人血浆百草枯高效液相色谱-串联质谱法的建立与评价

目的建立测定人血浆百草枯浓度的高效液相色谱-串联质谱法并评价。方法用甲醇蛋白质沉淀法对血浆样品预处理后,以乙腈-水(含200 mmol/L甲酸铵和0.1%甲酸)为流动相梯度进样,流速为0.4 mL/min。通过色谱柱(Waters XBridge BEH HILIC,2.5μm,2.1 mm×100 mm)分离样品。以ESI正离子模式、多反应离子监测(MRM)模式监测百草枯(m/z 186.1→171.1作为定量离子对)。用该方法检测临床患者血浆百草枯浓度,用ROC曲线评价血浆百草枯浓度和百草枯中毒严重指数(SIPP)对临床结局的判断价值。结果血浆百草枯浓度在50～10 000 ng/mL时,线性关系良好(R~2=0.997),最低定量下限为50 ng/mL。低(100 ng/mL)、中(2 000 ng/mL)、高(8 000 ng/mL)3个浓度水平质控品的不精密度均符合要求,且无基质效应。处理后样品室温放置6 h内稳定,样本反复冻融3次对结果无影响。31例中毒患者SIPP为17.76(0.30～90.91)h·mg/L,死亡组SIPP高于存活组(P0.05)。SIPP的ROC曲线下面积为0.889,最佳临床临界值为11.679 h·mg/L。结论本法灵敏、准确、快速、特异性好,适用于临床检测百草枯中毒患者。     

高效液相色谱串联质谱法测定血清非结合雌三醇的前处理研究

目的优化高效液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)测定血清游离雌三醇(uE3)的前处理方法。方法以活性炭吸附血清为研究基质,通过加入已知量的雌三醇(E3)标准品及E3-2-3-4-13 C3内标,在LC-20AD XR高效液相色谱系统和API 5500串联四级杆质谱仪上对E3检测的色谱条件、质谱条件及萃取条件等进行优化。结果色谱条件:选用菲罗门Knietex色谱柱(100.0mm×2.1mm,2.6μm);有机相为甲醇,水相为0.1mmol/L氟化铵水溶液,8min梯度洗脱。质谱条件:选用电喷雾(ESI)负离子模式和多反应监测(MRM)模式分析,选择质荷比(m/z)287→m/z 145作为E3的定量离子对,m/z 287→m/z 171作为定性监测离子对;选择m/z 290→m/z 148作为内标的定量离子对,m/z 290→m/z 174作为定性监测的离子对。萃取条件:萃取剂为正己烷/乙酸乙酯(50/50,v/v),样品与萃取剂的比例为1∶2,萃取率可达85.71%。结论 E3检测的色谱条件、质谱条件、萃取条件已得到全面优化,为后续建立LC-MS/MS测定人血中uE3的参考方法打下良好基础。     

超高效液相色谱串联质谱法测定消毒产品中违禁抗真菌药物

摘要 目的 建立测定消毒产品中违禁添加抗真菌药物成分的方法。 方法 采用超高效液相色谱串联质谱法,对消毒剂中添加的9种违禁抗真菌药物成分做出测定方法的建立和验证。 结果 以1%甲酸乙腈溶液为流动相、用PSA去除杂质和外标法定量。酮康唑、氟胞嘧啶、氟康唑、灰黄霉素、联苯苄唑、硝酸益康唑、硝酸咪康唑、盐酸萘替芬和克霉唑9种抗真菌药物成分都确定了线性范围和最低检出限,线性相关系数(r2)均＞0.99;加标回收率为72.0%～106.4%,相对标准偏差为2.52%～6.15%。 结论 该方法适用于各种剂型消毒产品中多组分抗真菌药物的检测,为消毒产品的检测和监管提供了技术支持。     

