天冬多糖逆转缺氧诱导的上皮间质转换抑制人肝癌细胞迁移

目的:探讨天冬多糖(ASP)逆转缺氧(1%氧)诱导的上皮间质转化(EMT)抑制人肝癌细胞迁移,揭示ASP抗肝癌作用的可能机制。方法:人肝癌细胞SK-Hep1和Hep-3B分为常氧组,缺氧组,缺氧+ASP(2. 5 mg/m L)组,缺氧+ASP(5 mg/m L)组,缺氧+ASP(10 mg/m L)组。用CCK8法和创伤愈合实验分别检测各组人肝癌细胞的增殖和迁移;观察各组人肝癌细胞的形态学变化; Western blot法检测各组人肝癌细胞EMT相关蛋白表达的变化。结果:CCK8实验结果表明ASP在缺氧培养24 h和48 h均可明显地抑制人肝癌细胞的增殖(P 0. 05)。划痕实验结果表明,缺氧组的人肝癌细胞较常氧组迁移能力明显增强(P 0. 05),加入ASP后可明显的抑制缺氧诱导的人肝癌细胞的迁移,且具有明显的剂量依赖性(P 0. 05)。细胞形态学观察发现,缺氧组较常氧组人肝癌细胞形态变长,呈间质型,加入不同浓度ASP后形态变圆,呈上皮型; Western blot法检测发现,与常氧组相比,缺氧组人肝癌细胞E钙黏素表达下调,N钙黏素和波形蛋白表达上调,加入不同浓度ASP后,E钙黏素表达开始上调,N钙黏素和波形蛋白表达开始下调。结论:ASP可明显的抑制缺氧诱导的人肝癌细胞迁移,其机制可能是通过逆转缺氧诱导的EMT实现的。     

蝎毒多肽提取物抑制H22肝癌血管生成的作用机制研究

目的探讨蝎毒多肽提取物抗肿瘤血管生成的机制。方法建立H22肝癌皮下荷瘤模型,随机分为荷瘤对照组（对照组）,蝎毒多肽提取物（polypeptide extract from scorpion venom,PESV）高、低剂量组,5－氟尿嘧啶（5-fluorouracil,5-Fu）组,每组10只。连续干预14天。绘制肿瘤体积生长曲线并计算抑瘤率;HE染色观察各组肿瘤组织病理变化;采用SP法检测各组肿瘤组织微血管密度（microvessel density,MVD）。采用免疫组织化学法及Western blot法检测各组磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K）、磷酸化蛋白激酶B （phosphoprotein kinase B,P-Akt）、缺氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α）、血管内皮生长因子-A（vascular endothelial growth factor-A,VEGF-A）蛋白表达。结果5-Fu组,PESV高、低剂量组抑瘤率分别为64.8%、43.7%和32.4%。与对照组比较,三个给药组PI3K、P-Akt、HIF-1α、VEGF-A蛋白表达明显下调（P〈0.05,P〈0.01）,PESV高、低剂量组MVD均降低（P〈0.05）。结论PESV可抑制H22肝癌血管生成,其机制可能与抑制肿瘤微环境中PI3K、P-Akt、HIF-1α、VEGF-A的表达有关。     

