急性白血病Survivin基因的表达及临床意义

目的:研究Survivin基因在急性白血病(AL)患者中的表达及临床意义。方法:应用RT-PCR检测64例AL患者Survivin mRNA的表达水平,14例健康人为正常对照,K562、HL-60细胞株为阳性对照。结果:Survivin的阳性表达率高于正常对照,且在初治AL中的表达水平较正常对照组明显升高,治疗缓解后Survivin表达下降,复发时表达水平升高在初治AL患者中Survivin阳性患者缓解率低于表达阴性的患者。结论:Survivin基因表达的紊乱可能在AL的发病中起着重要作用,并且与AL复发和预后相关。     

急性白血病B7-1基因的表达及临床意义

目的:研究B7-1基因在急性白血病(AL)患者中的表达及临床意义。方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测64例AL患者B7-1mRNA的表达水平,14例健康人为正常对照,K562、NB4细胞株为阳性对照。结果:AL患者B7-1基因的表达率与对照组没有差异,但半定量后的表达水平明显较正常低,且初发和缓解患者表达量差异无显著性。结论:B7-1基因表达的紊乱可能在AL的发病中起着重要作用,并且可能与AL复发和预后相关。     

急性髓性白血病肺耐药相关蛋白(LRP)的表达和临床意义

目的 :探讨肺耐药相关蛋白 (LRP)基因在急性髓性白血病细胞中的表达及其在临床耐药、预后判断方面的意义。方法 :应用半定量RT PCR技术 ,检测了 6 2例AML患者和 10例正常对照者LRP基因的表达 ,并随访了 10例患者治疗前后LRP基因的表达情况。结果 :M3的LRP基因表达水平和阳性率明显低于M4 、M5(P <0 .0 5 )。难治复发组LRP基因表达水平与正常对照组相比较明显增高 (P <0 .0 1)。初治组中LRP- 患者的完全缓解率明显高于LRP+患者(P <0 .0 5 )。 10例随访患者中LRP阴性者治疗效果和生存期均优于LRP阳性者。结论 :LRP过度表达与临床耐药及临床疗效相关     

重症急性胰腺炎大鼠海马NF-κB与Caspase-3的表达

目的研究大鼠重症急性胰腺炎(SAP)合并脑损伤时脑组织海马区核因子-κB p65(NF-κB p65)和半胱天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的表达及与脑损伤的关系。方法 4%牛磺胆酸钠逆行注入大鼠胰胆管建立SAP模型(SD大鼠32只,SAP组),对照组32只SD大鼠应用生理盐水(NS组)。尼氏染色检测脑组织海马区神经元损伤情况,免疫组化检测海马组织NF-κB p65和Caspase-3的蛋白表达。结果与NS组比较,在3、6、12h,SAP组NF-κB p65和Caspase-3的表达均明显增加,6h达高峰(P<0.05),且海马神经元损伤也明显加重(P<0.05)。结论 NF-κB p65参与了SAP大鼠脑损伤的发生、发展;NF-κB p65可能通过促进Caspase-3的表达来加速神经元凋亡。     

初发急性非淋巴细胞白血病SSBP2 mRNA表达研究

目的:探讨SSBP2 mRNA在初发急性非淋巴细胞白血病中的表达。方法:利用半定量RT-PCR检测64例初发急性非淋巴细胞白血病患者及20例正常对照SSBP2 mRNA表达,以β-actin作为内参照。结果:64例初发ANLL患者及20例正常对照均表达SSBP2。与正常对照比较,初发ANLL患者SSBP2mRNA表达水平为(0.410±0.216)与对照组(0.383±0.172)差异无显著性(P>0.05)。结论:初发ANLL中SSBP2mRNA表达无异常改变,SSBP2表达可能并不参与急性非淋巴细胞白血病的发生。     

