牛血浆纤维粘连蛋白对人牙髓成纤维细胞增殖,DNA合成,细胞…

采用四唑盐比色法（ＭＴＴ）、３Ｈ－ＴｄＲ掺入试验、细胞大小测定的图象分析等方法，观察不同浓度牛血浆纤维粘连蛋白（ＦＮ）和人工合成肽段（ＲＧＤＳ，４０ｕｇ／ｍｌ）对外培养的人牙髓细胞的影响。ＦＮ（２０、４０ｕｇ／ｍｌ）可促进牙髓成纤维细胞增殖、刺激细胞ＤＮＡ合成，ＦＮ（１０、８０ｕｇ／ｍｌ）、ＲＧＤＳ（４０ｕｇ／ｍｌ）和空白组成对牙髓细胞无上述效应。４种浓度ＦＮ和ＲＧＤＳ（４０ｕｇ／ｍｌ）均使牙髓细     

牛血浆纤维粘连蛋白对培养的人牙髓细胞增殖,表型的影响

目的：将传代的人牙髓细胞培养于加入１０％ＦＣＳ的ＤＭＥＭ液中，其中含５０μｇ／ｍｇＬ－ＶｉｔＣ、１０ｍｍｏｌ／Ｌβ－磷酸甘油钠，观察牛血浆纤维粘连蛋白（ＦＮ，２０μｇ／ｍｌ）对细胞的增殖、表型的影响。方法：细胞培养，免疫组化染色，扫描电镜。结果：ＦＮ（２０μｇ／ｍｌ）在细胞增殖期可促进细胞增殖，但在静止期则无明显的促增殖作用，也不能改变细胞的形态、生长方式；两组细胞的ＣｏｎＡ、ＷＧＡ凝集素受体的表达也无差异。扫描电镜证实：两组细胞表面光滑。结论：ＦＮ（２０μｇ／ｍｌ）可促进含１０％ＦＣＳ的ＤＭＥＭ液中的人牙髓细胞的增殖，但不影响其表型。     

牛血浆粘连蛋白对培养的人牙髓成纤维细胞FN和Ⅲ型胶原表达的影响

观察了不同浓度牛血浆纤维粘连蛋白（ＦＮ）对培养的人牙髓成纤维细胞Ⅲ型胶原、ＦＮ表达的影响；用图象分析仪对染色强弱进行相对定量分析，ＦＮ（１０、２０μｇ／ｍｌ）组的人牙髓细胞Ⅲ型胶原表达最强，ＦＮ（４０，８０μｇ／ｍｌ）组的人牙髓细胞ＦＮ表达最强，说明ＦＮ的不同浓度影响了培养的人牙髓成纤维细胞的功能，ＥＬＩＳＡ测定结果可做为图象分析的参考与补充。     

牛血浆纤维粘连蛋白对培养的人牙髓细胞ConA、WGA、SBA凝集素受体表达的影响

本文观察了不同浓度牛血浆纤维粘连蛋白（ＦＮ）和人工合成肽（ＲＧＤＳ．４０μｇ／ｍｌ）对人牙髓成纤维细胞ＣｏｎＡ、ＷＧＡ、ＳＢＡ凝集素受体的影响，培养液中ＦＮ的浓度分别为１０、２０、４０、８０μｇ／ｍｌ，ＲＧＤＳ的浓度为４０μｇ／ｍｌ．凝集素受体的表达情况通过图象分析仪进行半定量分析，培养的人牙髓细胞不表达ＳＢＡ受体，ＦＮ（４０、８０μｇ／ｍｌ）可显著地使人牙髓细胞ＣｏｎＡ受体表达增强，而ＷＧＡ的受体表达减弱，ＲＧＤＳ（４０μｇ／ｍｌ）组的细胞ＷＧＡ的受体表达弱于ＦＮ（１０、２０μｇ／ｍｌ）组。     

正常和炎症牙髓中纤维粘连蛋白分布的研究

用免疫组化，图像分析和免疫电镜等方面，对正常、炎症牙髓中的纤维粘连蛋白进行研究，表明正常牙髓中的ＦＮ呈网状分布，外层明显高于中央区：炎症牙髓中ＦＮ呈均质状分布，含量明显降低，ＦＮ存在于细胞、胶原纤维，无定形基质和血管神经束之间。     