银杏叶提取物对肝纤维化大鼠肝脏低氧诱导因子1α及血管内皮生长因子表达的影响

目的:观察银杏叶提取物(GbE)对肝纤维大鼠肝组织低氧诱导因子1α(HIF-1α)及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探讨GbE抗肝纤维的作用机制。方法:采用40%的CCl4皮下注射(3mL.kg-1.d-1,2次/周,首剂加倍),连续6周诱导大鼠肝纤维化模型,同时分别以高、中、低剂量(200、100、50mg.kg-1.d-1)GbE灌胃干预6周,常规HE和Masson染色观察大鼠肝组织炎症和纤维化程度,RT-PCR及免疫组化法检测肝组织HIF-1α和VEGF基因的mRNA及蛋白表达。结果:模型组大鼠肝组织炎症和纤维化程度计分较正常组明显增高(P0.01),肝组织HIF-1α和VEGF基因的mRNA及蛋白的表达较正常组明显增强(P0.05,P0.01),HIF-1α蛋白表达水平与肝纤维化程度、VEGF mRNA表达水平呈明显的正相关;应用高、中、低剂量GbE干预后,大鼠肝组织炎症和纤维化程度显著减轻(P0.05,P0.01),肝组织HIF-1α和VEGF基因的mRNA及蛋白表达明显下降(P0.05)。结论:GbE下调肝纤维化大鼠肝组织HIF-1α及其下游分子VEGF的转录和表达可能是其抗肝纤维化作用的机制之一。     

肌腱周围炎大鼠模型建立与针刺干预作用的实验研究

目的:建立大鼠跟腱周围炎病理模型,揭示针刺防治肌腱周围炎的作用机制。方法:24只Wistar大鼠随机分为对照组、造模组和针刺干预组,采用"跳跃运动"方法制作大鼠跟腱周围炎的动物模型,6周后取材进行HE染色,免疫组织化学法检测HIF-1α和VEGF的表达。结果:(1)模型组大鼠跟腱及其周围组织出现明显的炎性反应病理特征,腱组织、肌肉以及软骨组织的HIF-1α和VEGF的表达水平均明显高于对照组(P<0.01)。(2)针刺干预组的腱组织和肌肉中HIF-1α和VEGF表达水平高于对照组(P<0.05或P<0.01),软骨组织则均无明显差异,但针刺干预组与模型组比较,腱组织、肌肉以及软骨组织的HIF-1α和VEGF的表达水平明显下降(P<0.05或P<0.01)。结论:"跳跃运动"是建立跟腱周围炎动物模型的可行方法,改善组织内部缺氧环境可能是针刺防治肌腱周围炎重要途径之一。     

天冬多糖对小鼠免疫功能影响的实验研究

目的：探讨天冬多糖对小鼠免疫功能的影响。方法：通过小鼠胸腺和脾脏指数的测定,确定了小鼠巨噬细胞吞噬的功能、淋巴细胞转化率和血清溶血素的形成。结果：天冬多糖的高、中、低剂量明显能使小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞百分率、吞噬指数和胸腺、脾脏等免疫器官重量的增加,从而使小鼠淋巴细胞转化率及胸腺、脾脏指数的增加和小鼠血清溶血素水平的提高。结论：天冬多糖有增强机体免疫功能的作用。     

红景天对低氧条件下内皮细胞HIF-1α、HIF-1β和VEGF表达的影响

目的:观察红景天对低氧条件下人脐静脉内皮细胞表达低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、低氧诱导因子-1β(HIF-1β)和血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法:采用XTT比色法检测红景天不同干预时间、浓度对细胞增殖的影响,以确定最佳干预条件;采用SYBRGreenI荧光染料实时定量PCR法检测mRNA表达水平;WesternBlot法检测蛋白表达水平。细胞分3组:正常氧对照组,低氧对照组,红景天干预组。结果:红景天干预的最佳条件为24h、10μg/mL。与正常氧相比,低氧条件下内皮细胞HIF-1α、HIF-1β和VEGF蛋白表达均升高(P<0.01);红景天促进了低氧条件下内皮细胞HIF-1α和VEGF的基因和蛋白表达(P<0.01),而对HIF-1β的基因和蛋白表达没有影响。结论:红景天促进低氧条件下内皮细胞HIF-1α及VEGF的表达可能是红景天抗缺氧和促血管新生作用的机制之一。     

