造血干细胞诱导树突状细胞的临床应用

目的:探讨回输自动员人外周造血干细胞(PBSC)体外诱导树突状细胞(DCs)治疗乳腺癌患者的可行性.方法:采用CS-3000血细胞分离系统分离9例粒细胞集落刺激因子(G-CSF)预动员乳腺癌患者PBSC,在体外经rhGM-CSF、rhIL-4诱导和自体肿瘤细胞提取物刺激后成为成熟DCs,收集并自体回输.用MTT法测定DCs在体内外激活细胞毒性T细胞(CTL)的体外杀伤活性.结果:9例患者平均采集1.02×109PBSC,培养后平均收获2.3×108DCs,CD83表达率平均为68.7%.收获DCs的数量是等量未动员全血的57.5倍.在体外自体肿瘤抗原致敏的DCs激活CTL对自体原代培养的肿瘤细胞具有显著的杀伤活性.DC瘤苗自体回输除轻微发烧外,无任何其它不良反应,回输后患者PBMC对自体肿瘤细胞的杀伤活性提高20倍.结论:用血细胞分离机分离G-CSF动员肿瘤患者PBSC,在体外诱导制备自体DC瘤苗,回输治疗可提高对自体肿瘤细胞的杀伤活性,而且安全可靠,无明显不良反应.     

人骨髓,脐血CD34^＋干细胞体外扩增的树突状细胞的表型及 …

目的：从人骨髓造血前体细胞体外培养扩增树突状细胞（ＤＣｓ）,测定其表型及Ｔ细胞刺激活性。方法：采用Ｍｉｎｉ－ＭＡＣＳ分离技术,从正常人骨髓、脐血分离ＣＤ３４＾＋造血干细胞,体外以重组ｈＧＭ－ＣＳＦ,ｈＴＮＦ－α,ｈＩＬ－３诱导培养２周,流式细胞术检测扩增细胞的表面表型及细胞内ＩＬ－１２的表达,体外同种混合淋巴细胞反应检测扩增ＤＣｓ的Ｔ细胞刺激活性。结果：从正常人骨髓、脐血分离得到高纯度（〉９０％）     

造血干细胞的体外扩增及其临床应用

ＣＤ３４＾＋造血干细胞已显示有巨大的临床应用价值，本文概述了造血干细胞移植时的剂量要求，ＣＤ３４＾＋细胞的纯化手段和扩增技术，并简介ＣＤ３４＾＋细胞纯化扩增技术的临床应用情况。     

正常供者外周血造血干细胞动员效果及影响因素

 目的　探讨粒细胞集落刺激因子（G-CSF）动员正常供者外周血造血干细胞的效果、毒副作用及影响因素。方法　对59名异基因造血干细胞正常供者采用G-CSF 皮下注射3 ~ 5 d,使用COBE Spectra血细胞分离机采集外周血干细胞,流式细胞术检测采集物中CD+34细胞数。结果　所有供者第一次采集的单个核细胞（MNC）及CD+34细胞量平均值分别为4.4（1.12～13.06）×108／kg供者体重及3.78（1.14～12.92）×106／kg供者体重。患者不良反应轻微。男性供者、年龄小于45岁者及采集前白细胞计数高者采集所得CD+34细胞数较高。结论　G-CSF作为正常供者动员剂安全有效。患者性别、年龄及采集前白细胞计数可作为预测因素。     