牛肌腱胶原凝胶体在人牙髓成纤维细胞等原代培养中的应用

在铺有牛肌腱胶原玻璃培养瓶中进行人牙髓和牙周组织原代培养，牙髓和牙周组织的成功率分别为９／２１和５／１５，与不铺胶原的对照组（１／２１和０／１５）相比有显著差异（Ｐ＜０．０１和Ｐ＜０．０５）。这可能是细胞特异的高亲和力受体与胶原结合，使两者成为一个整体，增加了组织块贴壁率和细胞培养的成功率。本研究提示牛肌腱胶原铺制技术可以大大提高人牙髓和牙周组织培养的成功率。     

牛血浆FN对人牙髓成纤维细胞骨形成蛋白和碱性磷酸酶分泌和表达的影响

目的：观察纤维粘连蛋白（ＦＮ）与牙髓细胞分化的关系．方法：将传代的人牙髓细胞接种于９６孔板,分别用不同浓度牛血浆ＦＮ（１０,２０,４０,８０μｇ／ｍｌ）作用３天,进行骨形成蛋白（ＢＭＰ）和碱性磷酸酶（ＡＬＰ）的免疫组化染色,图象分析仪半定量测定,并测定培养上清液中ＡＬＰ活性．结果表明：四种浓度的ＦＮ组的牙髓细胞ＢＭＰ和ＡＬＰ表达无明显差异,ＦＮ（２０,４０μｇ／ｍｌ）组培养上清液中ＡＬＰ活性较强．结论：ＦＮ在牙髓细胞分化过程中的作用是有限的．     

传代的人牙髓成纤维细胞在体外培养下的增殖和表型变化

观察和比较了在ＤＭＥＭ加１０％ＦＣＳ；ＤＭＥＭ加１０％ＦＣＳ和５０μｇ／ｍｌＶｉｔＣ和１０ｍｍｏｌ／Ｌβ－磷酸甘油钠两种培养条件下，第５代人牙髓细胞的某些生物学特征，观察时间为３、９、１５、２１ｄ，通过ＣｏｎＡ和ＷＧＡ凝集素受体表达观察细胞的分化情况。结果表明第５代的人牙髓细胞可能是单一基因表型的细胞，其多层生长的能力减弱，牙髓细胞的凝集素受体（ＣｏｎＡ和ＷＧＡ）表达随培养时间延长未见明显改变。说明随着人牙髓细胞传代培养，人牙髓细胞的某些生物学特征发生了变化。     

Calcium ion release from calcium hydroxide stimulated fibronectin gene expression in dental pulp cells and the differentiation of dental pulp cells to mineralized tissue forming cells by fibronectin

Aim The effect of calcium ions on dental pulp cells was examined and the mechanism of dentine bridge formation by calcium hydroxide was investigated. Methodology Human dental pulp cells were treated with high concentration of calcium or magnesium ions for 24 h and fibronectin gene expression was measured by the quantitative PCR method. Human dental pulp cells were then cultured on fibronecin‐coated dishes for 24 h, and osteocalcin and osteopontin gene expression, which are typical phenotypes of mineralized tissue forming cells, were measured by the quantitative PCR method. Results Fibronectin gene expression was stimulated by calcium ions dose‐dependently. On the other hand, magnesium ions did not influence fibronectin gene expression. Furthermore, pulp cells cultured on fibronectin‐coated dishes enhanced the expression of phenotypes of mineralized tissue forming cells. Conclusions Calcium ions released from calcium hydroxide stimulates fibronectin synthesis in dental pulp cells. Fibronectin might induce the differentiation of dental pulp cells to mineralized tissue forming cells that are the main cells to form dentine bridges, via contact with cells.     

不同低氧浓度对体外培养人牙髓干细胞生物学特性的影响

目的:探讨不同低氧浓度对体外培养人牙髓干细胞生物学特性的影响.方法:选择2019年1月-2020年1月收集的健康者完整拔除的下颌阻生第三磨牙,采用块酶消化法培养牙髓干细胞,置于3％O2(3％低氧浓度实验组)、5％O2(5％低氧浓度实验组)和21％O2(21％常氧浓度对照组)中培养7 d.用流式细胞仪检测细胞周期、凋亡情...     

