特女贞苷对高糖刺激的肾小球系膜细胞凋亡的保护作用

目的: 研究特女贞苷对高糖刺激的小鼠肾小球系膜细胞凋亡的保护作用。方法: 体外培养小鼠肾小球系膜细胞,采用MTT法观察特女贞苷对细胞活力的影响(n=6),选择安全浓度。高糖刺激肾小球系膜细胞模拟糖尿病肾病模型,以100,50,25 μmol·L^-1特女贞苷对肾小球系膜细胞作用48 h,采用流式细胞术检测细胞凋亡率(n=10),以Western blot法进一步考察特女贞苷对肾小球系膜细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved-caspase 3),B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达的影响(n=3)。结果: 高糖刺激肾小球系膜细胞凋亡率明显增加,蛋白水平caspase 3表达上调,Bcl-2/Bax明显下降(P<0.05)。100,50,25 μmol·L^-1特女贞苷均能显著抑制高糖刺激的肾小球系膜细胞凋亡和下调cleaved-caspase 3蛋白表达,明显上调Bcl-2/Bax(P<0.01,P<0.05),作用呈浓度依赖。结论: 特女贞苷对高糖刺激的肾小球系膜细胞凋亡具有明显的保护作用,这可能与其上调Bcl-2/Bax和抑制caspase 3激活有关。     

橙皮苷对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡及滑膜组织Bcl-2/Bax表达的影响

目的:研究橙皮苷(HDN)对佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜细胞的凋亡诱导作用及滑膜组织Bcl-2/Bax表达的影响。方法:60只SD大鼠随机分为6组:正常组、模型组、HDN(40,80,160 mg.kg-1)剂量组和雷公藤多苷组;用弗氏完全佐剂诱导大鼠AA模型;DNA琼脂糖凝胶电泳观察滑膜组织凋亡情况;原位末端标记检测(TUNEL)法检测滑膜组织中滑膜细胞凋亡及凋亡指数;免疫组化法检测滑膜组织Bcl-2和Bax表达变化。结果:HDN(80,160 mg.kg-1)治疗组大鼠滑膜组织DNA经电泳分析可见凋亡细胞DNA梯状条带;HDN(80,160 mg.kg-1)组大鼠滑膜细胞凋亡指数较模型组显著升高;与模型组比较,HDN(80,160 mg.kg-1)组大鼠滑膜组织Bcl-2表达明显降低而Bax表达明显升高,各剂量HDN均可显著降低Bcl-2/Bax。结论:HDN能通过抑制滑膜组织Bcl-2和促进Bax的表达、降低Bcl-2/Bax,诱导AA大鼠滑膜细胞凋亡,这可能是其治疗AA的作用机制之一。     

辽东楤木叶总皂苷对人结肠癌HT-29细胞凋亡的影响

目的探讨辽东楤木叶总皂苷(ETS)诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡及其对凋亡相关蛋白表达的影响。方法 MTT法检测不同浓度(6.25、12.5、25、50、100、200 mg/kg)ETS培养的结肠癌HT-29细胞增殖率,Hoechst33258染色和激光共聚焦成像检测细胞凋亡,并观察凋亡细胞的形态学改变,免疫组化检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果 ETS可诱导HT-29细胞发生凋亡,且凋亡作用在一定范围内呈剂量依赖性;ETS可使HT-29细胞Bcl-2表达降低、Bax表达升高(P0.05,P0.01),且呈明显的量效关系。结论 ETS可诱导HT-29细胞凋亡,其凋亡机制可能与降低Bcl-2、升高Bax的表达相关。     

虎眼万年青总皂苷对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响及其机制

目的探讨虎眼万年青总皂苷(Ornithogalum caudatum AIT saponins)诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡的机制,为开发应用于治疗乳腺癌的药物提供实验依据。方法用MTT比色法检测虎眼万年青总皂苷对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用;流式细胞术分析细胞凋亡;Western Blotting法检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax与Bad表达的变化。结果虎眼万年青总皂苷对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长有明显抑制作用,并呈剂量、时间依赖性;能诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞发生凋亡,且凋亡率呈浓度依赖性;能下调Bcl-2蛋白的表达,升高Bax/Bcl-2的比值,其高剂量组具有显著统计学差异(P<0.01),能上调Bad蛋白的表达,其低、中、高剂量组具有显著统计学差异(P<0.01)。结论虎眼万年青总皂苷可抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,并可诱导细胞凋亡,其机制可能与升高Bax/Bcl-2的比值,上调Bad蛋白的表达相关。     