艾灸对佐剂性关节炎大鼠踝关节滑膜组织低氧诱导因子-1α和血管内皮生长因子表达的影响

目的:观察艾灸对佐剂性关节炎(AA)大鼠踝关节滑膜组织低氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达的影响,探讨艾灸抑制类风湿关节炎关节滑膜血管新生、改善关节症状的作用机制。方法:60只健康成年雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、艾灸组和甲氨蝶呤组,每组15只。采用右后足跖皮下注射弗氏完全佐剂法制备AA大鼠模型。艾灸组予双侧“足三里”“关元”和“阿是穴”艾灸治疗,每次20 min,每日1次,连续干预3周;甲氨蝶呤组予甲氨蝶呤(0.35 mg/kg)灌胃给药,每周2次,连续干预3周。采用足趾容积测量仪检测大鼠足跖容积;HE染色法观察大鼠踝关节滑膜组织病理情况;免疫组织化学法和Western blot法检测大鼠踝关节滑膜组织HIF-1α、VEGF蛋白表达情况。结果:与正常组比较,模型组大鼠的足趾容积和踝关节滑膜组织HIF-1α、VEGF蛋白表达均明显升高(P<0.01),滑膜组织出现明显增生且有大量新生血管形成;与模型组比较,艾灸组和甲氨蝶呤组大鼠的足趾容积和踝关节滑膜组织HIF-1α、VEGF蛋白表达均明显降低(P<0.05,P<0.01),滑...     

大鼠酒精性肝病形成中肝脏HIF-1α VEGF mRNA表达的变化

目的：观察缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）及其下游分子VEGF基因在酒精性肝病大鼠肝组织中的表达,分析它们与酒精性肝病发生发展的关系。方法：以白酒-玉米油-吡唑混合液灌胃14周建立酒精性肝病动物模型,常规HE和Masson染色动态观察4、8、14周时肝组织脂肪变程度和炎症程度的变化;XOD法检测血清SOD活性,TBA法检测血清MDA含量;ELISA法检测肝组织中TNF-α含量;RT-PCR技术动态检测肝组织HIF-1α及其下游分子VEGF mRNA的表达。结果：随着饮酒时间的延长大鼠血清MDA含量和肝组织TNF-α水平、HIF-1αmRNA和VEGFmRNA表达逐渐增加,血清SOD活性逐渐降低,同时肝组织脂肪变程度和炎症程度逐渐加重;在造模4周,血清MDA和SOD水平、肝组织TNF-α含量、HIF-1αmRNA和VEGFmRNA表达与正常组差异无显著性（P〉0.05）;在造模8周MDA和TNF-α含量较正常组明显增高、SOD活性较正常组明显降低（P〈0.01、P〈0.05）,HIF-α、VEGF mRNA表达较正常组有增高趋势,但差异无显著性;至造模14周时MDA和TNF-α含量、HIF-1α和VEGF mRNA表达均较正常组及模型4周组显著增高（P〈0.01、P〈0.05）,SOD活性则明显降低;相关性分析显示,HIF-1αmRNA表达水平与肝组织脂肪变程度、炎症程度、VEGFmRNA表达、TNF-α含量及血清MDA水平均呈明显的正相关,而与血清SOD活性呈明显的负相关（P〈0.01、P〈0.05）。结论：HIF-1α及其下游因子VEGF参与酒精性肝病的发生发展。     

愈肝散结颗粒对晚期肝癌患者血清VEGF及HIF-1α的影响

目的:探讨愈肝散结颗粒对晚期肝癌患者血清中血管内皮生长因子(vascular endothelialgrowth factor,VEGF)及缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α)表达的影响。方法:将临床分期为Ⅲb～Ⅳ期的肝癌患者61例随机分为治疗组31例,对照组30例,治疗组口服愈肝散结颗粒;对照组口服安慰剂颗粒。另随机选择同时期20例正常体检患者为健康人群组,采用双抗体夹心ABC-ELLSA法定量检测治疗前后2组患者及健康人群组血清中VEGF及HIF-1α表达水平,并观察瘤体大小及临床症状改善情况。结果:治疗组及对照组患者血清VEGF及HIF-1α水平较健康人群呈上升趋势,但治疗组上升程度低于对照组(P0.05);瘤体大小治疗组改善总有效率为6.5%,对照组为3.3%,2组比较差异无统计学意义(P0.05);临床症状改善方面治疗组总有效率为87.1%,对照组为60.0%,2组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:愈肝散结颗粒可能通过抑制VEGF/HIF-1α通路,减少肿瘤血管生成而减缓肿瘤生长。     

