人巨细胞病毒特异性T淋巴细胞检测的研究进展

人巨细胞病毒 (HCMV)是疱疹病毒的一种 ,在不同人群中的感染率为 5 0 %～ 90 %。初次感染后 ,在宿主免疫的控制下潜伏于骨髓等细胞中。当免疫功能受损时 (移植、获得性免疫缺陷综合征、肿瘤等 ) ,潜伏的病毒易被激活 ,严重者可引起致死性肺炎、肝炎[1] 。大量研究表明 ,特异性细胞免疫对HCMV感染的控制和疾病的恢复起重要作用 ,尤其是CD8+ T对控制HCMV感染更为重要[1,2 ] 。Cwynarski等[3 ] 研究发现 ,HCMV潜伏感染期 ,如特异性CD8+ T在免疫正常者中为 0 4～ 0 8× 10 7/L ;而肾移植受者为≥ 1× 10 7/L时 ,均可阻止病毒的激活…     

慢性乙型肝炎患者CD8~+记忆T细胞的检测分析

目的探讨慢性乙型肝炎患者和急性乙型肝炎恢复期患者CD8+记忆T细胞的产生及分布特性,分析其临床意义。方法流式细胞术检测16例急性乙型肝炎恢复期患者、26例慢性乙型肝炎患者和18名健康人的外周血CD8+记忆T细胞亚群,以初始T细胞、中心记忆T细胞(TCM)、效应记忆T细胞(TEM)、终末分化效应细胞(TTEM)占总计数CD8+细胞数的百分比表示。结果与健康组、急性乙型肝炎恢复期组相比,慢性乙型肝炎组患者CD8+初始T细胞明显增加(P<0.001);TCM、TEM细胞亚群分布频率显著降低(P<0.001)。急性乙型肝炎恢复期组与健康组相比,TCM升高(t=2.34,P=0.03)。高病毒载量组慢性乙型肝炎TTEM百分比比中低病毒载量高(t=2.43,P=0.02)。无论肝炎活动期还是静止期,初始T细胞、TCM、TEM、TTEM百分比差异均无统计学意义。结论慢性乙型肝炎患者和急性乙型肝炎恢复期患者CD8+记忆T淋巴细胞亚群的比例存在明显差异,可能与体内抗原长期存在以及刺激的程度相关。从而导致清除病毒的能力下降,慢性化的形成。     

活动性肺结核与潜在感染者CD8+、CD4+记忆T细胞表达水平的比较

[目的]探讨CD8+、CD4+记忆T细胞表达水平在活动性肺结核与潜伏感染者中的表达差异及其意义.[方法]本院确诊的25例活动性肺结核患者(A组)、25例肺结核潜伏感染者(B组)、30例健康人群作为健康对照组(C组),检测各组外周血CD4+记忆T细胞、CD8+记忆T细胞的表达水平,并探讨其与高分辨率CT评分(HRCT)的相关性.[结果]B组的CD4+ Tcm、CD8+ Tcm水平显著高于A组、C组(P＜0.05),A组的CD4+ Tcm、CD8+ Tcm水平显著的高于C组(P＜0.05).B组、A组的CD4+Tem、CD8+Tem水平显著的低于C组(P＜0.05),B组、A组的CD4+ Tem、CD8+ Tem水平相比差异无显著性(P＞0.05).A组患者CD4+ Tcm、CD8+ Tcm水平与HRCT评分呈显著的负相关关系(P＜0.05);A组患者CD4+Tem、CD8+ Tem水平与HRCT评分无显著的相关系(P＞0.05).[结论]CD4+、CD8+中心记忆性T细胞在活动性肺结核与潜伏感染者中水平差异显著,并且与肺结核患者病例损伤程度有关.     

