间尼索地平对5-羟色胺诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖和迁移的影响及其机制

目的探讨间尼索地平(m-Nis)对5-羟色胺(5-HT)诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖和迁移的影响,并深入研究其作用机制。方法采用植块法培养大鼠PASMCs。实验分为6组:空白对照组、5-HT(1μmol·L-1)组,m-Nis(10-5、10-6、10-7、10-8mol.L-1)组。噻唑蓝(MTT)比色法、Transwell迁移小室法分别测定PASMCs的增殖和迁移,Western blot法检测大鼠PASMCs中增殖细胞核抗原(PCNA)的蛋白表达及细胞外信号调节激酶1和2(ERK1/2)的磷酸化水平,研究m-Nis对ERK1/2/MAPK信号通路的影响。结果不同浓度m-Nis明显抑制了5-HT诱导的大鼠PASMCs增殖(P<0.05或P<0.01)和迁移(P<0.01),并呈现一定的浓度依赖性;另外,Western blot结果显示m-Nis对5-HT诱导的大鼠PASMCs中PCNA的蛋白表达有不同程度的抑制作用(P<0.05或P<0.01),10-5,10-6,10-7mol.L-1m-Nis还明显抑制了5-HT诱导的大鼠PASMCs中ERK1/2磷酸化水平的升高,p-ERK1/2/ERK1/2比值均有不同程度地降低(P<0.05或P<0.01)。结论m-Nis对5-HT诱导的大鼠PASMCs增殖和迁移有明显的抑制作用,可能与其抑制PCNA蛋白表达及ERK1/2/MAPK信号通路有关。     

右美托咪定对高氧诱导的人肺泡上皮细胞线粒体损伤及HIF-1α/ERK通路的影响

摘要：目的:观察右美托咪定（Dex）对高氧诱导的人肺泡上皮细胞HPAEpiC线粒体损伤及缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）/细胞外信号调节激酶（ERK）通路的影响。方法:培养HPAEpiC细胞,分为对照（Control）组、高氧模型（Hyperoxia）组、高氧和药物处理（Hyperoxia+Dex）组、高氧和HIF-1α激动剂处理（Hyperoxia+DMOG）组以及高氧和药物、HIF-1α抑制剂处理（Hyperoxia+Dex+YC-1）组。采用活性氧（ROS）检测试剂盒和MitoSOXTM?Red荧光染色分别检测细胞中和线粒体中ROS含量;线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1法）检测线粒体膜电位;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测细胞中HIF-1α/ERK通路相关蛋白及核呼吸因子-1（NRF-1）蛋白水平。结果:与Control组比较,Hyperoxia组HPAEpiC细胞中和线粒体中ROS含量升高,线粒体膜电位降低,细胞凋亡率增高,细胞中HIF-1α、p-ERK和NRF-1蛋白水平降低（P<0.05）。与Hyperoxia组比较,Hyperoxia+Dex组和Hyperoxia+DMOG组HPAEpiC细胞中和线粒体中ROS含量降低,线粒体膜电位升高,细胞凋亡率降低,细胞中HIF-1α、p-ERK和NRF-1蛋白水平升高（P<0.05）。与Hyperoxia+Dex组比较,Hyperoxia+DMOG组和Hyperoxia+Dex+YC-1组HPAEpiC细胞中和线粒体中ROS含量升高,线粒体膜电位降低,细胞凋亡率增高,细胞中HIF-1α、p-ERK和NRF-1蛋白水平降低（P<0.05）。结论:Dex可能通过激活HIF-1α/ERK通路减轻高氧诱导的人肺泡上皮细胞线粒体损伤。     