HIF-1α和VEGF-C在胆囊癌中的表达及相关性

目的：探讨血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）和AngⅡ 1型受体拮抗剂缬沙坦对人体内皮细胞纤溶酶原激活因子（纤溶因子）表达的影响.方法：选用人脐静脉内皮细胞系（HUVECs）作为研究对象.采用不同浓度AngⅡ（10-5～10-9mol/L）与HUVECs共同培养,作为AngⅡ组,同期设立对照组和缬沙坦组.运用细胞酶联免疫法和发色底物法检测三组细胞培养上清液中组织型纤溶酶原激活剂（tPA）和I型纤溶酶原激活物抑制剂（PAI-1）的活性与抗原浓度.结果：AngⅡ呈浓度依赖型刺激PAI-1的活性和含量水平,缬沙坦可降低AngⅡ对PAI-1分泌的作用.二者对tPA的分泌均无明显影响.结论：AngⅡ可促进HUVECs分泌PAI-1;缬沙坦可阻断Ang II的这种作用.     

Anticancer activities and mechanisms of Blumea balsamifera extract in hepatocellular carcinoma cells

Blumea balsamifera (also known as sambong), a medicinal plant, is known to improve physiological disorders such as rheumatism and hypertension. However, its anticancer activity has not been well elucidated. In this study, we found that Blumea balsamifera MeOH extract (BME) induced growth inhibitory activity in rat and human hepatocellular carcinoma cells (McA-RH7777, HepG2, respectively) without cytotoxicity as in with rat hepatocytes used as a normal cell model. BME induced cell cycle arrest at G1 phase via decreases in expression of cyclin-E and phosphorylation of retinoblastoma (Rb) protein in both dose- and time-dependent manners. Furthermore, BME reduced the level of a proliferation related ligand (APRIL) which stimulates tumor cell growth. The anti-proliferative effect of BME was improved slightly but significantly by the treatment with recombinant human APRIL. These findings suggest that BME may have a possible therapeutic potential in hepatoma cancer patients and the depletion of cellular APRIL may be one of the important mechanisms on the growth inhibitory effect of BME.     

镰形棘豆提取物抗肝癌的体内外活性研究

目的：探讨镰形棘豆提取物的体内外抗肝癌活性,并探讨其可能的机制。方法：采用MTT法检测镰形棘豆提取物对SMMC-7721细胞的增殖抑制,采用PI单染法和AnnexinV-FITC／PI双染法进行流式细胞仪检测,测定细胞周期和凋亡率,观察H22荷瘤小鼠的体内肿瘤抑制作用。结果：MTT实验表明,镰形棘豆提取物EOOF和FOF有效抑制肿瘤细胞SMMC-7721的增殖,并呈一定的剂量依赖性,其IC50值分别为0．115和0．097mg·mL^-1。TFOF作用SMMC-7721细胞后可使细胞周期停滞于G1期,凋亡细胞的比例升高,并且呈浓度依赖性。镰形棘豆提取物FOF能明显抑制H22荷瘤小鼠肿瘤的生长,低、高剂量组的抑制率分别为56．1％和70．8％（P〈0．01）。结论：镰形棘豆提取物FOF能抑制SMMC-7721细胞的增殖,诱导其凋亡,并对H22荷瘤小鼠有肿瘤生长抑制作用。显示镰形棘豆具有较好的发展为抗肝癌药物的前景。     

