FGF3和FGF10对人卵巢癌SKOV3细胞迁移和侵袭的影响及其与Wnt/β-catenin信号通路的关系

目的 探讨FGF3和FGF10对人卵巢癌SKOV3细胞株迁移和侵袭的影响及其与Wnt/β-catenin信号通路的关系。方法 体外培养人卵巢癌SKOV3细胞,采用人工合成siRNA干扰细胞的FGF3和FGF10基因,运用Real-time PCR和Western blot分别从mRNA水平和蛋白水平检测干扰效果。Transwell检测FGF3和FGF10蛋白表达下调后细胞迁移和侵袭能力的变化。采用LiCl激活Wnt/β-catenin信号通路,运用Real-time PCR检测FGF3和FGF10基因的变化。结果 FGF3和FGF10基因沉默组细胞迁移和侵袭能力与阴性对照（NC）组细胞、未处理组SKOV3细胞相比明显减弱（P<0.05）,NC组与未处理组SKOV3细胞迁移和侵袭能力差异无统计学意义（P>0.05）。 激活Wnt/β-catenin信号通路后,FGF3和FGF10基因水平增高。结论 FGF3和FGF10基因受Wnt/β-catenin信号通路的调控,促进人卵巢癌SKOV3细胞的迁移和侵袭。     

人上皮性卵巢癌组织中PFTK1的表达及其对细胞迁移、侵袭及增殖能力的影响

目的:研究PFTAIRE蛋白激酶1（PFTAIRE protein kinase 1,PFTK1）在人上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer,EOC）组织中的表达,以及PFTK1基因的沉默对人卵巢癌细胞迁移、侵袭及增殖能力的影响。方法: 随机选取我院2015年6月至2016年11月收治的25例EOC患者为研究对象,采用Western blot检测癌组织以及癌旁组织中PFTK1蛋白的表达情况。选取PFTK1高表达的人卵巢癌细胞株SKOV3为研究对象,转染PFTK1-siRNA后,采用流式细胞仪检测PFTK1基因的沉默对SKOV3细胞周期的影响,采用细胞迁移和侵袭实验（Transwell）检测SKOV3细胞迁移、侵袭能力的变化,采用平板克隆形成实验检测SKOV3细胞增殖能力的变化。结果:Western blot检测结果显示,EOC患者癌组织中的PFTK1蛋白表达量显著高于癌旁组织（P＜0.01）;流式细胞仪检测结果显示,PFTK1-siRNA组细胞出现明显的生长抑制,细胞多停滞在G0/G1期,与对照组相比差异显著（P＜0.01）;细胞迁移和侵袭实验（Transwell）结果显示,PFTK1-siRNA组细胞的迁移和侵袭能力与对照组比较显著下降,且差异均显著（P＜0.01）;平板克隆形成实验结果显示,PFTK1-siRNA组细胞增殖能力显著降低,与对照组相比差异显著（P＜0.01）。结论:PFTK1在人EOC癌组织中呈现高表达状态;PFTK1基因沉默后,EOC细胞株SKOV3的细胞迁移、侵袭及增殖能力均受到不同程度的抑制,这将为基因治疗人卵巢癌提供一定的理论依据。     

柠檬酸合成酶对卵巢癌SKOV3细胞上皮间质转化的影响

目的:探讨柠檬酸合成酶（citrate synthase,CS）对上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer,EOC）细胞SKOV3上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transformation,EMT）及生物学行为的影响。方法:利用Lipofectamine 2000体外瞬时转染化学法合成的CS siRNA,通过实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qRT-PCR)和Western blot检测转染效率;Transwell实验检测转染前后SKOV3细胞侵袭和迁移能力的变化;Western blot检测转染前后上皮标记分子E-cadherin、间质标记分子Vimentin蛋白水平和Wnt通路关键分子β-catenin蛋白水平,实时荧光定量PCR检测转染前后EMT相关转录因子Slug、Snail和Twist的mRNA水平。结果:siRNA干扰序列显著降低SKOV3细胞中CS表达;CS低表达显著抑制SKOV3细胞的侵袭和迁移能力,促进上皮标记分子E-cadherin表达,抑制间质标记分子Vimentin表达,降低Wnt通路关键分子β-catenin表达;EMT相关转录因子Snail和Twist表达显著降低(P＜0.001,P＜0.01),Slug表达下降不显著(P＞0.05)。结论:CS低表达显著抑制卵巢癌SKOV3细胞EMT,其机制可能是通过降低Snail和Twist转录因子实现的,为卵巢癌的转移治疗提供初步的实验及理论基础。     

