儿童急性白血病MLL基因的检测及临床意义

目的对儿童急性白血病(acute leukem ia,AL)MLL基因重排进行临床和实验研究。方法采用荧光原位杂交(FISH)和多重RT-PCR技术,联合染色体R带核型分析及流式细胞仪免疫表型检测,对27例儿童AL进行分析。结果25例儿童AL中的9例(36.0%)有MLL重排,ALL中的发生率为4.0%,AML中的发生率为3.7%。多重RT-PCR检测到MLL易位产生的融合基因4例,分别为MLL/AF4 2例、MLL/AF9和MLL/AF10各1例;27例白血病患儿进行了染色体核型分析,22例(81.5%)有克隆性染色体异常。在MLL重排中ALL均为B系ALL,AML均为M5b。结论MLL基因重排可能与儿童急性单核细胞白血病和B细胞系ALL有关。     

混合系白血病基因相关白血病骨髓细胞形态学特征

目的通过观察混合系白血病(Mixed lineage leukemia，MLL)基因相关白血病患者骨髓细胞形态学特征，了解MLL基因重排特征与FAB形态学分型的关系。方法用多重巢式RT-PCR方法检测214例白血病和淋巴瘤的常见白血病相关融合基因，选择有MLL基因异常的白血病患者骨髓细胞涂片做光镜下的形态学观察，比较具有不同MLL基因异常的白血病细胞的形态学差异。结果患者中发现MLL基因异常者14例，其中有MLL／AF6融合基因者5例，骨髓细胞形态学均为FAB—M5型，具有典型的原始单核细胞白血病的特征：在光镜下均表现为细胞体积大，染色质疏松，细胞核折叠，有1～2个大而清晰的核仁，胞质嗜碱性呈毛玻璃样。多数细胞核旁淡染区明显，胞浆内可见细长型奥氏小体，染色体纤细。过氧化物酶染色阴性，非特异脂酶染色阳性，可被氟化钠抑制。其他MLL基因异常7例，包括MLL部分串联重复(PTD)，MLL／AF10融合基因，MLL／AF4阳性者，分别属于M1，M4型，MDS和幼稚淋细胞白血病。结论MLL基因异常主要见于与单核细胞相关的白血病，MLL／AF6重排可能是急性原始单核细胞型白血病一种独立亚型的重要标志，该融合基因可能与单核细胞分化有更密切的关系。     

MLL基因重排急性白血病患儿的临床和生物学特点研究

目的对儿童急性白血病进行混合谱系白血病(mixed lineage leukemia，MLL)基因重排的临床和实验研究：方法应用MLL双色荧光原位杂交(FISH)基因探针进行双色FISH，以13对引物行多重RT—PCR检测融合基冈，并联合染色体R带核型分析及流式细胞仪免疫表型检测，对298例儿童急性白血病中16例含有MLL基因重排患儿进行分析：结果MLL基因重排的白血病在儿童急性白血病中占5.4％，而在婴幼儿白血病中占56．3％；对106例患进行多重RT—PCR，检测到涉及MLL基因重排11例，其中MLL／AF42例，MLL／AF61例，MLL／AF6、MLI／ELL合并MLL／AFX或HOX11各1例，MLL／AF92例，MLL／AF101例，MLI／ELL2例。串联重复dup11q231例，HOX活化1例；27例进行了FISH检测，发现9例有MLL重排，其阳性率为36．0％；16例MLL基因重排患儿中14例(87．5％)有克隆性染色体异常，其中11例累及11号染色体[t(4；11)2例，t(6；11)、t(8；11)、t(7；8；11)、t(9；11)各1例， 112例，11q-3例]；16例MLL基因重排患儿中11例为B系ALL，以B祖细胞或前B细胞白血病为主，5例为急性单核细胞白血病，其中3例有CD7和CD2淋系抗原表达；16例MLL基因重排患儿中8例接受治疗，7例获得完全缓解。结论多重RT—PCR和FISH联合是检测MLL重排最精确和灵敏的方法，MLL基冈重排中包括易位、缺失和重复。MLL基因重排的检测对儿童急性白血病预后判断和治疗方案的选择具有重要意义，并且对WHO分型将其单独列为11q23／MLL白血病提供了有力的依据。     