吡那地尔对人肺动脉平滑肌细胞KATP通道蛋白及ERK1/2磷酸化的影响

目的 探讨ATP敏感性钾(KA口)通道开放剂吡那地尔(Pin)对内皮素1(ET-1)诱导的人肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)KATe通道蛋白表达及细胞外信号调节激酶1和2(ERK1/2)磷酸化的影响.方法 体外培养人PASMCs,用ET-1诱导其增殖,应用Westem blot方法评价Pin对ET-1诱导的人PASMCs KArP通道蛋白磺酰脲受体亚单位(SUR2B)和内向整流性孔区亚单位(Kir6.1)表达的影响以及ERK1/2的磷酸化作用.结果 ET-1显著下调SUR2B的表达,Pin呈浓度依赖性上调SUR2B表达;KATP通道拮抗剂格列本脲阻断Pin的作用,而Kir6.1的表达不受影响.ET-1呈时间依赖性促进人PASMCs ERK1/2磷酸化,10min时最明显,Pin(10μmol/L)拮抗ET-1对ERK1/2磷酸化的影响,格列本脲逆转Pin的作用.结论 KATP通道开放剂Pin通过上调KATP通道蛋白的表达,抑制ET-1诱导的人PASMCs ERK1/2的磷酸化.     

异丹叶大黄素对低氧肺动脉平滑肌细胞增殖的作用及机制

摘要：目的:观察异丹叶大黄素（ISO）对低氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）增殖的影响,并探讨其可能机制。方法:不同浓度的ISO在低氧或常氧培养条件下孵育大鼠PASMCs 24 h后,CCK-8试剂盒检测细胞增殖与细胞毒作用,流式细胞仪分析细胞周期,实时定量PCR（RT-PCR）检测细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、细胞周期蛋白E（Cyclin E）、细胞周期蛋白依赖性激酶2（CDK2）、细胞周期蛋白依赖性激酶4（CDK4）、细胞周期蛋白依赖性激酶6（CDK6） mRNA的表达,Western Blot检测总的及磷酸化的磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）与蛋白激酶B（Akt）表达,荧光酶标仪检测活性氧族（ROS）的产生。结果:CCK-8检测结果表明ISO能够抑制低氧PASMCs增殖（P<0.05）,且实验浓度ISO对PASMCs无明显毒性作用（P>0.05）;流式细胞仪结果表明ISO使处于G0/G1期的PASMCs比例增加（P<0.05）,处于S期PASMCs比例减少（P<0.05）; RT-PCR检测结果表明ISO能够抑制Cyclin D1、CyclinE、CDK2、4、6 mRNA的表达（P<0.05）; Western Blot检测结果表明ISO能够抑制PI3K/Akt信号通路的活化（P <0.05）;荧光酶标仪检测结果表明ISO能够抑制ROS的产生（P <0.05）。结论:ISO可抑制低氧PASMCs增殖,其机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路的活化及ROS的产生有关。     

大鼠肺动脉平滑肌细胞原代培养及低氧对缺氧诱导因子- 1α的影响

目的获得活力稳定、高度纯化的体外培养大鼠血管平滑肌细胞,为肿瘤研究提供实验材料;并探讨低氧对抗肿瘤药物研究新靶点：缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）的影响。方法无菌下取SD大鼠心肺组织,然后分离出肺动脉段,分离肺动脉中膜层,用组织块贴壁法培养,倒置相差显微镜观察细胞形态、普通免疫组织化学法（SP法）进行细胞鉴定。随后,将体外培养的大鼠PASMCs,设计常氧组、低氧组H2,H6,H12,H24,用Western blotting法检测HIF-1α的蛋白表达。结果用组织贴块法成功培养大鼠PASMCs,得到生长稳定、纯度高的PASMCs,且培养与纯化可以同时进行,可获得稳定传代的细胞;HIF-1α蛋白在常氧组有少量表达,在低氧条件下,其表达明显增加。结论成功建立体外大鼠肺动脉平滑肌细胞原代培养模型;低氧条件下促进其中HIF-1α的表达;这提示HIF-1α蛋白的表达可能是肿瘤细胞适应缺氧环境的重要原因。     