过表达KLF4通过Wnt/β-catenin信号通路抑制胃癌细胞EMT和细胞周期的实验研究

目的:探讨过表达KLF4通过Wnt/β-catenin信号通路抑制胃癌细胞上皮-间质转化和细胞周期的作用机制。方法:将课题组前期已成功转染过表达KLF4的BGC-823细胞分为KLF4过表达载体组(BGC823-OE组)、空病毒载体组(BGC823-NC组)和未经处理的BGC-823细胞组（BGC823-Ctrl组）。Western blot和qRT-PCR检测KLF4、EMT和Wnt信号通路相关蛋白和mRNA在三组细胞中的表达水平。CCK-8实验、划痕实验、Transwell迁移实验、平板克隆实验和流式细胞术观察各组细胞的增殖能力、迁移能力、克隆形成能力和细胞周期变化情况。结果:Western blot和qRT-PCR实验结果显示BGC823-OE组KLF4蛋白和mRNA表达水平明显升高。上皮-间质转化的上皮标志物E-cadherin蛋白和mRNA表达水平升高,间质标志物N-cadherin蛋白和mRNA表达水平降低。Wnt信号通路下游靶基因β-catenin和Cyclin D1的蛋白和mRNA表达水平降低。CCK-8增殖实验结果显示BGC823-OE组的增殖能力下降。划痕实验和Transwell迁移实验结果显示BGC823-OE组的迁移能力下降。平板克隆结果显示BGC823-OE组的克隆能力下降。流式细胞术结果显示BGC823-OE组G0/G1期比例增高,S期比例降低。结论:过表达KLF4可能通过Wnt/β-catenin信号通路抑制胃癌细胞EMT及阻滞胃癌细胞的细胞周期。     

沉默单羧酸转运体4对前列腺癌PC3细胞恶性生物学行为的影响

目的：探讨沉默单羧酸转运体4（monocarboxylate transporter 4,MCT4）对前列腺癌PC3细胞增殖、迁移和侵袭的影响 及其可能的分子机制。方法：利用RNA干扰技术分别将siRNA-MCT4（si-MCT4）和阴性对照质粒（si-NC）转染进PC3细胞,培养 96 h后用乳酸测定法检测转染后PC3细胞培养液中乳酸含量, 用CCK-8法、Transwell小室法分别检测PC3细胞的增殖、迁移和侵 袭能力, 用Western blotting检测沉默效果及细胞中 integrin β4-FAK-SRC-MEK-ERK 信号通路相关蛋白（integrin β4、p-FAK、 p-SRC、p-ERK1/2、p-MEK1/2）和EMT相关蛋白（E-cadherin、N-cadherin）的表达水平。结果：成功构建沉默MCT4的PC3细胞株。 与对照组比较,si-MCT4组PC3细胞培养液中乳酸含量显著降低（P<0.01),细胞的增殖、迁移和侵袭能力均显著降低（P<0.05或 P<0.01）;si-MCT4组PC3细胞中integrin β4、p-FAK、p-SRC、p-ERK1/2、p-MEK1/2 及 N-cadherin 水平显著降低（均 P<0.01）, 而 E-cadherin表达水平显著升高（P<0.01）。结论：沉默MCT4表达可显著抑制前列腺癌PC3细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其机制 可能与抑制细胞培养液中的乳酸水平和细胞中integrin β4-FAK-SRC-MEK-ERK信号通路及EMT相关蛋白的表达有关。     

