寄生虫学

抗恶性疟原虫重组谷氨酸脱氢酶单克隆抗体的制备及其鉴定；恶性疟原虫MESA基因的克隆和测序；海南省恶性疟原虫氯喹抗性相关基因Pfmdr1多态性分析；间日疟原虫MSPIC端基因亚克隆及在大肠埃希菌中的融合表达；NO在IL-12诱导抗伯氏疟原虫感染免疫效应中的作用；IL-12对伯氏疟原虫红内期感染小鼠Th1／Th2细胞因子表达水平的影响；儿童先天性病残与弓形虫感染关系的研究；宫内感染弓形虫影响儿童生长发育的观察；弓形虫表面抗原P22基因片段的克隆、表达及鉴定；弓形虫和乙型肝炎病毒混合核酸疫苗的研究Ⅱ．pcDNA3-HBsAg-GRA1在COS-7细胞中的表达及鉴定；弓形虫GRA7基因在大肠埃希菌中的表达；小鼠过继转移致敏小肠IEL抗弓形虫感染；弓形虫SAG1基因成熟蛋白编码区在大，肠杆菌中的表达；卡氏肺孢子虫肺炎动物模型的实验观察；丝虫特异IgG4检测试剂盒的研制；日本血吸虫FKBP12基因的原核克隆表达及表达产物的纯化；日本血吸虫中国大陆株雌性特异性DNA片段及重复序列的分离与鉴定；左旋咪唑防御日本血吸虫尾蚴感染的实验研究；核酸疫苗VR1012／Sj31粘膜免疫诱导小鼠抗攻击感染的研究；日本血吸虫染色体核型及其G带带型分析；蚯蚓与日本血吸虫间共同抗原的初步研究；致弱日本血吸虫尾蚴感染小鼠皮肤组织中CD11c分子的动态表达；日本血吸虫副肌球蛋白T细胞表位的预测和鉴定；日本血吸虫Sj14FABP与细胞因子IL-12重组质粒的构建和表达；Mago nashi：一个日本血吸虫性别决定基因的发现与鉴定；CpG ODN对B本血吸虫感染小鼠Th1／Th2细胞因子表达水平的影响；日本血吸虫Sj16基因重组杆状病毒的构建和鉴定；日本血吸虫精蠹酸酶基因启动子序列的扩增及序列分析；日本血吸虫天然抗原分子的柱纯析分离纯化与鉴定；铜锈环梭螺（Bellamya aeruginosa）作为广州管圆线虫中间宿主的发现；抗华支睾吸虫代谢抗原单克隆抗体的制备及鉴定研究；华支睾吸虫病大鼠肝细胞凋亡的实验研究；猪囊尾蚴液、固相多种抗原对囊虫病免疫诊断效果评价。     

双氢青蒿素对卜氏肺孢子虫肺炎大鼠TNF—α水平的影响

目的 研究双氢青蒿素对卡氏肺孢子虫肺炎大鼠血清和肺泡巨噬细胞培养上清液TNF－α水平的影响。方法 以醋酸可的松皮下注射Wistar大鼠建立卡氏肺孢子虫肺炎动物模型，用60mg/kg双氢青蒿素治疗实验大鼠，杀鼠取肺，用胶原酶消化法分离肺泡巨噬细胞，用LPS刺培养72h，同时设有感染组和正常对照，用TNF－α水平则低于感染组。结论 卡氏肺孢子虫感染引起大鼠肺泡巨噬细胞分泌高水平的TNF－α，但双氢青蒿素治疗后PCP大鼠肺泡巨噬细胞产生TNF－α水平降低。     