黄芩白术对自然流产小鼠保胎作用及对蜕膜细胞的Bcl-2、Bax表达影响的研究

目的通过比较自然流产小鼠及黄芩白术作用小鼠蜕膜细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白的表达,从细胞及分子水平探讨黄芩白术对自然流产小鼠的保胎作用及对Bcl-2、Bax表达的影响。方法建立自然流产模型和黄芩白术作用模型。用免疫组化SABC法测定2组蜕膜细胞Bcl-2和Bax蛋白的表达,用DNA缺口原位末端标记技术(TUNEL)测定2组蜕膜细胞凋亡情况。结果与自然流产组相比,黄芩白术作用组Bcl-2蛋白的表达升高(P<0.01),Bax蛋白的表达明显降低(P<0.01)。蜕膜细胞凋亡指数自然流产组明显高于黄芩白术作用组(P<0.01)。结论黄芩白术对自然流产小鼠具有保胎作用,能降低凋亡指数和Bax水平,增高Bcl-2水平。     

壁虎醇提物对人食管癌细胞EC9706增殖及凋亡蛋白表达的影响

目的 研究壁虎醇提物对人食管鳞癌细胞株EC9706的生长抑制作用及其机制.方法 通过MTT法检测不同浓度、不同时间壁虎醇提物对人食管鳞癌细胞的生长抑制作用;倒置显微镜观察不同浓度壁虎醇提物作用细胞24 h后细胞形态的改变;吉姆萨染色后光学显微镜下观察细胞凋亡的形态改变;SP免疫组化法检测细胞内凋亡蛋白Bax和Bcl-2的表达.结果 6～8 mg/ml壁虎醇提物作用于细胞24,48,72 h后能够明显抑制EC9706食管鳞癌细胞株的生长(P<0.01,与阴性对照比较),抑制率分别为13%～76%, 37%～88%, 54%～93%,抑制作用呈剂量和时间依赖性;Geimsa染色可见凋亡细胞;免疫组化结果显示,壁虎醇提物(6,7 mg/ml)处理细胞24 h后,与阴性对照组比较,细胞内Bcl-2蛋白无明显变化,而Bax蛋白表达升高,Bax/Bcl-2比值升高.结论 壁虎醇提物能够抑制EC9706细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2比值升高有关.     

人参皂苷CK诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡的研究

目的探讨人参皂苷CK对人肝癌HepG-2细胞凋亡的作用及机制。方法采用MTT法测定不同浓度(30,60,90μmol/L)人参皂苷CK对人肝癌HepG-2细胞的增殖抑制作用;通过HE染色、AO/EB染色观察人参皂苷CK诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡的形态学变化;WesternBlotting检测凋亡相关蛋白P53、Bax和Bcl-2的表达情况。结果人参皂苷CK可明显抑制人肝癌HepG-2细胞的增殖,且呈剂量依赖性和时间依赖性。随着人参皂苷CK给药浓度的增加,出现典型凋亡形态特征的细胞逐渐增多,抗凋亡蛋白Bcl-2和P53表达量逐渐下降,而促凋亡蛋白Bax的表达逐渐升高,Bcl-2/Bax比例明显降低。结论人参皂苷CK可诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡,其作用机制可能与下调P53蛋白表达和降低Bcl-2/Bax比例有关。     

软坚消瘿汤对甲状腺细胞凋亡及Bcl-2/Bax表达的影响

目的观察软坚消瘿汤对实验性自身免疫性甲状腺炎(EAT)大鼠甲状腺凋亡蛋白Bcl-2/Bax和细胞凋亡的影响,从细胞凋亡角度探讨其作用机制。方法运用甲状腺球蛋白与弗氏佐剂混合免疫注射法,联合饮用高碘水模拟大鼠实验性自身免疫性甲状腺炎。免疫组化染色法检测大鼠甲状腺细胞Bcl-2/Bax变化,原位末端标记技术检测细胞凋亡。结果软坚消瘿汤能显著降低Bax表达,增加甲状腺细胞Bcl-2表达,减少甲状腺细胞凋亡。结论软坚消瘿汤可能通过降低滤泡上皮细胞Bax表达,提高Bcl-2表达从而减轻甲状腺细胞凋亡。     