LncRNA MALAT1通过激活Wnt/β-catenin通路调控Saos-2细胞自噬、增殖、迁移及侵袭北大核心

目的:观察LncRNA MALAT1对Saos-2细胞自噬、增殖、迁移及侵袭的影响,并探讨其作用机制。方法:干扰LncRNA MALAT1在Saos-2细胞中的表达水平,CCK8法检测细胞增殖能力,流式细胞技术检测细胞凋亡及周期情况,细胞划痕实验及Transwell实验检测细胞迁移及侵袭改变,透射电镜观察自噬小体,Western Blot、RT-PCR检测自噬相关因子Beclin1、LC3、p62表达差异及LncRNA MALAT1对Wnt/β-catenin通路的影响。结果:干扰LncRNA MALAT1后,Saos-2细胞自噬水平明显升高,Beclin1、LC3表达水平明显升高(P<0.05),而p62的表达水平显著下降(P<0.05);细胞增殖、迁移和侵袭能力显著下降(P<0.05),Wnt/β-catenin通路相关因子Wnt3a、β-catenin的表达水平显著下降(P<0.05)。结论:LncRNA MALAT1可以通过激活Wnt/β-catenin通路调控Saos-2细胞自噬、增殖、迁移和侵袭。     

lncRNA PVT1沉默对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移及STAT3通路的影响

目的:研究沉默变异性浆细胞瘤异位1（plasmacytoma heterotopic 1,PVT1）基因对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移、信号转导及转录活化因子（STATs）3通路的影响。方法:体外培养卵巢癌SKOV3细胞株,设计PVT1 siRNA序列,转染细胞,分为siRNA组、阴性对照组（NC）、空白对照组（BC）,利用qRT-PCR检测各组细胞PVT1相对表达量,利用MTT法检测细胞增殖情况,利用划痕实验检测细胞迁移能力,利用Transwell实验检测细胞侵袭能力,利用WB法检测STAT3通路相关蛋白表达情况。结果:转染后,siRNA3组细胞中PVT1表达水平较BC组与NC组显著降低（P＜0.05）;转染后,与BC组与NC组比较,siRNA3组细胞增殖率较BC组与NC组显著降低（P＜0.05）,迁移、侵袭细胞数显著降低（P＜0.05）,p-STAT3蛋白,MMP2、MMP9、CD44、PCNA蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）。结论:沉默PVT1可能抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移与侵袭,其具体机制可能与STAT3信号通路有关。     

siRNA沉默结肠癌转移相关基因1表达对人类卵巢癌细胞株侵袭转移的影响

目的 检测结肠癌转移相关基因1（MACC1）在卵巢癌细胞株中的表达,并探讨用siRNA技术抑制其表达对卵巢癌细胞生物学行为的影响.方法 应用实时荧光定量PCR （RT-qPCR）及Western blot法检测OVCAR3、ES-2、SKOV3、HO-8910卵巢癌细胞株中MACC1的表达,合成MACC1特异性siRNA并转染OVCAR3细胞,利用RT-qPCR筛选并鉴定MACC 1基因有效沉默后,应用体外黏附实验、Transwell迁移及侵袭实验、体外血管拟态实验检测MACC1基因沉默后OVCAR3细胞的体外黏附、迁移、侵袭及血管生成能力的变化.结果 OVCAR3细胞较其他卵巢癌细胞株高表达MACC1.MACC1基因沉默后,OVCAR3细胞的体外黏附能力受到不同程度的抑制;Transwell迁移实验中,MACC1 siRNA干扰的OVCAR3细胞（干扰组）转入底层膜的细胞数为（245.5±12.8）个,低于阴性对照组和空白对照组[分别为（500.3±16.5）、（496.3±13.1）个,均P＜0.05]; Transwell侵袭实验中,干扰组转入底层膜的细胞数为（185.3±14.1）个,低于阴性对照组和空白对照组[分别为（405.7±9.1）、（416.3±11.5）个,均P＜0.05];体外血管拟态显示干扰组细胞多呈散在分布,连接减少,形成的完整结构少.结论 利用siRNA技术抑制MACC1基因表达可有效抑制卵巢癌OVCAR3细胞的体外转移和侵袭能力,MACC1有望成为卵巢癌治疗的靶基因.     

