53基因密码子249突变致肝细胞癌的机理研究

目的为了进一步探讨ＨＣＣ中ｐ５３基因密码子２４９突变的作用机理。方法收集密码子２４９突变率为３２９％的７０例南方地区手术切除ＨＣＣ标本，采用ＳＳＣＰ、ＩＨＣ和ＲＮＡ斑点杂交分析方法，深入研究了密码子２４９突变伴ＬＯＨ情况及其对ｐ５３基因转录和翻译的影响。结果９０％的密码子２４９突变伴ＬＯＨ。突变组中，ｐ５３蛋白和ｐ５３ｍＲＮＡ检出率分别为９１３％和９５７％，两者均显著高于无突变组（Ｐ＜０００１）。相关分析显示，ｐ５３基因的转录与翻译之间高度相关（ｒ＝０．８２０８）。结论ＬＯＨ是使ｐ５３基因密码子２４９突变发挥致癌作用的主要因素。ｐ５３基因密码子２４９的突变导致了ｐ５３基因在转录和翻译两水平上的增加，其中转录增加是ｐ５３蛋白表达增加的重要原因之一     

肝细胞癌p53及nm23-H1 mRNA表达的意义

目的探讨ｐ５３,ｎｍ２３Ｈ１与原发性肝细胞癌（ＨＣＣ）发生发展的关系．方法运用原位分子杂交技术对４９例ＨＣＣ中ｐ５３和ｎｍ２３Ｈ１基因ｍＲＮＡ进行检测,并结合临床病理特征进行分析．结果ｐ５３ｍＲＮＡ杂交阳性２３例,占４６９％;ｐ５３ｍＲＮＡ过表达与肿瘤的肝内转移．包膜侵犯及Ｅｄｍｏｎｄｓｏｎ分级相关（Ｐ＜００５）;ｎｍ２３Ｈ１ｍＲＮＡ阳性表达２７例,占５５１％;ｎｍ２３Ｈ１ｍＲＮＡ表达与肿瘤肝内转移及ＴＮＭ分期呈负相关（Ｐ＜００５）;同时发现ｐ５３ｍＲＮＡ过表达和ｎｍ２３Ｈ１ｍＲＮＡ低表达在ＨＣＣ肝内转移中具有协同作用．结论ｐ５３和ｎｍ２３Ｈ１参与ＨＣＣ的发生发展,ｐ５３过表达及ｎｍ２３Ｈ１低表达提示ＨＣＣ肝内转移．     

肝细胞癌中端粒酶逆转录酶表达及其与肿瘤抑制基因p53相关性研究

目的探讨肝细胞肝癌（ＨＣＣ）中端粒酶逆转录酶（ＨＴＥＲＴ）ｍＲＮＡ表达意义及其与肿瘤抑制基因ｐ５３的相关性。方法收集３４例ＨＣＣ标本,应用ＲＮＡ－ＲＮＡ原位杂交技术检测ＨＴＥＲＴ ｍＲＮＡ表达,观察其与病理特征间的关系;用免疫组织化学技术检测ｐ５３蛋白,比较ＨＴＥＲＴ与ｐ５３表达间的关系。结果３０／３４例（８８．２％） ＨＣＣ中癌细胞ＨＴＥＲＴ ｍＲＮＡ呈阳性表达,其中小肝癌６例均为阳性;分化差、肝内外转移、包膜不完整、癌旁有活动性病变及ＨＢｓＡｇ阳性者ＨＴＥＲＴ ｍＲＮＡ表达较高;侵袭灶前沿癌细胞及少数非典型性增生的肝细胞中常见阳性。 ＨＴＥＲＴ ｍＲＮＡ和ｐ５３表达一致（均阳或均阴）者占７９．４％,两者表达具有相关性, ｐ５３阳性者 ＨＴＥＲＴ ｍＲＮＡ表达较强（Ｐ＜０．０５）。正常肝组织 ＨＴＥＲＴ ｍＲＮＡ呈阴性。结论 ＨＣＣ中 ＨＴＥＲＴ ｍＲＮＡ高表达; ＨＴＥＲＴ ｍＲＮＡ表达与ＨＣＣ发生、演进有关; ｐ５３可能参与ＨＴＥＲＴ ｍＲＮＡ的表达调控。     