肽刺激培养法体外扩增巨细胞病毒特异细胞毒性T淋巴细胞

目的研制一种扩增特异细胞毒性T淋巴细胞频数的方法。方法用不同浓度的巨细胞病毒（CMV）特异的表位肽pp65刺激人外周血单个核细胞（PBMCs）使CMV特异CTLs在PBMCs中的百分比增高。用四聚体一PE和CD。一FITC双标记PBMCs中的CMV特异CTLs，然后用流式细胞仪分析。结果这个方法能有效扩增CMV特异CTLs，使在外周血中占淋巴细胞百分比不到l％的CMV特异CTLs迅速增加到接近20％，占CDsT淋巴细胞的40％以上，并能从单份血样中获得大量特异CTLs用于流式分析。结论肽刺激培养法简便、易操作，能有效扩增CMV特异CTLs，使不同人的数据更容易对比和连续的评价。该方法也为过继性免疫疗法治疗巨细胞病毒疾病打下了基础。     

特异诱导脐血CD8+抗白血病细胞毒淋巴细胞的研究

微小残留病灶(minimal residual disease,MRD)的存在是导致白血病复发的主要根源,特异性免疫治疗能有效地清除MRD,其中的策略之一就是诱导并回输白血病特异性的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL).本实验的目的是研究脐血能否在体外诱导生成CD8+ CTL,所生成的CD8+ CTL能否特异性杀伤白血病细胞,从而确定脐血淋巴细胞的利用价值及用于特异性免疫治疗的可行性.通过联合细胞因子体外诱导脐血单个核细胞(mononuclear cells,MNC)分化为树突状细胞(dendritic cells,DC),同时负载U937冻融抗原;成熟DC刺激同源的脐血T淋巴细胞成为CTL,经MACS磁珠分选出CD8+ CTL.用倒置显微镜、扫描电镜及流式细胞仪等方法检测DC,四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定杀伤活性.结果显示,10份人脐血标本均可培养出形态典型、功能成熟的DC.3组效应细胞CD8+ CTL、CD8- CTL和T淋巴细胞(TL)组在相同效靶比(40∶1)对U937细胞株的杀伤率分别为(66.36±12.43)%、(34.47±8.19)%和(15.79±4.64)%,以CD8+ CTL组最高;效靶比为40∶1时,CD8+ CTL对U937细胞株的杀伤率(66.36%)高于对K562细胞株的杀伤率(41.97%)(P＜0.05);而CD8- CTL对U937细胞株和K562细胞株的杀伤率无显著差异(P＞0.05).结论用负载U937白血病细胞株抗原的成熟脐血DC可使脐血淋巴细胞诱导产生特异性的CD8+ CTL;CD8+ CTL对U937白血病细胞株的杀伤活性强于CD8- CTL的作用;CD8+ CTL对U937白血病细胞株杀伤具有特异性.     

CD4+和CD8+T淋巴细胞在结直肠癌诊治中的临床应用

结直肠癌(CRC)在全世界最常见的致命恶性肿瘤中排名第 3 位,在基因组改变、表达特征及药物反应性方面表现出异质性[1].目前,最可靠的结肠癌预后因素是 TNM分期.尽管筛查和治疗的进步极大地提高了CRC患者的生存率,但在诊断为相同 TNM期的肿瘤患者中,临床结果差异很大,局限性癌患者的复发率为20％～30％[2].在一项研究中,Ⅰ期复发率为 5％,Ⅱ期复发率为 12％,Ⅲ期复发率为 33％[3].随着肿瘤组织学分级的进展,复发率随之增加.由于辅助化疗可显著降低复发率,术后辅助化疗已成为Ⅲ期CRC 的标准治疗方法.然而,辅助化疗在Ⅱ期CRC中的作用仍有争议.虽然目前指南建议对高危Ⅱ期患者进行辅助治疗,但对高危Ⅱ期 CRC 的定义仍然不明确.TNM分期的局限性表明,需要在预测复发的临床病理特征之外做更详细的检查,以寻找一个更好的生存和复发预后指标.目前发现 CD4+、CD8+ T淋巴细胞在很多恶性肿瘤中存在差异,并对预后有指导意义,但其对 CRC 诊治及预后价值的综合研究相对较少.本文对近几年关于 CRC 患者CD4+和(或)CD8+T 淋巴细胞水平的研究文献作一综述,旨在评估其作为一项 CRC 诊治及预后指标的可能性.     