益精方对不育症大鼠睾丸生精细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的观察益精方对腺嘌呤法不育症大鼠睾丸生精细胞凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响。方法Wistar大鼠75只随机分为空白组,模型组,益精方高、中、低剂量组,每组15只。除空白组外,其余各组均以腺嘌呤连续灌胃10天;从第11天开始,空白组及模型组用等量生理盐水灌胃,益精方高（3.38 g/100 g）、中（1.69 g/100 g）、低剂量（0.85 g/100 g）组分别以益精方各剂量灌胃,每天1次,连续20天。实验结束后将大鼠全部处死,摘取睾丸,采用原位缺口末端标记法（TUNEL）和免疫组化SABC法分别检测各组动物生精细胞的凋亡情况及Bcl-2/Bax蛋白的表达。结果与空白组比较,模型组Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高,细胞凋亡数升高,差异均有统计学意义（P〈0.01）。与模型组比较,三个剂量组Bcl-2蛋白表达均升高（P〈0.01,P〈0.05）,高、中剂量组Bax蛋白表达均降低（P〈0.01,P〈0.05）,中剂量组细胞凋亡数降低（P〈0.01）。结论益精方能够通过调控睾丸组织Bcl-2及Bax蛋白的表达,抑制生精细胞的凋亡。     

强心复脉颗粒对兔缺血再灌注窦房结细胞凋亡及Bax,Bcl-2,Fas-L蛋白表达的影响

目的:探讨临床有效中药复方强心复脉颗粒防治病窦综合征的分子作用机制。方法:采用兔右冠状动脉根部结扎/放松法制备兔窦房结缺血再灌注模型,运用原位末端标记(TUNEL)法观察强心复脉颗粒对兔右冠状动脉缺血再灌注致窦房结细胞凋亡的影响,并运用免疫组化的方法观察其对细胞凋亡相关基因Bax,Bcl-2,Fas-L蛋白表达的影响,用Imagepro Plus图象分析系统计算Bax,Bcl-2,Fas-L表达平均吸光度值。结果:兔右冠状动脉缺血再灌注所致窦房结损伤可明显诱导兔窦房结细胞发生凋亡,引发Fas-L基因蛋白表达增强,同时显著引发Bax基因蛋白表达增强,Bcl-2/Bax下降;强心复脉颗粒可显著下调Fas-L和Bax基因的蛋白表达,上调Bcl-2/Bax,明显抑制和阻断窦房结细胞发生凋亡。结论:通过调节缺血再灌注后窦房结Bax,Bcl,Fas-L基因的蛋白表达从而抑制和阻断细胞凋亡的发生,可能是中药复方强心复脉颗粒防治病窦综合征窦房结缺血再灌注损伤的分子作用机制。     

孕康口服液对早发性卵巢功能不全小鼠的影响

目的观察孕康口服液对早发性卵巢功能不全小鼠的影响。方法采用正常动情周期ICR小鼠灌胃给予雷公藤多苷溶液40 mg/kg构建早发性卵巢功能不全模型,大鼠随机分为正常组、模型组及孕康口服液高、中、低剂量组(36、18、9 mL/kg),灌胃给药10周。给药期间定期观察小鼠动情周期;ELISA法检测血清中雌二醇(E₂)、孕激素(P)、促卵泡生成素(FSH)、促黄体生成素(LH)、催乳素(PRL)、抗苗勒管激素(AMH)、抑制素B(INHB)水平;HE染色观察卵巢组织形态;TUNEL染色检测卵巢颗粒细胞凋亡;免疫组化检测Bax、Bcl-2蛋白表达。结果与模型组比较,孕康口服液高剂量组能缩短小鼠动情周期(P<0.05),改善卵巢组织形态学并增加窦状卵泡数量(P<0.05);升高血清E₂水平(P<0.05);减少卵巢颗粒细胞凋亡数量,并能降低Bax表达以及升高Bcl-2表达。结论孕康口服液能改善雷公藤多苷致小鼠早发性卵巢功能不全,其机制可能是通过调节凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达,减少卵巢颗粒细胞凋亡。     

咳喘宁对支气管哮喘大鼠肺组织嗜酸粒细胞凋亡及调控基因表达的影响

目的观察咳喘宁对支气管哮喘大鼠肺组织嗜酸粒细胞凋亡及调控基因Bcl-2、Bax表达的影响。方法40只SD大鼠随机分为正常组、模型组、咳喘宁高剂量组（27．0g生药／kg体重）、咳喘宁低剂量组（13．5g生药／kg体重）、桂龙咳喘宁对照组（0．41g／kg体重），每组8只。除正常组外，以卵蛋白致敏并吸入激发法制备大鼠支气管哮喘模型，各治疗组均从第1次哮喘激发开始（造模第3周）至处死前每日灌胃给药，激发并给药4周后处死大鼠，采用TUNEL法检测细胞凋亡，免疫组化检测凋控基因Bcl-2、Bax表达，采用HE染色观察肺和气管病理组织学变化。结果与正常组比较，模型组大鼠支气管管壁和平滑肌厚度、嗜酸粒细胞、淋巴细胞数以及肺组织Bcl-2表达的细胞比例明显增加，Bax表达的细胞比例显著降低；与模型组比较，各治疗组均可显著降低支气管管壁和平滑肌厚度、嗜酸粒细胞、淋巴细胞数以及Bcl-2阳性细胞的比例，升高Bax表达阳性细胞比例和嗜酸粒细胞凋亡指数。结论咳喘宁通过调节凋亡基因表达，促进嗜酸粒细胞凋亡，减轻哮喘气道炎症。     

