较造影前增多,其中87%(20/23灶)为3～10 mm小病灶.另5例显示原病灶范围较前增大.结论新型超声造影技术对肝占位病变的定性诊断明显优于常规超声;在显示肿瘤数目尤其发现微小病灶方面更优于增强CT,从而极大地提高了超声对肝占位病变的诊断价值.     

脉冲反向谐波实时超声造影对肝占位病变良恶性的鉴别诊断

目的探讨低机械指数实时超声造影鉴别肝占位病变良恶性的临床应用价值。方法采用静脉团注造影剂SonoVue和低机械指数脉冲反向谐波技术对192例肝占位病变(109例恶性肿瘤,83例良性病变)进行实时灰阶超声造影,将造影前后病灶评分与病理结果进行比较分析。结果超声造影前肝脏恶性肿瘤诊断的敏感性、特异性和准确性分别为52.3%、44.6.%和49.0%,造影后分别提高到89.0%、96.4%和92.2%(P<0.01)。结论低机械指数实时超声造影可明显增强对肝占位病变良恶性的鉴别诊断能力。