大气细颗粒物及其水提物对人支气管上皮细胞的氧化损伤效应

目的探讨大气细颗粒物(PM2.5)及其水提物对人支气管上皮细胞(HBE)的毒性和氧化应激效应。方法采集杭州地区某地PM2.5并提取其中水溶性成分,分别用0、100、250、500、1 000、1 500和2 000μg/m L PM2.5及其水提物对HBE细胞进行染毒,采用CCK-8法检测细胞毒性。通过对染毒后细胞匀浆液中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性的测定,评估PM2.5及其水提物对HBE细胞氧化损伤效应及氧化应激反应的影响。结果随着PM2.5及其水提物染毒剂量的增加,HBE细胞活力逐渐下降,并具有明显的剂量-效应关系(P0.05)。在相同剂量下,PM2.5的细胞毒性大于其水提物毒性(P0.05)。与阴性对照组相比,PM2.5 200、400和800μg/m L剂量组细胞SOD活性明显下降(P0.05),MDA含量明显升高(P0.05);而水提物400和800μg/m L剂量组细胞SOD活性明显下降(P0.05),MDA含量明显升高(P0.05)。结论 PM2.5及其水提物对HBE细胞均具有细胞毒性作用,并且能引起细胞的氧化应激反应。     

枸杞多糖对2,4-D诱导的PC12细胞氧化损伤及凋亡的影响

目的探讨枸杞多糖(LBP)对2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)诱导的PC12细胞氧化损伤及凋亡的影响。方法取处于对数生长期褐家鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12),分别设对照(无血清培养基)组和400、800、1 200μmol/L 2,4-D染毒组及LBP干预组(250 mg/L LBP+1 200μmol/L 2,4-D),培养24 h后,测定细胞的存活率、凋亡率和活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量及总超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力。结果与对照组比较,各浓度2,4-D染毒组PC12细胞的存活率均降低,而ROS含量及凋亡率均升高,差异均有统计学意义(P0.05);且随着2,4-D染毒浓度的升高,PC12细胞的存活率呈下降趋势,而ROS含量及凋亡率均呈上升趋势。与1 200μmol/L 2,4-D染毒组相比,LBP干预组PC12细胞的存活率较高,而ROS含量及凋亡率均较低,差异均有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,400、800、1 200μmol/L 2,4-D染毒组PC12细胞的MDA含量均升高,而SOD和GSH-PX活力降低,差异均有统计学意义(P0.05);且随着2,4-D染毒浓度的升高,PC12细胞的MDA含量均呈上升趋势,SOD和GSH-Px活力呈下降趋势。与染毒组相比,LBP干预后PC12细胞MDA含量降低,而SOD和GSH-Px活力升高,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 LBP对2,4-D致PC12细胞的氧化损伤和凋亡具有一定的拮抗作用。     

姜黄素对甲醛致A549细胞氧化损伤拮抗作用

目的探讨姜黄素对甲醛致细胞氧化损伤的拮抗效应。方法采用A549细胞株作为实验材料,实验设对照组、0.1 mmol/L甲醛染毒组,姜黄素组(0.1 mmol/L甲醛+2.5～20.0 mg/L姜黄素),检测A549细胞中一氧化氮合酶(NOS),丙二醛(MDA),超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。结果甲醛染毒组A549细胞SOD、NOS和GSH-Px活性分别为(21.79±1.13)、(1.88±0.16)与(27.83±0.2)U/mgprot,与对照组比较,SOD、NOS和GSH-Px活性明显下降(P<0.05),MDA含量[(3.87±0.153.87)nmol/mgprot]明显升高(P<0.05)。与甲醛染毒组比较,各姜黄素组GSH-Px活性上升、MDA含量下降(P<0.05),与对照组比较,40 mg/L姜黄素组GSH-Px活性、MDA含量差异无统计学意义(P>0.05)。结论姜黄素可提高A549细胞抗氧化酶活性,并存在剂量效应关系。     