过表达KLF4 通过Wnt/β-catenin 信号途径调控膀胱癌细胞上皮间质转化及迁移

[摘要] 目的：探讨Krüppel 样因子4（KLF4）调控膀胱癌细胞EMT 及迁移的作用及其机制。方法：在膀胱癌5637 和T24 细胞中构建稳定过表达KLF4 的实验组（LV-KLF4）和阴性对照组（LV-NC）,用qPCR 和WB 实验验证KLF4 mRNA 和蛋白的表达水平。用Transwell 小室法检测LV-KLF4 组、LV-NC 组细胞的迁移能力变化,用WB 检测EMT 相关标志物上皮钙黏蛋白、神经钙黏蛋白、波形蛋白及Wnt 信号通路相关蛋白的表达水平,用免疫荧光技术检测过表达KLF4 后细胞内β -catenin 的分布变化情况。结果：成功构建KLF4 过表达的5637 和T24 细胞。与LV-NC 组比较,LV-KLF4 组细胞中KLF4 mRNA 及蛋白表达水平升高（均P<0.01）,上皮钙黏蛋白的表达水平升高（P<0.01）,神经钙黏蛋白和波形蛋白的表达水平降低（均P<0.01）,总β -catenin、核β-catenin、MMP9 及c-Myc 表达水平显著降低（均P<0.01）,细胞的迁移能力显著下降（P<0.01）,细胞内β -catenin 蛋白荧光表达减弱。结论：过表达KLF4 可能通过调控Wnt/β -catenin 信号通路抑制EMT过程,从而抑制膀胱癌5637和T24 细胞的迁移。     

RBM8A基因对子宫内膜癌HEC-1A细胞增殖、迁移和凋亡的作用及其机制

目的探讨沉默RBM8A基因表达对子宫内膜癌HEC-1A细胞生物学行为的影响及其可能机制。方法设计RBM8A基因靶向的发夹状shRNA,筛选出最佳shRNA沉默片段,构建携带有目的基因的重组慢病毒干扰载体并感染HEC-1A细胞,通过嘌呤霉素筛选出稳定敲低RBM8A基因的细胞作为实验组(shRBM8A),同时设计无意义序列的shRNA作为对照组(shControl)。CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell检测细胞迁移和侵袭能力,流式细胞计数法检测细胞凋亡,Western blot法分析凋亡相关蛋白、上皮间质转化(EMT)信号转导通路相关蛋白的表达。结果与shControl组比较,敲低RBM8A后HEC-1A细胞增殖减慢,凋亡率增加,且迁移与侵袭能力受到明显抑制(P<0.05),凋亡相关蛋白cleaved-caspase 9和cleaved-caspase 3表达增加,EMT相关蛋白E-cadherin表达升高,Vimentin表达降低。结论沉默RBM8A基因可抑制子宫内膜癌细胞增殖、迁移、侵袭并促进细胞凋亡,抑制EMT信号转导通路可能是其作用机制。     

STC1诱导上皮-间质转化促进肺癌细胞的侵袭和迁移

背景与目的：斯钙素1（stanniocalcin 1,STC1）与癌症的发展和不良预后相关,但STC1对肺癌细胞转移的影响及其作用机制目前还未完全阐明。探讨STC1对肺癌细胞侵袭和迁移的影响及其可能的内在分子机制。方法：构建STC1过表达的细胞系HLEC-STC1及对照细胞系HLEC-EV,STC1沉默的细胞系A549-STC1 siRNA及对照细胞系A549-EV;采用Transwell和划痕实验检测细胞的侵袭和迁移能力;采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）和蛋白质印迹法（Western blot）检测上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）标志物的mRNA和蛋白质水平变化;并使用细胞免疫荧光技术进一步验证细胞EMT标志物的表达和定位;采用Western blot检测EMT相关信号通路蛋白和转录因子的水平。结果：与对照细胞相比,过表达STC1的HLEC-STC1细胞的侵袭和迁移能力增强,STC1沉默的A549-STC1 siRNA细胞的侵袭和迁移能力减弱（P＜0.05）;过表达STC1的HLEC-STC1细胞中上皮标志物上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）的表达下调,间质标志物神经型钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（vimentin）及肿瘤干细胞标志物上皮细胞黏附分子（epithelial cell adhesion molecule,EpCAM）表达上调（P＜0.05）;低表达STC1的A549-STC1 siRNA细胞中E-cadherin的表达上调,N-cadherin、vimentin及EpCAM的表达下调（P＜0.05）;同时,HLEC-STC1细胞中细胞外调节蛋白激酶信号通路（extracellular signal-regulated protein kinase,ERK）及Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路激活相关的磷酸化（p）-ERK和β-catenin的水平升高,转录因子E盒结合锌指蛋白1（zinc finger E-box-binding homeobox 1,ZEB1）和锌指转录因子1（Snail1）的表达水平上调,A549-STC1 siRNA细胞中的结果则相反（P＜0.05）。结论：STC1可能通过激活ERK和Wnt/β-catenin信号通路上调转录因子ZEB1和Snail1的表达水平,从而诱导EMT促进肺癌细胞的侵袭和迁移。     