人参皂苷Rg1保护心肌细胞免于缺氧-复养损伤涉及PKCε-activatedERK1／2径路

目的：人参皂苷Rg1是人参、三七等人参属药材的主要活性成分。众多研究表明人参总皂苷和三七总皂苷具有心血管方面的活性及治疗作用。本研究旨在观察人参皂苷Rg1单体心肌保护作用及作用机制。方法：培养大鼠乳鼠心肌细胞,缺氧3小时复养1小时后检测心肌细胞乳酸脱氢酶（LDH）的渗漏,心肌细胞内总超氧化物歧化酶（T-SOD）和过氧化氢酶（CAT）的活性,还原型谷胱甘肽的含量。利用DFH为探针检测细胞内活性氧（ROS）水平,Fluo-4探针检测细胞内钙水平。采用WesternBlot技术检测细胞PKCe在细胞膜和细胞浆的分布,以及ERK1/2、P38和JNK的蛋白磷酸化水平,选择PMA为PKCε的激动剂,PD98059、SP600125、SB203580为ERK1/2、P38和JNK的抑制剂。结果：人参皂苷Rg1具有缺氧一复氧损伤保护作用,可明显降低乳酸脱氢酶的渗漏。人参皂苷Rg1可抑制ROS的产生,并可升高细胞内的抗氧化酶活性。与模型组比较Rg1 120μM处理组T-SOD、CAT、GSH分别升高85．8％、73．1％和36．9％,细胞内ROS水平下降了63．8％。     

迷迭香酸对大鼠抑郁样行为的作用及其机制研究

目的：探讨迷迭香酸（ RA）对慢性不可预见应激（ CUS）抑郁模型大鼠抑郁样行为的改善作用及机制。方法将大鼠随机分为6组,每组16只。 A组：生理盐水组;B组：低剂量RA组;C组：高剂量RA组;D组：CUS＋生理盐水组;E组：CUS＋低剂量RA组;F组：CUS＋高剂量RA组。建立CUS抑郁大鼠模型,干预结束后对部分大鼠（每组8只）进行旷场实验、强迫游泳行为学测试后,取海马组织蛋白样品,酶联免疫吸附法（ ELISA）检测脑源性神经营养因子（BDNF）水平,免疫印迹（Western-blot）法检测细胞外调节蛋白激酶（ERK1/2）、磷酸化细胞外调节蛋白激酶（pERK1/2）的蛋白表达水平。各组其余8只大鼠进行水迷宫实验。结果行为学实验、海马组织BDNF的ELISA检测、pERK1/2及ERK1/2蛋白定量及水迷宫实验目标象限停留时间百分比结果D组与A、B、C组比较均存在显著差异（P〈0.05）,F组与D组存在显著差异（P〈0.05）,而E组与D、F组之间无显著差异（P〉0.05）,A、B、C组之间差异也无统计学意义（P〉0.05）。结论 CUS模型大鼠会表现出类似于抑郁症患者的抑郁样行为,而一定剂量的RA干预能改善这一行为,其机制可能为RA通过上调抑郁大鼠海马星形胶质细胞中ERK1/2的磷酸化,促进其释放BDNF,进而发挥抗抑郁效应。     

丹参酮IIA在低氧诱导肺动脉高压中的保护作用

目的：通过低氧诱导肺动脉高压（PAH）小鼠及细胞模型,探讨丹参酮IIA（TanIIA）对PAH的疗效及可能的作用机制。方法：选取C57BL6雄性小鼠随机分为常氧组、低氧组及低氧+TanIIA组各5只。4周后采用右心导管法检测小鼠右心室压力,行肺组织氧化苏木精伊红染色法（HE）染色,采用硫代巴比妥酸（TBA）法和WST-8法检测肺组织中丙二醇（MDA）及超氧化物歧化酶（SOD）水平。取肺动脉平滑肌细胞（hPASMCs）随机分为常氧组、低氧组和低氧+TanIIA组,24 h后采用蛋白免疫印迹（WB）实验检测Bax、P62、Akt及P-Akt蛋白表达水平。结果：与常氧组小鼠比较,低氧组右心室收缩压升高（P<0.05）;与低氧组小鼠比较,低氧+TanIIA组右心室收缩压降低（P<0.05）。低氧组较常氧组肺血管明显重构,与低氧组比较,低氧+TanIIA组肺血管重构程度减轻;与常氧组比较,低氧组肺组织中SOD下降,MDA增加（P<0.05）;与低氧组比较,低氧+TanIIA组小鼠肺组织中SOD增加,MDA降低（P<0.05）。与常氧组比较,低氧组PASMCs中Bax蛋白表达降低,P62蛋白表达增加（P<0.05）;与低氧组比较,低氧+TanIIA组PASMCs中Bax蛋白表达增加,P62蛋白表达降低（P<0.05）。与常氧组比较,低氧组PASMCs中P-Akt/Akt比值增加（P<0.05）;与低氧组比较,低氧+TanIIA组PASMCs中P-Akt/Akt比值降低（P<0.05）。结论：TanIIA具有保护低氧PAH的作用,可能与TanIIA可减轻低氧PAH中氧化应激水平及抑制低氧PASMCs中PI3K/Akt信号通路的激活,部分逆转低氧状态下PASMCs凋亡的减少,改善PAH中肺血管重构有关。     

