基于网络药理学与肠道菌群的柏子仁脂肪油改善Aβ25-35诱导小鼠脑损伤的作用研究

研究柏子仁脂肪油(Platycladi Semen oil, SP)对Aβ_25-35诱导小鼠脑损伤的保护作用及其机制,为临床治疗阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease, AD)提供理论依据。雄性昆明(KM)小鼠随机分为对照组、模型组(脑部注射200μmol·L^-1 Aβ_25-35溶液,0.15μL·g^-1)、阳性药多奈哌齐组(10 mg·kg^-1)及柏子仁脂肪油低、高剂量(0.5、1 mL·kg^-1)组。探究各组小鼠的学习记忆功能、神经元损伤、Aβ_1-42/Aβ_1-40、p-Tau、细胞凋亡、氧化应激相关指标、免疫细胞及鞘氨醇激酶1(sphingosine kinase 1, SPHK1)/鞘氨醇-1-磷酸(sphingosine-1-phosphate, S1P)/鞘氨醇-1-磷酸受体5(sphingosine-1-phosphate receptor 5, S1PR5)通路相关蛋白或mRNA水平...     

新型口服抗复发性多发性硬化药物——芬戈莫德

芬戈莫德(fingolimod)是鞘氨醇1-磷酸受体调节剂,于2010年9月由美国FDA批准用于治疗复发性多发性硬化。芬戈莫德的化学名为2-氨基-2-[2-(4-正辛基苯基)乙基]-1,3-丙二醇盐酸盐,分子式为C19H34ClNO2,相对分子质量为343.93。结构式见图1。1作用机制芬戈莫德经鞘氨醇激酶代谢转化为有活性的芬戈莫德磷酸盐。芬戈莫德磷酸盐是鞘氨醇1-磷酸受体调节剂,与鞘氨醇1-磷酸受体1,3,4,5有较高的亲和力。芬戈莫德磷     

1-磷酸鞘氨醇通过PI3K/Akt信号通路对冠心病大鼠心肌细胞凋亡的调控作用研究

目的:观察1-磷酸鞘氨醇通过磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphatidylinositol-3-OH kinase,PI3K)/蛋白激酶B (Protein kinase B,Akt)信号通路对冠心病(Coronary heart disease,CHD)大鼠心肌细胞凋亡的调控作用。方法:将45只清洁级Wistar雄性大鼠,随机分为假手术组、模型组和1-磷酸鞘氨醇(Sphingosine-1-phosphate,S1P)组,每组各15只。模型组和S1P组诱导CHD模型。模型诱导成功1周后,进行尾静脉注射给药。S1P组按1.0 mg/kg剂量给予S1P,假手术组和模型组分别给予等体积的生理盐水,每周1次,连续给药4周。采用TTC染色法测定各组大鼠的心肌梗死面积,使用TUNEL染色方法观察计算各组大鼠心肌细胞的凋亡指数,通过Western blot检测PI3K/Akt信号通路中相关蛋白PI3K、Akt及凋亡因子含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3 (Cysteinyl aspartate specific proteinase 3,Caspase-3)的表达情况。结果:TTC染色检测结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠均出现大面积的心肌梗死(P<0.01);与模型组比较,S1P组大鼠心肌梗死面积显著减小(P<0.01)。TUNEL染色结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠心肌细胞凋亡数量明显增加,其凋亡率显著升高(P<0.01);与模型组比较,S1P组大鼠心肌细胞的凋亡指数显著降低(P<0.05)。Western blot检测结果显示,各组间PI3K、Akt蛋白表达量无显著性差异(P>0.05);与假手术组比较,模型组心肌细胞内p-PI3K、p-Akt的表达量显著下降(P<0.01),Caspase-3的表达水升高(P<0.05);与模型组比较,S1P组p-PI3K、p-Akt的表达水平显著增加(P<0.01)。Caspase-3的表达水平降低(P<0.05)。结论:S1P可能是通过调节PI3K/Akt信号通路中相关蛋白的表达来有效抑制CHD大鼠心肌细胞凋亡的。     