自体造血干细胞移植物的体外净化

高剂量的放化疗联合自体造血干细胞移植治疗恶性肿瘤肿瘤夫败的主要原因是是疾病的复发。     

自体外周血造血干细胞移植治疗T细胞淋巴瘤疗效分析

 【摘要】 目的 评价自体外周血造血干细胞移植（APBSCT）治疗T细胞淋巴瘤的临床疗效。方法 回顾性分析2006年9月至2011年12月于上海瑞金医院行APBSCT的T细胞淋巴瘤患者22例,包括T淋巴母细胞淋巴瘤6例,外周T细胞淋巴瘤（PTCL）16例（间变大细胞淋巴瘤8例,非特异性PTCL4例,皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤1例,鼻型NK／T细胞淋巴瘤2例,皮肤T细胞淋巴瘤1例）。所有病例均按WHO 2001年和WHO 2008年分类进行病理分型。预处理方案包括BEAM方案13例,ICE方案4例,CBV方案5例。采用1998年国际工作小组制定的非霍奇金淋巴瘤疗效评价标准评价疗效,根据患者移植前疾病状态和对化疗敏感性分为完全缓解（CR1）组和未达CR1组、敏感组和耐药组,并对临床治疗疗效以及移植前疾病状态与预后关系进行分析。结果 22例患者移植后中位随访13.1个月（1～60个月）,2年预期的无进展生存率为（67.6±11.0） %,总生存率为（71.1±11.1） %。移植后共6例出现疾病进展或复发,其中5例死亡。CR1和化疗敏感组无进展生存率分别为100 %和91.7 %,高于未达CR1组（42.6 %）和耐药组（19.0 %）,而且两组病例总生存也显著优于未达CR1组和耐药组。结论 T细胞淋巴瘤患者移植时疾病缓解状态和对化疗敏感性对移植疗效有显著影响,提示在化疗敏感阶段和（或）获得CR1后应早期行APBSCT治疗。     

造血干细胞移植治疗外周T 细胞淋巴瘤的进展

外周T 细胞淋巴瘤（PTCL）,其免疫表型提示来源于胸腺后（或成熟）T 细胞,包括大组非特异性PTCL。在全球范围内,PTCL约占非霍奇金淋巴瘤（NHL ）的10％,在我国约占20% ～30% ,明显高于西方国家。大多数PTCL侵袭性强,恶性程度高,传统的化疗方法与B 细胞NHL 相比疗效不佳、预后不良,５年生存率低。近年来研究表明造血干细胞移植（HSCT）对PTCL有较好的疗效,优于传统的化疗方法。本文主要总结自体造血干细胞移植（ASCT）、异基因造血干细胞移植（allo-SCT ）和自体外周血干细胞移植联合自体骨髓移植（APBHSCT+ABMT）三种方式及其优劣。ASCT无供受者之间的免疫排斥反应,造血重建快,但其复发率相对较高;allo-SCT 具有移植物抗淋巴瘤作用,但其有较高的治疗相关死亡率;APBHSCT+ABMT对于年龄偏大、造血功能差而难以采集足够外周血干细胞、有潜在出血和感染风险较大PTCL患者意义较大。HSCT的移植方法、移植时机、预处理方案及强度等多种因素对移植疗效均有影响,如何根据不同PTCL患者的具体情况选择不同的移植方式、选择合适的移植时机等问题还值得进一步深入的研究。      

自体造血干细胞移植后的免疫重建研究进展

大剂量放化疗联合造血干细胞移植是治疗恶性血液肿瘤及部分实体瘤的新疗法之一。在世界范围内,每年大约有1万例自体造血干细胞移植用来治疗恶性肿瘤。近年来的各项随机实验证实,大剂量化疗联合自体造血干细胞输注可明显延长血液系统恶性疾病包括复发的非霍奇金淋巴瘤犤1犦,急性髓性白血病犤2犦和多发性骨髓瘤犤3犦患者的无病生存期(DFS)。在实体瘤的治疗上也已取得了较好的效果犤4犦。然而,移植后仍有部分病人出现复发和转移,移植后免疫功能的长期抑制是造成移植后恶性肿瘤复发的重要原因之一,移植后免疫功能的状态及免疫治疗对清除体内残…     