原位杂交方法检测胃癌及其癌前病变中抑癌基因p53的表达

目的用原位杂交方法检测胃粘膜癌前病变及胃癌组织中ｐ５３ｍＲＮＡ的表达,并观察感染Ｈｐ对其表达的影响．方法病理证实为慢性胃炎６６例和胃癌１６例,用地高辛标记的ｃＤＮＡ为探针进行原位杂交实验,检测其胃粘膜组织中ｐ５３ｍＲＮＡ表达,用单克隆抗体ＤＯ０１进行免疫组化检测Ｐ５３蛋白的表达．结果在慢性萎缩性胃炎、肠化生、异型增生及胃癌中,原位杂交方法检测ｐ５３ｍＲＮＡ表达率分别为５３９％,５２３％,４２８％和２５％,免疫组化方法检测Ｐ５３蛋白的表达率分别为００％,５３％,１５４％和２５％．ｐ５３ｍＲＮＡ的表达与蛋白的表达无明显的一致性,ｐ５３ｍＲＮＡ的表达可以在Ｐ５３蛋白阴性及阳性的细胞中．在２６例萎缩性胃炎中,１４例检测到ｐ５３ｍＲＮＡ的表达,而其中１６例（包括１４例阳性病例）无一例检测到Ｐ５３蛋白的表达．在肠化生、异型增生及胃癌组织中也发现有类似的情况．Ｈｐ感染组与未感染组,ｐ５３ｍＲＮＡ表达率之间统计学检验Ｐ＜００５．结论在胃癌及其癌前病变中,随着病变的发展,ｐ５３ｍＲＮＡ的表达率随之下降,Ｈｐ对其表达有明显的影响     

p53基因密码子249突变致肝细胞癌的机理研究

目的 为了进一步探讨ＨＣＣ中ｐ３５基因密码子２４９突变的作用机理。方法 收集密码子２４９突变率为３２．９％的７０例南方地区手术切除ＨＣＣ标本，采用ＳＳＣＰ、ＩＨＣ、和ＲＮＡ斑点杂交分析方法，深入研究了密码子，２４９突变伴ＬＯＨ情况其对ｐ３５基因转录和翻译的影响。结果 ９０％的密码子２４９突变伴ＬＯＨ。突变组中，ｐ３５蛋白和ｐ３５ｍＲＮＡ检出率分别为９１．３％和９５．７％，两者均显著高于无突变组（Ｐ     

非小细胞肺癌淋巴结转移与nm23-H_1基因突变及mRNA表达异常关系研究

目的观察非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）组织中ｎｍ２３－Ｈ１基因的存在状况及其转录表达水平，分析肺癌恶性转移与该基因异常的关系。方法采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和半定量ＲＴ－ＰＣＲ方法，以正常癌旁组织及正常肺组织为对照，观察了３１例原发性ＮＳＣＬＣ中ｎｍ２３－Ｈ１基因的突变和ｍＲＮＡ表达情况。结果３１例肺癌中未发现１例存在ｎｍ２３－Ｈ１基因突变。在２０例具淋巴结转移的ＮＳＣＬＣ中ｎｍ２３－Ｈ１基因ｍＲＮＡ表达降低１４例（１４／２０），明显高于未发生淋巴转移的非小细胞肺癌（３／１１）（Ｐ＜０．０５）。结论以上结果显示，ｎｍ２３－Ｈ１为一种可在肺癌转移过程中发挥负调节作用的转移抑制基因，该基因表达水平可望作为一个肺癌转移的预测因子。     

原发性肝癌转移与ras p53基因及其蛋白表达的关系

目的了解ｒａｓ，ｐ５３基因及其蛋白表达与原发性肝细胞癌（ＨＣＣ）转移的关系．方法应用免疫组化、狭缝杂交分别对１４例ＨＣＣ有转移者和１６例无转移者癌组织中ｒａｓ，ｐ５３基因蛋白和ＲＮＡ表达进行了研究．结果经微波修复抗原后，在１４例有转移ＨＣＣ组织中，Ｐ２１和Ｐ５３蛋白的阳性例数分别为１１例和１２例，在１６例无转移ＨＣＣ组织中，其阳性例数分别为５例和７例，两组间具有极显著性差异（Ｐ值分别为００１４和００２６）．ＨＣＣ有转移组ＮｒａｓＲＮＡ为无转移组的３～５倍，而两组间Ｐ５３ＲＮＡ量则几乎相等．结论经微波修复抗原后，Ｐ２１和Ｐ５３蛋白的免疫组化染色可作为衡量ＨＣＣ转移潜能的指标．     

