蒺藜总皂苷含量测定方法研究

目的建立蒺藜总皂苷的含量测定方法。方法采用分光光度法,选用菝葜皂苷元(Sarsasa- pogenin)为对照品,通过高氯酸显色,计算蒺藜药材中总皂苷的含量。结果菝葜皂苷元在0．230 4-0．720 0 mg 范围内具有良好的线性关系(γ=0．999 3),平均回收率为98．54％,RSD为1．57％。结论该方法简便、准确、灵敏,重现性良好,适用于蒺藜总皂苷的含量测定。     

蒺藜全草中总皂苷总含量的测定

目的：测定蒺藜全草中总皂苷的含量。方法：将对照品蒺藜皂甙FSA－1和蒺藜总皂苷分别溶于硫酸－甲醇（7：3）溶液中,于60℃作用15min后,用分光光度法测定蒺藜总皂甙的含量。结果：在波长319nm处有大量的吸收峰,浓度与吸收值之间有良好的性关系。结论：通过测定6批蒺藜全草中总皂苷的含量,表明了本方法简单,重现性好,结果准确。     

蒺藜总皂苷抗动脉血栓形成的作用

目的:研究蒺藜总皂苷对小鼠颈总动脉血栓形成的影响。方法:以120,240,480 mg·kg^-1剂量的蒺藜总皂苷连续灌胃小鼠10 d,利用三氯化铁诱导的小鼠颈总动脉血栓模型,采用激光多普勒血流仪监测血栓形成时间和血流变异性,应用小室灌流法和比浊法检测血小板黏附和聚集功能。结果:蒺藜总皂苷可以显著延长血栓形成时间,降低血流变异性,减少血小板在胶原蛋白表面上的黏附面积,降低二磷酸腺苷诱导的血小板最大聚集率。结论:蒺藜总皂苷具有抗动脉血栓形成的作用,机制可能与其抑制血小板黏附和聚集功能有关。     

蒺藜总皂苷对血淤模型大鼠血液流变学和体外血栓形成的影响

目的:观察蒺藜总皂苷对血淤模型大鼠的血液流变学及血栓形成的影响。方法:将大鼠随机分为对照组、模型组、川芎嗪组和蒺藜总皂苷(高、中、低剂量)组,各组灌胃给予相应药物,除对照组外,其余5组建立血淤模型,随后测定各组血液流变学及体外血栓形成指标。结果:模型组血液粘度增加、红细胞电泳时间延长、纤维蛋白原含量增加,血栓形成的长度及重量增加;与模型组比较,蒺藜总皂苷组血液粘度、红细胞电泳时间、纤维蛋白原含量及血栓的湿重、干重和长度均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:蒺藜总皂苷对血淤模型大鼠的血液流变学指标及血栓形成均有显著改善作用。     

蒺藜总皂苷对大鼠肺缺血再灌注损伤的保护作用

目的:观察蒺藜总皂苷(GSTT)对大鼠肺缺血再灌注损伤(LIRI)的保护作用及其可能机制。方法:建立大鼠在体肺缺血再灌注模型,缺血45min,再灌120min,将雄性Wistar大鼠随机分为手术对照组(C组)、缺血再灌注组(IR组)、GSTT小剂量组(L组)、GSTT大剂量组(H组),分别在再灌120min时,测定肺组织湿干质量比值(W/D),髓过氧化物酶(MPO)活性,血清超氧化物歧化酶(SOD)活性,丙二醛(MDA)含量,并进行肺组织病理学检查;结果:IR组肺组织W/D、MPO活性、血清MDA升高,而血清SOD降低。预先给予GSTT干预后,L、H组均可以不同程度减弱缺血再灌注诱导上述指标的变化。肺组织病理学检查显示GSTT预先给药可减轻肺缺血再灌注的损伤。结论:GSTT对肺缺血再灌注损伤有保护作用,可能与其抑制氧自由基生成和中性粒细胞浸润有关。     

蒺藜总皂苷改善小鼠微循环障碍的作用

目的观察蒺藜总皂苷改善小鼠微循环障碍的作用。方法采用静脉注射高分子右旋糖苷致小鼠微循环障碍模型,小鼠ig蒺藜总皂苷,观察其改善作用。结果蒺藜总皂苷1202、40、480mg.kg-13个剂量组和盐酸地尔硫卓艹(50mg.kg-1)组各时相的血液流态权分值不同程度显著减小(P<0.01,P<0.05),表示血液流速显著加快。蒺藜总皂苷480mg.kg-1时,红细胞聚集性显著减小(P<0.05)。结论蒺藜总皂苷具有改善高分子右旋糖苷引起小鼠微循环障碍的作用。     