MLL基因重排阳性的儿童急性淋巴细胞白血病的融合基因及免疫表型特点

为了探讨混合谱系白血病（mixed linage leukemia,MLL）基因重排阳性的儿童急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia,ALL）融合基因与免疫表型的特征,利用多重巢式聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）方法检测601例ALL患儿中MLL基因重排的发生率,通过对PCR产物的测序,分析融合基因的亚型及特点;比较分析重排阳性的22例患儿与同期未检出任何融合基因的随机抽取的30例ALL患儿及43例pro—B—ALL患儿初诊时免疫表型特点。结果表明：MLL基因重排阳性的ALL患儿检出率为3．66％,占pro—B—ALL的29．9％。20例MLL基因重排阳性的B—ALL患者全部为CD10^-,表达CD13、CD33和CD34的例数较pro—B—ALL对照组低,CD20、CD22、CD2、CD5、CD7的表达则无差异。共检出4种MLL基因的伙伴基因AF4、AF9、AF10和ENL。MLL基因融合位点主要位于第6、7、8外显子,同一患者可同时存在多种MLL基因融合位点;而其伙伴基因的融合位点相对单一。1例患儿MLL—AF10融合转录本存在随机插入序列。结论：MLL基因重排的发生率低,重排形式多样,阳性ALL患儿在免疫表型及融合转录本的表达方面具有独特的生物学特征。     

MLL基因重排在成人急性白血病中的检测和临床特征研究

混合系白血病(MLL)发生基因重排在成人急性白血病中相关研究较少。本研究通过3种技术组合检测MLL基因重排,探究其在成人急性白血病中的发生率、伙伴基因类型、伴MLL基因重排的急性白血病临床特征和预后并评估该组合检测的临床应用价值。对183例成人急性白血病患者采用常规细胞遗传学、分离信号FISH和多重巢式PCR 3种技术组合检测MLL基因重排。结果显示,成人急性白血病中MLL基因重排发生率低(8.2%);重排类型在急性淋巴细胞白血病(ALL)中MLL-AF4最常见,急性髓系白血病(AML)中MLL-AF6和MLL-AF9最常见;MLL基因重排患者髓外浸润占40%,诱导治疗30 d内完全缓解率33.3%,3个月复发率和6个月生存率各为50.0%和50.0%。结论:本研究中常规细胞遗传学技术对MLL基因重排的漏检率高达60%,因此常规细胞遗传学,分离信号FISH和多重巢式PCR结合检测MLL基因重排具有重要的预后意义和指导临床治疗价值。     

联合间期和中期荧光原位杂交确定成人急性白血病患者11q23/MLL异常

目的 探讨快速、敏感、有效揭示11q23／MLL基因重排的方法，确定11q23／MLL异常存成人急性白血病（AL）中的发生情况及其临床特征，指导AL风险治疗。方法112例成人AL患者骨髓细胞经24h短期培养按常规方法制备染色体标本，R显带行核型分析；LSIMLL双色分离信号DNA探针行间期荧光原位杂交（FISH）筛选异常信号，有异常信号者行中期FISH确定11q23／MLL基因重排。结果 112例AL患者FISH揭示9例11q23／MLL易位（检出率8．0％），其中常规细胞遗传学分析（CCA）只检出4例（检出率3．6％）。3例CCA示del（11）（q23）者FISH揭示2例为11q23／MLL易位，1例为11号染色体长臂末端缺失。在1例正常核型、1例11q＋和1例无11q23明显异常者，FISH揭示为11q23／MLL易位。除9例易何外，FISH揭示8例存在MLL基因扩增，包括多倍体、均匀染色区（hsr）和双微染色体（dmin）。AL伴11q23／MLL异常者多诊断为B系祖细胞急性淋巴细胞白血病（pro-B ALL）、急性单核细胞白血病（AMoL）或急性双表型白血病（BAL）。结论 使用MLL双色分离信号DNA探针行FISH确定11q23／MLL异常是快速敏感的方法，其检出率高于CCA，有效揭示11q23／MLL易位和扩增。临床诊断pro-B ALL、AMoL或BAL，尤其正常核型者应行FISH以确定11q23／MLL异常。     

难治性白血病MLL基因与免疫表达的相关性及预后分析

目的检测难治性白血病患者MLL基因及免疫表型,比较免疫表型、MLL基因的相关性及对预后的影响。方法利用荧光定量技术检测MLL基因,观察白血病MLL基因的表达水平,并进行特定的抗原标记。分析其临床意义。结果 48例难治性白血病中6例检测到MLL基因,发生率为12.5%,发生率较高,MLL-AF6融合基因均为M5型,MLL-AF4融合基因均为急性淋巴细胞白血病。结论 RQ-PCR监测融合基因可以有效观察疗效,MLL基因M4型,M5型白血病表达均明显升高,M3型显著降低。免疫表达异常及MLL基因重排其临床缓解率低,疗效差。     