高效液相色谱-质谱测定罐装饮料中9种双酚-二缩水甘油醚

目的建立了罐装饮料中9种双酚-二缩水甘油醚的快速分析方法。方法采用叔丁基甲醚提取,固相萃取柱净化,高效液相色谱-质谱联用测定双酚-二缩水甘油醚。结果在5.0～60.0μg/L浓度范围内,线性关系良好,在3个添加水平下,9种双酚-二缩水甘油醚的平均回收率为78.2%～105.1%,相对标准偏差为4.6%～9.0%。结论该方法准确、灵敏度高,可同时对9种目标物进行准确定性和定量,适合于罐装食品中9种双酚-二缩水甘油醚残留量的测定。     

同位素稀释-超高效液相色谱串联质谱法测定人体血清/全血中维生素B1

目的建立快速、灵敏测定人体血清/全血中维生素B_1的稳定同位素稀释-超高效液相色谱串联质谱(ID-UPLC-MS/MS)法。方法血清/全血样本经蛋白质沉淀处理,上清液用双蒸水稀释,采用Thermo Hypersil GOLD a Q色谱柱分离,以10 mmol/L甲酸铵水溶液~乙腈为流动相,梯度洗脱。采用电喷雾离子源电离,正离子模式下,采用多反应监测(MRM)扫描方式检测,维生素B_1和同位素内标的离子通道分别为m/z 265.2→122.0和269.2→122.0。结果维生素B_1在0.446~89.2 ng/m L范围内线性关系良好,r=0.999 6;低、中、高质控样本的日内、日间精密度的相对标准偏差(RSD)均5.34%;平均加样回收率在96.9%~102.6%,RSD均6.61%。结论建立的方法简单快速、灵敏度好、准确度高,可用于人体血清/全血中维生素B_1的测定。     

串联质谱和高效液相色谱-串联质谱二次筛查联合应用于新生儿MMA筛查

目的探讨串联质谱和高效液相色谱-串联质谱二次筛查联合应用在甲基丙二酸血症(MMA)中的筛查价值。方法收集新生儿串联质谱初筛结果中C3、C3/C2、C3/C0单一或多个指标异常的新生儿干血滤纸片标本,用高效液相色谱-串联质谱的方法定量检测原始血片中甲基丙二酸、甲基枸橼酸和高半胱氨酸,对二次筛查后疑似阳性的新生儿进行召回复查,并进行尿气相色谱/质谱检测。临床诊断患儿进一步予以基因检测进行确诊。结果共收集423例C3、C3/C2、C3/C0单一或多个指标异常的新生儿筛查标本,初筛阳性率约为1%,行联合筛查检测结果发现8例标本中甲基丙二酸和同型半胱氨酸表达水平明显升高,召回复查尿气相色谱质谱提示甲基丙二酸轻度升高。结论串联质谱和高效液相色谱-串联质谱联合应用可以提高新生儿MMA筛查的阳性预测值、降低假阳性率,在新生儿遗传代谢病筛查中具有重要价值。     

高效液相色谱-串联质谱法检测血清油酸及其在胰岛素抵抗中的应用

目的建立高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)检测血清油酸(OA),初步评估OA在2型糖尿病(T2DM)胰岛素抵抗(IR)中的作用。方法用OA-[~(13)C_5]作为同位素内标物,OA和OA-[~(13)C_5]的离子对分别为281.3/281.3和286.3/286.3。ZORBAX SB-Aq C18反相色谱柱,流动相A为超纯水,流动相B为甲醇乙腈(1∶1,v/v),梯度洗脱,流速0.3 mL/min。根据EP15-A3文件,考察精密度和正确度、线性范围、稳定性、携带污染率等性能以评价该方法的可靠性。选取临床确诊T2DM患者109例及体检健康者100例,用HPLC-MS/MS检测血清OA,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)评价IR,进一步分析OA与IR的关系。结果建立的检测OA的HPLC-MS/MS特异性好,在10～1 000μmol/L范围内线性关系良好,y=0.007 55x+0.004 83,r=0.997 7,定量限(LLOQ)为10μmol/L,批内不精密度(以变异系数CV表示)≤1.62%,实验室内CV≤1.73%,方法精密度较好,适合临床血清样品的测定。与健康人对照组血清OA水平(113.20±58.00)μmol/L比较,T2DM组血清OA水平(425.58±220.17)μmol/L升高,且对照组和T2DM组OA与HOMA-IR均呈正相关。以OA诊断IR的AUC为0.689,当根据约登指数确定cut-off值为235.8μmol/L时,敏感性为70.4%,特异性为63%;当OA联合FPG诊断IR时,AUC增至0.806,且与OA诊断IR的AUC比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论建立了科学、高效定量检测血清OA浓度水平的HPLC-MS/MS,为动态监测代谢性疾病人群OA含量的变化提供了可靠的方法。     