双氢青蒿素对卡氏肺孢子虫肺炎大鼠TNF-α水平的影响

目的研究双氢青蒿素治疗对卡氏肺孢子虫肺炎大鼠血清和肺泡巨噬细胞培养上清液 TNF- α水平的影响。方法以醋酸可的松皮下注射 Wistar大鼠建立卡氏肺孢子虫肺炎动物模型 ,用 60 m g/ kg双氢青蒿素治疗实验大鼠 ,杀鼠取肺 ,用胶原酶消化法分离肺泡巨噬细胞 ,用 L PS刺激培养 72 h,同时设有感染组和正常对照。用 TNF- α试剂盒分别检测血清和培养上清液 TNF- α的水平。结果感染组和治疗组 TNF- α水平均高于正常对照 ,治疗组 TNF- α水平则低于感染组。结论卡氏肺孢子虫感染引起大鼠肺泡巨噬细胞分泌高水平的 TNF- α,但双氢青蒿素治疗后 PCP大鼠肺泡巨噬细胞产生 TNF- α水平降低。     

实验性卡氏肺孢子虫肺炎的病理学研究

Ｗｉｓｔａｒ大鼠皮下注射醋酸考的松诱发卡氏肺孢子虫肺炎，自第６～１２周，每周解剖病鼠２只观察，全部给药鼠均发病。肺部病变表现为：（１）肺印片查见卡氏肺孢子虫包囊和滋养体。（２）组织病理学改变：第６～８周ＨＥ染色切片呈间质性肺炎伴中度淋巴细胞浸润，肺泡内缺乏泡沫样渗出物，第９～１２周肺泡内出现泡沫样渗出物，ＰＡＳ染色该渗出物呈阳性反应，ＧＭＳ染色查见染成黑色的包囊。（３）停用醋酸考的松后４～６周，肺部炎症明显好转，提示大鼠卡氏肺孢子虫肺炎有自愈可能。电镜显示包囊、滋养体及受损肺泡上皮细胞的超微结构。     

mtLSU-巢式PCR检测实验大鼠卡氏肺孢子虫的实验研究

目的对mtLSU-巢式PCR方法检测大鼠卡氏肺孢子虫的应用价值以及基因序列进行评价。方法采用地塞米松免疫抑制法诱导大鼠感染肺孢子虫;实验组10只,对照组1只;诱导至第7周时收集实验组及对照组大鼠肺组织和支气管肺泡灌洗液（BALF）标本,采用mtLSU-巢式PCR方法对人源与鼠源肺孢子虫共有的基因进行扩增和序列测定,同时采用镜检法对实验组大鼠肺组织和肺泡灌洗液标本进行检测,评估两种方法的敏感性。结果采用mtLSU-巢式PCR方法对实验感染大鼠肺组织和BAL进行检测,卡氏肺孢子虫DNA阳性率分别为100%（10/10）、90%（9/10）。而GMS染色镜检法检测的阳性率分别为80%（8/10）、60%（6/10）。所测Wistar大鼠卡氏肺孢子虫mtLSU基因序列长度为155bp,与GenBank的大鼠源肺孢子虫（U20170）及人源肺孢子虫（DQ473446）同源性均为100%（154/154、155/155）。结论 mtLSU-巢式PCR方法应用于大鼠卡氏肺孢子虫检测敏感性高,特异性强;获得与人源耶氏肺孢子虫相同的Wistar大鼠卡氏肺孢子虫mtLSU的基因序列。     

双氢青蒿素对卡氏肺孢子虫肺炎大鼠肺泡巨噬细胞凋亡的影响

目的：检测双氢青蒿素对卡氏肺孢子虫肺炎（PCP）大鼠肺泡巨噬细胞凋亡的影响。方法：以醋酸可的松皮下洲Wistar大鼠建立PCP动物模型，对60mg/kg双氢青蒿素治疗实验大鼠，杀鼠取肺，用胶原酶消化法分离肺泡巨噬细胞，可PI和TUNEL法检测其凋亡，同时设有正常大鼠对照组。结果：感染组和治疗组大鼠肺泡巨噬．细胞凋亡率显著高于正常对照组，治疗组大鼠肺泡巨噬细胞凋亡率明显低于感染组。结论：卡氏肺孢子虫感染引起大鼠肺泡巨噬细胞发生凋亡，经双氢青蒿素治疗后PCP大鼠肺泡巨噬细胞凋亡降低。     

