C57BL/6哮喘小鼠肾组织瞬时感受器电位M6离子通道mRNA表达

 【目的】 观察C57BL/6哮喘小鼠肾组织瞬时感受器电位M6离子通道(TRPM6) mRNA的表达,探讨哮喘低镁血症的可能原因。【方法】 健康4 ~ 6周龄清洁级雌性C57BL/6小鼠48只,体质量(12 ± 2)g,随机数字表法分为哮喘组和对照组,每组各24只。哮喘组应用卵蛋白(OVA)建立哮喘小鼠模型。第1天(1 d)。21 d。34 d天每组分别随机抽取8只检测血浆Mg2+。红细胞内Mg2+。肾组织TRPM6 mRNA的表达。【结果】 1 d血浆Mg2+。红细胞内Mg2+。肾组织TRPM6 mRNA表达水平哮喘组与对照组之间差异无显著性:[(0.85 ± 0.07 vs. 0.89 ± 0.12) mmol/L。(2.48 ± 0.14 vs. 2.49 ± 0.07) mmol/L。0.51 ± 0.08 vs. 0.49±0.06, P均 > 0.05];21 d 哮喘组血浆Mg2+。红细胞内Mg2+。肾组织TRPM6 mRNA表达水平均显著低于对照组:[(0.84 ± 0.09 vs. 0.95 ± 0.07) mmol/L。(2.39 ± 0.14 vs. 2.44 ± 0.09) mmol/L。0.32 ± 0.06 vs. 0.52 ± 0.05,P均 < 0.05]; 34 d哮喘组血浆Mg2+。红细胞内Mg2+。肾组织TRPM6 mRNA表达水平亦显著低于对照组: [(0.67 ± 0.10 vs. 0.94 ± 0.10) mmol/L。(2.17 ± 0.08 vs. 2.43 ± 0.08) mmol/L。0.24 ± 0.05 vs. 0.53 ± 0.06,P均 < 0.05]。肾组织TRPM6 mRNA表达水平与血浆Mg2+浓度呈正相关(r = 0.630, P < 0.001);肾组织TRPM6 mRNA表达水平与红细胞内Mg2+浓度呈正相关(r = 0.715, P < 0.001)。 【结论】 肾组织TRPM6 mRNA的低表达可能是导致 C57BL/6哮喘小鼠低镁血症的原因。     

瞬时感受器电位离子通道4相关的离子通道病

瞬时感受器电位离子通道4(TRPV4)是瞬时感受器电位离子通道家族香草素受体亚家族的成员之一,也是瞬时感受器电位离子通道家族中被阐述最多、最特别的一个。它具有使其编码的Ca~(2+)通道失活的多种突变倾向,侵袭骨骼系统、神经系统、呼吸系统等,且临床表型多样。目前,研究较多的是骨骼发育不良和周围神经病,但均只能推测TRPV4基因突变引起各种临床表现(骨骼、运动和感觉症状)的(病理)生理学机制。因此,明确此类疾病的发病机制、病因、分类、开发药理学的潜能,对TRPV4相关疾病的预防和治疗有重要意义。     

瞬时感受器电位通道1在臭氧致小鼠肺组织炎症中的表达

目的探讨经典瞬时感受器电位通道1（TRPC1）在臭氧暴露下小鼠肺组织中的表达情况。方法采用臭氧暴露建立小鼠肺
组织炎症模型,通过对小鼠行为学观察、支气管肺泡灌洗液的细胞分类计数和肺组织病理形态分析证实模型建立成功后,
RT-PCR法检测肺组织TRPC1 mRNA的表达,Western blot法和免疫组织化学染色法分别观察TRPC1蛋白在肺组织的表达和
定位情况。结果RT-PCR和Western blot 结果显示,与对照组相比,臭氧组小鼠肺组织TRPC1 mRNA及其蛋白表达上调（P<
0.05）;免疫组织化学染色法进一步证实,臭氧组小鼠肺组织TRPC1蛋白在肺泡上皮细胞、支气管上皮细胞、浸润的炎症细胞的
表达均较对照组明显增强（P<0.05）;相关性分析显示,小鼠肺组织中TRPC1 mRNA和蛋白的表达均与支气管肺泡灌洗液中白
细胞总数、巨噬细胞、中性粒细胞、淋巴细胞数呈显著性正相关（P<0.01）。结论TRPC1可能与小鼠肺组织炎症发病机制有关。
     