羊水样本卵磷脂和鞘磷脂检测超高效液相色谱串联质谱方法的建立及应用

目的建立检测羊水中卵磷脂和鞘磷脂(L/S)的超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)方法,以便准确、高效地预测胎儿肺成熟度。方法收集孕32~39周孕妇分娩时的羊水样本23份。依据新生儿Apgar评分标准,有3例胎儿胎肺未成熟、20例胎儿胎肺成熟。另收集孕18周孕妇羊水样本7份作为基线对照,建立检测羊水中卵磷脂和鞘磷脂水平的UPLC-MS/MS方法,计算卵磷脂/鞘磷脂(L/S)比值,同时采用板层小体计数(LBC)法检测板层小体(LB),评价2种方法在预测胎肺成熟度中的价值。结果建立的检测羊水中卵磷脂和鞘磷脂的UPLC-MS/MS方法精密度良好,离子峰强度和保留时间均在可检测范围内,主成分分析(PCA)显示6个质控样本聚类良好。以L/S比值=10作为判断胎肺成熟度与不成熟的临界值,UPLC-MS/MS的敏感性和特异性均为100%。以LB=50×10^9/L作为判断胎肺成熟度与不成熟的临界值,LBC法的敏感性和特异性分别为80%和95%。结论建立了检测羊水中卵磷脂和鞘磷脂水平的UPLC-MS/MS方法,其结果可靠,可以准确、高效地预测胎肺成熟度。     

Ag/H柱脱氯-超高效液相色谱-质谱法测定出厂水消毒副产物

目的 建立Ag/H柱脱氯-超高效液相色谱—质谱法检测出厂水中消毒副产物。方法 样品经Ag/H固相萃取柱除去余氯,再经0.22μm的膜过滤后,在HSS T3色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm)上进行分离,采用甲醇-0.000 5%甲酸水溶液梯度洗脱方式,电喷雾负离子(ESI-)模式,多反应监测模式(MRM)进行质谱分析。为校正基质效应,采用基质匹配标准曲线法对一氯乙酸、二氯乙酸、一溴乙酸、一氯一溴乙酸、二溴乙酸、三氯乙酸、一溴二氯乙酸、二溴一氯乙酸和三溴乙酸9种卤乙酸进行定量分析。结果 9种卤乙酸在0.5～100μg/L内均具有良好的线性关系(r≥0.9995),检测限(S/N=3)为0.012～0.50μg/L,定量限(S/N=10)为0.036～1.50μg/L。以自来水为基底根据卤乙酸含量的不同分别进行5.0、20、80μg/L浓度的加标试验(n=6),平均回收率在75.3%～106.3%,相对标准偏差范围在0.58%～12.8%。结论 该分析方法可用于出厂水中微量卤乙酸的检测。     