益气强心饮对慢性心衰大鼠心肌细胞凋亡及Bax、Bcl-2基因蛋白表达影响的实验研究

[目的]本实验旨在通过动物实验观测中药益气强心饮对慢性心衰大鼠心肌细胞凋亡及Bax、Bcl-2基因蛋白表达的影响。[方法]采用腹主动脉缩窄法结合皮质激素造模法建立慢性心衰阳虚水泛证大鼠模型,随机分为模型组、西药对照组、中药对照组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、假手术组,用药8周后,观察各组大鼠的心肌细胞凋亡及Bax、Bcl-2基因蛋白表达。[结果]益气强心饮能明显下调慢性心衰大鼠心肌组织Bax基因蛋白表达、上调Bcl-2基因蛋白表达,疗效等同西药对照组。[结论]益气强心饮可调控慢性心衰大鼠的心肌细胞凋亡,具有治疗及延缓心衰发展等作用。     

两首活血化瘀方干预急性心肌缺血心肌细胞凋亡与Bcl—2、Bax表达的实验研究

目的观察两首活血化瘀方对心肌细胞调亡与相关蛋白表达干预的作用。方法采用结扎冠状动脉左前降支的方法复制急性心肌缺血模型,20条犬随机分成对照组、心肌缺血组、桃红四物汤以及丹参饮组,每组5条。分别采用HE染色、DNA末端标记法（TUNEL）以及免疫组化法观察心肌组织病理变化、心肌细胞凋亡与相关蛋白表达的变化。结果对照组无细胞变性与坏死,仅见极少量凋亡阳性细胞;心肌缺血组有明显心肌组织坏死,心肌细胞凋亡增多,Bcl-2的表达明显减少,Bax的表达明显增多,与对照组比较有统计学意义;桃红四物汤以及丹参饮组心肌细胞坏死及凋亡均显著减轻,Bcl-2的表达明显增多,Bax的表达明显减少,与心肌缺血组比较有统计学意义。结论桃红四物汤以及丹参饮可影响Bcl-2和Bax的表达,有效地抑制心肌细胞坏死及凋亡,减轻心肌细胞损伤,对缺血心肌有保护作用。     

活血胶囊对动脉粥样硬化兔平滑肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的探讨活血胶囊干预对动脉粥样硬化兔主动脉平滑肌细胞凋亡及凋亡相关因子Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法通过高脂饮食建立实验性动脉粥样硬化兔动物模型,采用TUNEL法检测平滑肌细胞凋亡,SP免疫组化法检测凋亡相关因子Bcl-2、Bax蛋白表达。结果与模型组比较,活血胶囊低、高剂量组均能降低兔主动脉平滑肌细胞凋亡的凋亡指数(P<0.05,P<0.01),降低Bax蛋白表达(P<0.05,P<0.01),升高Bcl-2蛋白表达(P<0.05,P<0.01),并呈现一定的量效关系(P<0.05)。结论活血胶囊可能通过上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,减少平滑肌细胞凋亡,从而抑制动脉粥样硬化斑块的形成。     

三氧化二砷诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡及其部分机制探讨

目的探讨三氧化二砷(AS_2 O3)诱导人胃癌 SGC-7901细胞凋亡的可能机制。方法光学及电子显微镜观察细胞形态学变化,流式细胞术(flow cytometry,FCM)及末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿嘧啶缺口末端标记法(terminal deoxynucleotidy transferase-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)判定细胞凋亡;免疫组织化学 SABC 法检测凋亡相关基因蛋白 Bcl-2、Bax、c-Myc 及 P53的表述;流式细胞术检测Caspase-3蛋白表达;以二硫代苏糖醇(Dithiothreitol,DTT)为二硫键还原剂,观察其对 As_2O_3所致的 SGC-7901细胞凋亡的影响。结果 As_2O_3作用后光镜及电镜下观察到典型凋亡细胞的形态学特征;FCM 检测在细胞周期 G_1期前出现亚二倍体凋亡峰,同时见不同程度的 G_2/M 期阻滞;TUNEL 标记发现 DNA 链的断裂;As_2O_3 作用后 Bcl-2蛋白表达降低,Bax、Caspase-3蛋白表达明显升高,c-Myc 蛋白在 As_2O_3处理12、24 h 后表...     