p53基因突变与老年人膀胱癌预后关系的研究

目的　探讨老年人膀胱癌组织 ｐ５３ 基因突变与临床分期、病理分级及预后的关系。方法　利用 Ｐ Ｃ Ｒ Ｓ Ｓ Ｃ Ｐ 及 Ｐ Ｃ Ｒ 直接循环测序技术，分析 ７０ 例 ６０ 岁以上老年人膀胱癌组织 ｐ５３ 基因突变。结果　７０ 例中 ２４ 例（３４３％ ）发生 ｐ５３ 基因突变。侵润性 膀胱癌（ｐ Ｔ２ ～ｐ Ｔ ４ ）组比浅表性性膀胱癌（ｐ Ｔ ａ～ｐ Ｔ１ ）组、Ⅱ～Ⅲ级组比Ⅰ级组 ｐ５３ 基因突变率明显增高（ Ｐ ＝ ００２０ 和 Ｐ ＝００２３）。突变阳性组与突变阴性组的 １ 年、３ 年、５ 年生存率分别为 ６３６％ 、４０１％ 、４０１％ 及 ９１８％ 、７６４％ 、５６４％ ，阳性组较阴性组明显预后不良（ Ｐ＝ ００２３）。结论　ｐ５３ 基因突变可作为预测老年人膀胱癌恶性进展及鉴别浸润性与浅表性膀胱癌、预后判断有用的分子生物学指标。     

肺鳞癌组织Mdm2蛋白表达p53基因突变相关性研究

目的探讨原发性肺鳞癌与Ｍｄｍ２蛋白表达、ｐ５３基因突变之间的相关性。方法采用ＳＰ免疫组织化学方法和银染聚合酶链式反应单链构象多态性（银染ＰＣＲＳＳＣＰ）方法检测手术切除、经病理证实的４５例原发性肺鳞癌组织及癌旁肺组织中Ｍｄｍ２蛋白表达和ｐ５３基因突变情况。结果免疫组织化学检测的４５例肺鳞癌组织Ｍｄｍ２蛋白阳性率为６２％（２８／４５）,２例癌旁肺组织中Ｍｄｍ２蛋白呈弱阳性表达,免疫组织化学方法结合银染ＰＣＲＳＳＣＰ检测４５例肺癌组织ｐ５３基因突变,阳性率为５１％（２３／４５）,４５例癌旁肺组织未检测到ｐ５３基因突变。（１）肺鳞癌与ｐ５３基因突变有明显相关性（Ｐ＜０．０５）。（２）肺鳞癌与Ｍｄｍ２基因产物过度表达有明显相关性（Ｐ＜０．０５）。（３）Ｍｄｍ２蛋白过度表达与ｐ５３基因突变复合存在和肺鳞癌淋巴转移（６６％,１０／１５）有明显相关性（Ｐ＜０．０５）。结论Ｍｄｍ２蛋白过度表达与ｐ５３基因突变是临床估计患者预后重要的分子生物学指标     

原发性肝细胞癌中WAF1／CIP1基因的及其与p53基因突变的关系

目的 研究原发性肝细胞癌（ＨＣＣ）组织中ＷＡＦ１基因的表达及其与ｐ５３基因突变和临床病理学指标的关系和意义。方法 应用半定量ＲＴ－ＰＣＲ、免疫组织化学及定量ＤＮＡ图像分析的方法,检测ＷＡＦ１基因在３２例ＨＣＣ及其癌旁肝组织和５例正常肝细胞中的表达,研究其与ｐ５３基因突变及临床病理学指标的关系。结果 肝癌组织中ＷＡＦ１ｍＲＮＡ表达相对值（１．０６±０．３７）Ｕ低于其相应旁旁肝组织（１．３０±０．３７     

基因芯片在痘病毒对宿主基因转录调控中的应用

痘病毒(Poxvirus)是病毒颗粒最大的一类 DNA 病毒,结构复杂;感染人和动物后常引起局部或全身化脓性皮肤损害,给畜牧业带来严重的经济损失同时也威胁着人类健康。痘病毒可通过多种策略调控宿主基因的转录进而影响其免疫应答。基因芯片通过对宿主细胞在病毒感染前后基因表达谱的检测,为病毒的致病机制及病毒感染对宿主的调控机制的研究提供了便利手段。本文综述了有关基因芯片在痘病毒研究中的应用。     