和血柔肝方对肝纤维化大鼠SphK1/S1P/S1PR信号通路的影响

目的 观察和血柔肝方对肝纤维化大鼠SphK1/S1P/S1PR信号通路相关因子表达的影响,探讨其治疗肝纤维化的作用机制。方法 SPF级雄性SD大鼠随机分为对照组和造模组,造模组大鼠每周2次颈背部皮下注射60%CCl4溶液（CCl4∶橄榄油=3∶2）,剂量3 mL/kg,连续12周,复制肝纤维化大鼠模型。造模成功后,将造模组大鼠随机分为模型组、秋水仙碱组及和血柔肝方低、中、高剂量组,每组10只。各给药组分别予相应药液灌胃,对照组和模型组予等体积蒸馏水,每日1次,连续4周。给药结束后分别检测大鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天冬氨酸氨基转移酶（AST）,HE染色观察大鼠肝组织病理变化,RT-PCR检测大鼠肝组织鞘氨醇激酶1(SphK1)、1-磷酸鞘氨醇受体3(S1PR3)、细胞外信号调节激酶1(ERK1)、第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物基因（PTEN）、肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)及转化生长因子-β（TGF-β）m RNA表达,Western blot检测大鼠肝组织SphK1、S1PR3、ERK1、PTEN和TGF-β蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组大鼠体质量...     

二冬膏延缓胃癌发生的作用机制

目的:通过分析大鼠胃组织细胞凋亡和血浆差异代谢产物,探讨二冬膏延缓胃癌发生的作用机制。方法:大鼠随机分为正常组、模型组、维甲酸(12×10~(-3)g·kg~(-1))组、二冬膏低、高剂量(6,12 g·kg~(-1))组,除正常组外,其余大鼠ig N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)0.2 g·kg~(-1)建立模型,10 d/次,共9次。各组每天ig相应药物,正常组ig等体积生理盐水,治疗3个月后处理动物,苏木素伊红(HE)染色分析胃癌程度及病理变化的改善;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)测定胃组织中凋亡抑制基因B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)mRNA表达;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测胃组织细胞凋亡;血浆代谢组学寻找差异代谢产物。结果:与模型组比较,二冬膏低、高剂量组病变主要在良性的乳头状瘤和乳头状增生,说明二冬膏能够改善胃癌病变程度;低剂量组能明显降低胃组织Bcl-2 mRNA的表达(P0.01),TUNEL显示二冬膏低、高剂量组胃组织细胞凋亡数比模型组高。二冬膏低剂量血浆代谢产物中发现的鞘氨醇-1-磷酸(Sphingosine-1-phosphate),20-羟基-二十烷四烯酸(20-HETE),甘氨胆酸(Glycocholic acid)等与细胞凋亡相关。结论:二冬膏能够促进胃癌变大鼠胃组织发生细胞凋亡,延缓胃癌发生。     

芬戈莫德类似物的设计合成及抗肿瘤活性研究

目的对基于由冬虫夏草提取物多球壳菌素ISP-1结构改造而得到的药物芬戈莫德进行结构修饰,并初步考察其类似物的抗肿瘤活性。方法以不同的取代苯为原料,按照本课题组开发的芬戈莫德合成路线,经过傅克酰基化、亚硝基SN2取代反应、羰基还原、双亨利反应和硝基还原反应制得目标化合物。通过MTT方法,检测化合物对3种人类肿瘤细胞Siha、PC-3和MKN-45的抗肿瘤活性。结果制得芬戈莫德(1)及其18个类似物(2~19),化合物10、11、12具有与芬戈莫德相当的抗肿瘤活性。结论化合物2~10及12~19为未见文献报道的新化合物,为基于1-磷酸鞘氨醇(S1P)受体拮抗作用的抗肿瘤药物的发现提供依据。     