铁过载对造血干细胞移植的影响

铁过载与造血干细胞移植（HSCT）预后关系密切。移植前铁过载可能增加患者HSCT后发生感染、肝静脉闭塞病（VOD）及肝损伤的风险,降低患者移植后总生存（OS）率、无事件生存（EFS）率。移植后铁过载可能降低患者的OS率。祛铁治疗有可能使HSCT患者获益。     

rHuG-CSF动员健康供者外周血造血干细胞的效果观察

目的:观察重组人粒细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte-colony stimulating factor,rHuG-CSF)动员健康供者外周血造血干细胞的效果及影响因素。方法:将本研究中心异基因造血干细胞移植健康供者163例,分别采用3种不同厂家生产的rHuG-CSF进行外周血造血干细胞动员,对其动员效果、受者移植后造血重建等情况进行比较。结果:不同种rHuG-CSF动员后采集的单个核细胞(MNC)及CD34 细胞均能满足临床造血干细胞移植的需要,130例人类白细胞抗原(human leucocyte antigens,HLA)配型相合的同胞受者移植后均获得顺利植入。动员的单个核细胞数及CD34 细胞数与性别无关,而CD34 细胞数在41~60岁年龄组中明显减少(P<0.05);对采集时机的分析显示:第5天采集的单个核细胞数及CD34 细胞数最高(P<0.05),此后逐渐下降。结论:糖基化的及两个非糖基化的rHuG-CSF制剂均能有效地在异基因移植中作为外周血造血干细胞动员剂。     

自体造血干细胞移植治疗恶性血液病61例疗效分析

 目的　评价自体造血干细胞移植（AHSCT）治疗恶性血液病的疗效。方法　中南大学湘雅医院自1994年4月至2008年8月对61例恶性血液病患者进行了61次AHSCT治疗,移植时急性非淋巴细胞白血病（ANLL）30例,非霍奇金淋巴瘤（NHL）25例,霍奇金淋巴瘤（HL）3例,浆细胞瘤3例。ANLL采用预处理方案为MAC方案：美法仑（Mel）160 mg／m2×1次,阿糖胞苷（Ara-C）2.0／2.5 g×2次,环磷酰胺（Cy）1.8 g／m2×2次;淋巴瘤以及浆细胞瘤采用预处理方案：全身放疗（TBI）+Cy,单次照射8～10 Gy,剂量率5 cGy／min,Cy 1.8 g／m2×2次。或在以上方案基础上进行修改。结果　所有患者重建造血,1例患者移植过程中心功能衰竭死亡,移植相关死亡率为1.6 %。60例患者长期随访,1例患者失访。移植组中位随访期为52（2～211）个月,复发13例（21.3 %）,复发中位时间为18（2～77）个月。死亡14例（23.0 %）,现生存47例（77.0 %）,中位生存时间为66（15～211）个月。5年无病生存率（DFS）为[（77.5±5.5）%,比同期单纯接受化疗者的（31.6±7.3）%]明显增高,差异有统计学意义（P＜0.01）。结论　AHSCT移植患者移植相关死亡率低,无病生存率较高,可作为恶性血液病治疗的重要方法。     

Radiation response of human normal and leukemic hemopoietic cells assayed by in vitro colony formation

The effect of ionizing radiation on the survival of bone marrow cells from patients with acute nonlymphocytic leukemia or from hematologically normal controls was studied using colony formation as an endpoint. A modified agar culture method which incorporated daily feeding with new medium was used to allow the growth of leukemic cell colonies. Analysis of radiation-dose survival curves revealed that normal bone marrow cell populations exhibited a relatively steep slope, with values of D0 ranging from 0.5-1.3 Gy (mean = 0.82 +/- 0.22 Gy). There was essentially no shoulder to the survival curves, with Dq values ranging from less than 0 to 0.3 Gy. The leukemic cells tested displayed survival curves that did not differ qualitatively from those obtained with normal cells, i.e., steep slopes and neglible shoulders. However, the average value of the D0 (0.62 +/- 0.15 Gy) was statistically different (p less than 0.025) than that obtained for the normal cells. The results of these studies may have implications both for the use of radiation therapy for the treatment of malignant hemopoietic diseases, and for total body irradiation prior to bone marrow transplantation.     