基于超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱和网络药理学探讨通脉颗粒治疗脑卒中的作用机制

目的 基于超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱(UHPLC-QTOF-MS)和网络药理学方法,探讨通脉颗粒治疗脑卒中的作用机制。方法 采用UHPLC-QTOF-MS技术鉴定通脉颗粒的化学成分;通过TCMSP、TTD和PubMed等数据库检索通脉颗粒活性成分作用靶点和脑卒中相关靶点;采用STRING数据库构建关键靶点的蛋白互作网络;采用DAVID数据库对关键靶点进行基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果 从通脉颗粒中鉴定出丹酚酸B、葛根素和藁本内酯等96个化学成分,筛选到38个活性成分和作用于脑卒中靶点55个,核心靶点包括前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)、核因子κB(NFκB)和核因子红细胞系2相关因子2(NRF2)等,关键通路主要涉及缺氧诱导因子1(HIF-1)、肿瘤坏死因子(TNF)和磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K-Akt)等。结论 通脉颗粒中丹酚酸B、葛根素和藁本内酯等主要活性成分,通过作用于PTGS2、NFκB和NRF2等靶点,调控HIF-1、TNF和PI3K-Akt等信号通路发挥抗脑卒中的作用。     

超高效液相色谱串联质谱法检测人肺组织、支气管黏膜和支气管分泌液中奈诺沙星浓度及临床应用

目的建立一种快速、准确地检测人体肺组织、支气管黏膜和支气管分泌液中奈诺沙星浓度的超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)方法,并将该方法应用于临床样品检测。方法色谱柱为ACE UltraCore 2.5 super C18(4.6 mm×50 mm,2.5μm),流动相为0.3%甲酸水溶液-甲醇,采用电喷雾离子源、正离子多反应监测进行分析扫描。内标为苹果酸奈诺沙星-D3。样品经乙腈沉淀蛋白后离心,取上清液稀释后进样。方法学验证中用0.9%NaCl溶液作为替代基质代替支气管黏膜和支气管分泌液。利用经方法学验证过的检测方法进行组织穿透性研究样品的检测,通过肺组织、支气管黏膜和支气管分泌液与血浆浓度的比值评价奈诺沙星的组织体液穿透性。结果该方法测定奈诺沙星在组织体液中的线性范围均为0.0200~10.0 mg/L,检测下限均为0.0200 mg/L。肺组织样品及替代基质样品的各质控浓度测定结果的批内和批间精密度均≤6.0%,准确度偏差均≤11.5%。肺组织内标归一化基质效应因子为96.5%~99.3%,变异系数均≤1.5%。0.9%NaCl溶液替代支气管黏膜及支气管分泌液的精密度和准确度偏差分别≤2.8%和≤10.3%。肺组织和替代基质中奈诺沙星的总体回收率分别为95.0%和102.8%,变异系数分别为1.0%和1.5%。肺组织穿透性研究结果显示5例需行肺叶切除术患者口服奈诺沙星500 mg,每日1次,连续服药(4±1)d后,体内药物分布达到稳态,肺组织、支气管黏膜和支气管分泌液中浓度与血浆浓度比值分别为3.72~6.56、4.03~9.51、1.18~1.88。结论该研究建立了一种准确、方便检测人肺组织、支气管黏膜和支气管分泌液中奈诺沙星浓度的UPLC-MS/MS法,其方法学验证结果均符合生物样品分析的要求。组织穿透性结果显示奈诺沙星在肺组织、支气管黏膜和支气管分泌液中穿透性良好。     

固相萃取-反相高效液相色谱法同时测定血清中3种抗癫痫药物

目的　应用固相萃取-反相高效液相色谱法测定血清中抗癫痫药物。方法　用 ElutBond C18小柱预处理样品,甲醇为洗脱剂;采用 Waters Nova RC18 柱,流动相为甲醇∶水=45∶55;检测波长230nm,流速1ml/min,内标(苯乙酮)法定量。结果　苯巴比妥、苯妥英、卡马西平的浓度线性范围分别为4.1~62.6μg/ml(r=0.9968)、3.9~60.1μg/ml(r=0.9971)和 1.6~21.2μg/ml(r=0.9945),最低检测限分别为 0. 05μg/ml、0. 05μg/ml 和 0. 01μg/ml;相对回收率分别为 90. 6% ~103.6%、93.4%~118.3%和91.2%~101.1%;批内变异系数均小于 6.0%,批间变异系数均小于8.0%。结论　固相萃取-反相高效液相色谱法简便、灵敏、准确、稳定,适合于以上 3 种抗癫痫治疗药物的同时监测。     