三七总皂苷对家兔实验性动脉粥样硬化的预防作用

目的:观察三七总皂苷(PNS)对家兔实验性动脉粥样硬化(AS)形成过程中血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平、丙二醛(MDA)水平、超氧化物歧化酶(SOD)活性的作用及AS斑块形成面积大小的影响。方法:将日本大耳兔随机分为空白对照组、AS模型组、PNS低剂量组及PNS高剂量组,各组喂饲不同饲料,PNS高、低剂量组同时灌胃给予相应药物,1次.d-1,连续给药12wk。分别于实验前及第12周末经耳缘静脉采血,测定血清中TG、TC、LDL-C、MDA水平及SOD活性。结果:AS模型组血清中TG、TC、LDL-C水平均显著高于空白对照组(P<0.01)及PNS高剂量组(P<0.01);PNS高剂量组血清中MDA水平及主动脉斑块面积明显低于AS模型组(P<0.01),而其SOD活性明显高于AS模型组(P<0.01)。结论:三七总皂苷可以通过调节脂类代谢、抗氧自由基等途径发挥预防AS的作用。     

银杏叶提取物-蒺藜总皂苷缓释微丸的制备研究

目的制备银杏叶提取物-蒺藜总皂苷（GBE-GSTT）缓释微丸。方法采用挤出制粒滚圆法制备素丸,以微球圆整度、堆密度、脆碎度和收率为指标,通过正交试验选出优化处方工艺,用乙基纤维素进行缓释包衣。结果缓释包衣微丸在1h释放量约为20％,无明显突释现象;4h释放量约为55％,8h可达80％以上,基本符合中国药典对缓释制剂的要求。微丸体外释放符合一级动力学模型。结论本工艺制备GBE—GSTT缓释微丸可行,操作简便,质量稳定。     

蒺藜皂苷对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究蒺藜皂苷调控lncRNA NKILA对膀胱癌细胞增殖、凋亡的影响及机制研究。方法 将膀胱癌细胞J82分为对照组（Control组）、GSTT组、GSTT+si-NC组及GSTT+si-NKILA组。对照组用0 mg·L^-1蒺藜皂苷处理,GSTT组用80 mg·L^-1蒺藜皂苷处理,将siRNA control和NKILA siRNA转染到细胞内,细胞转染后以含有80 mg·L^-1蒺藜皂苷细胞培养液培养细胞,为GSTT+si-NC组及GSTT+si-NKILA组。通过细胞计数法-8（CCK-8）检测J82细胞活力;以实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-qPCR）检测NKILA的表达水平;以克隆形成实验检测各组细胞增殖能力;以流式细胞术检测J82细胞凋亡情况;以蛋白质印迹法检测凋亡蛋白水平。结果 Control组、GSTT组、GSTT+si-NC和GSTT+si-NKILA组NKILA mRNA表达分别为1.00±0.05,1.99±0.10,2.04±0.11和1.19±0.12;细胞活力分别为（100.00±7...     

HPLC法测定蒺藜粗皂苷中蒺藜呋甾皂苷甲的含量

目的:建立蒺藜粗皂苷中有效成分蒺藜呋甾皂苷甲的含量测定方法。方法:采用HPLC法。色谱柱:Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相:乙腈-水(29∶71),流速:0.7 ml.min-1,蒸发光散射检测器,漂移管温度:110℃,气体流速:2.0L.min-1。结果:进样量在1.376～8.256μg范围内线性关系良好,平均加样回收率为100.24%,RSD=1.6%,样品含量80.8～107.6 mg.g-1。结论:该方法简便、结果准确可靠、重现性好,且灵敏度高,专属性强,可用于蒺藜呋甾皂苷甲的含量测定。     

蒺藜皂苷预适应对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用

目的探讨蒺藜皂苷(GSTT)预适应对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用。方法 56只大鼠随机分假手术组(Sham)、缺血/再灌注(I/R)组、缺血预适应组(IP)、阳性药(尼可地尔1.0mg·kg-1)组、GSTT100、30、10mg·kg-1组。采用分光光度法测定血清乳酸脱氢酶(LDH),二氨基二苯甲烷(MDA),超氧化物歧化酶(SOD)水平。ELISA法测定血清TNF-α与IL-6的含量。光学显微镜下观察受损心肌病理组织学改变,采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,Western blot检测心肌组织内caspase-3表达。结果与模型组比较,GSTT100、30mg·kg-1组LDH、MDA含量明显降低,SOD活性明显升高(P<0.01),TNF-α及IL-6含量也明显降低,凋亡细胞数明显减少(P<0.01),caspase-3表达下降,心肌组织形态明显改善。结论蒺藜皂苷预先给药对大鼠心肌缺血/再灌注损伤具有保护作用,能减少自由基生成,抑制细胞凋亡。     