多种炎性疾病患者外周血CD4＋和CD8＋T淋巴细胞的检测与临床意义分析

目的：探讨恶性肿瘤、肺结核、干燥综合征、葡萄膜炎等多种炎性疾病患者外周血CD4＋和CD8＋淋巴细胞的变化及其临床意义。方法应用BD FACSCanto II流式细胞仪检测上述疾病患者外周血CD4＋、CD8＋ T细胞并计算两者比值,同时检测健康者标本20例作为健康对照组,进行统计分析。结果与健康对照组比,恶性肿瘤组CD4＋ T淋巴细胞、CD4＋/CD8＋均明显降低,CD8＋ T淋巴细胞增高,差异有统计学意义（ P＜0．05）;全身炎性反应综合征组CD4＋ T淋巴细胞、CD4＋/CD8＋均明显降低,CD8＋ T 淋巴细胞增高,差异有统计学意义（ P＜0．05）;葡萄膜炎组CD8＋ T淋巴细胞增高,差异有统计学意义（P＜0．05）;肺结核组CD4＋ T淋巴细胞降低,差异有统计学意义（ P＜0．05）。结论患者的 CD4＋、CD8＋ T 淋巴细胞异常,表明机体细胞免疫功能异常。流式细胞仪检测CD4＋、CD8＋ T淋巴细胞可以作为患者临床免疫功能的初步诊断指标,辅助疾病治疗和病情观察。     

ALL病儿T淋巴细胞CD28表达及意义

目的探讨儿童B细胞型急性淋巴细胞白血病（ALL）治疗前后外周血T淋巴细胞表面CD28的表达及临床意义。方法采用流式细胞术,检测27例初发的B细胞型AI。L病儿化疗前后外周血T淋巴细胞表面CD28的表达,其中经化疗后达到完全缓解（cR）21例,未缓解（NR）6例。以同期23例健康体检儿童作为正常对照组。结果与正常对照组比较,治疗前初发ALL病儿外周血CD4^＋T淋巴细胞表面、CD8^＋T淋巴细胞表面CD28的表达均显著降低（t=21．56、44．02,P〈0．05）。化疗后CR组病）LPb周血CD4^＋T淋巴细胞表面、CD8^＋T淋巴细胞表面CD28较治疗前均显著升高（t=10．84、25．30,P〈0．05）,而NR组病儿CD4^＋T淋巴细胞表面、CD8^＋T淋巴细胞表面CD28与治疗前比较差异无显著性（P〉0．05）。结论CD28是参与AI。L发病的重要共刺激分子,其表达异常可能是ALL的发病因素之一;其表达水平可能是判断ALI。预后及化疗敏感性的因素之一。     