高效液相色谱-质谱法测定复方消毒产品中季铵盐成分

摘要 目的 建立测定复方消毒产品中季铵盐成分的高效液相色谱-质谱法检测方法。方法 样品经甲醇提取,经腈基修饰色谱柱分离,以5 mmol/L乙酸铵甲醇溶液-5 mmol/L乙酸铵水溶液为流动相,梯度洗脱,外标法进行定量分析。结果 12种季铵盐在0.04~0.6 mg/L质量浓度范围内线性关系良好,相关系数均大于0.995。季铵盐的检出限为0.001~0.02 mg/L,定量下限为0.02~0.04 mg/L。样品基质在0.04、0.32和0.56 mg/L 3个加标水平下的平均回收率为80.2%~119%,相对标准偏差为0.22%~9.88%。结论 该方法操作便捷,灵敏度高,精密度良好,能同时检测且不会互相干扰,适用于复方消毒产品中季铵盐成分的定量检测。     

高效液相色谱-串联质谱法测定人血浆中异烟肼、利福平及其在健康男性体内的药物代谢动力学研究

目的?建立可靠的测定人血浆中异烟肼（INH）和利福平（RFP）浓度的高效液相色谱－串联质谱法,用于研究健康男性体内的药物代谢动力学特征。方法?以稳定同位素作为内标,血浆样品经甲醇沉淀蛋白质处理后检测。INH采用Atlantis HILIC（50 mm×2.1 mm,3 μm）色谱柱,以水和5 mmol／L甲酸铵90%乙腈水溶液（均含0.01%甲酸）为流动相;RFP 采用Syncronis C18（50 mm×2.1 mm,5 μm）色谱柱,以乙腈和50%乙腈水溶液为流动相;二者均为梯度洗脱。使用电喷雾离子源,正离子多反应监测方式进行检测。结果?INH、RFP 分别在5～5 000 ng／mL、10～10 000 ng／mL范围内线性关系良好（r＞0.99）。方法专一性强,精密度以变异系数表示,均小于7%,无明显基质效应。结论?本方法操作简便,特异性高,可用于人体药物代谢动力学及治疗药物监测等研究。     

高效液相色谱-质谱法同时检测兔血浆中3种草乌成分

目的 建立高效液相色谱-质谱检测血浆新乌头碱、乌头碱和次乌头碱浓度的方法.方法 采用Agilent 1200系列的高效液相色谱仪和Bruker esquire HCT质谱仪检测.兔血浆在碱性条件下经乙醚萃取,以乙腈∶0.1%碳酸氢铵(60∶40)为流动相,ZORBAX SB-C18色谱柱分离,质谱电喷雾离子化源(ESI),选择离子监测、内标法定量.结果 新乌头碱、乌头碱、次乌头碱3种物质的线性范围宽,线性关系良好,定量下限分别为1.0、0.4和0.5 μg/L;血浆的萃取回收率高,在84.17%～98.06%;3种成分的日内、日间精密度相对标准偏差均小于10%.结论 该色-质联用分析方法准确、灵敏度高,可用于急性草乌中毒患者的血浓度监控及药代动力学和毒代动力学研究.     

同位素稀释超高效液相色谱-串联质谱法检测人血清中维生素K1含量

目的建立同位素稀释超高效液相色谱-串联质谱法测定人血清中维生素K_1含量。方法采用AB Sciex API 4000三重四级杆质谱仪,以稳定同位素标记的2H7-维生素K_1为内标,利用甲醇沉淀血清中的蛋白质,然后加入正己烷进行液液萃取,离心后上清液经氮气吹干,用乙腈复溶。用电喷雾离子源(ESI)在正离子模式下,以MRM模式采集数据。结果该方法的定量下限为0.1 ng/m L,线性范围为0.1~20 ng/m L,r=0.999 2,日内、日间精密度的CV≤7.78%,回收率在92.23%~99.32%;样品室温放置4 h,处理后自动进样器放置24 h,于-80℃环境中反复冻融3次,稳定性均良好;检测1 108份血清样品结果显示90.61%在参考区间内。结论建立了测定人血清中维生素K_1含量的同位素稀释超高效液相色谱-串联质谱法,该法准确度高、检测限低,分析时问题,适合批量处理样品。     