lncRNA ZFPM2-AS1在膀胱癌组织中的表达及对膀胱癌T24细胞生物学特性的影响

目的探究lncRNA ZFPM2-AS1在膀胱癌组织中的表达和对膀胱癌T24细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭的影响。方法QPCR检测膀胱癌组织和细胞系中lncRNA ZFPM2-AS1的表达;将阴性对照siRNA和lncRNA ZFPM2-AS1 siRNA转染至膀胱癌T24细胞中,qPCR检测转染后细胞中lncRNA ZFPM2-AS1表达,MTT检测细胞增殖,克隆形成检测细胞克隆形成能力,细胞划痕检测细胞迁移,Transwell检测细胞侵袭,Western blot检测细胞中Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达。结果膀胱癌组织中lncRNA ZFPM2-AS1的水平高于癌旁组织;与正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1相比,T24、J82、56373种膀胱癌细胞株中lncRNA ZFPM2-AS1表达水平均高于正常膀胱上皮细胞,且差异有统计学意义(P<0.01)。与沉默对照组相比,沉默ZFPM2-AS1组T24细胞中lncRNA ZFPM2-AS1表达显著降低(P<0.01),细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力显著降低(P<0.01),细胞中Wnt/β-catenin信号通路蛋白β-catenin及其下游蛋白c-Myc和Cyclin D1表达显著降低,p-β-catenin蛋白表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.01)。结论LncRNA ZFPM2-AS1在膀胱癌中高表达,沉默LncRNA ZFPM2-AS1能够抑制膀胱癌细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

毛兰素通过Hedgehog 信号通路调控结直肠癌HT29 细胞的上皮间质转化和血管生成

目的： 基于Hedgehog 信号通路探讨石斛提取物毛兰素（erianin,ER）抑制结直肠癌HT29 细胞上皮间质转化（EMT）和血管生成的作用机制。方法: 将HT29 细胞分为空白对照组、ER-L（25 μg/mL）组、ER-M（50 μg/mL）组、ER-H（75 μg/mL）组、 ER-H（75 μg/mL）+PM（Hedgehog 通路激活剂,1.5 μmol/L）组。MTT法检测细胞增殖活力,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,划痕实验和Transwell 实验检测细胞迁移与侵袭能力,血管拟态形成实验检测血管生成能力,WB法检测与EMT进程、Hedgehog信号通路和拟态血管生成相关蛋白质的表达。结果: HT29 细胞增殖活性随着ER质量浓度的升高而逐渐降低（P<0.05）;与空白对照组比较,ER各组细胞克隆形成率、迁移与侵袭能力、血管形成能力、间质标志蛋白（N-cadherin、vimentin）、血管生成相关蛋白（VEGF、VE-cadherin）及Hedgehog 通路相关蛋白（SHH、GLI1、SMO、c-Myc）表达均显著下降（均P<0.05）,上皮标志蛋白（E-cadherin）、Hedgehog 通路中融合蛋白抑制剂（SUFU）蛋白表达均显著上升（均P<0.05）;PM 处理在一定程度上逆转了ER 对于HT29细胞增殖、EMT和血管生成的抑制作用（均P<0.05）。结论: ER可以抑制结直肠癌HT29细胞的增殖、迁移与侵袭、EMT和血管生成,其机制可能与抑制Hedgehog信号通路激活有关。     

AQP1通过Wnt通路促进乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移与侵袭

目的:探讨过表达水通道蛋白1（aquaporin 1,AQP1）基因对人乳腺癌细胞MCF-7增殖、迁移、侵袭能力的影响,分析其对Wnt通路的调控作用。方法:构建和包装pBabe-puro-AQP1逆转录病毒载体,建立稳定过表达AQP1基因的MCF-7细胞。细胞免疫荧光染色法检测外源性AQP1在MCF-7细胞内的定位,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和Western blot检测AQP1 mRNA及蛋白表达变化;采用CCK-8法检测细胞的增殖活性;流式细胞法检测细胞周期;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell法检测细胞的侵袭能力;基因表达谱芯片、Western blot检测转染后Wnt细胞通路相关基因表达改变。结果:稳定过表达AQP1后MCF-7细胞增殖、迁移、侵袭能力显著增加,差异有统计学意义（P＜0.001）。基因表达谱芯片结果显示,过表达AQP1后22个差异表达基因富集于Wnt细胞信号通路,mRNAs表达明显增强（P＜0.000 1）,Wnt细胞通路关键基因β-catenin及下游靶基因细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、C-Myc蛋白表达也显著增加。结论:AQP1可能通过激活Wnt信号通路促进MCF-7细胞增殖、迁移与侵袭。     