鼻咽癌组织中XIAP和caspase-3的表达及意义

目的采用组织芯片技术研究鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)组织中凋亡抑制蛋白XIAP和caspase-3的表达及意义。方法搜集70例NPC患者活检和25例鼻咽部慢性炎症组织石蜡标本,利用组织芯片技术及SP免疫组织化学方法检测癌组织芯片中XIAP和半胱天冬酶-3(caspase-3)的表达。结果①NPC中XIAP的阳性表达明显高于炎症组织(P<0.05)。NPC中caspase-3的阳性表达均明显低于炎症组织(P<0.05);②caspase-3在XIAP阳性的NPC标本中的阳性表达率低于XIAP阴性的标本,XIAP和caspase-3表达均呈明显负相关(P<0.05)。结论XIAP在NPC中高表达,caspase-3在NPC中低表达,XIAP和caspase-3表达呈负相关。XIAP和caspase-3可能在NPC的发生、发展过程中起重要作用,它们参与NPC的凋亡调控过程,可能是NPC的发病机制中一个重要因素。     

B细胞淋巴瘤/白血病-2及半胱天冬酶-3在子宫肌瘤中的表达及意义

目的研究B细胞淋巴瘤/白血病-2及半胱天冬酶-3在子宫肌瘤中的表达,探讨二者与子宫肌瘤发生、发展的关系。方法采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶(SP)法检测30例子宫平滑肌瘤及周围正常子宫肌层组织中B细胞淋巴瘤/白血病-2及半胱天冬酶-3的表达。结果子宫肌瘤组织中B细胞淋巴瘤/白血病-2表达显著高于周围正常子宫肌层组织(P<0.01);子宫肌瘤组织中半胱天冬酶-3的表达显著低于周围正常子宫肌层组织(P<0.01)。B细胞淋巴瘤/白血病-2在子宫肌瘤中的表达有周期性差异,分泌期高于增生期(P<0.01);半胱天冬酶-3在子宫肌瘤及肌层中的表达无周期性(P>0.05)。结论 B细胞淋巴瘤/白血病-2在子宫肌瘤中的高表达和半胱天冬酶-3的低表达提示子宫肌瘤细胞的凋亡被抑制,可能是子宫肌瘤发生的机制之一;B细胞淋巴瘤/白血病-2在子宫肌瘤中表达的周期性,提示肌瘤在不同月经周期生长速度不同,其表达可能受性激素的调节。     

急性髓细胞白血病FLT3-ITD基因的表达及临床意义

目的 通过对初诊急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者进行FLT3 -ITD基因突变检测,探讨FLT3-ITD基因突变与AML临床特征的相关性,为AML的临床分层治疗、分子靶向治疗及预后判断提供理论依据.方法 采用实时定量聚合酶链反应(RT-PCB)检测60例初治AML患者和10例对照组患者骨髓FLT3-ITD基因突变.结果 60例初治AML患者突变阳性率为25.0％( 15/60),10例对照组患者骨髓均未检测到该突变;依据法美英协作组(FAB)分型标准备亚型FLT3 -ITD突变率不同,其中以M3、M5型突变率较高;60例初治AML中,28例老年AML组与32例非老年AML组FLT3-ITD基因表达水平比较,差异有统计学意义(P＜0.05);FLT3-ITD阳性组患者具有外周血白细胞数、骨髓白血病细胞比例高的临床特点,并且FLT3-ITD阳性组化疗后完全缓解率(CR)低于FLT3-ITD阴性组(P＜0.05).结论 FLT3-ITD基因突变在AML患者中存在一定的突变率,且多见于M3、M5型患者,FLT3-ITD阳性患者具有外周血白细胞数、骨髓白血病细胞比例高,CR低的临床特点.     

蓝萼甲素对人肺癌A549细胞的作用及其机制

<正>蓝萼甲素(glaucocalyxin A)是由唇形科香茶菜属植物香茶菜Rabdosia amethystoieds(Benth)Ham中分离提取出的二萜化合物,可抑制SiHa、Hela、HL-60等细胞株增殖[1]。本文研究了蓝萼甲素对人肺腺癌A549细胞增殖的影响,并初步探讨其机制。1材料与方法1.1材料蓝萼甲素(glaucocalyxin A),购自上海艾汇生物科技有限公司。Hoechst凋亡检测试剂盒、PARP,cleavedcaspase-3和caspase-8抗体购自上海碧云天生物公司,     