辛伐他汀干预对急性心肌梗死大鼠ERK1／2信号通路及心室重塑的影响

目的：观察辛伐他汀对急性心肌梗死大鼠心功能、心室肌Ⅰ、Ⅲ型胶原含量变化、心脏细胞外信号调控蛋白激酶1/2（ERK1/2）和p-ERK1/2的影响。方法：20只建模后24h存活的雄性Wistar心肌梗死（AMI）大鼠,随机分为AMI（A）组,辛伐他汀（S）组[20mg/（kg.d）],每组10只,另设假手术（C）组（n=6）,手术方法同模型组,但不结扎冠状动脉。术后8周测定心功能和血流动力学参数。处死后测定左室重量指数（left ventricular weight index,LVWI）;Western blot法检测ERK1/2和p-ERK1/2的表达。结果：辛伐他汀组与AMI组比较心肌梗死面积差异无统计学意义（P〉0.05）;左心室截面直径、面积和左心室容积差异无统计学意义（P〉0.05）;LVW、LVW/BW和LVEDP显著降低（P〈0.01）,±dp/dt/LVSP绝对值升高（P〈0.01）。辛伐他汀组与AMI组相比左心室非梗死区Ⅰ型和Ⅲ型胶原含量和ERK1/2磷酸化水平显著降低（P〈0.01）,左心室非梗死区Ⅰ型、Ⅲ型胶原含量和心脏组织内ERK1/2磷酸化水平均呈显著正相关（r分别为0.916和0.983,P〈0.01）。结论：辛伐他汀能有效抑制AMI左心室非梗死区Ⅰ、Ⅲ型胶原的产生以及缓解大鼠AMI后心室重构、改善心功能。这种作用可能与抑制心脏内ERK1/2磷酸化水平有关。     

水仙环素活化AKT/mTOR通路减轻高氧诱导新生大鼠急性肺损伤

目的：探讨水仙环素对高氧诱导新生大鼠急性肺损伤的影响及其机制。方法：取足月新生Wistar大鼠40只,随机分为常氧组（21% O2）、常氧+水仙环素组、高氧组（85% O2）、高氧+水仙环素组,每组10只。各组大鼠于不同含氧量条件下暴露7 d,另取足月新生大鼠50只,随机分为常氧组、高氧组、高氧+水仙环素组、高氧+水仙环素+蛋白激酶B（AKT）抑制剂组及高氧+水仙环素+雷帕霉素组,每组10只。各药物组于出生后0、2、4、6 d时分别腹腔注射1 mg/kg水仙环素、1mg/kg AKT抑制剂和4mg/kg雷帕霉素,比较各组大鼠肺损伤、促炎细胞因子、纤维化及肺组织细胞凋亡水平。结果：与常氧组比较,高氧组大鼠体质量、肺组织B淋巴细胞瘤-2基因/Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2/Bax）水平明显降低,支气管肺泡灌洗液（BALF）中细胞总数、总蛋白及肺组织湿干质量、BALF与血清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、单核细胞趋化因子（MCP-1）、IL-6含量、肺组织α平滑肌动蛋白（α-SMA）、波形蛋白及胶原蛋白Ⅰ表达、肺组织细胞凋亡率、原代肺成纤维细胞凋亡率、磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）/AKT、磷酸化雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）/mTOR升高（P<0.05）;常氧组与常氧+水仙环素组上述指标比较差异无统计学意义（P>0.05）。与高氧组比较,高氧+水仙环素组体质量、肺组织Bcl-2/Bax水平升高,BALF中细胞总数、总蛋白及肺组织湿/干质量、BALF与血清中TNF-α、IL-1β、MCP-1、IL-6含量、肺组织α-SMA、波形蛋白及胶原蛋白Ⅰ表达、肺组织细胞凋亡率、原代肺成纤维细胞凋亡率、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR降低（P<0.05）。与高氧+水仙环素组比较,高氧+水仙环素+AKT抑制剂组TNF-α、IL-1β水平升高（P<0.05）,高氧+水仙环素+雷帕霉素组TNF-α、IL-1β、胶原蛋白Ⅰ表达升高,Bcl-2/Bax水平明显降低（P<0.05）。结论：水仙环素可保护新生大鼠高氧肺损伤,其机制可能与水仙环素活化AKT/mTOR信号通路,改善炎症反应、减缓肺纤维化程度、抑制肺组织细胞的凋亡有关     