上海市吴淞地区大气PM2.5两种提取成分的细胞毒性研究

[目的]研究上海市吴淞地区大气细颗粒物（PM2.5）两种提取成分（有机和无机提取成分）的细胞毒性。[方法]采用滤膜法采集上海市吴淞地区大气中PM2.5，以中国仓鼠肺成纤维细胞（chinese hamsterfibroblast cell line，CHL）为靶细胞研究PM2.5，有机及无机提取成分对细胞活力、代谢的影响及氧化损伤毒性，具体包括细胞形态、活力和细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）、乳酸（LD）、丙二醛（MDA）及超氧化物歧化酶（SOD）水平的测定。[结果]上海市吴淞地区大气PM2.5的有机和无机两种提取成分分别以10、50、100、200μg/ml浓度染毒CHL细胞10h，结果显示随着染毒剂量的增加细胞形态损伤加剧，细胞存活率、SOD含量呈下降趋势，LD和MDA则呈上升趋势，LDH则呈现先升后降趋势。与阴性对照组相比，200μg／ml染毒组的LD含量的升高同100、200μg/ml组的LDH和MDA含量的升高及SOD水平的下降均具有统计学显著性（P〈0．05）～除200μg/ml染毒组，有机提取成分要高于无机提取成分所染毒细胞的生长抑制率外，其他各染毒浓度组的氧化损伤及代谢指标水平在两种染毒成分之间尚不能认为有差别。[结论]上海市吴淞地区PM2.5，的有机及无机提取成分均具有一定的细胞毒性。     

大气PM_(2.5)对人卵巢颗粒细胞的毒性作用及氧化损伤研究

目的研究大气PM_(2.5)对人卵巢颗粒细胞的毒性作用。方法人卵巢颗粒细胞体外培养48 h后,分别用100、200、300μg/ml PM_(2.5)溶液染毒24 h,检测细胞活力,并测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、雌二醇、孕酮、丙二醛(MDA)、caspase-3水平及超氧化物歧化酶(SOD)活力、活性氧(ROS)含量。结果随着PM_(2.5)染毒浓度的增加,人卵巢颗粒细胞活力下降,细胞培养液中雌二醇和孕酮含量下降,300μg/ml PM_(2.5)染毒组培养液中LDH含量高于对照组和100μg/ml PM_(2.5)染毒组,300μg/ml PM_(2.5)染毒组caspase-3表达高于对照组,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。300μg/ml PM_(2.5)染毒组细胞MDA含量、ROS含量均高于对照组,各浓度PM_(2.5)染毒组SOD活力均低于对照组,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论 PM_(2.5)对人卵巢颗粒细胞的毒性作用随染毒浓度的升高而增加,同时可诱导细胞氧化损伤。     

虾青素对辛硫磷所致大鼠皮肤成纤维细胞氧化损伤的拮抗作用

目的 探讨虾青素对辛硫磷所致大鼠皮肤成纤维细胞氧化损伤及凋亡的拮抗作用.方法 取4只3日龄清洁级SD大鼠背部皮肤培养.取第4代成纤维细胞,正常对照组和辛硫磷氧化损伤组更换新鲜培养基,低、中、高剂量虾青素保护组分别更换含0.2、2、20 μg/L虾青素的培养基,于37℃、5％ CO2培养24h后,正常对照组更换新鲜培养基,辛硫磷氧化损伤组和各剂量虾青素保护组分别更换含10 μg/L辛硫磷的培养基,于37℃、5％ CO2培养24h.采用噻唑兰(MTT)比色法检测细胞存活率;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;测定细胞超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活力和丙二醛(MDA)含量.结果 与对照组比较,辛硫磷染毒组和虾青素保护组大鼠皮肤成纤维细胞存活率和SOD、CAT活力下降,凋亡率和MDA含量升高.与辛硫磷染毒组比较,虾青素保护组大鼠皮肤成纤维细胞存活率和SOD、CAT活力较高,凋亡率和MDA含量下降;且随着虾青素剂量的升高,辛硫磷染毒大鼠皮肤成纤维细胞存活率和SOD、CAT活力呈上升趋势,凋亡率和MDA含量呈下降趋势.结论 虾青素对辛硫磷所致的大鼠皮肤成纤维细胞氧化损伤及凋亡具有明显的拮抗作用.     