瞬时感受器电位M7通道对RBL-2H3细胞增殖 及凋亡的影响

 【目的】 观察瞬时感受器电位M7通道(TRPM7)在大鼠肥大细胞系RBL-2H3的表达,探讨其对RBL-2H3增殖和凋亡的影响&#65377;【方法】 Western blot及细胞免疫荧光分别检测TRPM7 在RBL-2H3的表达&#65377;通过离子通道阻断剂2-APB抑制TRPM7通道的表达,以WST-1法检测细胞增殖,流式细胞术及Hoechst 33342 荧光染色检测细胞凋亡&#65377;【结果】 Western blot及细胞免疫荧光法均检测到TRPM7在RBL-2H3的表达,细胞免疫荧光提示TRPM7主要表达于RBL-2H3细胞膜&#65377;100 μmol/L和 200 μmol/L的2-APB可明显抑制TRPM7的表达&#65377;100 μmol/L和 200 μmol/L的2-APB对RBL-2H3的增殖抑制率分别为(30.4 ± 4.2)%和(42.0 ± 0.8)%,早期凋亡率分别为(36.9 ± 6.7)%和(49.3 ± 1.8)%,总凋亡率分别为(40.2 ± 7.0)%和(76.8 ± 5.5)%&#65377;【结论】 TRPM7通道表达于RBL-2H3肥大细胞系并参与其增殖和凋亡&#65377;     

经典瞬时受体电位通道在哮喘小鼠肺组织中的表达

目的探讨经典瞬时受体电位(transient receptor potential canonical,TRPC)通道在慢性哮喘小鼠肺组织中的表达。方法随机将BALB/c小鼠分成对照组和哮喘组。应用5%鸡卵白蛋白(OVA)腹腔注射致敏和雾化激化的方法制备小鼠慢性哮喘模型,对照组用生理盐水代替OVA。最后一次激发24h后处死小鼠,取肺组织进行RT-PCR和免疫组织化学检测,观察哮喘小鼠肺组织TRPC mRNA和蛋白表达水平的变化。结果 RT-PCR结果显示,正常小鼠肺组织分别表达TRPC1、TRPC2、TRPC3、TRPC6mRNA;与对照组相比,哮喘小鼠肺组织TRPC1、TRPC6mRNA表达显著增高(P<0.05);免疫组织化学检测发现TRPC1、6蛋白在哮喘小鼠肺组织的支气管上皮细胞、血管平滑肌细胞及浸润的炎症细胞表达明显增强。结论 TRPC1、TRPC6可能与哮喘发病机制密切相关。     

瞬时感受器电位香草酸受体1在呼吸系统疾病中的研究进展

瞬时感受器电位香草酸受体1(TRPV1)在呼吸系统分布广泛,特别是感觉神经C纤维;另外,TRPV1在平滑肌细胞、上皮细胞、血管内皮细胞、黏膜下腺及炎性细胞也有表达。TRPV1参与呼吸系统疾病相关症状的多个方面,包括气道炎症、黏液分泌、气道高反应性、气道重构、咳嗽等。在呼吸系统疾病中,TRPV1表达及灵敏度均增加,TRPV1通道已经成为新兴的潜在的治疗位点。     

肺动脉高压与经典瞬时感受器电位通道

肺动脉高压(PAH)的发病机制目前还不十分清楚,近来越来越多的研究发现经典瞬时感受器电位通道(TRPC)参与PAH的发生、发展。目前认为TRPC家族成员是构成质膜上受体操纵性钙通道和钙池操纵性钙通道的分子基础,TRPC作为主要的钙内流通道,参与多种生理及病理过程。TRPC通过多种机制影响肺动脉平滑肌细胞基础钙水平,在肺血管紧张度的调节及肺动脉平滑肌细胞增殖中发挥了重要作用。TRPC的研究为PAH发病机制的研究提供了一个新的思路。本文简要介绍TRPC与PAH的联系。     