冬凌草甲素对人肝癌BEL-7402细胞的增殖抑制作用及其作用机制

目的:探讨冬凌草甲素对肝癌BEL-7402细胞的增殖抑制作用及其作用机制。方法:以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的BEL-7402细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪检测细胞凋亡,Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡时的形态学变化。应用PCR-ELISA及RT-PCR法检测细胞凋亡前后端粒酶活性及端粒酶hTERTmRNA表达水平的变化。结果:冬凌草甲素可显著的抑制BEL-7402细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系。冬凌草甲素作用48~60h后在Hoechst33258荧光染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征,同时端粒酶hTERTmRNA的表达水平及端粒酶活性均明显降低。结论:冬凌草甲素能抑制BEL-7402细胞的生长及诱导细胞发生凋亡;降低端粒酶hTERTmRNA的表达水平及端粒酶活性可能是其重要作用机制之一。     

Chemoprevention against hepatocellular carcinoma of Cornus officinalis in vitro

The water extracts of Cornus officinalis Sieb. et Zuce against hepatocellular carcinoma (HCC) was studied for its chemopreventive potential. Three HCC cell lines (HepG2, SK-Hep1 and PLC/PRF/5) and three leukemic cell lines (U937, K562 and Raji) were tested with XTT assay. Extracts of C. officinalis inhibited all these HCC cells and leukemic cells at a concentration of 100 microg/ml (P < 0.05) and was dose-dependent (P < 0.0001). P53 (P< 0.0001) and Ras (P = 0.001) significantly affected its activity against HCC. Extracts of C. officinalis also possessed the anti-oxidant activity through free radicals scavenging activity at a concentration of 50 microg/ml (P < 0.05). In summary, our experiment implied that C. officinalis might be a candidate for chemopreventive agent against HCC through the antioxidant and anti-neoplastic effects.     

库拉索芦荟多糖对小鼠腹腔巨噬细胞的体外激活作用

 目的　研究库拉索芦荟多糖对小鼠腹腔巨噬细胞的激活作用。方法　用25,50,100,200,400μg·mL^-1的库拉索芦荟多糖体外诱导小鼠腹腔巨噬细胞48h ,测定细胞内乳酸脱氢酶、酸性磷酸酶、精氨酸酶活性及释放的TNF-α和IL-1含量。结果　库拉索芦荟多糖能上调腹腔巨噬细胞内乳酸脱氢酶、酸性磷酸酶和精氨酸酶活性,并能显著诱导腹腔巨噬细胞表达TNF-α和IL-1,增强吞噬中性红能力。结论　库拉索芦荟多糖对小鼠腹腔巨噬细胞具有激活作用。     

槐耳清膏在肝癌治疗中的抑癌研究

目的　从病理角度在细胞水平上观察槐耳清膏的防癌与抑癌作用。方法　联合应用二乙基亚硝胺、四氯化碳复制鼠肝硬化肝癌模型 ,分为 7组 ,在不同阶段灌服槐耳清膏进行干预 ,2 0周后处死鼠进行病理观察。结果　在鼠肝癌模型制备早期灌服槐耳清膏具有显著的防癌作用 ,癌变率显著降低 ;在癌形成与发展过程中灌服槐耳清膏也有显著的抑癌效应 ,可减轻癌变的病理变化 ;槐耳清膏还能通过抑制肝硬化来干预癌的形成 ,其疗效与疗程呈正相关。结论　槐耳清膏具有确切的防癌、抑癌作用 ,是临床抗肿瘤的理想药物。     

芦笋多糖对S180小鼠红细胞膜组分及流动性的影响

[目的]考察芦笋多糖对S180小鼠红细胞膜组分及流动性的影响。[方法]芦笋多糖对S180小鼠腹腔注射给药7d,应用聚丙烯酰胺凝胶电泳测定小鼠红细胞膜带3蛋白及血型糖蛋白A的相对含量,采用试剂盒测定红细胞膜磷脂、胆固醇和唾液酸含量,荧光偏振法结合探针1,6-二苯-1、3、5己三烯测定红细胞膜流动性。[结果]芦笋多糖能增加S180小鼠红细胞膜表面带3蛋白、血型糖蛋白A的含量;升高S180小鼠红细胞膜磷脂含量,降低胆固醇含量;增加S180小鼠红细胞膜表面唾液酸含量;提高S180小鼠红细胞膜流动性。[结论]芦笋多糖可以改善S180小鼠红细胞膜组分的异常变化,从而保持细胞膜的流动性,恢复红细胞的结构和功能。     