卡氏肺孢子虫肺炎大、小鼠低死亡率动物模型的建立

为建立低死亡率卡氏肺孢子虫肺炎 (PCP)SD大鼠和ICR小鼠动物模型 ,本试验将雌性SD大鼠和ICR小鼠分别随机分为实验组和对照组 ,实验组采用按体重定量皮下注射地塞米松的方法 ,免疫抑制诱导建立PCP动物模型 ,对照组注射与地塞米松等体积的生理盐水。分别制作肺印片 ,经瑞 姬氏复合染色后 ,检查卡氏肺孢子虫包囊。制作肺组织病理切片 ,经HE染色后观察肺组织病理变化。用地塞米松诱导后 ,实验组SD大鼠和ICR小鼠死亡率均为 0 ,肺印片阳性率均为 76 7% (2 3 30和 2 3 30 )。肺组织出现典型的病理变化 ,并可观察到Pc包囊。实验组SD大鼠体重下降明显 ,与对照组体重比较具有极显著性差异 (P <0 0 1)。ICR小鼠经诱导后 ,体重变化不显著。采用按体重定量皮下注射地塞米松的方法可建立低死亡率PCP动物模型     

卡氏肺孢子虫的分类、命名、体外培养及其动物模型的建立

以往所称的“卡氏肺孢子虫” (Pneumocystiscarinii,Pc)能感染包括人和实验动物在内的多种哺乳动物 ,免疫力低下的宿主感染后能引起致命的卡氏肺孢子虫肺炎 (Pneumocystiscariniipneumonia,PCP )或称肺孢子虫病(Pneumocystosis)。国际上已将原感染人体的卡氏肺孢子虫 (Pneumocystiscarinii)更名为Pneumocystisjeroveci,国内张瑞娟、朱淮民( 2 0 0 3)将其译为耶氏肺孢子虫 ,然尚未被广泛应用。其生物学分类也由原来动物界的原虫定为真菌界的真菌类。重新命名和跨界的分类归属具有重要意义 ,然而 ,国内有关“卡氏肺孢子虫”的报道 ,尚未启…     

复方磺胺甲恶唑对肾移植后卡氏肺孢子虫肺炎的预防作用

背景：卡氏肺孢子虫肺炎是由卡氏肺孢子虫寄生于肺部引起的一种严重的致命性肺炎。复方磺胺甲恶唑是目前用于治疗卡氏肺孢子虫肺炎的一线药物,治疗量往往有明显的不良反应,小剂量预防用药临床疗效及毒副作用尚不清楚。 目的：观察复方磺胺甲恶唑对肾移植后卡氏肺孢子虫肺炎的预防效果。 方法：选择肾移植后1个月且无复方磺胺甲恶唑过敏者。肾移植后1个月至半年或1年常规服用复方磺胺甲恶唑(0.48 g/d)。观察移植肝肾功能,感染情况,药物不良反应。 结果与结论：2006年起,随访125例肾移植术后早期患者,73例术后1个月起常规服用复方磺胺甲恶唑(0.48 g/d)至术后半年者,1例停药4个月后感染卡氏肺孢子虫肺炎死亡,47例服用复方磺胺甲恶唑(0.48 g/d)至术后1年者,无感染卡氏肺孢子虫肺炎者,5例因复方磺胺甲恶唑过敏或医从性差未服用复方磺胺甲恶唑者,2例分别在术后4,5个月感染卡氏肺孢子虫肺炎,1例死亡。结果提示,肾移植术后1个月至1年常规服用复方磺胺甲恶唑(0.48 g/d),可有效预防卡氏肺孢子虫肺炎,临床无明显不良反应。     