Role of Fbxw7 in the maintenance of normal stem cells and cancer-initiating cells

In addition to the properties of self-renewal and multipotency, stem cells are characterised by their distinct cell cycle status. Somatic stem cells are maintained in a quiescent state but switch reversibly from quiescence to proliferation as needed. On the other hand, embryonic stem cells and induced pluripotent stem cells proliferate rapidly until the induction of differentiation results in inhibition of cell cycle progression. Uncovering the mechanisms underlying cell cycle control in stem cells should thus provide insight into regulation of the balance between self-renewal and differentiation, a key goal of stem cell biology. Recent research has shown that cancer-initiating cells (CICs), a cell population with stem cell-like properties in cancer, are also quiescent, with this characteristic conferring resistance to anticancer therapies that target dividing cells. Elucidation of the mechanisms of CIC quiescence might therefore be expected to provide a basis for the eradication of cancer. This review summarises our current understanding of the role of F-box and WD40 repeat domain-containing 7 (Fbxw7), a key regulator of the cell cycle, in the maintenance of normal stem cells and CICs, as well as attempts to define future challenges in this field.     

干细胞移植治疗骨髓增生异常综合征13例

 目的　探讨干细胞移植（HSCT）在骨髓增生异常综合征（MDS）治疗中的疗效以及预处理方式的选择。方法　对13例MDS患者行异基因造血干细胞移植 （allo-HSCT）（包括HLA配型全相合10例、半相合2例、脐血移植1例）。输注单个核细胞（MNC） 6.92（2.65～21.33）×108／kg,CD34细胞4.47（1.49～10.22）×106／kg。其中,5例选择全身照射+氟达拉滨+环磷酰胺（TBI+Flud+Cy）方案预处理,3例白消安（BU）／Cy预处理,3例TBI+CY,2例采用阿糖胞苷（Ara-C）+BU+Cy+替尼泊苷（VM26）预处理。移植物抗宿主病（GVHD）的预防：2例HLA配型半相合者给予抗胸腺细胞球蛋白（ATG）联合环孢素A（CsA）加短程甲氨蝶呤（MTX）治疗,并于移植后1～28 d持续给予霉酚酸酯（MMF）,其他病例仅给予CsA加短程MTX。结果　13例患者中9例造血完全重建,移植相关死亡4例。结论　HSCT是可以治愈MDS的有效方法。预处理选择应采取个体化。     

间充质干细胞诱导体外分化来的初始T细胞表型变化的实验研究

 目的　将体外由CD+34细胞分化而来的初始T细胞与异基因骨髓间充质干细胞（MSC）共孵育,观察初始T细胞表型的变化。方法　传3代以上的MSC与脐血CD+34细胞分化的初始 T细胞共孵育1周,用流式细胞仪检测其表型变化。结果　与对照组相比,CD+8细胞明显增加[共孵育组（35.9±6.3）%,单纯初始T细胞培养组（18.4±4.5）%],且CD+8 CD+3细胞明显增加[共孵育组（27.6±2.8）%,单纯初始 T细胞培养组（15.2±3.1）%]。结论　骨髓MSC在体外与异基因初始 T淋巴细胞共孵育使CD+8初始T细胞表达增加,这种变化可能与其诱导免疫耐受相关。     

Cancer stem cells in human gastrointestinal cancer

Cancer stem cells (CSCs) are thought to be responsible for tumor initiation, drug and radiation resistance, invasive growth, metastasis, and tumor relapse, which are the main causes of cancer‐related deaths. Gastrointestinal cancers are the most common malignancies and still the most frequent cause of cancer‐related mortality worldwide. Because gastrointestinal CSCs are also thought to be resistant to conventional therapies, an effective and novel cancer treatment is imperative. The first reported CSCs in a gastrointestinal tumor were found in colorectal cancer in 2007. Subsequently, CSCs were reported in other gastrointestinal cancers, such as esophagus, stomach, liver, and pancreas. Specific phenotypes could be used to distinguish CSCs from non‐CSCs. For example, gastrointestinal CSCs express unique surface markers, exist in a side‐population fraction, show high aldehyde dehydrogenase‐1 activity, form tumorspheres when cultured in non‐adherent conditions, and demonstrate high tumorigenic potential in immunocompromised mice. The signal transduction pathways in gastrointestinal CSCs are similar to those involved in normal embryonic development. Moreover, CSCs are modified by the aberrant expression of several microRNAs. Thus, it is very difficult to target gastrointestinal CSCs. This review focuses on the current research on gastrointestinal CSCs and future strategies to abolish the gastrointestinal CSC phenotype.     