板蓝根二酮B体外抗癌活性研究

目的：板蓝根二酮Ｂ抗人肝癌ＢＥＬ－７４０２细胞,卵巢癌Ａ２７８０细胞体外活性研究,方法：ＭＴＴ法测定板蓝根二酮Ｂ对肝癌ＢＥＬ－７４０２细胞和卵巢癌Ａ２７８０细胞的抑制作用,集落形成实验观察药物的诱导分化作用,ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ试剂盒测定细胞的端粒酶活性。结果：板蓝根二酮Ｂ具有抑制肝癌ＢＥＬ－７４０２细胞、卵巢癌Ａ２７８０细胞增殖的能力,其ＩＣ５０分别为８．２μｇ／ｍＬ和７．８μｇ／ｍＬ,且具有诱导     

青藤碱对体外人胆管癌细胞的抑制作用

目的研究青藤碱对体外人胆管癌细胞的抑制作用。方法 CCK-8和平板克隆实验检测青藤碱对胆管癌细胞存活率及增殖率的影响,流式细胞术检测青藤碱对胆管癌细胞凋亡作用的影响,Transwell检测青藤碱对胆管癌细胞侵袭能力的影响,细胞划痕检测青藤碱对胆癌细胞迁移能力的影响,Western blot检测青藤碱对胆管癌细胞中凋亡相关蛋白caspase-3和caspase-9和侵袭相关蛋白E-Cadherin、Vimentin表达的影响。结果随着青藤碱浓度的提高以及时间的延长,胆管癌细胞的存活率逐渐下降(P0.05,P0.01),细胞集落形成数量逐渐减少(P0.05,P0.01)。青藤碱可呈剂量依赖性地促进胆管癌细胞凋亡(P0.01),抑制胆管癌细胞的侵袭迁移(P0.01),并且可以使cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白以及E-cadherin蛋白表达逐渐升高,vimentin蛋白表达逐渐下降(P0.05,P0.01)。结论青藤碱可以有效地抑制体外胆管癌细胞的增殖,侵袭和迁移能力,诱导细胞凋亡,这可能与其上调cleaved caspase-3、cleaved caspase-9和E-cadherin蛋白表达,以及下调vimentin蛋白表达有关。     

蜂毒素对人肝癌细胞裸鼠移植瘤的生长抑制作用

目的 探讨蜂毒素对人肝癌细胞移植瘤在BALB/C裸鼠体内生长的影响.方法 建立人肝癌BEL-7402细胞裸鼠皮下移植瘤模型,观察瘤内注射蜂毒素对肝癌细胞移植瘤在裸鼠体内生长的影响.应用HE染色观察肿瘤组织形态学变化,采用免疫组织化学法检测肝癌组织微血管密度(MVD),酶联免疫吸附法检测裸鼠血清白细胞介素-8(IL-8)的水平,Western blotting法检测裸鼠肝癌组织中血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达情况.结果 荷瘤裸鼠瘤内注射蜂毒素剂量为40、60、80μg/kg时的抑瘤率分别为44.64%、62.86%、73.73%,药物处理组肿瘤体积明显小于模型组(P<0.01).光镜下见蜂毒素各组肿瘤组织出现片状坏死,肿瘤间质内可见肿瘤血管,并有血管破坏现象.蜂毒素可明显降低裸鼠肝癌组织微血管密度,药物处理组IL-8和VEGF的表达显著低于模型组(P<0.01).结论 蜂毒素能够明显抑制人肝癌细胞裸鼠移植瘤的生长,其作用机制可能与下调IL-8和VEGF的表达,抑制肿瘤血管生成有关.