支气管哮喘患者气道巨噬细胞中瞬时受体电位通道M8的表达

目的：研究瞬时受体电位通道M8(TRPM8)在支气管哮喘患者气道来源的巨噬细胞中的表达及其临床意义。方法：收集支气管哮喘患者和志愿者的支气管肺泡灌洗液,分离其中巨噬细胞培养,通过RT-PCR和Western Blot技术检测TRPM8 mRNA和蛋白水平;通过ELISA技术检测细胞上清液中白细胞介素-10(IL-10)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)。结果：哮喘组患者支气管肺泡灌洗液中巨噬细胞TRPM8 mRNA和蛋白水平均明显高于对照组（P<0.01）。哮喘组IL-10水平明显高于对照组（P<0.01）,然而两组TNF-α蛋白水平却差异无统计学意义（P>0.05）。通过Spearman相关分析,TRPM8蛋白与IL-10蛋白间存在相关性（r=0.969,P<0.01）。然而,TRPM8蛋白与CRP、IgE、FeNO、嗜酸粒细胞以及TNF-α蛋白浓度间均未发现明显相关性（P>0.05）。结论：哮喘患者气道巨噬细胞中TRPM8 mRNA和蛋白增多。其可能通过影响IL-10参与哮喘的发病机制。     

瞬时感受器电位香草酸受体1在糖尿病神经病理性痛大鼠背根神经节中的表达

目的:探讨瞬时感受器电位香草酸受体1(TRPV1)在糖尿病大鼠神经病理性疼痛形成中的作用。方法:64只Wistar大鼠腹腔注射链脲菌素制备糖尿病模型,随机分为糖尿病神经病理性疼痛组(D组)和TRPV1抑制剂组(E组),E组大鼠腹腔再注射TRPV1拮抗剂SB366791。分别于第2、4、6、8周末测定每组大鼠机械缩足反应阈值(MWT)、左侧坐骨神经传导速度(NCV)、背根神经节(DRG)中TRPV1表达情况。另取32只大鼠做空白对照组(C组)。结果:随糖尿病时间延长,D组MWT和NCV值逐渐降低,TRPV1水平逐渐升高(P<0.05);E组MWT和NCV值逐渐增高,TRPV1水平逐渐降低(P<0.05)。结论:糖尿病大鼠神经病理性疼痛的形成和维持与大鼠背根神经节中TRPV1表达水平上调有关。     

哮喘小鼠肺组织TRPM8与TRPA1mRNA的表达

目的观察哮喘小鼠肺组织TRPM8与TRPA1 mRNA的表达。方法 SPF级雌性Balb/c小鼠16只,随机分为哮喘组和对照组,每组8只。哮喘组应用卵蛋白(OVA)建立哮喘小鼠模型,末次激发后留取肺组织,采用荧光实时定量RT-PCR技术检测支气管肺组织中TRPM8与TRPA1的mRNA表达水平。结果哮喘组肺组织中TRPM8与TRPA1 mRNA水平分别为(0.619 1±0.213 1)和(0.272 2±0.167 1),明显高于对照组(0.347 1±0.221 1和0.107 9±0.041 5),差异有统计学意义(P<0.05)。结论哮喘小鼠肺组织TRPM8与TRPA1 mRNA的表达上调,可能是冷刺激诱发哮喘发作的分子机制。     