多巴胺下调 XIAP表达促进胶质瘤U251细胞凋亡的实验研究

摘 要 目的：探究多巴胺（DA）通过下调X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）对胶质瘤U251细胞凋亡的影响。 方法: DA处理胶质瘤U251细胞,Cell Counting Kit 8（CCK 8）法检测细胞增殖情况;线粒体膜电位（MMP）检测细胞凋亡情况;流式细胞术检测细胞凋亡率;实时荧光定量多聚酶链式反应（qRT PCR）和蛋白免疫印迹检测XIAP、B淋巴细胞瘤 2基因（BCL2）、Bcl 2相关X蛋白（BAX）、生存素（survivin）、活化的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶（cleaved caspase3）表达情况。 结果: 与U251组相比,U251+100 μmol·L-1DA组、U251+50 μmol·L-1DA组、U251+100 μmol·L-1DA组的细胞增殖抑制率、凋亡率、BAX、cleaved caspase3 mRNA和蛋白表达量均升高（P＜0.05）,红绿荧光相对比例、XIAP、BCL2、survivin mRNA和蛋白表达量、BCL2/BAX比值均降低（P＜0.05）。与U251+25 μmol·L-1DA组相比,U251+50 μmol·L-1DA组、U251+100 μmol·L-1DA组的细胞增殖抑制率、凋亡率、BAX、cleaved caspase3 mRNA和蛋白表达量均升高（P＜0.05）,红绿荧光相对比例、XIAP、BCL2、survivin mRNA和蛋白表达量、BCL2/BAX比值均降低（P＜0.05）。与U251+50 μmol·L-1DA组相比, U251+100 μmol·L-1 DA组的细胞增殖抑制率、凋亡率、BAX、cleaved caspase3 mRNA和蛋白表达量均显著升高（P＜0.05）,红绿荧光相对比例、XIAP、BCL2、survivin mRNA和蛋白表达量、BCL2/BAX比值均显著降低（P＜0.05）。 结论: DA可能通过下调XIAP表达,从而促进胶质瘤U251细胞凋亡。     

成人急性髓细胞白血病DNMT3A基因突变的检测和临床意义

目的研究急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)中DNA甲基转移酶3A基因(DNA methyltransferase 3 alpha,DNMT3A)突变的检出率和临床意义。方法收集70例恶性血液病病人骨髓标本,采用聚合酶链式反应技术(polymerase chainreaction,PCR)扩增目的片段,然后进行直接测序检测DNMT3A突变情况。结果 70例患者中有6例突变,全部为初发AML患者,54例初发AML患者的DNMT3A突变率为6例(突变率11.1%),其中1例为R882C突变,5例为R882H突变,在正常核型AML患者中的突变率为19.2%,在急性单核细胞白血病(acute monocytic leukemia,AML-M5)中突变率高达21.7%。DNMT3A突变组患者的年龄、性别、骨髓原始细胞数、初发时白细胞数、首次化疗缓解率等临床指标与DNMT3A野生型组相比均无统计学意义。结论 DNMT3A基因突变在AML中发生率较高,多见于正常染色体核型和AML-M5患者中,其与预后的关系有待进一步研究。     

因宁片对甲亢大鼠肝细胞凋亡调节蛋白Caspase-3和Bcl-2表达的影响

目的 观察因宁片对甲亢大鼠肝细胞凋亡调节蛋白半胱天冬酶-3(Caspase-3)和B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)表达的影响,探讨因宁片对甲亢肝损害的保护作用及其机制.方法 对SD大鼠灌胃甲状腺片1.2 g/(kg·d)制备甲亢肝损害模型.因宁片低(0.6 g/kg)、中(1.2 g/kg)、高(2.4 g/kg)剂量组和甲亢灵组(1.2 g/kg)均灌胃给药,治疗30 d后处死大鼠,取血和肝脏.用放射免疫法测血清三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、促甲状腺激素(TSH),全自动生化仪测血清天门冬酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT).Western-Blot检测Caspase-3蛋白、Bcl-2蛋白表达.结果 与空白对照组相比,模型组大鼠血T3和T4水平明显升高,TSH水平下降(P＜0.01),AST和ALT水平升高(P＜0.01),Caspase-3蛋白表达明显升高,Bcl-2蛋白表达显著下降(P＜0.01).与模型组比较,因宁片高、中、低剂量组血中T3,T4,AST,ALT水平均明显降低,TSH水平均明显升高(P＜0.05),因宁片高、中剂量组Caspase-3蛋白表达明显下调(P＜0.01和P＜0.05),Bcl-2蛋白表达明显上调(P＜0.01),且因宁片高剂量组的改变最明显.结论 因宁片对甲亢合并肝损害有预防作用,其作用机制可能与抑制肝细胞凋亡有关.     