茶多酚对急性低氧促培养的兔肺小动脉平滑肌细胞产生血栓素A_2和前列环素的影响

目的　观察茶多酚 (teapolyphonels,TP)对肺内小动脉平滑肌细胞 (PASMCs)产生血栓素A2 (TXA2 )和前列环素(PGI2 )及其比值的变化的影响 ,以探讨茶多酚对肺血管的作用及其途径。方法　采用培养的家兔PASMCs为材料 ,用放射免疫法测定在低氧和常氧及环加氧酶抑制剂吲哚美辛干预下 ,培养液中血栓素B2 (TXB2 )和 6 酮 PGF1α的含量。结果　低氧使PASMCs培养液中TXB2 和 6 酮 前列腺素F1α(6 keto PGF1α)含量及其比值显著增加。常氧和低氧条件下 ,终浓度为 3× 10 -5mol·L-1的茶多酚轻微降低TXB2 而明显提高 6 酮 PGF1α的含量 ;终浓度为 2 5× 10 -5mol·L-1的吲哚美辛明显降低TXB2 和 6 酮 PGF1α含量 ;茶多酚和吲哚美辛共同作用 ,TXB2 的含量降低无显著性 ,而 6 酮 PGF1α含量比单纯用吲哚美辛增加明显。结论　茶多酚可能通过增强PASMCs内PGI2 合成酶的活性在低氧时增强PASMCs产生PGI2 ,使TXA2 与PGI2 的比值显著降低而逆转低氧性肺血管收缩。     

碘化N-正丁基氟哌啶醇通过非外钙机制抗心肌细胞缺氧复氧损伤

目的研究碘化N-正丁基氟哌啶醇(F2)对大鼠心肌细胞无外钙缺氧/复氧(H/R)损伤的作用及其机制。方法建立无外钙(零钙液)的心肌细胞H/R模型,于缺氧液及复氧液中加入1×10-6mol/L的F2。倒置显微镜下观察细胞形态结构及搏动的变化;采用蛋白印迹法检测心肌细胞磷酸化ERK(p-ERK1/2)、总ERK1/2蛋白表达的变化。结果零钙液H/R可引起培养心肌细胞形态结构呈损伤性改变,包括胞体收缩、伪足减少和搏动无力;零钙液H/R可引起培养心肌细胞p-ERK1/2表达增加,但不影响总ERK表达,即可激活培养心肌细胞ERK1/2;F2可以改善零钙液H/R状态下心肌细胞形态结构的损伤。F2对零钙液H/R心肌细胞p-ERK1/2高表达具有抑制作用,但不影响总ERK的表达。结论 F2可通过非外钙依赖机制拮抗心肌细胞H/R损伤,这可能与其抑制零钙液H/R状态下ERK1/2的激活密切相关。     