The in vitro effect of epirubicin on human normal and leukemic hemopoietic cells

Epirubicin, at concentrations ranging between 10(-7) and 10(-13) M, was assayed in semisolid cultures of human normal hemopoietic cells and in liquid cultures of 5 different human leukemic cell lines. The growth of all normal hemopoietic progenitor cells was inhibited by the higher drug concentrations; at the lowest concentration, only CFU-E and 7th-day CFU-GM were not inhibited. On the other hand, leukemic cells were sensible only to the higher concentration of epirubicin, which, nevertheless, was not fully inhibitory. Leukemic cell differentiation was not promoted by the drug, as evidenced by a panel of monoclonal antibodies, by cytochemistry and by functional tests. These results suggest a marked in vitro myelotoxicity of epirubicin, that does not appear to be compensated by a powerful control of leukemic cell proliferation.     

脐血体外扩增干祖细胞和同时诱导分化T、NK和DCs免疫细胞

Umbilical cord blood stem cell transplantation (CB- SCT) has approached significant success in treatment of lethal congenital or malignant disorders, but CBSCT with low incidence of GVHD is associated with higher rates of delayed or failed engraftment and relapse than bone marrow transplants. This may be caused by immature im- mune cells, compared with the corresponding cells from adults. More studies have been reported that cord blood T lymphocytes are immature in phenotype and function…     

造血干细胞移植治疗血液病110例疗效观察

 【摘要】　目的　观察造血干细胞移植（HSCT）治疗血液病的疗效,探讨移植相关并发症的预防及处理方法。方法　回顾性分析采用HSCT治疗的110例血液病患者临床资料。61例患者采用自体外周血造血干细胞移植（auto-PBSCT）;49例患者采用异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）,其中,28例采用HLA全相合的同胞异基因外周血干细胞移植（allo-PBSCT）,20例采用单倍体异基因骨髓+PBSCT,1例急性淋巴细胞白血病患儿采用脐带血HSCT。预处理方案：淋巴瘤患者采用BEAM方案（卡莫司汀+依托泊苷+阿糖胞苷+左旋苯丙氨酸氮芥）,白血病患者采用改良的Bu／Cy方案（羟基脲+阿糖胞苷+白消安+环磷酰胺+司莫司汀）,多发性骨髓瘤患者采用大剂量左旋苯丙氨酸氮芥方案,急性再生障碍性贫血患者采用FC（氟达拉滨+环磷酰胺）+兔抗人胸腺细胞球蛋白（ATG）方案。移植物抗宿主病（GVHD）的预防采用短程甲氨蝶呤+环孢素A+吗替麦考酚酯,单倍体移植患者加ATG。结果　109例（99.1 %）患者成功获得造血重建,移植后中性粒细胞≥0.5×109／L、血小板≥20×109／L的平均天数在自体移植中分别为10 d和12 d,在异基因移植中分别为12 d和15 d;allo-HSCT中Ⅰ～Ⅲ度急性GVHD的发生率为28.6 ％（14／49）,慢性GVHD的发生率为32.7 ％（16／49）。中位随访36个月（1～60个月）,84例（76.4 ％）患者无病生存,其中,auto-PBSCT组45例（73.8 ％）,allo-HSCT组39例（79.6 ％）;26例（23.6 ％）死亡。auto-PBSCT组16例（26.2 ％）复发死亡,2例（3.3 ％）复发,无移植相关死亡;allo-HSCT组9例（18.4 ％）复发死亡,3例（6.1 ％）复发,1例（2.0 ％）发生移植相关死亡。结论　HSCT是治疗恶性血液病安全、有效的方法,也是治疗血液病的重要手段之一。