补中益气汤对肺孢子虫肺炎模型大鼠细胞免疫影响的实验研究

目的观察补中益气汤煎剂对卡氏肺孢子虫肺炎模型大鼠的免疫调节作用。方法Waster雌性大鼠60只,随机分成正常对照组、模型对照组、西药治疗对照组、中药治疗组及中药预防组。除正常组外其他4组均参照国内外公认的造模方法建立肺孢子虫肺炎模型。模型对照组生理盐水灌胃：西药治疗对照组与中药治疗组于实验第5周起至第6周分别给予复方新诺明及补中益气汤煎剂灌胃;中药预防组于实验第1周起以补中益气汤煎剂灌胃。于实验第6周末处死各组大鼠并检测各组大鼠淋巴细胞转化率和T细胞亚群百分比。结果正常组大鼠淋巴细胞转化率、CD4＋T细胞数量和CD4＋／CD8＋的值高于模型组,其差异具有统计学意义。中药预防组大鼠淋巴细胞转化率、CD4CF细胞数量和CD4＋／CD8＋的值高于西药治疗组和模型组。预防组大鼠CD4＋、CD4＋／CD8＋的值与正常组差异无统计学意义。西药治疗组CD4＋、CD4＋／CD8＋的值与模型组无差异。结论正常组与中药预防组大鼠T淋巴细胞转化率高于模型组,CD4＋T细胞数量的减少与PCP的发生具有密切关系,正常组与中药预防组CD4＋T细胞数量高于模型组,补中益气汤能够提高卡氏肺孢子虫肺炎模型大鼠淋巴细胞转化率和CD4＋T细胞的数量,在本实验中中药预防组的效果尤为显著,证实该方剂对大鼠肺孢子虫肺炎具有防治作用。     

卡氏肺孢子虫感染大鼠血清中蛋白及血液中嗜酸粒细胞的变化分析

卡氏肺孢子虫肺炎（pneumocystis carinii pneumonia,PCP）是由卡氏肺孢子虫（pneumocystis carinii,PC）引起的一种呼吸系统机会性感染,多见于免疫功能低下患者。据报道,未经药物预防的爱滋病（AIDS）患者约80％感染PCP。     

卡氏肺孢子虫肺炎大鼠血清中TNF—α、IL-8和sICAM-1水平的变化

目的检测卡氏肺孢子虫肺炎（PCP）大鼠血清中TNF-α、IL-8和sICAM-1水平。方法建立清洁级SD大鼠PCP动物模型,同时设正常对照组,检测血清中TNF-α、IL-8和sICAM-1含量。并观察肺脏病理学的变化。结果PCP模型组血清中TNF-α、IL-8和sICAM-1含量分别是（3．65±0．73）ng／mL、（0．65±0．12）ng／mL和（1247．39±288．57）pg／mL,正常对照组的含量分别是（0．70±0．21）ng／mL、（0．14±0．10）ng／mL和（261．40±53．21）pg／mL,并且PCP模型组肺组织炎症反应明显。结论卡氏肺孢子虫肺炎大鼠血清中TNF-α、IL-8和sICAM-1的含量均升高,并且肺组织炎症反应明显。     

环介导等温扩增技术检测卡氏肺孢子虫的研究

目的 环介导等温扩增(LAMP)技术检测卡氏肺孢子虫(Pc).方法 醋酸可的松经皮下注射Wistar大鼠诱导Pc,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)提取Pc基因组DNA.设计4条扩增Pc线粒体核糖体大亚基(mtrRNA)基因的LAMP引物,以结核杆菌、肺炎支原体、肺炎衣原体、弓形虫、大鼠白细胞为对照,进行LAMP反应.LAMP产物经显色、电泳及酶切鉴定.将Pc DNA 10倍稀释后同时进行LAMP和PCR,比较其敏感性.结果 Pc检测管经显色后呈绿色(阳性),对照组均呈棕色(阴性).Pc LAMP产物经电泳后呈LAMP特征性梯状条带,扩增产物经Tail限制性内切酶酶切鉴定正确,对照组均无扩增产物.LAMP可检测到虫体DNA的最低浓度是lP9/pJ,为PCR的10倍.结论 检测Pc的LAMP方法敏感、特异及简便.     