槲皮素对大鼠原代肝细胞酒精性氧化损伤的防护作用

目的:观察槲皮素(quercetin)对大鼠原代肝细胞酒精性氧化损伤的防护作用。方法:经二步胶原酶技术分离培养大鼠原代肝细胞,用100mmol/L无水乙醇染毒细胞8h,作为酒精损伤模型。乙醇染毒前经不同剂量槲皮素(25～200μmol/L)预作用不同时间(0～8h),观察槲皮素干预对细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(AST)活性,丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)水平和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性的影响。结果:大鼠原代肝细胞经100mmol/L酒精暴露8h后,LDH、AST活性,MDA、GSH含量和SOD、CAT活性与对照组相比,均有非常显著性差异;酒精暴露前1～4h经50～75μmol/L槲皮素干预效果最明显,LDH、AST、MDA和GSH、SOD、CAT水平分别较酒精组非常显著性降低和升高。结论:槲皮素可能通过减少GSH耗竭,提高抗氧化酶活性,抑制脂质过氧化来保护大鼠原代肝细胞抗酒精性氧化损伤,保护作用呈剂量与时间效应关系。     

PM2.5致大鼠肾脏氧化损伤效应研究

目的通过建立大鼠PM_(2.5)经呼吸道亚慢性染毒模型,探讨PM_(2.5)对大鼠肾脏的氧化损伤效应。方法将SPF级雄性大鼠20只随机分为对照组(生理盐水)和PM_(2.5)染毒组(染毒剂量10 mg/kg),每组10只。采用气管注入法染毒,每周1次,连续染毒24周。采用试剂盒测定肾脏丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力,采用免疫组织化学方法检测肾脏Bcl-2、Bax蛋白表达水平,采用TUNEL法检测肾脏细胞凋亡情况,采用HE染色对肾组织进行病理形态学检测。结果与对照组比较,PM_(2.5)染毒组大鼠肾脏SOD及GSH-Px活力均降低,MDA含量升高,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,PM_(2.5)染毒组大鼠肾脏Bcl-2蛋白表达水平下降,Bax蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P0.05)。TUNEL检测结果显示,PM_(2.5)染毒组肾脏细胞凋亡率高于对照组,差异有统计学意义(P0.05);PM_(2.5)染毒组肾脏出现明显的病理形态学改变。结论 PM_(2.5)可致大鼠肾脏发生明显的氧化损伤效应。     

不同地区大气PM2.5对大鼠肺泡巨噬细胞毒性作用的实验研究

目的比较不同地区大气PM2.5对肺泡巨噬细胞的毒性作用。方法采集广州市、东莞市、深圳市和肇庆市4个地区的大气PM2.5,将PM2.5分别以1、10、50、100、200、300μg/ml剂量对肺泡巨噬细胞染毒24 h。检测一氧化氮(NO)释放量、超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)生成量、肿瘤坏死因子(TNF-α)水平、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率及细胞存活率。以肇庆作为对照,观察PM2.5对各指标的影响。经剂量与效应指标回归分析,以斜率评价各地区PM2.5的效应大小。结果不同地区大气PM2.5致肺泡巨噬细胞释放TNF-α、NO、MDA的水平和LDH的漏出率均随着染毒剂量增加而升高,SOD的活力和细胞的存活率随染毒剂量升高而降低。深圳和东莞大气PM2.5对肺泡巨噬细胞胞内的SOD活力的抑制程度高于广州和肇庆(P<0.05)。深圳和东莞大气PM2.5致肺泡巨噬细胞内MDA的生成量明显高于肇庆(P<0.05)。广州大气PM2.5致肺泡巨噬细胞生成TNF-α量最高,其次为东莞,均明显高于肇庆(P<0.05)。广州大气PM2.5致肺泡巨噬细胞内LDH的漏出率最高,其次为东莞和深圳,均高于肇庆(P<0.05)。剂量高于100μg/ml时,广州、深圳和东莞大气PM2.5致肺泡巨噬细胞存活率低于肇庆(P<0.05)。回归分析显示,广州大气PM2.5对肺泡巨噬细胞的TNF-α、LDH漏出率、NO释放量的效应最强,肇庆大气PM2.5对肺泡巨噬细胞的LDH漏出率、NO释放量和细胞存活率的效应最低。结论不同地区大气PM2.5对大鼠肺泡巨噬细胞的毒性作用随染毒剂量增加而增强,广州、东莞、深圳地区大气PM2.5的毒性效应总体上强于肇庆地区。     