急性白血病ATM基因和BRCA2基因的杂合性缺失

目的：探讨急性淋巴细胞白血病（ALL）与急性非淋巴细胞白血病（ANLL）ATM基因和BRCA2基因杂合性缺失及其相互关系。方法：应用PCR－变性聚丙烯酰胺凝胶电泳－银染技术检测ATM基因D11S2179位点和BRCA2基因D13S260位点的杂合性缺失（LOH）。结果：64例ALL患者中两位点LOH发生率为18.7%；D11S2179和D11S260两位点LOH的发生频率分别为12.5%和14.0%；两位点同时发生LOH的频率为7.8%。38例ANLL患者中两位点LOH的发生率为7.9%，D11S2179和D13S260两位点的LOH发生频率分别为2.6%和5.2%。两组总发生率比较差异有显著性意义（P＜0.05）。结论：ATM基因和BRCA2基因的LOH可能参与ALL的病理发生，而与ANLL无明显相关性。     

HLA—DRB和ACE基因与肺结核的相关性分析

目的探讨人类白细胞抗原（HL气）-DRB基因和血管紧张素转换酶（ACE）基因多态性与肺结核的相关性。方法采用聚合酶链反应-序列特异性引物法（PCR—SSP）对肺结核组和健康对照组进行HLA-DRB和ACE基因分型。结果肺结核组HLA—DRB1＊15等位基因的频率显著高于对照组（P〈0．05）；复治和耐药肺结核组ACE基因的I／D基因型频率显著高于初治和无耐药组（P〈0．05）。结论HLA—DRB1＊15等位基因及ACE基因的I／D基因型与肺结核密切相关。     

HLA-DRB和ACE基因与肺结核的相关性分析

目的探讨人类白细胞抗原(HLA)-DRB基因和血管紧张素转换酶(ACE)基因多态性与肺结核的相关性。方法采用聚合酶链反应-序列特异性引物法(PCR-SSP)对肺结核组和健康对照组进行HLA-DRB和ACE基因分型。结果肺结核组HLA-DRB₁^*15等位基因的频率显著高于对照组(P＜0.05);复治和耐药肺结核组ACE基因的I/D基因型频率显著高于初治和无耐药组(P＜0.05)。结论HLA-DRB₁^*15等位基因及ACE基因的I/D基因型与肺结核密切相关。     

Fas基因转导胃癌细胞的表达

目的将Ｆａｓ基因导入胃癌细胞，建立Ｆａｓ基因表达株，并比较转导前后ｍＲＮＡ与蛋白的表达水平．方法采用分子克隆技术将Ｆａｓ基因插入真核表达载体ｐＢＫＣＭＶ的多克隆克隆位点之间，以脂质体介导法将目的基因导入受体细胞ＳＧＣ７９０１，用Ｇ４１８筛选克隆细胞；以Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ，Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测Ｆａｓ基因的表达．结果成功地构建了真核表达载体ｐＢＫＦａｓｃＤＮＡ．转导细胞后，从１×１０５细胞中筛选出１００个抗性克隆以上，转导率大于０１％，随机挑选２个克隆扩增培养，获得了１株稳定的抗性细胞，从而有效地建立了Ｆａｓ基因表达株（ＳＧＣ７９０１Ｆａｓｃｅｌｓ）．杂交结果表明，转导株与非转导株均有ｃＤＮＡ的表达，但转导株在ｍＲＮＡ及蛋白水平的表达均明显高于非转导株．结论Ｆａｓ基因在胃癌细胞中处于低表达状态；通过真核表达载体的介导，Ｆａｓ基因导入胃癌细胞后，能有效地表达ＦａｓｍＲＮＡ及其蛋白．     

凋亡相关性基因bcl—2和bax在肺癌中的表达及意义

为探讨B细胞淋巴瘤／白血病-2（bcl-2）基因及其同源类似物bax基因的表达与肺癌发生的关系,应用免疫组化SP法检测了51例肺癌患者的肺癌标本及其癌旁组织中bcl-2、bax的表达。结果显示,bcl-2在肺癌中染色比在癌旁组织中深,bax在肺癌中染色比在癌旁组织中浅,两者之间均有极显著差异（P＜0.01）;bcl-2、bax表达与肺癌的组织分型、患者的性别、吸烟史、临床分型、分期及淋巴结转移无关（P＞0.05）。提示①bcl-2、bax在肺癌发生中具有重要作用。②在癌前病变组织中检测并比较bcl-2和bax的表达,有利于肺癌的早期诊断。③可通过药物使bcl-2表达降低,促进凋亡,提高患者对放、化疗的敏感性。     