5-ALA-PDT联合放疗对常氧与乏氧人卵巢癌SKOV3细胞的协同杀伤作用机制

目的：探讨在常氧与乏氧下5-氨基酮戊酸（5-ALA）介导的光动力疗法（PDT）（5-ALA-PDT）联合放疗对人卵巢癌SKOV3细胞的协同杀伤作用机制。方法：实验分为常氧组与乏氧组,两组再各设正常对照组（N）、单纯药物组（0.3 mmol·L^-1）、放射加药组（0.3 mmol·L^-1+6 Gy）、光动力组（0.3 mmol·L^-1+0.5 J·cm^-2）及联合组（6 Gy+0.3 mmol·L^-1-0.5 J·cm^-2）,采用荧光显微镜观察5-ALA转化为原卟啉IX的荧光强度,倒置显微镜结合台盼蓝单染法检测细胞膜破损率,荧光显微镜结合Hoechst 33342单染法检测细胞凋亡,流式细胞仪结合试剂盒检测ROS含量。结果：4 h后细胞膜附近明显出现红色荧光,常氧下的荧光强度显著强于乏氧。24 h或48 h后,联合组细胞膜破损率常氧高于乏氧（P<0.01）,随着时间的延长细胞膜破裂增多（P<0.01）;同时间点同组内联合组细胞膜破损率比单纯放射加药组、光动力组都要高（P<0.01）。24 h或48 h后,联合组细胞凋亡率24 h常氧低于乏氧（P<0.01）,48 h不显著（P>0.05）,随着时间的延长凋亡率不断降低（P<0.01）;同时间点同组内联合组24 h细胞凋亡率比单纯放射加药组、光动力组都要高,而48 h却都要低（P<0.05）。0 h、12 h或24 h后,联合组ROS含量常氧低于乏氧（P<0.01）,随着时间的延长ROS含量先升高后降低（P<0.01）,12 h含量最高;同时间点同组内联合组ROS含量都比单纯放射加药组、光动力组都要高（P<0.05）。结论：常氧下5-ALA-PDT与放疗联用表现出协同作用,可能与产生的ROS导致细胞膜破损造成细胞大量坏死有关;而乏氧下表现出协同作用可能与ROS导致细胞大量凋亡有密切联系。     

在大鼠中15-LO/15-HETE参与缺氧对K_V1.5表达的抑制作用

目的采用分子生物学技术从组织和细胞水平上观察阻断15-LO/15-HETE后,缺氧对KV1.5表达的影响。方法通过酶法分离、培养Wistar大鼠肺动脉血管平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)和大鼠肺动脉,应用Western blot和RT-PCR方法分别从蛋白质水平和mRNA水平上观察在15-LO阻断剂CDC和NDGA作用下,缺氧对KV1.5表达的影响。结果从组织和细胞水平上,用CDC和NDGA阻断15-LO即阻断了内源性15-HETE的产生,KV1.5的表达量在蛋白质水平和mRNA水平与未阻断组比较都增加。在阻断了内源性15-HETE的产生以后,加入外源性15-HETE,KV1.5的表达量减低。说明不仅内源性15-HETE参与诱导缺氧对KV1.5表达的影响,外源性15-HETE也同样能影响缺氧条件下KV1.5的表达量。但在阻断了内源性15-HETE的产生以后,加入外源性15-HETE,KV1.5的表达量减低。说明不仅内源性15-HETE参与诱导缺氧对KV1.5表达的影响,外源性15-HETE也同样能影响缺氧条件下KV1.5的表达量。结论上述结果表明,从大鼠肺动脉组织和细胞水平上,内源性15-HETE介导了缺氧对KV1.5表达的抑制作用。     

Rac1 inhibition protects against hypoxia/reoxygenation-induced lipid peroxidation in human vascular endothelial cells

Both in vivo models of ischemia/reperfusion and in vitro models of hypoxia (H)/reoxygenation (R) have demonstrated the crucial role of the Rac1-regulated NADPH oxidase in the production of injurious reactive oxygen species (ROS) by vascular endothelial cells (ECs). Since membrane lipid peroxidation has been established as one of the mechanisms leading to cell death, we examined lipid peroxidation in H/R-exposed cultured human umbilical vein ECs (HUVECs) and the role of Rac1 in this process. H (24 h at 1% O2)/R (5 min) caused an increase in intracellular ROS production compared to a normoxic control, as measured by dichlorofluorescin fluorescence. Nutrient deprivation (ND; 24 h), a component of H, was sufficient to induce a similar increase in ROS under normoxia. Either H(24 h)/R (2 h) or ND (24 h) induced increases in lipid peroxidation of similar magnitude as measured by flow cytometry of diphenyl-1-pyrenylphosphine-loaded HUVECs and Western blotting analysis of 4-hydroxy-2-nonenal-modified proteins in cell lysates. In cells infected with a control adenovirus, H (24 h)/R (2 h) and ND (24 h) resulted in increases in NADPH-dependent superoxide production by 5- and 9-fold, respectively, as measured by lucigenin chemiluminescence. Infection of HUVECs with an adenovirus that encodes the dominant-negative allele of Rac1 (Rac1N17) abolished these increases. Rac1N17 expression also suppressed the H/R- and ND-induced increases in lipid peroxidation. In conclusion, ROS generated via the Rac1-dependent pathway are major contributors to the H/R-induced lipid peroxidation in HUVECs, and ND is able to induce Rac1-dependent ROS production and lipid peroxidation of at least the same magnitude as H/R.     