同位素稀释超高效液相色谱串联质谱法检测血浆18-羟皮质酮方法的建立及初步临床应用

目的 建立一种同位素稀释超高效液相色谱串联质谱法(isotope dilution ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry,ID-UPLC-MS/MS)检测血浆18-羟皮质酮(18-Hydroxycorticosterone,18...     

高效液相色谱-串联质谱法在检测绝经后妇女血清中雌激素及其代谢物中的应用

目的 建立一种高灵敏度的高效液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS),分析绝经后妇女血清中包含雌酮(E1)、雌二醇(E2)及其羟基化、甲基化、葡萄糖醛酸结合/硫酸结合(-G/S)等代谢产物的水平。方法 采用叔丁基甲醚液-液萃取法,结合β-葡萄糖醛酸苷酶/芳基硫酸酯酶水解及丹磺酰氯对萃取后的血清样品进行衍生化处理。以同位素标记的雌酮-d4作为内标,采用Waters UPLCⅠ-Class/Xevo TQS液质联用系统测定。以ACQUITY UPLC BEH C18 (2.1 mm×100 mm, 1.7μm)为色谱柱,水/甲醇(含0.05%甲酸和2 mmol/L甲酸铵)为流动相,0.3 mL/min流速梯度洗脱。柱温为50℃,进样量10μL。电喷雾离子源(ESI)正离子模式下扫描,多重反应监测(MRM)下测定,分析时间7 min。结果 各类雌激素定量下限低至1～2 pg/mL,平均加标回收率在90.3%～111.3%之间。绝经后妇女血清各类雌激素总量远高于临床常规雌激素指标E2的水平,并以E1-G/S和16α-羟基雌酮结合型(16OHE1-G/S)水平相对较高。各类雌激素-G/S结合型水...     

超高效液相色谱串联质谱同时检测人血清5种甾体激素方法学及生物参考区间的建立

目的 建立超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)同时测定人血清中睾酮(T)、双氢睾酮(DHT)、雄烯二酮(AD)、脱氢表雄酮(DHEA)和17α羟孕酮(17OHP)的方法,并确定表观健康人群血清中5种甾体激素的参考区间。方法 血清样品沉淀后经SOLAμHRP固相萃取柱纯化,采用Poroshell 120 ECC18色谱柱分离,用含0.05%甲酸的30%乙腈溶液和90%乙腈溶液梯度洗脱。采用电喷雾正离子多反应监测模式检测,采用同位素内标法定量检测甾体激素的浓度。对建立的UPLC-MS/MS方法进行全面的性能验证,并建立适用于上海地区人群人血清5种甾体激素的参考区间。结果 UPLC-MS/MS检测人血清中5种甾体激素的最低定量限为0.01～0.10 ng/mL,标准曲线范围覆盖1 000倍,r²值均>0.999 5,线性良好,样本经稀释后可报告范围覆盖5 000倍。5种分析物批内与批间的准确度为95.0%～105.6%,精密度均<8%。8种结构类似物对目标分析物均无干扰,高三酰甘油不影响检测结果,溶血可导致DHEA检测值降低。各分析物的提取回收率为...     

同位素内标-液相色谱-串联质谱法测定动物性食品中氟虫腈及其代谢物残留

采用通过式固相萃取技术,建立动物性食品中氟虫腈及其代谢物的同位素内标-超高效液相色谱-串联质谱(U-PLC-MS/MS)的检测方法.样品采用含1％(体积分数)甲酸的乙腈提取,加入同位素内标,PRiME HLB柱净化,以BEH C18为分离柱,用甲醇-1 mmoL乙酸铵(含0.1％甲酸)为流动相进行梯度洗脱,在负离子多反...