活血定喘汤对支气管哮喘患儿气道炎症及炎性因子水平的影响

目的:探讨活血定喘汤对支气管哮喘患儿气道炎症及炎性因子水平的影响。方法:将诊断为支气管哮喘的98例患儿,随机分为研究组和对照组各49例,对照组口服孟鲁司特钠片治疗,研究组在对照组基础上联合加用活血定喘汤治疗,比较两组患儿临床治疗总有效率和不良反应发生率,肺功能改善情况,同时检测并比较两组患者治疗前后的血清炎症因子[白细胞介素13(IL-13)、白细胞介素-4(IL-4)、γ-干扰素(IFN-γ)]、免疫细胞水平[嗜酸性粒细胞直接计数(EOS)、嗜酸性阳离子蛋白(ECP)、免疫球蛋白 E(IgE)、CD₄⁺、CD₄⁺/ CD₈⁺]以及血清1-磷酸鞘氨醇(S1P)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)表达水平。结果:治疗3个月后同组患儿FEV₁、FEV₁/FVC以及C-ACT评分均显著高于治疗前,而研究组的改善及变化幅度明显高于对照组(P<0.05); 两组患儿治疗的有效率差异具有统计学意义(P<0.05),研究组为89.80%,明显高于对照组的65.31%; 同组患者比较,治疗后的血清炎性因子(IL-4、IL-13)、免疫细胞水平(ECP、EOS、IgE、CD₈⁺)、S1P水平以及PI3K表达水平均显著低于治疗前,而CD₄⁺、INF-γ和CD₄⁺/ CD₈⁺则高于治疗前,且与对照组相比,研究组变化更明显(P<0.05); 两组患儿不良反应发生比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:活血定喘汤治疗儿童支气管哮喘临床疗效显著,可改善患儿体内血清炎症因子、PI3K以及 S1P水平,增强患儿肺功能和免疫功能。     

鞘磷脂及其代谢产物与多种疾病的研究进展

正鞘磷脂(sphingomyelin,SM)是生物膜组成中重要成分之一,随着人们对存在于动物和酵母中SM的深入研究发现,SM及其代谢产物如神经酰胺(ceramide,Cer)、鞘氨醇(sphingosine,Sph)、1-磷酸鞘氨醇(sphingosinephosphate,S1P)是一类重要具有生物活性的信号分子,它们参与调节细胞的生长、分化、衰老和死亡等许多重要信号转     

西替利嗪对P物质诱导皮肤细胞单核细胞趋化蛋白-1表达的影响

 目的研究西替利嗪对P物质诱导表皮角质形成细胞系HaCaT细胞和真皮成纤维细胞表达单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的影响。方法采用MTT法考察西替利嗪对两种皮肤细胞生存性的影响;ELISA方法测定P物质诱导两种皮肤细胞分泌MCP-1的时效关系与量效关系。以P物质刺激HaCaT细胞和真皮成纤维细胞,加入不同剂量的西替利嗪共孵育24h,测定西替利嗪对MCP-1表达的影响。结果以10^-8mol·L^-1P物质刺激HaCaT细胞24h可以显著增加HaCaT细胞和真皮成纤维细胞MCP-1的分泌量,不同浓度的西替利嗪均可以抑制皮肤细胞MCP-1的分泌。结论西替利嗪可能通过抑制趋化因子MCP-1的表达而发挥抗皮肤过敏作用。     

毛叶合欢的化学成分

目的研究毛叶合欢Albizia mollis的化学成分。方法采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶色谱及RP C-18柱色谱进行分离纯化,并运用波谱方法对所分得化合物进行结构鉴定。结果从毛叶合欢中分得了13个化合物,经波谱解析分别鉴定为白桦酸(1)、桉脂素(2)、麦角甾醇过氧化物(3)、金合欢酸内酯(4)、桦木醇(5)、表儿茶素(6)、(-)-表阿夫儿茶精(7)、β-香树酯醇(8)、ergosta-7,22-dien-3β-O-β-glycopyranoside(9)、3-吲哚甲酸(10)、1-O-十八烷酸甘油酯(11)、正二十七烷醇(12)、1-O-β-D-葡萄糖苷-(2S,3R,4E,8E)-2-N-(2′-羟基-二十一碳酰基)-十八碳鞘氨醇-4,8-二烯(13)。结论所有化合物均为首次从该植物中分得。     