缺氧诱导因子-1α过表达通过葡萄糖转运载体-4介导缺氧大鼠骨髓间充质干细胞对葡萄糖的摄取

目的探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因转染是否提高骨髓间充质干细胞(MSC)缺氧状态下的葡萄糖摄取能力以及这种能力是否与葡萄糖转运载体-4(GLUT-4)的表达和易位有关。方法将MSCs分为常氧非转染组(即对照组)、常氧转染组、缺氧非转染组和缺氧转染组,分别于常氧(5%CO_2,37℃)和缺氧(94%N_2、1%O_2和5%CO_2,37℃)条件下孵育8 h。放射同位素法检测~3H-G摄取量,免疫细胞化学和Western-blot检测GLUT-4的表达。结果①与缺氧非转染组相比,缺氧转染组显著提高细胞摄取~3H-G量(P<0.01),但二者均显著低于对照组和常氧转染组对~3H-G的摄取(P<0.01);②与缺氧非转染组相比,缺氧转染组显著提高细胞和细胞膜GLUT-4蛋白的表达(P<0.01),2组均显著低于对照组GLUT-4蛋白的表达和移位(P<0.01);③~3H-G摄取量与细胞膜中GLUT-4表达呈正相关(r=0.437,P=0.001)。结论 HIF-1α基因提高MSCs的葡萄糖摄取能力,此机制与HIF-1α基因提高GLUT-4的表达和易位相关。     

Akt-dependent heme oxygenase-1 induction by NS-398 in C6 glial cells: a potential role for CO in prevention of oxidative damage from hypoxia

We investigated whether increased heme oxygenase (HO)-1 activity by NS-398 is responsible for protection against hypoxia-induced damage in C6 cells. The expression of HO-1 was analyzed by Western blot and cell viability was analyzed by lactate dehydroxygease (LDH) activity. NS-398 increased HO-1 expression in a concentration- and time-dependent manner during both normoxia and hypoxia (95% N(2)/5% CO(2)), but the latter was much more sensitive. Because induction of HO-1 occurred due to hypoxia itself, NS-398 seemed to potentiate the expression of HO-1. The reduced cell viability due to hypoxia was significantly reversed by either NS-398 or [Ru(CO)(3)(Cl)(2)](2), a CO-donor. Zinc protophorphrin (ZnPPIX), a HO-1 inhibitor, inhibited the protective effect of NS-398 against hypoxia. Treatment with glucose oxidase (GOX, 20 mU/ml) increased ROS production and caused apoptotic death, as assayed by DCFH-DA and TUNEL, respectively. NS-398 significantly reduced GOX-induced cell death and ROS production; these effects were reversed by pre-treatment with oxyhemoglobin (HbO(2)), a CO/NO scavenger, or ZnPPIX. Finally, NS-398 increased PPAR-gamma luciferase activity in transiently PPAR-gamma transfected C6 cells, which was antagonized by ZnPPIX. NS-398 increased phosphorylation of Akt, and LY-294002, a specific PI(3) kinase inhibitor, inhibited NS-398-induced HO-1 expression. Taken together, we conclude that therapeutic use of NS-398 in the treatment of oxidative stress-oriented neuronal disorders would be beneficial through dual actions: HO-1 induction and COX-2 inhibition.     