辛硫磷对大鼠骨髓间充质干细胞DNA损伤、细胞凋亡及P53蛋白表达的影响

目的研究辛硫磷对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)DNA的损伤作用及其对氧化损伤、细胞凋亡和P53蛋白表达的影响。方法 Percoll离心法分离培养大鼠BMSCs,正常传代。取第3代BMSCs,调整细胞密度为1.0×106/瓶,当细胞至亚融合状态,分别以0(对照)、0.2、2和20μg/L的辛硫磷浓度染毒24h。采用MTT法检测BMSCs的存活率,分光光度比色法检测BMSCs超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量,单细胞凝胶电泳检测BMSCs的DNA损伤,流式细胞术检测大鼠骨髓间充质干细胞凋亡率,Western blotting检测BMSCs的P53蛋白表达水平。结果与对照组相比,0.2～20μg/L辛硫磷染毒24h,可诱发大鼠BMSCs的DNA损伤,且具有剂量-效应关系;各染毒组大鼠BMSCs的存活率、SOD和CAT活性均显著下降(P<0.05),细胞凋亡率和MDA含量均显著升高(P<0.05);辛硫磷染毒可以诱导大鼠BMSCs P53蛋白表达水平的增加(P<0.05)。结论辛硫磷可诱导大鼠BMSCs氧化损伤、DNA损伤、细胞凋亡和P53蛋白表达,且具有剂量-效应关系。     

硫酸铟对V79细胞氧化损伤及VitC拮抗作用体外研究

目的观察硫酸铟对中国仓鼠肺成纤维细胞(V79)的氧化损伤及维生素C的修复作用。方法以体外培养的V79细胞为研究对象,四氮唑蓝比色分析法(MTT法)观察不同染毒剂量(0.5、1、2、4、8 mmol/L硫酸铟)和不同染毒时间(2、6、122、4 h)的细胞毒性;应用生化方法检测经铟染毒的细胞内超氧化物歧化酶(SOD)的活力、丙二醛(MDA)含量及维生素C(VitC)的修复作用。结果当硫酸铟浓度≥1 mmol/L时,各染毒组细胞吸光度值与对照组比较降低,差异有统计学意义(P0.05)。随着硫酸铟浓度增高,SOD活力降低,MDA含量增加;随着VitC浓度的增加,SOD活力升高,MDA含量减少,但当VitC浓度增至500μmol/L时,V79细胞的SOD活力反而下降,MDA含量增高,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论硫酸铟对V79细胞的损伤可能与细胞氧化应激增强有关,低浓度VitC(20、100μmol/L)对该损伤有拮抗作用。     