田黄方抑制ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化作用及机制研究

目的基于1-磷酸鞘氨醇(S1P)/1型1-磷酸鞘氨醇受体(S1PR1)通路探讨田黄方抑制ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化的作用及相关机制。方法将40只ApoE~(-/-)小鼠随机分为模型组、田黄方低剂量组(1.5 g/kg)、田黄方高剂量组(4.5 g/kg)和阿托伐他汀组(10 mg/kg),每组10只,另选具有相同遗传背景的同龄野生型C57BL/6J小鼠10只为对照组。模型组与药物干预组均给予高脂饲料喂养8周,对照组给予普通饲料喂养。干预组每日灌胃相应药物,对照组与模型组给予等量生理盐水灌胃。12周后,取小鼠血清,分离主动脉,保存于-80℃冰箱。全自动生化分析仪检测血清中TG、TC、HDL-C、LDL-C水平,高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS/MS)检测血清中S1P含量;油红O染色法观察主动脉组织形态学变化;RT-PCR法检测肝脏与胆固醇逆转运相关蛋白CD36、ABCA1、SR-BI、LXRa和S1PR1 mRNA表达情况。结果模型组主动脉管腔内及主动脉根部可见较大的AS斑块形成,与模型组比较,干预组主动脉管腔内及主动脉根部的AS斑块面积显著减小(P0.05)。与对照组比较,模型组小鼠血清中TG、TC、LDL-C水平及CD36 mRNA表达升高(P0.01),HDL-C、S1P水平及ABCA1、SR-BI、LXRa和S1PR1 mRNA表达降低(P0.01)。与模型组比较,各给药组TG、TC、LDL-C水平及CD36 mRNA表达降低(P0.05,P0.01),HDL-C水平及ABCA1、SR-BI、LXRa mRNA表达升高(P0.05,P0.01)。结论田黄方具有调节血脂和抗AS的作用,其机制可能与其调控S1P-S1PR1通路介导胆固醇逆转运有关。     

荆芥1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合成酶基因克隆及生物信息学分析

目的 克隆荆芥1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合成酶(1-deoxy-D-xylulose 5-phosphate synthase,StDXS)基因,并进行生物信息学分析.方法 根据荆芥转录组数据获得的StDXS基因序列设计特异性引物,通过RT-PCR技术获得StDXS基因cDNA的全长序列,并进行生物信息学分析.结果...     

补肾化痰法经Sphk1通路调控肥胖PCOS雌鼠子宫内膜容受性的研究

目的:观察补肾化痰法调控肥胖多囊卵巢综合征(PCOS)雌鼠子宫内膜容受性(ER)的作用机制。方法:采用7～8周龄SD雌鼠,来曲唑加高脂乳剂建立肥胖PCOS模型以补肾化痰法治疗,结合阴道脱落细胞涂片、体质量、血清性激素和子宫形态学进行模型验证。取子宫内膜进行苏木精-伊红(HE)染色,ELISA法检测血清雌二醇(E_2)、孕激素(PROG)及睾酮(T)的表达,免疫组织化学法检测孕激素受体(PR)、雌二醇受体(E_2R)的表达水平,RT-PCR法检测雌鼠子宫鞘氨醇激酶1(Sphk1)、1型1-磷酸鞘氨醇受体(S1Pr1)、蛋白激酶(Akt)、细胞周期蛋白1(CyclinD1) mRNA的表达。结果:与空白组比较,模型组动情周期紊乱,体质量显著增加,腺体个数明显减少,子宫内膜发育受损,血清T浓度及子宫内膜PR、E_2R表达升高,血清PROG、E_2浓度及子宫内膜Sphk1mRNA、S1Pr1mRNA、AktmRNA、CyclinD1mRNA表达显著降低;与模型组比较,中药高剂量组体质量增长得到抑制,腺体个数明显增加,子宫内膜发育改善,血清PROG、E_2浓度及子宫内膜Sphk1mRNA、S1Pr1mRNA、AktmRNA、CyclinD1mRNA表达升高,血清T浓度及子宫内膜PR、E_2R表达降低。结论:补肾化痰法可能通过纠正肥胖PCOS雌鼠生殖性激素紊乱,调控PR、E_2R,激活Sphk1信号通路,促进子宫内膜血管生成,从而发挥改善子宫内膜容受性的作用。     