多重RT-PCR方法同时检测29种白血病融合基因

目的 探讨同时检测白血病29种染色体结构畸变形成的融合基因与MIC分型的关系。方法 采用多重巢式RT—PCR方法对191例儿童白血病29种染色体结构畸变形成的融合基因进行分析。结果 191例白血病患骨髓或外周血标本中，86例(45．0％)具有14种染色体结构畸变产生的融合基因，包括SIL/TAL1、MLL/AF1q、E2A／PBX1、MLI/AF6、AML1／ETO、MLL/AF9、TEL/ABL、BCR／ABL、MLL/AF10、dupMLL、MLL/ENL、TEL/AML1、PML/RARα、CBFβ/MYH11。在31例患中检出HOX11原癌基因活化，其中15例(7．8％)伴有其它染色体结构畸变产生的融合基因，16例(8．4％)只检出HOX11原癌基因的活化，未伴有其它融合基因。结论 采用多重巢式RT—PCR方法，可快速分析29种染色体结构畸变产生的融合基因，可同时筛选出29种急性白血病的常见染色体易位，帮助化疗和骨髓移植后微量残留病的检测。     

t(11;17)(q23;q21)见于两种具有不同形态学改变和基因重排的急性白血病

急性髓系白血病(AML)大多有特异性染色体重排，它们常显示特定的形态学改变和基因重排，例如t(8；21)白血病有M2的形态学改变和AML1-ETO融合基因，t(15；17)白血病有M3的形态学改变和PML—RARα融合基因，inv(16)白血病有M4Eo的形态学改变和CBFβ-MYH11融合基因，涉及11q23的易位有M5的形态学改变和MLL基因重排。     

应用多重套式RT-PCR检测儿童急性淋巴细胞白血病的融合基因

目的　研究染色体结构易位所致的融合基因在儿童急性淋巴细胞白血病 (ALL)的表达。方法　采用多重套式RT PCR结合染色体R带或G带核型分析、流式细胞仪细胞免疫表型检测对 64例儿童ALL进行分析。结果　64例ALL患儿中 23例(36. 0% )具有 13种染色体畸变产生的融合基因,包括E2A/PBX1,E2A/HLF,TEL/AML1,TLS/ERG,MLL/AF4,MLL/AF9,MLL/AF10,MLL/AFX,MLL/AF6,MLL/ELL,dupMLL,TAL1D,HOX11。ALL患儿融合基因和染色体总畸变率为 67. 2%(43 /64)。结论　多重套式RT PCR结合染色体核型、免疫表型是儿童ALL临床诊断、治疗和预后判断的重要依据。     

混合系白血病全长基因在AML-M4/M5患者中的突变检测

急性髓系白血病(AML)-M4、M5常有11号染色体异常,定位于11q23的混合系白血病(MLL)基因异常所形成的MLL-PTD和MLL融合基因在该病的发病机理中具有重要作用。但在该类白血病绝大多数未能检测出染色体水平异常,是否存在MLL基因的其他突变?本研究对MLL全长基因的外显子进行了测序分析。选取25例初发核型正常的AML M4、M5患者(排除MLL融合基因和MLL-PTD及M4eo),进行了MLL全长基因的外显子PCR扩增直接测序分析,对发现的突变在基因组DNA水平进行验证。利用Mass Array方法在正常对照样本和AML扩大样本中对发现的点突变进行检测。结果发现,在MLL的RD、PHD、TAD和SET功能域中存在着高频的缺失、插入及多个点突变;同时对照研究正常样本,发现也存在上述的变异,且突变频率无统计学差别(P>0.05)。结论:检测到的MLL基因发生在mRNA水平的缺失、插入和多个点突变,分别是MLL在转录水平的选择性剪接和MLL的单核苷酸多态性,它们共同构成了MLL的遗传多态性;这些MLL基因遗传多态性可能与AML M4、M5的发病不直接相关,对于治疗、预后及其他生物学表型的意义还有待进一步探讨。     

急性白血病MLL融合基因新检测方法的建立和应用

本研究旨在建立一种快速检测急性白血病中常见MLL融合基因的方法。针对10种最常见的MLL融合基因,首先通过检索文献及数据库,确定已报道的所有融合形式并据此设计引物和探针。其次,以构建的16个阳性质粒和阴性细胞系建立和优化多重实时PCR检测体系。最后,利用所收集的54份白血病标本对该体系进行临床评估,并对检出的阳性标本进行测序验证。结果:该体系可对所有阳性质粒进行有效检测,且灵敏度均可达10个拷贝。在54份标本中,检出MLL-AF4、MLL-AF9、MLL-AF10、MLL-ELL 4种类型的融合基因,对阳性标本进行测序,测序结果与检测结果一致。结论:本研究建立了一种筛查MLL融合基因的多重实时PCR方法,能够对发生频率约占MLL融合类型90%的10种融合基因进行检测。该体系具有快速、灵敏、特异、可靠的优点,将有助于临床上MLL融合基因阳性患者的诊断和管理。