卡氏肺孢子菌pVAX-p55-v3及pVAX-p55-v0真核表达载体的构建及表达鉴定

目的:构建卡氏肺孢子菌p55-v3及p55-v0抗原基因真核表达载体,mRNA水平鉴定其在COS-7细胞中的表达。方法:以卡氏肺孢子菌总RNA为模板,RT-PCR技术扩增p55-v3及p55-v0抗原基因,连接至pTA2载体,再克隆到pVAX1真核表达载体,构建重组质粒pVAX-p55-v3和pVAX-p55-v0。重组质粒在感受态DH5α大肠杆菌中大量扩增后,转染至COS-7细胞,RT-PCR鉴定其在mRNA水平的表达。结果:构建的重组质粒经酶切及测序鉴定,与文献报道的同源性分别达到99.8%和99.9%;其编码的氨基酸与文献报道的同源性为100%。RT-PCR显示p55-v3和p55-v0成功转染至COS-7细胞,并在其中进行基因表达。结论:本研究成功构建了pVAX-p55-v3和pVAX-p55-v0重组质粒,并在COS-7细胞中表达,为进一步阐明p55-v3的免疫保护功能以及核酸疫苗的研究提供了基础。     

人源肺孢子虫纯培养株的建立及基因鉴定

目的建立人源肺孢子虫（PneUmOCySaSj／rovec／，Pj）纯培养株。方法从肺孢子虫肺炎（PCP）患者的支气管肺泡灌洗液（BALF）中分离巧，用改良IMDM培养基做原代、传代和冻存复苏培养；以四胺银染色计数法观察虫体增殖情况；以线粒体rRNA大亚基特异引物扩增培养物中的目的基因，与基因库中的鼠源和人源肺孢子虫基因做序列比较。结果用添加S-腺苷甲硫氨酸（SAM）等辅助剂的IMDM培养基从2例PCP患者的BALF中分离出2个巧纯培养株。分离培养的巧可进行冷冻保存和复苏培养。培养120h的巧包囊可增殖3．2倍。基因序列分析证实分离出的巧株与鼠源性肺孢子虫的线粒体rRNA大亚基同源性为67．8％，与GenBank中巧的同源性为93．2％。结论用本法建立了2个Pj纯培养株。     

肾小球肾炎患者免疫抑制治疗后并发卡氏肺孢子虫肺炎

目的 研究糖皮质激素联合细胞毒药物治疗肾小球肾炎并发卡氏肺孢子虫肺炎（PCP）的临床表现。方法 回顾性分析3例糖皮质激素联合细胞毒药物治疗肾小球肾炎并发PCP的临床，并复习相关文献资料。结果 3例患者年龄为28～67岁，男性2例，女性1例。1例为原发性肾小球肾炎、1例为狼疮性肾炎、1例为显微镜下多血管炎致新月体肾炎。PCP表现均出现在接受糖皮质激素联合细胞毒药物（包括环磷酰胺、雷公藤多甙片、甲氨喋呤）过程中，其中1例曾给予甲基强的松龙冲击治疗。3例均表现为发热、进行性呼吸困难、Ⅰ型呼吸衰竭，影像学检查提示双肺弥漫性间质病变；2例痰涂片发现号氏肺孢子虫（PC）包囊，1例痰聚合酶链反应检测Pc阳性。2例经复方新诺明治疗后痊愈，1例死亡。结论 肾小球肾炎患者免疫抑制治疗后出现进行性低氧血症应考虑PCP的可能性，需早期诊断、治疗。     