20(S)-原人参二醇对肺癌A549细胞增殖和荷瘤裸小鼠肿瘤生长的抑制作用

目的研究20(S)-原人参二醇对小细胞肺癌A549细胞增殖和荷瘤裸小鼠肿瘤生长抑制作用。方法采用噻唑蓝(MTT)法观察20(S)-原人参二醇对小细胞肺癌A549细胞增殖的抑制作用,流式细胞术测定20(S)-原人参二醇对小细胞肺癌A549细胞凋亡及周期的影响,并在裸小鼠人肺癌模型上观察20(S)-原人参二醇对荷瘤裸小鼠肿瘤生长的抑制作用。结果20(S)-原人参二醇对A549细胞具有明显的抑制作用并有剂量时间依赖关系,并且流式细胞仪检测时均出现典型凋亡峰,24小时凋亡率分别为32.47%、32.75%、33.51%。荷瘤裸小鼠动物实验表明,20(S)-原人参二醇对裸小鼠的肿瘤生长也具有明显的抑制作用,抑瘤率分别为18.78%、34.37%、50.02%。结论20(S)-原人参二醇对A549细胞的增殖和荷瘤裸小鼠肿瘤的生长具有明显的抑制作用。     

莪术醇β-环糊精包合物对食管癌TE-1细胞增殖、凋亡的影响及其机制研究

目的探讨莪术醇β-环糊精包合物对食管癌TE-1细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法采用饱和溶液法制备莪术醇与β-环糊精的包合物,红外光谱验证包合物的形成。不同浓度(25、50、100mg/L)莪术醇β-环糊精包合物处理食管癌TE-1细胞后,噻唑蓝[3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide,MTT]比色法测定细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期与凋亡情况。实时荧光定量PCR及2-ΔΔCt法定量分析不同处理组Survivin mRNA的相对表达量。Western blot检测Survivin蛋白表达。结果 MTT法检测结果显示,与对照组比较,莪术醇β-环糊精包合物各剂量组生长抑制率均明显升高,且随着剂量升高而增加,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术检测结果显示,莪术醇β-环糊精包合物处理可使细胞阻滞在G0/G1期与G2/M期,并且促进细胞凋亡。此外,与对照组比较,处理组细胞中Survivin mRNA与蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论莪术醇β-环糊精包合物能够抑制食管癌细胞TE-1的增殖,促进凋亡,对Survivin的抑制与其抑制食管癌细胞的恶性表型的作用相关。     

黄龙舒喘汤调控S1P/S1PR通路干预大鼠气道高反应的效应机制研究

目的 观察黄龙舒喘汤干预哮喘模型大鼠气道高反应的作用，探讨干预作用与S1P/S1PR通路的相关性。方法 将60只Wistar大鼠随机分为6组，即对照组、模型组、激素组、黄龙舒喘汤低、中、高剂量组。根据分组情况，给予相应的干预措施，并采用相应的方法检测。结果 经黄龙舒喘汤干预后，哮喘大鼠症状有不同程度减轻，气道阻力值(RI)均较模型组降低(P<0.05),能显著降低肺泡灌洗液(BALF)中总细胞、嗜酸性粒细胞(EOs)和中性粒细胞(NEUT)计数(P<0.05);肺组织病理可见激素组和各HLSC组可见不同程度的气管舒张、分泌物减少、气管周围炎症细胞减少；SphK2表达显著降低(P<0.05),S1PR2、S1PR3表达较模型组显著下调(P<0.05)。结论 采用黄龙舒喘汤干预哮喘大鼠模型，能减轻气道阻力，改善气道高反应性(AHR)和气道炎症细胞浸润，降低肺组织中表达增多的SphK2,其机制可能与抑制S1PR2/S1PR3介导的通路有关。     