颗粒物与花粉联合作用对细胞氧化损伤的影响

目的探讨不同颗粒物与致敏花粉联合作用对细胞的氧化损伤。方法采用200μg/ml发电厂燃煤飞灰、豚草花粉和豚草花粉+燃煤飞灰混和物染毒中国仓鼠肺细胞(CHL),检测细胞丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力,并观察0.01mol/L N-乙酰半胱氨酸(NAC)抗氧化效应。结果与对照组比较,花粉、燃煤飞灰和混合物染毒组的MDA含量均升高,T-SOD活力均降低(P<0.05);GsH-PX活力均呈现下降趋势,但仅混合物染毒组差异有统计学意义(P<0.05)。与豚草花粉或燃煤飞灰单独染毒比较,混合物染毒组的MDA含量升高(P<0.05),T-SOD、GSH-PX活力虽呈现下降趋势,但未见统计学意义(P>0.05)。与混合物染毒组比较,混合物+NAc组MDA含量降低,T-SOD活力升高(P<0.05)。结论燃煤飞灰和豚草花粉均可造成CHL细胞的氧化损伤,并且当豚草花粉和燃煤飞灰联合作用时,其氧化损伤作用有增强的趋势,抗氧化剂可以对花粉和颗粒物的氧化损伤起到拮抗作用。     

PM_(2.5)对人脐静脉血管内皮细胞的损伤及黄芩苷的干预作用

目的探讨PM_(2.5)对人脐静脉内皮细胞(EA.hy926)的影响及黄芩苷的保护作用及机制。方法于2015年3月采集广州城区雾霾天气时的大气PM_(2.5),以不同质量浓度(0、50、200、400μg/ml)染毒EA.hy926细胞24 h,检测细胞存活率、凋亡率、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)及乳酸脱氢酶(LDH)活力、细胞内p-p38 MAPK、Bax、Bcl-2蛋白表达。另外分别以黄芩苷(15、30、60μg/ml)和p38 MAPK通路特异性阻滞剂SB203580 20μmol/L预处理细胞,再加入200μg/ml PM_(2.5)染毒24 h,检测上述指标,探讨黄芩苷的干预作用及机制。结果与对照组比较,PM_(2.5)染毒后可降低EA.hy926细胞存活率和SOD活力,增加MDA含量及LDH活力,上调p-p38 MAPK蛋白表达及Bax/Bcl-2蛋白,差异均有统计学意义(P0.05);黄芩苷干预可增加EA.hy926细胞存活率和SOD活力,降低MDA含量及LDH活力,下调p-p38 MAPK蛋白表达及Bax/Bcl-2蛋白,差异均有统计学意义(P0.05)。结论黄芩苷可通过抑制p38 MAPK通路,减轻PM_(2.5)对EA.hy926细胞的损伤。     

不同地区大气PM2.5对人血管内皮细胞毒性作用的实验研究

目的比较不同地区大气PM2.5对血管内皮细胞的毒性,并探讨其作用机制。方法采集广州、东莞、深圳和肇庆4个城市的PM2.5。试验细胞为人脐静脉内皮细胞。将PM2.5分别以10、50、100、200、300μg/ml剂量染毒,作用于细胞24 h,测定细胞NO释放量、SOD活力、LDH漏出量及细胞存活率(MTT试验)。以肇庆作为对照,观察PM2.5对各指标的影响。经剂量与指标回归分析,以斜率评价不同城市PM2.5的效应大小。结果各城市PM2.5致细胞NO释放量和LDH漏出量随剂量增加而升高,SOD活力和细胞存活率随剂量升高而降低(P<0.05)。广州和深圳PM2.5在高剂量时致NO释放量明显高于肇庆(P<0.05)。广州、东莞和深圳PM2.5致SOD活力降低的程度在各剂量组均强于肇庆(P<0.05)。深圳PM2.5致LDH释放量明显高于肇庆,广州、东莞在高剂量时高于肇庆(P<0.05)。广州、深圳PM2.5致细胞死亡率高于肇庆(P<0.05)。回归分析表明,广州PM2.5致LDH漏出和细胞死亡的毒性效应最高,深圳PM2.5对NO释放和SOD活力降低的毒性效应最高,肇庆PM2.5对NO、SOD、LDH的细胞毒性均处于最低水平。NO释放量、LDH漏出量与细胞存活率呈负相关,SOD活力与细胞存活率呈正相关(P<0.01)。结论不同城市PM2.5对血管内皮细胞的毒性表现不同。NO、SOD、LDH与细胞存活率有关联,氧化应激损伤可能是其作用机制之一。     