肾移植后合并卡氏肺孢子虫肺炎：10年同一机构378例中的12例

背景：在肾移植后早期,由于免疫抑制剂用量较大,患者的免疫功能明显受到抑制,卡氏肺孢子虫肺炎在此期间相对高发。 目的：分析肾移植后并发卡氏肺孢子虫肺炎的临床特点、诊治及预防。 方法：收集佛山市第一人民医院肾内科2000-11/2010-07肾移植378例中并发卡氏肺孢子虫肺炎12例患者的临床资料,分别对其发病时间、易感因素、诊断方法、临床表现及治疗方案、预防效果进行回顾性分析。 结果与结论：发病时间为移植后5.3(3~11)个月。12例患者均有发热,体温达38.0~40.2 ℃,气促及紫绀。9例轻微咳嗽,5例少量白痰,1例红色泡沫痰。5例合并细菌感染,2例合并真菌感染,2例合并巨细胞病毒感染,1例合并结核。服用他克莫司患者感染发生率为7.8%(7/89),服用环孢素A患者感染发生率为1.7%(5/289)。9例使用呼吸机,2例使用呼吸机无创性连续鼻或口鼻面罩治疗。8例痊愈,2例治疗中出现血小板减少致脑出血死亡,1例合并真菌感染死亡,1例合并血气胸死亡。治疗期间,无排斥反应发生。说明早期诊断,联合用药,减少免疫抑制剂用量是提高卡氏肺孢子虫肺感染治愈率的关键。     

实验感染大、小鼠和临床疑似病例肺孢子虫mt LSU rRNA基因检测

为探讨PCR技术对实验感染大、小鼠肺孢子虫肺炎(PCP)和临床疑似病例诊断的可行性。用皮下注射地塞米松法诱导SD大鼠和ICR小鼠PCP并收集临床疑似病例24h深部痰液。受试动物解剖后,制备肺印片,经瑞姬氏复合染色镜检确定肺孢子虫(Pc)感染的阳性率;同时,以针对虫体mtLSUrRNA基因设计的引物,PCR扩增鼠肺组织和支气管灌洗液(BALF),以及痰液样本中的DNA;比较实验动物样本镜检和PCR两种方法的检测结果;测定PCR的敏感性和特异性。结果表明,SD大鼠和ICR小鼠肺印片的阳性率分别为68.8%(1116)和85.7%(1821),肺组织PCR检测的阳性率分别为75%(1216)和80.9%(1721),肺泡灌洗液PCR的阳性率分别为81.2%(1316)和23.8%(521)。肺印片镜检和PCR技术检测结果无显著性差别;可见,PCR对虫体mtLSUrRNA基因的检测具有显著的特异性和敏感性,至少可以检测出0.6pg的肺孢子虫DNA;6例临床疑似病例样本中2例显示肺孢子虫PCR阳性反应。     

卡氏肺孢子虫病的诊断及其进展

卡氏肺孢子虫病诊断方面的研究表明，辅助诊断方法缺乏特异性，在确定病人是否有肺感染，感染的程度及疗效的考核上都有一定作用。但ＰＣ感染的最后确诊主要靠病原体检测。取材方法：对于肺感染者应以导痰为首选，其次是ＢＡＬ和ＴＢＬＢ。儿童可采用经皮穿刺肺吸引的方法取材。在前述方法无法实施的紧急情况下，才考虑开胸肺活检。肺外感染者可在病变局部穿刺取材。制片法：可用穿刺物或肺组织等做直接涂片，印片，或悬液滴片等简捷方法，也可采用组织切片。染色方法：常用Ｇｉｅｍｓａ、初检、ＴＢＯ或ＧＭＳ法进一步确诊。ＩＦ可提高检出率。ＰＣＲ技术检测孢子虫病更敏感和特异，有操作简便，易于推广应用等优点。     

加味补中益气汤治疗大鼠肺孢子虫肺炎的疗效观察

目的探讨加味补中益气汤治疗大鼠肺孢子虫肺炎（PCP）的疗效。方法按国内公认的PCP造模方法，建立大鼠PCP动物模型。设中药治疗组和预防组，同时建立西药对照组、PCP模型对照组及正常对照组。通过观察各组大鼠存活率、体重、肺内肺孢子虫包囊的数量和肺组织病理学变化考核药物疗效。结果中药组大鼠存活率高于PCP模型组，但低于正常组；中药治疗组和预防组大鼠平均体重高于PCP模型组，包囊数低于PCP模型对照组；中药治疗组和预防组大鼠肺组织炎症反应明显轻于PCP模型对照组。结论加味补中益气汤对大鼠肺孢子虫肺炎，有一定的疗效。