蠲饮泄肺方通过SOCS1负调控JAK1/STAT1通路对气道黏液高分泌的作用

目的探讨蠲饮泄肺方对脂多糖(LPS)诱导的气道黏液高分泌的抑制作用及其机制。方法培养人支气管上皮16HBE细胞,分别用脂多糖作用6 h、0.005%浓度的蠲饮泄肺方相应处理细胞,并对细胞进行SOCS1-siRNA转染,荧光定量PCR技术(RTPCR)、Western blot法检测转染效果。根据不同的处理措施,分为空白对照组、试验1组(仅脂多糖刺激)、试验2组(脂多糖刺激+SOCS1-siRNA转染)、试验3组(脂多糖刺激+蠲饮泄肺方)、试验4组(脂多糖刺激+SOCS1-siRNA转染+蠲饮泄肺方)。Western blot法分别检测各组细胞裂解液中SOCS1、MUC5AC、磷酸化JAK1和STAT1表达量,同时检测JAK1、STAT1总蛋白,以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GADPH)蛋白表达量为内参。结果 RT-PCR、Western blot法检测SOCS1-siRNA转染效果明确。与空白对照组比较,试验1组细胞内SOCS1表达被抑制,MUC5AC、JAK1和STAT1磷酸化水平增高(P0.001);试验2组细胞内SOCS1表达被抑制及MUC5AC、JAK1和STAT1磷酸化水平增高更明显(P0.001);试验3组相比试验1组,细胞内SOCS1表达增高,MUC5AC、JAK1和STAT1磷酸化水平下降(P0.001);试验4组相比试验2组,细胞内SOCS1表达增高,MUC5AC、JAK1和STAT1磷酸化水平下降(P0.001)。使用蠲饮泄肺方后能改善脂多糖和SOCS1-siRNA对细胞内SOCS1表达的抑制,降低JAK1和STAT1磷酸化水平及MUC5AC的表达。结论蠲饮泄肺方能抑制脂多糖诱导的MUC5AC高表达,从而抑制气道黏液高分泌,与SOCS1抑制JAK1/STAT1信号通路、产生负反馈调节、降低磷酸化水平有关。     

甘草苷抑制UVB诱导HaCaT细胞凋亡的体外研究

目的:研究甘草苷抑制UVB诱导HaCaT细胞凋亡的机制。方法:以不同浓度的甘草苷作用于人皮肤角质形成细胞(HaCaT细胞),MTT法筛选药物的有效安全浓度;用30 m J/cm2的UVB照射HaCaT细胞,制备光老化模型,MTT法检测细胞增殖率;试剂盒法测定SOD、GSH-Px活性;流式细胞仪检测各组细胞中ROS含量和总凋亡率;Western Blot法检测各组细胞上清中Bax、Bcl-2蛋白表达量。结果:10-7、10-6、10-5mol/L甘草苷对HaCaT细胞无明显促增殖与抑制作用(P0.05);甘草苷可提高SOD、GSH-Px活性,降低ROS含量和细胞凋亡率,抑制Bax蛋白的表达,促进Bcl-2蛋白的表达(P0.05或P0.01)。结论:甘草苷能抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡,其机制可能与抗氧化损伤、抑制Bax蛋白的表达、促进Bcl-2蛋白的表达有关。     