慢性乙型肝炎病毒感染患者外周血特异性CD8~+T淋巴细胞检测的临床意义

目的研究慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染患者外周血特异性CD8+T淋巴细胞(CTL)频率的变化及临床价值。方法采用乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)18-27表位肽-人类白细胞抗原(HLA)-A*0201五聚体及CD8单克隆抗体,设计流式细胞技术检测HLA-A2+6例、HLA-A2-12例非HBV感染者、HLA-A2+49例和HLAA2-42例HBV感染者外周血中针对该肽段的特异性CTL数量,占总计数CD8+细胞数百分比表示。结果 HLA-A2-HBV感染未抗病毒治疗者特异性CTL(0.30%～14.40%,中位数1.13%,n=20)与HLA-A2-非HBV感染者(0.33%～3.90%,中位数1.04%,n=12),差异无统计学意义(P>0.05),但显著低于HLA-A2-抗病毒治疗者(0.25%～20.30%,中位数2.11%,n=22,P<0.05);HLA-A2-抗病毒治疗者特异性CTL和HLA-A2+未抗病毒治疗者特异性CTL(0.20%～29.90%,中位数2.22%,n=20)均显著高于HLA-A2-非HBV感染者(P<0.01);HLA-A2+抗病毒治疗者特异性CTL(0.14%～39.22%,中位数1.33%,n=29)显著高于HLA-A2-非HBV感染者(P<0.05)。HLA-A2+未抗病毒组中血清HBV DNA<103 copy/mL、丙氨酸氨基转移酶小于40U/L者特异性CTL频率增高(P<0.05、0.01)。结论 HBV抗原肽-HLA-A*0201五聚体流式细胞技术能在体外直接检测外周血HBV特异性CTL频率的变化,其水平一定程度反映不同临床感染状态慢性HBV感染患者T淋巴细胞对特异性抗原表位免疫应答的差异。     

CD3~+、CD4~+、CD8~+T细胞水平在胃癌患者外周血中的变化

目的探讨T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+比值水平在胃癌患者外周血中的表达及意义。方法采用血液分析仪技术,检测40例胃癌手术前患者(按临床分期为Ⅰ～Ⅱ级组18例,Ⅲ～Ⅳ级组22例)及25名正常对照组外周血CD3+、CD4+、CD8+细胞和CD4+/CD8+比值T细胞水平。结果胃癌患者外周血CD3+、CD4+细胞、CD4+/CD8+比值分别为0.78%±0.35%、0.37%±0.21%、0.61%±0.42%,明显低于正常对照组(P<0.05);胃癌Ⅲ～Ⅳ级组CD3+、CD4+细胞CD4+/CD8+比值分别为0.42%±0.27%、0.21%±0.17%、0.29%±0.25%,明显低于Ⅰ～Ⅱ级组(0.95%±0.35%、0.45%±0.19%、0.76%±0.30%,P<0.05)。结论检测胃癌患者手术前外周血CD3+、CD4+、CD8+细胞和CD4+/CD8+比值T细胞水平,可以初步评估胃癌患者机体免疫状态,也为肿瘤的免疫增强治疗提供了理论依据。     

肿瘤浸润CD8+T淋巴细胞的功能缺失分子机制

肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocytes,TIL)是存在于肿瘤中的一群异质性且具有抗肿瘤作用的淋巴细胞群体,其中CD8~+T细胞为一种主要的效应细胞。然而,TIL在肿瘤微环境中功能缺失是导致肿瘤进展和细胞免疫治疗失败的主要因素。研究表明,TIL的抗肿瘤功能受限与特殊的肿瘤微环境及多种免疫抑制性通路相关。本文就近年来肿瘤浸润CD8~+T细胞功能障碍的主要分子机制作一总结和概述。     

造血干细胞移植术后人巨细胞病毒包膜糖蛋白gB抗原血症及gB特异性CD8＋T细胞测定

目的探讨HCMVgB抗原血症在HCMV感染中的诊断价值以及gB诱导的特异性CD8＋T细胞在控制病毒激活中的作用。方法根据移植术后时间进行分组,免疫组化法检测92份异基因造血干细胞移植术后白细胞样本中的gB、IE和pp65抗原,分析gB抗原检测在监测HCMV感染中的意义。应用SYFPEITHI和REVEALTM主要组织相容性抗原-肽结合力测定筛选出潜在T细胞表位,进而合成MHC-肽五聚体,应用基于流式细胞术的五聚体染色分析筛选出gB相对优势表位。结果 HCMV gB抗原与pp65和IE抗原检测均呈正相关,其阳性率（82.6%）和pp65抗原阳性率（90.2%）差异无显著意义（P=0.065）,但比IE抗原阳性率（92.4%）低（P=0.035）。三种抗原检测阳性率在移植术后1年内无显著差异;而在移植术1年后,gB阳性率低于IE和pp65阳性率（P=0.005）,并且在gB阴性而IE或pp65阳性的标本中,IE或pp65阳性值处于一个较低的范围（1~6/5×104WBC）。gB332-340可能是CD8＋T细胞的免疫优势靶位,其诱导的gB特异性CD8＋T细胞与gB抗原血症的发生呈现负相关。结论 HCMV gB对移植术后早期诊断感染有潜在的价值,并可能是一个提示病毒感染能力的指标;在对长期随访病人HCMV感染的监测中,gB与pp65、IE正相关,或许成为诊断HCMV感染的重要补充;gB特异性CD8＋T细胞的免疫应答在控制HCMV感染中可能起到重要作用。     