BIR2选择性凋亡抑制蛋白抑制剂研究进展

凋亡抑制蛋白XIAP、c-IAP1和c-IAP2是抗肿瘤新药研发的重要靶点,其均含有3个BIR结构域,许多靶向BIR2和BIR3结构域的小分子IAPs抑制剂已被报道,其中BIR2选择性IAPs抑制剂研究相对较少。不同于BIR3选择性IAPs抑制剂,BIR2选择性IAPs抑制剂可以阻断XIAP与Caspase-3和Caspase-7的相互作用,因此是一类具有不同作用机制的新型IAPs抑制剂,对这类化合物的研究对进一步阐明IAPs及IAPs抑制剂的作用机制具有重要意义。综述凋亡抑制蛋白的结构与功能、Smac的功能及其与IAPs的相互作用、BIR2选择性IAPs抑制剂的研究进展,以期为相关研究提供参考。     

藻蓝蛋白对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及对Caspase-3 mRNA表达的影响

目的探讨藻蓝蛋白对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及对Caspase-3 mRNA表达的影响。方法应用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞再灌注(MCAO/R)模型,随机分为假手术组4只、对照组40只和治疗组40只,应用藻蓝蛋白进行干预治疗,通过Bederson法评价大鼠的神经功能缺失症状,氯化三苯基四氮唑染色测量脑梗塞体积,原位杂交技术检测脑缺血再灌注后不同时段Caspase-3 mRNA的表达。结果脑缺血再灌注24~48h,治疗组神经功能缺损评分和脑梗死体积明显低于对照组。脑缺血再灌注6h,对照组Caspase-3mRNA阳性细胞数开始增加,至再灌注24h达高峰,2d后逐渐减少,至14d仍有表达。治疗组Caspase-3 mR-NA阳性细胞的数量相对较少,其变化规律与对照组相似,同一时间点相比较均显著低于对照组。结论藻蓝蛋白可下调Caspase-3 mRNA的表达,对脑缺血再灌注损伤有显著保护作用。     

7-NI对发育期大鼠反复惊厥GRP78/Caspase-12表达的影响

目的:在对氯化锂—匹罗卡品(LICL-PILO)致发育期大鼠反复惊厥实验研究中,探讨GRP78(葡萄糖调节蛋白78)、Caspase-12(半胱天冬蛋白酶12)动态变化及7-NI(7-硝基吲唑)对其表达的影响.方法:Wistar大鼠144只,日龄均为21d,随机分成3组:对照组(C组)、惊厥组(SR组)、7-硝基吲唑治疗组(7-NI组),每组48只.最后一次惊厥完成后分别与6h、12h、24h、72h后取海马,免疫组化法及半定量逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)法检测其GRP78、Caspase—12的表达.结果:免疫组化及RT-PCR均显示对照组GRP78表达很少,惊厥组的表达量低于7-NI治疗组(P＜0.01),且两者均在12h达高峰;对照组caspase-12阳性细胞数极少,可以忽略不计,惊厥组的表达量高于7-NI治疗组(P＜0.01),且两者均在24h达高峰.结论:反复惊厥发作时GRP78及Caspase-12均上调,但GRP78早于Caspase-12; 7-NI可能通过抑制NO等应激源的产生来抑制GRP78及Caspase-12为标志的内质网应激途径,起到神经保护作用.     