表皮生长因子对人牙髓细胞DNA合成及细胞周期的影响

目的 研究表皮生长因子(EGF)对体外培养的人牙髓细胞(HDPCs)DNA合成及细胞周期的影响。方法 将培养的第5代HDPCs分成EGF(1ug/ml)实验组和对照组,分别以含5％FBS的DMEM培养48h;常规消化、固定细胞,调整细胞密度为2.O×10~6/ml,经DNA荧光染色后用流式细胞仪(FCM)测定DNA分子含量。结果与对照组相比,EGF实验组HDPCs的DNA合成前期细胞比例(G_1％)明显降低,而DNA合成期细胞比例(S％)及细胞增殖指数PrI值(S+G_2M)％均显著增高。结论 EGF具有促进HDPCs的DNA合成和分裂增殖的作用,可能主要是通过促使处于G_1期的细胞进入S期来实现的;提示EGF在牙髓组织的损伤修复过程中起着重要作用。     

狗牙髓腔中植入纤维粘连蛋白复合羟磷灰石的实验研究

目的：将纤维粘连蛋白（ＦＮ）液与羟基磷灰石（ＨＡＰ）复合并植入狗牙髓腔中，以观察ＦＮ是否改善ＨＡＰ的作用效果。方法：在３只狗４２个牙的唇侧制洞，分别用６００μｇ／ｍｌＦＮ－ＨＡＰ糊剂和生理盐水－ＨＡＰ糊剂植入牙髓腔中，进行组织病理学观察。结果：术后３周，在ＦＮ－ＨＡＰ颗粒周围出现少许骨样基质沉积；术后５周，实验组颗粒周边骨样基质沉积较对照组多。结论：６００μｇ／ｍｌＦＮ液促进狗牙髓组织在ＨＡＰ颗粒周边沉积基质。     

血小板血浆对人牙髓细胞增殖的影响

目的：观察血小板血浆及其细化成分对人牙髓细胞增殖的影响。方法：使用因正畸而拔除的人牙的牙髓细胞，用细胞定量测定试剂盒测定细胞增殖情况。结果：5％的多血小板血浆（platelet-rich plasma，PRP）、5％和10％的洗净血小板（washed platelet，WPLT）均明显地促进了人牙髓细胞的增殖，而且WPLT的作用较PRP更显著。乏血小板血浆（platelet-poor plasma，PPP）呈浓度依赖性地抑制了人牙髓细胞增殖，5％WPLT促进人牙髓细胞增殖的作用。结论：去除血浆成分的WPLT对培养的人牙髓细胞增殖有明显的促进作用；血浆中可能存在对抗血小板生长因子作用的因子。     

Effect of mineral trioxide aggregate on proliferation of cultured human dental pulp cells

AIM: To investigate the effect of mineral trioxide aggregate (MTA) on the proliferation of human dental pulp (HDP) cells ex-vivo. METHODOLOGY: Human dental pulp cells were cultured with MTA or calcium hydroxide-containing cement (Dycal) using culture plate inserts. Control cells were cultured with culture plate inserts only. Cell proliferation was measured for up to 14 days using a Cell Counting kit, and the concentration of calcium ions released from the tested materials was assessed using a Calcium E-test kit. To confirm that the effect of MTA was attributable to released calcium ions, cell proliferation was measured in the presence of exogenous calcium chloride as a source of calcium ions while in the absence of MTA. RESULTS: Mineral trioxide aggregate significantly stimulated cell proliferation after 12 days, whereas Dycal had no such effect. The number of calcium ions released from MTA was significantly higher than that released from Dycal. Following the addition of calcium chloride, cell proliferation increased in a dose-dependent manner after 12 days. Moreover, cell proliferation showed a similar pattern whether a given concentration of calcium ions was produced by calcium chloride or by release from MTA. CONCLUSIONS: In this ex-vivo study, the elution components such as calcium ions from MTA had higher proliferation ability of HDP cells than control and Dycal.