RA患者外周血CD4/CD8 T细胞比值及CD4+ CD25+ T细胞的检测及其临床意义

目的 观察活动期类风湿性关节炎（RA）患者外周血T细胞CD4／CD8比值及CD4^＋ CD25^＋T细胞（Tn细胞）的数量,探讨其在RA诊治中的价值。方法 用流式细胞术检测CD4^＋ CD25^＋T细胞及TR细胞的数量。结果 49例急性期RA患者的CD4／CD8比值和TR细胞数量显著高于正常人群组。28例RA患者治疗后的TR细胞数量显著高于治疗前,而CD4／CD8比值的变化无统计学意义。结论 RA治疗后症状改善患者,TR细胞数量明显上升,RA的发病和发展与该细胞数量密切相关。     

CD8~+调节性T细胞研究进展

机体的免疫应答是一个动态的平衡过程,调节性T细胞(Tregs)在免疫反应的调节、免疫耐受的维持和免疫平衡的建立中发挥重要作用。Tregs有双重作用:既可以抑制宿主对病原体的免疫应答,也可以抑制病原体感染后宿主的炎症反应;另外,还可以削弱机体对恶变细胞的监视作用,同时使机体免于自身免疫病。     

HIV/AIDS患者外周血CD4+、CD8+淋巴细胞与细胞间黏附分子的相关性

目的：研究可溶性细胞间黏附分子在HIV／AIDS疾病发展中的功能和作用，探讨HIV感染者和从DS患者外周血CD4^ 、CD8^ 淋巴细胞与细胞间靶附分子(ICAM—1)的相关性。方法：用流式细胞分析法和酶联免疫吸附法对18例HIV感染者和24例AIDS患者及外周血中CD4^ 、CD8^ 淋巴细胞绝对数及血清中sICAM—1水平表达进行检测。结果；HIV组和AIDS组CD4^ 细胞数较对照组降低明显(P＜0．001)，AIDS组较HIV组也有明显差异(P＜0．01)，两组CD8^ 细胞数较对照组明显升高(P＜0．01，P＜0．001)，而AIDS组较HIV组别无明显区别。HIV感染组和AIDS患者组sICAM—1水平较对照组明显升高(P＜0．01，P＜0．001)，AIDS组较HIV组sICAM—1水平差异有统计学意义(P＜0．05)。HIV组和AIDS组CD4^ 与sICAM—1存在明显负相关(P＜0．05)，CD8^ 仅与HIV组sICAM—1水平呈明显正相关。结论：sICAM—1与细胞免疫功能异常有非常密切的关系.     

组织嗜酸性粒细胞联合外周血CD4+/CD8+对慢性鼻窦炎规范化鼻内镜术后复发的预测价值

[目的]探讨组织嗜酸性粒细胞(Eos)联合外周血CD4+/CD8+对慢性鼻窦炎(CRS)规范化鼻内镜术后复发的预测价值.[方法]选取2019年3月至2020年4月在本院行C RS规范化鼻内镜手术治疗的105例C RS患者.统计术后1年复发情况,分析C RS患者规范化鼻内镜手术后复发的影响因素及组织嗜酸性粒细胞(Eos)...     