氧化损伤对耳蜗毛细胞Caspase-3和Caspase-9蛋白表达水平的影响

为研究氧化应激损伤耳蜗毛细胞Caspase-3、Caspase-9蛋白的表达水平,以探讨氧化应激诱发毛细胞凋亡的机制,将处于对数生长期的耳蜗毛细胞(HEI-OC1细胞)分别暴露于含终浓度为0(对照)、50、100、200μmol/L过氧化氢的DMEM高糖培养基24 h,以构建毛细胞氧化应激损伤模型。检测毛细胞内丙二醛(MDA)含量及Caspase-3和Caspase-9蛋白的表达水平。结果显示,与对照组比较,各浓度过氧化氢染毒组HEI-OC1细胞内MDA的含量均增高,差异有统计学意义(P0.01);且随着过氧化氢染毒浓度的升高,HEI-OC1细胞内MDA的含量呈上升趋势。与对照组比较,各浓度过氧化氢染毒组HEI-OC1细胞内Caspase-3和Caspase-9蛋白的表达水平均增高,差异有统计学意义(P0.05);且随着过氧化氢染毒浓度的升高,HEI-OC1细胞内Caspase-3和Caspase-9蛋白的表达水平均呈先上升后下降的趋势。提示氧化应激损伤可诱导耳蜗毛细胞的凋亡,但凋亡水平随氧化应激损伤程度的加重而呈先升高后下降的趋势。     

亚砷酸钠对人支气管上皮细胞的氧化损伤作用

目的 探讨不同浓度亚砷酸钠对永生化人支气管上皮细胞氧化损伤的影响.方法 体外培养永生化人支气管上皮(HBE)细胞,加入终浓度为0～50000 μmol/L的亚砷酸钠溶液暴露24h,测定细胞活性;加入终浓度为0～6μmol/L的亚砷酸钠溶液暴露24h,测定活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力及细胞DNA链断裂情况.结果 与对照组比较,各浓度亚砷酸钠染毒组HBE细胞内ROS、MDA含量和Olive尾矩均显著升高,细胞存活率和SOD活力均显著下降,差异有统计学意义(P＜0.05);且随着亚砷酸钠染毒浓度的升高,HBE细胞内MDA、ROS含量和Olive尾矩均呈明显的上升趋势(P＜0.05),细胞存活率和SOD活力均呈明显的下降趋势(P＜0.05).结论 亚砷酸钠可以诱导HBE细胞氧化损伤增加,提示氧化应激可能是亚砷酸钠致HBE细胞毒作用机制之一.     

油烟中细颗粒物致胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞氧化应激指标的影响

目的探讨油烟中的细颗粒物(PM2.5)对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)的细胞毒性。方法将1只妊娠18d的SPF级ICR小鼠体内的胎鼠肺组织制成AECⅡ细胞悬液。调整细胞浓度为1×106个/ml,分别加入终浓度为0(溶剂对照,DMEM)、25、50、100、200μg/ml的PM2.5(来源于烹调油烟)溶液,培养12、24和48h后进行MTT试验。调整细胞浓度为5×105个/ml,分别加入终浓度为分别为0(溶剂对照,DMSO)、12.5、25和50μg/ml的PM2.5溶液,培养12、24和48h后测定上清液中超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量。结果随着PM2.5染毒浓度的升高和染毒时间的延长,AECⅡ细胞存活率和SOD活力呈下降趋势,MDA含量呈上升趋势;而GSH含量仅随着PM2.5染毒浓度的升高而呈下降趋势。结论油烟中的PM2.5可降低AECⅡ的细胞活力,产生脂质过氧化作用。     