共表达HIV-1的gag-gp120与IL-2的pGPIL-2诱导小鼠产生细胞毒性T细胞的研究

目的 研究HIV-1CN融合基因与IL-2基因共表达基因质粒pGPIL-2诱导产生细胞毒性T细胞（CTL）。方法 脂质体介导共表达中国流行株HIV-1gag-gp120基因与IL-2基因的基因疫苗质粒pGPIL-2转染BHK-21细胞,以间接免疫荧光法鉴定其表达。取pGPIL-2免疫鼠脾细胞,检测pGPIL-2诱导的细胞毒性T细胞杀伤活性。结果 杀伤实验结果证明,经基因免疫获得的 CTL效应细胞,可杀伤 HIV-1CN 融合基因转染的靶细胞。结论 pGPIL-2可有效地诱导 CTL的产生,该研究结果为进一步设计中国流行株HIV-1基因疫苗提供了重要实验依据。     

Cancer and gene therapy

 The authors review the current literature pertaining to gene therapy as related to human cancer, covering gene therapy strategies, techniques of gene transfer, and targeted gene delivery. Gene therapy has various applications. Many technical obstacles in gene delivery need to be overcome. The safe delivery and expression of a gene to its destination are essential for clinical use. A greater understanding of the genetic basis of cancer and tumor immunology is necessary before the goal of cancer gene therapy can be fully realized. Received: 5 June 1996 / Accepted: 5 September 1996     

Development of gene therapy for blood disorders by gene transfer into haematopoietic stem cells

Haematopoietic stem cells (HSCs) are important target cells for gene therapy of blood disorders due to their pluripotency and ability to reconstitute haematopoiesis following myeloablation and transplantation. HSCs can 'self-renew' and generate new stem cells. Genetically modified stem cells are therefore expected to last a lifetime in the recipient following blood and marrow transplantation, and can potentially cure haematological disorders. Oncoretroviral vectors have been the main vectors used for HSCs because of their ability to integrate into the chromosomes of their target cells. Because oncoretroviral vectors require dividing target cells for successful localization of the preintegration complex and subsequent chromosomal integration of the provirus, only the dividing fraction of the target cells can be transduced. As only a small fraction of haematopoietic stem cells is dividing at any one time, oncoretroviral vector transduction of human HSCs has been low in clinical trials. However, patients with severe combined immune deficiency-X1 (SCID-X1) have recently been treated successfully by gene therapy of autologous bone marrow cells using oncoretroviral vectors containing the common gamma chain gene. While several additional disorders may potentially be treated successfully using oncoretroviral gene transfer to HSCs, many disorders may require much higher gene transfer efficiency than was achieved in the SCID-X1 study. Therefore, lentiviral vectors have recently emerged as promising vectors for human HSCs because they can transduce dividing and nondividing HSCs efficiently, and may become the vectors of choice in the future for treatment of blood disorders where a large fraction of HSCs has to be corrected.     

中缅边境恶性疟原虫pfmdr1基因多态性及pfmsp1等位基因分型研究

目的 分析中缅边境恶性疟原虫多抗药基因1(riamoaium Jaicipparum mumarug resustance1,pfmdr1)基因编码蛋白86位点多态性及裂殖子表面蛋白1(P.falciparum merozoite surface protein 1 gene,pfmsp1)等位基因的分型特征.方法 采用chelex-100法提取DNA,PCR扩增pfmdr1基因编码蛋白86位点及pfmsp1基因第2区与第3区部分片段,并对其进行DNA测序,对扩增片段基因的结构、同源性进行分析.结果 检测的50份血样中,49份成功扩增pfmdr1基因,49份在第25位氨基酸均发生缺失,且在第27～29位氨基酸由STA都突变为EYR,9份在第35位氨基酸缺失,第86位氨基酸均未发生点突变.50份恶性疟患者样本中有49份共扩增出72个pfmsp1基因片段,以MAD20型为主导型占93.88％,K1、RO33型为次之,并存在不同基因株混合感染现象.结论 中缅边境恶性疟原虫株pfmdr1基因第86位氨基酸点无突变,pfmsp1存在MAD20型、K1型和RO33型3种等位基因型,以MAD20型为优势虫株.