胃癌患者外周血淋巴细胞CD8、CD28表达的检测及临床意义

目的 探讨胃癌患者外周血淋巴细胞CD8、CD28的表达及其临床意义.方法 用流式细胞术对48例胃癌患者和30例健康体检者外周血淋巴细胞CD8及CD28进行了检测.结果 (1)胃癌组CD8+CD28-细胞与对照组比较明显增高(P＜0.05),CD8+CD28+细胞则明显减低(P＜0.01).(2)胃癌患者手术后CD8+CD28-细胞明显低于手术前(P＜0.01),CD8+CD28+细胞明显高于手术前(P＜0.05).(3)胃癌患者淋巴结转移组CD8+CD28-细胞明显低于未转移组(P＜0.01).(4)Ⅲ期胃癌患者CD8+CD28-细胞与Ⅰ期和Ⅱ期相比明显增高(分别P＜0.01,P＜0.05),随着临床分期的进程CD8+CD28+细胞、CD8-CD28+细胞逐渐减低(分别P＜0.01,P＜0.05).结论 检测胃癌患者的外周血中的CD8和CD28的表达,对了解患者的免疫状况,疾病进展和指导临床对患者进行免疫调节治疗方面有一定的价值.     

MHC-Ⅰpep四聚体技术检测人类巨细胞病毒特异性细胞免疫功能的新进展

人类巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）属疱疹病毒β亚科,人群的感染率为80%～90%.大量研究表明,机体感染HCMV的后果主要决定于机体的免疫功能,尤其是特异性T细胞的功能对HCMV感染的控制和恢复起主要作用.     

CD4+/CD8+、B淋巴细胞与抑制/细胞毒性T细胞预测宫颈癌放疗患者放射性肠炎的价值

目的 探讨宫颈癌放疗患者放疗前CD4⁺/CD8⁺、B淋巴细胞、抑制/细胞毒性T细胞联合预测放射性肠炎(RE)的价值。方法 回顾性分析2019年1月至2021年3月在中国科学院合肥肿瘤医院接受放疗的87例宫颈癌患者的临床资料,根据患者是否发生RE将患者分为RE组(n=27)和非RE组(n=60),并根据常见不良反应事件评价标准将RE组中≥2级者归为高症状级别组(HRE组,n=17),1级者归为低症状级别组(LRE组,n=10)。比较患者放疗前血浆CD4⁺/CD8⁺、B淋巴细胞、抑制/细胞毒性T细胞,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析放疗前CD4⁺/CD8⁺、B淋巴细胞、抑制/细胞毒性T细胞预测RE的价值。结果 放疗前RE组患者抑制/细胞毒性T细胞高于非RE组患者(35.04±2.39 vs 24.86±1.05),CD4⁺/CD8⁺(0.87±0.10 vs 1.88±0.13)、B淋巴细胞(6.60%±1.11...     

胃癌患者外周血淋巴细胞CD8、CD28表达的检测及临床意义

目的探讨胃癌患者外周血淋巴细胞CD8、CD28的表达及其临床意义。方法用流式细胞术对48例胃癌患者和30例健康体检者外周血淋巴细胞CD8及CD28进行了检测。结果(1)胃癌组CD8 CD28-细胞与对照组比较明显增高(P<0.05),CD8 CD28 细胞则明显减低(P<0.01)。(2)胃癌患者手术后CD8 CD28-细胞明显低于手术前(P<0.01),CD8 CD28 细胞明显高于手术前(P<0.05)。(3)胃癌患者淋巴结转移组CD8 CD28-细胞明显低于未转移组(P<0.01)。(4)Ⅲ期胃癌患者CD8 CD28-细胞与Ⅰ期和Ⅱ期相比明显增高(分别P<0.01,P<0.05),随着临床分期的进程CD8 CD28 细胞、CD8-CD28 细胞逐渐减低(分别P<0.01,P<0.05)。结论检测胃癌患者的外周血中的CD8和CD28的表达,对了解患者的免疫状况,疾病进展和指导临床对患者进行免疫调节治疗方面有一定的价值。