H_2O_2诱导大鼠原代海马神经细胞建立氧化损伤细胞模型

目的以H2O2诱导大鼠原代海马神经细胞建立氧化损伤细胞模型。方法取新生大鼠海马神经细胞,培养至第5天,加入终浓度为50、100、150、200和250μmol/L的H2O2,培养12、24和48 h后,观察细胞形态,通过MTT法测定细胞存活率,CCK-8法测定细胞损伤率,LDH酶标法测定上清液LDH活性,Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡率,确定出细胞损伤的最佳浓度时间。结果 H2O2可诱导神经细胞损伤且呈时间浓度依赖性。150μmol/L H2O2作用24 h时,MTT法测得细胞存活率为(70.18±4.66)%;CCK-8法测得细胞损伤率为(28.30±6.72)%;LDH酶标法测得LDH活性为(208.81±12.24)U/L;流式细胞术测得细胞早期凋亡率为(11.53±2.53)%,晚期凋亡率及坏死率为(13.75±2.22)%。结论 150μmol/L的H2O2作用24 h,可成功构建海马神经细胞氧化损伤模型。     

草苁蓉多糖对张氏肝细胞氧化损伤保护作用

目的探讨草苁蓉多糖对过氧化氢(H_2O_2)致张氏肝细胞氧化损伤的保护作用及机制。方法以张氏肝细胞为研究对象,用H_2O_2诱导建立细胞氧化应激损伤模型,噻唑蓝法检测细胞存活率;分光光度法测定细胞外液中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)及细胞中丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)和超氧化物歧化酶(SOD)含量。结果与对照组比较,模型组肝细胞存活率[(52.5±1.2)%]下降,细胞外液中ALT、AST、LDH活力[分别为(23.5±2.9)、(29.4±2.9)、(595.4±5.6)U/L]升高,细胞中SOD活性和GSH含量[分别为(163.1±6.1)U/mg prot、(8.91±1.26)mg/g prot]下降,丙二醛含量[(12.6±2.6)nmol/mg prot]升高;与模型组比较,50 mg/L草苁蓉多糖组肝细胞存活率[(79.0±5.5)%]升高,细胞外液中ALT、AST、LDH活力[分别为(10.4±2.9)、(14.4±3.2)、(374.4±12.5)U/L]降低,细胞中SOD活性和GSH含量[分别为(323.6±17.3)U/mg prot、(15.4±0.52)mg/g prot]升高,细胞MDA含量[(6.93±0.75)nmol/mg prot]降低。结论草苁蓉多糖对H_2O_2所致张氏肝细胞损伤具有一定保护作用,其机制可能与提高细胞抗氧化能力有关。     

H2O2诱导建立HTR-8/SVneo胎盘滋养细胞氧化应激模型

目的通过观察不同浓度过氧化氢(H2O2)对人胎盘滋养层细胞HTR-8/SVneo处理不同时间后的氧化应激状态,探讨建立H2O2诱导HTR-8/SVneo胎盘滋养细胞氧化损伤模型的最佳条件。方法2017年11月至2018年2月于西安交通大学第一附属医院进行实验研究。将HTR-8/SVneo细胞实验组分别给予不同终浓度的H2O2(50、150、300、500μmol/L),同时设立对照组,相同实验条件下分别继续培养1、3、6、12h,随后对此进行细胞存活率、细胞形态学观察,对超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、过氧化氢酶(CAT)测定,流式细胞仪分析活性氧自由基(ROS)水平和细胞凋亡的水平。结果与对照组比较,300μmol/L 3h经H2O2处理后可降低HTR-8/SVneo细胞的存活率(P=0.00<0.01),而且提高了LDH的释放,促使了SOD、CAT活性的下降和MDA含量的增加(P=0.00<0.01)。300μmol/L3h经H2O2处理后增加了细胞的凋亡率(P=0.00<0.01)及细胞内ROS水平(P=0.00<0.01)。同时,300μmol/L3h经H2O2处理后可明显促进细胞的形态学改变。结论通过H2O2可以成功建立HTR-8/SVneo氧化应激损伤细胞模型,最佳实验条件为300μmol/L H2O2处理3h。