瑞舒伐他汀对脑缺血再灌注后大鼠XIAP与Smac表达的影响

目的研究瑞舒伐他汀对脑缺血再灌注后大鼠脑组织X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(XIAP)与第2个线粒体源胱天酶激活剂(Smac)其表达的影响。方法大鼠随机分为假手术组、模型组和实验组,每组8只。实验组在模型制备前用瑞舒伐他汀5 mg·kg^-1·d^-1连续灌胃10 d,每天1次;假手术组和模型组正常喂养。制作大鼠大脑中动脉局灶性脑缺血再灌注模型,于缺血2 h再灌注24 h后进行神经功能评分。断头取脑,制作病理切片,以TUNEL染色法检测细胞凋亡情况,以免疫组化法和Western blot法检测XIAP与Smac表达变化。结果给药后,模型组与实验组脑组织中神经细胞凋亡计数分别为94. 63±14. 31,64. 24±8. 49; XIAP阳性细胞计数分别为22. 62±4. 38,36. 76±5. 27; XIAP蛋白表达分别为0. 54±0. 07,0. 78±0. 09; Smac阳性细胞计数分别为47. 59±6. 93,31. 76±4. 27; Smac蛋白表达分别为0. 91±0. 14,0. 71±0. 08,差异均有统计学意义(均P <0. 05)。结论瑞舒伐他汀可通过调控XIAP与Smac信号通路,减少神经细胞凋亡,发挥神经保护作用。     

抗凋亡蛋白Livin在急性白血病中的表达

目的 研究Livin在急性白血病中的表达,探讨其临床意义.方法 采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT PCR)检测40例急性白血病(AL)患者(AL组)Livin mRNA的表达水平,其中初治患者16例(初治亚组)、复发患者11例(复发亚组)、完全缓解患者13例(缓解亚组).另选10例健康人(对照组)的标本作正常对照.结果 初治亚组中Livin mRNA的表达较对照组明显升高(P＜0.05),治疗缓解后的表达水平下降(P＜0.05),复发时又再次升高;初治亚组Livin阳性的患者缓解率(14.3%)低于表达阴性的患者(77.8%)(P＜0.05).Livin mRNA的表达与AL患者性别、年龄无关(P＞0.05).结论 Livin基因的过度表达参与了AL的发病,并且是AL复发的高危因素.Livin基因的高表达是判断AL预后不良的指标之一.     

抗凋亡蛋白Livin在急性白血病中的表达

目的研究Livin在急性白血病中的表达,探讨其临床意义。方法采用半定量逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)检测40例急性白血病(AL)患者(AL组)LivinmRNA的表达水平,其中初治患者16例(初治亚组)、复发患者11例(复发亚组)、完全缓解患者13例(缓解亚组)。另选10例健康人(对照组)的标本作正常对照。结果初治亚组中LivinmRNA的表达较对照组明显升高(P<0.05),治疗缓解后的表达水平下降(P<0.05),复发时又再次升高;初治亚组Livin阳性的患者缓解率(14.3%)低于表达阴性的患者(77.8%)(P<0.05)。LivinmRNA的表达与AL患者性别、年龄无关(P>0.05)。结论 Livin基因的过度表达参与了AL的发病,并且是AL复发的高危因素。Livin基因的高表达是判断AL预后不良的指标之一。     

人肾透明细胞癌中细胞凋亡相关因子Caspase-3和Caspase-9的表达

目的研究人肾透明细胞癌组织中细胞凋亡相关重要因子Caspase-3、Caspase-9表达的变化与肾癌的关系。方法标本离体后分成肾透明细胞癌组、癌旁组织组、正常肾组织组,均用10%的甲醛溶液固定48h,常规石蜡包埋、切片5μm,应用免疫组织化学方法进行观察研究。结果 Caspase-3与Caspase-9均在正常肾组织中可见少量弱阳性反应,癌旁组织阳性表达增加,肾癌组织表达明显减少,两两比较结果显示,3组之间差异均有统计学意义（P〈0.01）。肾癌4个期之间比较差异无统计学意义（P〉0.05）。Caspase-3与Caspase-9蛋白表达呈正相关（r=0.988,P〈0.05）。结论癌组织中Caspase-3和Caspase-9表达下降,说明细胞凋亡减少,癌组织细胞增殖旺盛,是肿瘤形成的重要机制。