lncRNAHOXA-AS2靶向miR-520a-3p调控卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的：探究长链非编码RNA HOXA-AS2（lncRNA HOXA-AS2）与微小RNA-520a-3p（miR-520a-3p）之间的靶向关系及其对卵巢癌SKOV3 细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法：qPCR检测lncRNA HOXA-AS2 与miR-520a-3p 在多种卵巢癌细胞（SKOV3、HO8910、OVCAR3 细胞）及正常卵巢上皮细胞HOSE中的表达水平。生物信息学手段预测HOXA-AS2 与miR-520a-3p之间的靶向关系并用双荧光素酶报告基因实验验证。将si-HOXA-AS2、miR-520a-3p mimic、anti-miR-520a-3p 和相应对照片段分别或共转染SKOV3 细胞,MTT、Transwell 和Western blotting 法分别检测各组SKOV3 细胞增殖、迁移、侵袭及相关蛋白（CyclinD1、p21、p27、MMP-2、MMP-9、MMP-14）表达情况。结果：与HOSE细胞相比,多种卵巢癌细胞中HOXA-AS2 均呈高表达（均P<0.05）、miR-520a-3p 均呈低表达（均P<0.05）;HOXA-AS2 可靶向下调miR-520a-3p 的表达。si-HOXA-AS2 和miR-520a-3p mimics 组SKOV3 细胞的增殖、迁移及侵袭能力均较对照组均显著降低（ 均P<0.01）,且p21、p27 蛋白表达显著升高,而CyclinD1、MMP-2、MMP-9、MMP-14 蛋白表达显著减少（均P<0.01）;si-HOXA-AS2+anti-miR-520a-3p 组SKOV3 细胞增殖、迁移及侵袭能力较si-HOXA-AS2 和si-HOXA-AS2+anti-miR-NC 组显著增强（均P<0.05）。结论：lncRNA HOXA-AS2 通过靶向抑制miR-520a-3p表达进而增强卵巢癌SKOV3 细胞的增殖、迁移及侵袭能力。     

卵巢癌相关成纤维细胞通过上皮间质转化促进卵巢癌细胞SKOV3侵袭的研究

摘 要：［目的］ 研究癌相关成纤维细胞的条件培养基对卵巢癌细胞侵袭能力的影响及作用机理。［方法］ 原代培养人卵巢正常成纤维细胞（ NOF）和癌相关成纤维细胞（CAF）,并收取条件培养基NOFcm和CAFcm。用无血清的培养基DMEM、NOFcm和CAFcm分别处理SKOV3细胞,诱导SKOV3细胞发生上皮间质转化（EMT）,通过形态观察和Western blot 验证。形态上发生上皮间质转化（EMT）的SKOV3细胞,用transwell小室及三维培养实验检测细胞的侵袭能力的改变。［结果］ CAF的条件培养基能在体外诱导卵巢癌细胞SKOV3在形态上发生改变：细胞连接疏松,部分细胞呈梭形,且明显下调E-cadherin蛋白表达量,明显上调Vimentin蛋白表达量。Transwell 侵袭实验显示CAFcm处理后的SKOV3穿透matrigel胶的细胞数（284.00±32.86）相比于无血清的DMEM组（60.60±11.72）和NOFcm组（116.60±14.22）,数量明显增多(P=0.000374和P=0.001258);三维培养实验中只有CAFcm组和NOFcm组能形成克隆球,而在无血清的DMEM组不能形成克隆球,CAFcm组（37.75±1.70）相比于NOFcm组（14.5+±1.29）,形成的克隆球明显增大,向外侵袭能力增强,数量增多(P<0.001)。［结论］卵巢癌CAF通过诱导卵巢癌细胞发生EMT,进而促进卵巢癌细胞的侵袭能力。     