心脑舒通胶囊对大鼠缺血再灌注脑损伤后细胞凋亡的影响

目的:探讨心脑舒通胶囊对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡,及其对凋亡调控因子蛋白表达的影响。方法:采用线栓法阻塞大脑中动脉致大鼠局灶性脑缺血再灌注模型(MCAO),24 h后断头取脑,免疫组织化学法测定大脑皮层中Bax,Bcl-2,Fas,Fas-L以及caspase-3蛋白的表达,TUNEL法检测皮层区神经细胞凋亡。结果:缺血再灌注模型组大脑皮层内Bax,Fas,Fas-L和caspase-3蛋白明显升高,Bcl-2蛋白表达和Bcl-2/Bax明显降低,与假手术组比较,均有显著性差异(P<0.01)。心脑舒通胶囊能明显降低缺血侧大脑皮层内Bax蛋白表达,增加皮层内Bcl-2蛋白表达和Bcl-2/Bax;减少皮层内Fas和Fas-L蛋白表达,降低皮层内caspase-3蛋白和基因表达,显著减少凋亡的神经细胞数量,与模型组比较,有统计学意义(P<0.01)。结论:心脑舒通胶囊保护受损的脑组织,其机制可能与降低脑组织神经细胞凋亡,调节凋亡调控因子的蛋白表达有关。     

百事乐胶囊对慢性应激抑郁模型大鼠海马神经元凋亡的影响

目的: 探讨百事乐胶囊对慢性应激抑郁模型大鼠行为活动、海马神经元凋亡及凋亡因子B细胞淋巴瘤/白血病2(Bcl-2),Bcl-2相关x蛋白(Bax)表达的影响。方法: 将SD大鼠随机分为6组,即空白对照、抑郁模型、氟西汀、百事乐胶囊高、中、低(2.88,1.44,0.72 g·kg^-1)剂量组,采用慢性温和不可预见性应激加孤养的方式建立抑郁模型,造模同时ig给药,连续21 d,测定各组大鼠体重变化,Open-field、1%蔗糖偏食度测定大鼠行为学变化,TUNEL染色测定海马神经元凋亡变化,免疫组化检测海马Bcl-2,Bax的表达。结果: 与正常组比较,模型组体重增加、水平及垂直活动次数、蔗糖偏食度明显下降(P<0.01),凋亡细胞所占比例及凋亡细胞计数明显增加 (P<0.01);Bcl-2表达下降(P<0.01),Bax表达上升(P<0.01)。百事乐胶囊高剂量在第14、21天提升模型大鼠体重(P<0.01),中剂量在第21天升高模型大鼠体重(P<0.05);高、中剂量能提升模型大鼠水平或垂直活动次数(P<0.01 或P<0.05);高、中剂量能提高模型大鼠蔗糖偏食度,降低CA1,CA3区凋亡细胞所占比例及凋亡细胞计数(P<0.01或P<0.05),且高剂量能降低模型大鼠DG区凋亡细胞所占比例及凋亡细胞计数,升高海马CA3区Bcl-2并降低Bax的表达(P<0.05)。结论: 百事乐胶囊能通过减少海马神经元的凋亡而达到抗抑郁的作用。     

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??OBJECTIVE To investigate the apoptosis of the auction and mechanism of the hepatoma BEL-7402 cells induced by the ginseng polysaccharides(GPS). METHODS The hematoma cells BEL-7402 were incubated with GPS, cell viability was measured by CCK8, cell cycle distribution was assessed by fluorescence-activated cell sorting(FACS), the cell morphological changes were traced with TUNEL and scanning electron microscope, TNFR1, BCL-2 and Bax protein expression and ERK phosphorylation are tested by Western blot. RESULTS CCK8 results showed that GPS inhibited cells growth of BEL-7402 in dose-dependent and time-dependent. Flow cytometry found that S phase arrest was increased upon GPS concentrations. Obviously apoptotic sub-g peak was also found. And the peak was gradually enhanced with the concentration increased. TUNEL staining and SEM results showed that GPS led to significant cell morphology changes in hepatoma cells BEL-7402.And the apoptosis effect was increased upon the GPS concentrations. Western blot showed that level of apoptosis related protein Bax was increased, the expression of apoptosis-antagonizing protein Bcl-2 was decreased and the expression of death receptor TNFR1 appeared with GPS concentrations increased gradually,raise ERK phosphorylation. CONCLUSION GPS can induce apoptosis of hepatoma cells BEL-7402 by the mitochondrial pathway and the death receptor dependent pathway and ERK pathway.