Inhibitory effect of calcitonin gene-related peptide on hypoxia-induced rat pulmonary artery smooth muscle cells proliferation: role of ERK1/2 and p27

Calcitonin gene-related peptide (CGRP) inhibits angiotensin II-induced proliferation of aortic smooth muscle cells via inactivation of extracellular signal-regulated protein kinase 1/2 (ERK1/2). ERK1/2 is necessary for the degradation or down-regulation of the cell cycle inhibitor p27, and is also crucial in mediating proliferation of pulmonary artery smooth muscle cells (PASMCs). Whether ERK1/2/p27 signal pathway is involved in CGRP-mediated pathogenesis of pulmonary hypertension and vascular remodeling remains unknown. Pulmonary hypertension was induced by hypoxia in rats, and capsaicin (50 mg/kg, s.c.) was used to deplete endogenous CGRP. Proliferation of cultured PASMCs was determined by BrdU incorporation method and flow cytometry. The expression/level of CGRP, p27, ERK1/2, c-fos and c-myc was analyzed by radioimmunoassay, immunohistochemistry, real-time PCR or Western blot. Sensory CGRP depletion by capsaicin exacerbated hypoxia-induced pulmonary hypertension in rats, as shown by an increase in right ventricle systolic pressure, mean pulmonary artery pressure and vascular hypertrophy, accompanied with decreased p27 expression and increased expression of phosphorylated ERK1/2, c-fos and c-myc. Exogenous application of CGRP significantly inhibited hypoxia-induced proliferation of PASMCs concomitantly with increased p27 expression and decreased expression of phosphorylated ERK1/2, c-fos and c-myc. These effects of CGRP were abolished in the presence of CGRP(8-37). Knockdown of p27 also reversed the inhibitory effect of CGRP on proliferation of PASMCs and expression of c-fos and c-myc, but not on ERK1/2 phosphorylation. These results suggest that CGRP inhibits hypoxia-induced proliferation of PASMCs via ERK1/2/p27/c-fos/c-myc pathway. Down-regulation of CGRP may contribute to remodeling of pulmonary arteries in hypoxia-induced pulmonary hypertension.     

三七皂苷单体R1对低氧高二氧化碳肺动脉平滑肌细胞ERK1/2表达的影响

目的:探讨三七皂苷单体R1减轻低氧高二氧化碳性肺动脉收缩(hypoxia hypercapnia-in-duced pulmonary vasoconstriction,HHPV)的作用及其与细胞外信号调节激酶(ERK)1/2信号通路的关系。方法:原代培养雄性SD大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs),随机分为6组:常氧组(N组),低氧高二氧化碳组(H组),DMSO对照组(HD组),R1干预组(R8、R40、R100组)。采用免疫印迹法测定ERK1/2磷酸化蛋白表达,半定量逆转录-聚合酶链反应技术检测ERK1、ERK2基因表达水平。结果:p-ERK蛋白在N组表达弱,与H、HD组比较,R8、R40、R100组均不同程度下调,以R8组为著,差异有统计学意义(P<0.01);ERK1mRNA、ERK2mRNA在N组弱表达,与H、HD组比较,R8、R40、R100组表达均不同程度降低(P<0.01和P<0.05),以R8组为著。结论:ERK1/2信号通路可能介导大鼠低氧高二氧化碳性肺动脉收缩;三七皂苷单体R1可能通过抑制ERK1/2通路减轻低氧高二氧化碳性肺动脉收缩。     

丹参对体外高糖环境中大鼠系膜细胞活性氧抑制作用的研究

目的：观察丹参对高糖环境中系膜细胞所产生的活性氧（ROS）及转化生长因子β1（TGF—β1）的抑制作用。方法：将细胞分为以下6组：对照组（C组,普通MEM培养基,含5．6mmol·L^-1葡萄糖）;高糖组（H组,30mmol·L^-1高糖MEM培养基）;小剂量丹参干预组（S1组,H组＋37．5mg·ml^-1丹参）;中剂量丹参干预组（S2组,H组＋75mg·ml^-1丹参）;大剂量丹参干预组（S3组,H组＋150mg·ml^-1丹参）;单纯丹参组（S组,C组＋150mg·ml^-1丹参）。分别采用激光共聚焦和ELISA法检测ROS及TGF—β1水平。结果：H组ROS水平较C组明显增高,分别采用不同浓度丹参干预后,ROS水平均显著降低,并呈剂量依赖性;与H组相比,不同剂量丹参干预组TGF-β1表达均降低,但仅S3组TGF—β1的下降具有统计学意义。与对照组相比,单纯丹参干预组中ROS和TGF—β1水平无明显变化。结论：丹参可减少高糖环境中系膜细胞ROS及TGF—β1的产生,而这可能是丹参发挥肾脏保护作用机制之一。