miR-509-5p通过靶向HMGA2调控非小细胞肺癌H1299细胞增殖、迁移和侵袭及其机制探讨

目的:探讨miR-509-5p通过靶向HMGA2对非小细胞肺癌H1299细胞增殖、迁移和侵袭的调控作用及其机制。方法:体外培养人正常肺细胞株CCD-19LU和肺腺癌细胞株A549、H1299,采用qRT-PCR检测miR-509-5p的表达;转染miR-509-5p mimics构建miR-509-5p过表达的H1299细胞后,采用MTT和克隆形成实验检测细胞的增殖能力,Transwell小室实验检测细胞的迁移和侵袭能力,Western blot检测TWIST1、β-catenin和AXIN1蛋白的表达。通过生物信息学分析预测HMGA2可能是miR-509-5p的靶点,并采用双荧光素酶报告基因系统和Western blot检测miR-509-5p和HMGA2的靶向关系。转染干扰质粒载体pLL2G-shHMGA2构建HMGA2沉默的H1299细胞,采用MTT实验、克隆形成实验和Transwell小室实验检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力,Western blot检测TWIST1、β-catenin和AXIN1蛋白的表达。结果:与CCD-19LU细胞相比,A549和H1299细胞中miR-509-5p表达明显降低（P<0.05）,且在H1299细胞中低于在A549细胞中的表达（P<0.05）。与miR-NC组相比,miR-509-5p组细胞的增殖、迁移和侵袭能力均明显减弱（P<0.05）,TWIST1和β-catenin蛋白的表达明显降低（P<0.05）,而AXIN1蛋白的表达明显升高（P<0.05）;野生型miR-509-5p组细胞的荧光素酶活性明显低于miR-NC组（P<0.05）,而野生型anti-miR-509-5p组细胞的荧光素酶活性明显明显高于anti-miR-NC组（P<0.05）;miR-509-5p过表达可抑制HMGA2表达,反之则促进其表达。沉默HMGA2表达后,H1299细胞的变化趋势与miR-509-5p过表达的结果相一致。结论:miR-509-5p可通过靶向HMGA2调控非小细胞肺癌H1299细胞的增殖、迁移和侵袭,其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

溶酶体组织蛋白酶L对人卵巢癌SKOV3细胞迁移及侵袭的作用

目的 探讨溶酶体组织蛋白酶L（Cathepsin L）是否通过上皮-间充质转化（EMT）影响卵巢癌细胞的侵袭及迁移能力。方法 荧光定量PCR法检测人卵巢癌细胞ES-2、SKOV3、OV1以及OV2中CathepsinL的表达水平;设计并合成靶向Cathepsin L的特异性shRNA,通过脂质体转染法转染Cathepsin L表达最高的卵巢癌细胞SKOV3以构建稳定低表达Cathepsin L细胞株,Western blot和定量PCR法验证shRNA的干扰效率;划痕实验及Transwell法检测干扰后细胞的迁移及侵袭能力,Western blot法检测EMT相关指标E-cadherin和N-cadherin以及其上游信号分子Snail、p-AKT的变化。结果 四株卵巢癌细胞中,SKOV3的Cathepsin L表达水平最高（以此为参照）,而ES-2、OV1以及OV2细胞的表达水平分别为0.72±0.04、0.34±0.03和0.55±0.05。Cathepsin L-shRNA转染SKOV3细胞后,SKOV3/shRNA中的Cathepsin L的表达水平较空白组和对照组显著下降;划痕12 h和24 h后, SKOV3/shRNA组的细胞迁移能力明显受到抑制;SKOV3、SKOV3/Con和SKOV3/shRNA组的穿膜细胞数分别为（93.67±8.62）、（90.33±12.22）、（35.67±4.73）,与对照组相比,SKOV3/shRNA组细胞侵袭能力受到显著抑制（P<0.01）;Cathepsin L干扰组细胞的E-cadherin表达增加,N-cadherin的表达降低;此外,Cathepsin L干扰组细胞的Snail、p-AKT表达较对照组显著下降。结论 Cathepsin L可以促进卵巢癌细胞的迁移和侵袭;其机制可能与调节EMT的上游信号分子Snail、p-AKT有关。提示Cathepsin L在卵巢癌的发生发展中起重要作用。