经典瞬时感受器电位通道在炎性痛及神经病理性痛大鼠背根神经节表达水平的差异

目的 探讨背根神经节细胞经典瞬时感受器电位通道家族（TRPC）各亚型在炎性痛及神经病理性痛中表达是否存在差异性.方法 选用Sprague-Dawley雄性大鼠,随机分为两大组：炎性痛组和神经病理性痛组.炎性痛组又随机分为：空白对照组,生理盐水对照组,蜜蜂毒炎性痛模型组;神经病理性痛组又随机分为：空白对照组,假手术组,坐骨神经分支选择性结扎模型组.测定各组大鼠机械刺激缩足反射阈值和热刺激缩足潜伏期;然后分别于蜜蜂毒处理后2h及神经结扎后1周,检测各组大鼠背根神经节细胞内TRPC家族各亚型mRNA表达水平和各组背根神经节细胞内TRPC家族相应亚型蛋白表达水平.结果 实时定量基因扩增荧光检测技术显示,背根神经节细胞TRPC3、4、5亚型的mRNA表达水平在蜜蜂毒炎性痛组显著增加（P＜0.001）;而在神经病理性痛组背根神经节细胞TRPC2 mRNA表达水平显著提高（P ＜0.001）,同时TRPC3 mRNA表达水平却显著降低（P＜0.05）.免疫组化结果显示蜜蜂毒炎性痛组大鼠背根神经节内TRPC3、4、5免疫阳性细胞数显著增加;而神经病理性痛组大鼠背根神经节内TRPC2免疫阳性细胞数显著增加.结论 蜜蜂毒炎性痛模型及坐骨神经分支选择性结扎模型大鼠背根神经节细胞TRPC通道各亚型基因及蛋白表达水平存在差异,提示TRPC通道各亚型在炎性痛及神经病理性痛的发病中可能发挥着不同的作用.     

C57BL/6小鼠和C57BL/6 FMR1基因敲除小鼠行为学实验研究

目的:通过水迷宫实验、自主活动实验、听源性惊厥实验和悬尾实验来研究C57BL/6小鼠和C57BL/6 FMR1基因敲除小鼠的行为学差异.方法:通过胚胎复苏获得3只雌性杂合的C57BL/6 FMR1基因敲除小鼠后与C57BL/6小鼠进行繁殖,最终得到纯合的雌性和雄性C57BL/6 FMR1基因敲除小鼠各10只进行行为学实...     

瞬时受体电位阳离子通道6作为疾病治疗靶点研究进展

瞬时受体电位阳离子通道6(TRPC6)在肾、心脏和肺等多个器官均有表达,是构成细胞膜钙库操纵性通道的分子基础,在细胞信号转导中起着重要作用。其基因突变或过量表达可引起细胞内钙离子信号通路异常,使得大量钙离子内流,导致机体各种病理生理过程的变化。通过特异性TRPC6通道抑制剂和RNA干扰技术干预其在相关疾病中的过量表达,可以改善或缓解病情,提示TRPC6可能作为疾病治疗的新靶点。本文就近年来关于TRPC6作为疾病治疗靶点的研究进展进行综述。     

瞬时受体电位通道家族M8型受体转基因小鼠模型的建立

目的 建立瞬时受体电住通道家族M8型受体(TRPM8)转基因小鼠模型.方法 通过显微注射法将pcDNA3.1-hTrpm8导入C57BL/6J×CBA F1小鼠的受精卵中,并将其移植到假孕母鼠输卵管中获得子代小鼠.采用PCR方法鉴定子代基因型,通过RT-PCR和免疲印迹法检测Trpm8基因及蛋白在组织中的表达.结果 将405枚注射受精卵移植给15只假孕鼠,其中13只顺利妊娠并产下95只子鼠,经PCR鉴定得到5只转基因阳性首建鼠,其中4只小鼠可稳定传代,经与C57BL/6J小鼠回交7代后互交数代建系.子代转基因小鼠经RT-PCR检测发现Trpm8基因在心脏、肝脏、肾脏、脂肪和骨骼肌中均有表达,且TRPM8蛋白表达在转基因小鼠中显著增加.结论 通过显微注射法成功建立了Trpm8转基因小鼠模型.     

经典瞬时感受器电位通道对内皮细胞和平滑肌细胞增殖所引起的阻塞性病变的影响

目的：探讨经典瞬时感受器电位通道（TRPC）对内皮细胞和平滑肌细胞增殖所引起的阻塞性病变的影响。方法：选取人体尸检标本的颈动脉中明显有动脉粥样硬化的组织进行处理后经染色检测其TRPC6蛋白表达情况。取小鼠饲养高脂饲料12周后建模对比常规喂养组的TRPC6斑块表达情况。基因敲除后,动脉动脉粥样硬化斑块中的平滑肌细胞及胶原纤维含量情况、血管壁增厚及血流阻力情况。结果：TRPC6在人体动脉粥样硬化斑块中的表达显著更高,经免疫组织化学（IHC）染色其平均光密度显著更高。小鼠模型组（0.004±0.010）高于对照组（0.063±0.012）,差异有统计学意义（P<0.05）。基因敲除后,模型小鼠的动脉粥样硬化斑块中的巨噬细胞含量（16.55±1.12）显著少于之前的（28.21±2.23）,差异有统计学意义（P<0.05）;平滑肌细胞（27.26±2.51）显著高于之前的（20.92±1.61）,差异有统计学意义（P<0.05）;而胶原纤维差异不明显。基因敲除后,能明显改善小鼠的血管壁增厚及血流阻力情况。结论：TRPC6在动脉粥样硬化斑块中的表达显著调高,提示其参与了动脉粥样...     