温针疗法联合豨莶草对风湿性关节炎大鼠滑膜细胞活性及SphK1/S1P/S1PR1信号的影响

摘要：目的：探讨温针疗法联合豨莶草对风湿性关节炎大鼠滑膜细胞活性及SphK1/S1P/S1PR1信号的影响。方法：将50只大鼠按照随机数字法分为正常组、RA组、温针组、药物组及联合组，均10只。除正常组外其余大鼠均建立RA大鼠模型，建模成功后，温针组进行温针治疗，药物组大鼠灌胃豨莶草提取物，联合组温针治疗后灌胃豨莶草提取物，其余组灌胃同体积的生理盐水。采用排水法检测各组大鼠足部体积；HE染色观察裸关节病理；提取各组滑膜细胞，MTT法检测存活，Hoechst检测凋亡率；免疫印迹检测SPHK1、S1PR1及ERK1/2蛋白。结果：与正常组相比，RA大鼠治疗14d、18d及21d的足部体积均升高（P＜0.05），与RA组相比，温针组、药物组及联合组大鼠治疗同一时间足部体积均降低（P＜0.05），与温针组相比，联合组上述指标降低（P＜0.05）；正常组大鼠裸关节面光滑、滑膜完整、无炎症浸润及水肿，RA组大鼠裸关节炎性细胞浸润严重，滑膜组织增厚，关节腔隙狭窄及软骨破坏。温针组及药物组大鼠裸关节炎性浸润减少，滑膜增生降低，与药物组相比，联合组大鼠裸关节滑膜厚度未见增厚炎性细胞浸润减少；与正常组相比，RA组滑膜细胞存活OD值升高，凋亡率无意义，与RA组相比，温针组存活OD值降低，凋亡率升高，存在差异（P＜0.05），与温针组相比，联合组滑膜细胞存活OD值降低，凋亡率升高，存在差异（P＜0.05）；与正常组相比，RA组SPHK1、S1PR1及ERK1/2蛋白升高（P＜0.05），与RA组相比，温针组组SPHK1、S1PR1及ERK1/2蛋白均降低（P＜0.05），与温针组相比，联合组上SPHK1、S1PR1及ERK1/2蛋白更低（P＜0.05），其余组别无意义（P＞0.05）。结论：风湿性关节炎大鼠采用温针疗法联合豨莶草干预可抑制滑膜细胞活性，改善大鼠足部体积，这可能与抑制SphK1/S1P/S1PR1信号转导相关     

补骨脂素对UVB诱导HaCaT细胞凋亡及相关细胞因子表达的影响

目的:研究补骨脂素对UVB诱导HaCaT细胞凋亡及相关细胞因子表达的影响。方法:体外培养人皮肤角质形成细胞(HaCaT细胞),取对数生长期的细胞,随机分为空白对照组、UVB组和补骨脂素组,并用30mJ·cm~(-2)的中波紫外线(UVB)照射UVB组和补骨脂素+UVB组,制备光老化模型。MTT法分别测定补骨脂素对正常HaCaT细胞及光老化HaCaT细胞增殖率的影响;活性氧自由基(ROS)试剂盒测定各组细胞中ROS含量;Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒测定各组细胞凋亡率;蛋白免疫印迹(Western Blot)法测定各组细胞中p53、Bcl-2及Caspase-3蛋白的表达量。结果:与空白组比较,10~(-7)、10~(-6)、10~(-5) mol·L~(-1)补骨脂素对HaCaT细胞增殖率无显著影响(P0.05),可用于后续实验研究。与空白组比较,UVB组ROS含量和细胞凋亡率显著升高(P0.01),Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P0.01),p53及Caspase-3蛋白表达水平显著升高(P0.01)。与模型组比较,10~(-7)、10~(-6)、10~(-5) mol·L~(-1)补骨脂素+UVB组ROS含量和细胞凋亡率显著降低(P0.05,P0.01),Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P0.05,P0.01),p53及Caspase-3蛋白表达水平显著下降(P0.05,P0.01)。结论:补骨脂素可以通过降低细胞ROS含量和凋亡率,调控凋亡相关细胞因子p53、Bcl-2及Caspase-3的表达水平,抑制UVB诱导的细胞凋亡。