瞬时感受器电位香草酸受体1在低氧诱导肺动脉平滑肌细胞内钙升高中的作用

目的观察记录低氧条件培养的人肺动脉平滑肌细胞中瞬时感受器电位香草酸受体1(transient potential vanilloid receptor1,TRPV1)对细胞内Ca2+浓度(用340nm/380nm的荧光强度比值表示)的影响,探讨TRPV1在低氧性肺动脉平滑肌细胞增生中的作用。方法应用4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(4′,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)染色、流式细胞周期测定以及细胞内Ca2+浓度测定的方法检测细胞增生及细胞内Ca2+浓度变化。结果低氧能明显促进人肺动脉平滑肌细胞的增生,升高人肺动脉平滑肌细胞内静息Ca2+浓度,显著加强环并偶氮酸(cyclopiazonic acid,CPA)诱发的库容性Ca2+内流(capacitative Ca2+entry,CCE),上述效应均可被TRPV1阻断剂Capsazepine(CPZ)所抑制。结论在人肺动脉平滑肌细胞中,TRPV1可能是低氧所致细胞内Ca2+浓度增加、CCE增强和细胞过度增生的重要途径或调制因素。     

规范瞬时受体电位离子通道对血管重构的作用机制及研究进展

 规范瞬时受体电位离子通道（canonical transient receptor potential channel,TRPC）对钠和钙离子具有通透性。各种TRPC同聚体或异聚体复合物调节着血管中平滑肌和内皮细胞的诸多生理功能,它们的异常表达通常与高血压、内皮通透性增加等疾病的发生相关,是导致血管重构的重要分子基础。因此,研究TRPC在血管重构过程中的作用,能够为疾病的治疗提供新思路。     

泡桐花总黄酮抗C57BL/6小鼠哮喘气道炎症的实验研究

目的:研究泡桐花总黄酮抗实验性C57BL/6小鼠哮喘气道炎症的作用.方法:以卵蛋白致敏和引喘C57BL/6小鼠为模型,观察泡桐花总黄酮大、小剂量对小鼠哮喘发作程度、小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数和嗜酸性粒细胞(EOS)数、支气管黏膜EOS计数以及哮喘小鼠肺组织病理学改变的影响.结果:泡桐花总黄酮明显减轻C57BL/6小鼠哮喘发作程度,使BALF中EOS数明显下降,显著降低细支气管黏膜EOS的浸润和黏膜EOS计数.病理组织学检察发现,泡桐花总黄酮可明显减少C57BL/6哮喘小鼠肺间质及肺泡腔内EOS等炎细胞浸润.结论:泡桐花总黄酮具有抑制哮喘鼠气道过敏性炎症反应的作用.     

瞬时受体电位M8型离子通道选择性滤器的三维结构计算建模

构建瞬时受体电位M8型（TRPM8）离子通道选择性滤器结构域的三维结构模型。 在Rosetta计算结构生物学工具包中,使用基于运动回路闭合算法的从头计算,对TRPM8离子通道选择性滤器结构域进行多轮计算建模。 经过9轮计算得到了能量最低且结构收敛的TRPM8通道选择性滤器结构域的三维结构模型,发现D918位点的侧链并不指向离子流过的孔区中心,而Q914、D920和T923位点的侧链指向孔区中心;糖基化位点N934位于孔区外侧,其侧链指向胞外水环境。 构建了TRPM8通道选择性滤器结构域的三维结构模型,为理解该通道的离子选择性及相关机制提供了较为可靠的结构信息。