蒺藜皂苷对阿霉素损伤心肌细胞的保护作用

 观察蒺藜皂苷 (gross saponins of Tribulus terrestris, GSTT) 对阿霉素 (adriamycin, ADR) 诱导大鼠乳鼠心肌细胞损伤的保护作用, 并初步探讨其作用机制。分离出生1～3 d大鼠心肌细胞, 培养72 h后随机分为正常对照组、ADR (终浓度为2.0 mg·L⁻¹) 模型组和GSTT (100、30及10 mg·L⁻¹) 组, 继续培养24 h后, 应用MTT比色法检测细胞存活率, 测定培养基中肌酸激酶 (CK)、乳酸脱氢酶 (LDH)、天门冬氨酸氨基转移酶 (AST) 释放量, 超氧化物歧化酶 (SOD) 活性, 丙二醛 (MDA)、一氧化氮 (NO) 含量, 并采用流式细胞仪检测细胞凋亡及应用Western blotting检测GSTT对凋亡相关蛋白caspase-3的作用。结果表明, 与正常对照组比较, ADR模型组心肌细胞存活数明显减少, 心肌细胞培养液中CK、LDH、AST释放量增加 (P < 0.01, P < 0.001), 同时SOD活力下降 (P < 0.01) 而MDA、NO含量升高 (P < 0.001); 与ADR模型组比较, GSTT (100和30 mg·L⁻¹) 组存活心肌细胞数增多 (P < 0.05, P < 0.001), 心肌细胞培养液中CK、LDH、AST含量明显降低, SOD活力增加、MDA和NO含量降低 (P < 0.05, P < 0.01, P < 0.001)。流式细胞仪检测GSTT (100和30 mg·L⁻¹) 组心肌细胞凋亡数明显减少 (P < 0.05, P < 0.01), caspase-3含量下降 (P < 0.05, P < 0.001)。GSTT对ADR损伤的心肌细胞具有保护作用, 可减轻心肌细胞损伤, 抑制心肌细胞凋亡, 其机制与抗自由基作用有关。     

蒺藜皂苷激活PKCε抗氧化应激诱导心肌细胞凋亡的机制

观察蒺藜皂苷 (gross saponins of Tribulus terrestris, GSTT) 在过氧化氢 (hydrogen peroxide, H₂O₂) 诱导新生大鼠心肌细胞凋亡过程中对蛋白激酶C Eplison亚型 (protein kinase C Eplison, PKCε) 及凋亡相关蛋白的影响, 探讨蒺藜皂苷抗心肌细胞凋亡的作用机制。新生大鼠心肌细胞原代培养, H₂O₂建立心肌细胞凋亡模型, 流式细胞术检测细胞凋亡率; Western blotting法检测phospho-PKCε及Bcl-2、Bax的蛋白含量; 免疫细胞化学技术检测cleaved caspase-3蛋白含量。与模型组比较, GSTT (100 mg·L^-1) 预处理可明显降低H₂O₂诱导的心肌细胞凋亡率 (P < 0.01), 并增加phospho-PKCε及Bcl-2的蛋白含量 (P < 0.01), 降低Bax及cleaved caspase-3的蛋白含量 (P < 0.01); PKC抑制剂白屈菜红碱 (chelerythrine, Che) 可部分阻断蒺藜皂苷抗心肌细胞凋亡作用, 与蒺藜皂苷组比较具有统计学意义 (P < 0.05, P < 0.01)。GSTT抗心肌细胞凋亡的作用机制可能与激活PKCε后抑制线粒体依赖的凋亡有关。     

天然产物T12抗真菌作用及其机制研究

目的:研究从刺蒺藜(Tribulus terrestris L.)分离的一种皂苷类化合物T12的抗真菌作用及机制。方法:采用微量液基稀释法测定T12体外MIC_(80)值;透射电镜观察T12对白色念珠菌超微结构的影响;薄层色谱法、气质联用色谱法分别研究T12对细胞膜麦角甾醇生物合成通路的影响。结果:T12具有强的抗真菌活性,对白色念珠菌的体卟MIC_(80)值为0.87μmol·L~(-1);透射电镜观察,可见T12作用后,细胞膜多处破裂,细胞壁未见明显改变;T12对细抱膜麦角甾醇生物合成通路有明显影响。结论:结构新型、具有强抗菌活性的T12,通过影响白色念珠菌细胞膜麦角甾醇的生物合成发挥抗真菌作用。     

蒺藜皂苷对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的观察蒺藜皂苷（GSTT）对血管平滑肌细胞（VSMC）增殖及相关因素的影响。方法采用培养的牛VSMC,以血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）为刺激因子,应用MTT法检测细胞增殖;以H2O2为刺激因子,应用激光扫描共聚焦显微镜检测VSMC内钙离子浓度;应用硝酸还原酶法检测培养的牛血管内皮细胞NO释放量。结果GSTT能明显抑制AngⅡ刺激的VSMC增殖,具有剂量依赖性;GSTT也能抑制H2O2所致的VSMC内钙离子浓度升高,使血管内皮细胞释放的NO明显增多。结论GSTT能抑制AngⅡ诱导的VSMC增殖,此作用可能与抑制活性氧激活钙离子信号转导途径、增加血管内皮细胞NO含量等因素有关。     

葡萄籽原花青素对兔动脉粥样硬化血管病理形态的影响

目的：通过建立新西兰兔的高脂血症模型,观察葡萄籽原花青素（GSPE）对兔动脉粥样硬化（AS）血管病理形态的影响。方法选用新西兰大白兔,随机分为空白对照组、高脂模型组、GSPE 小剂量组、中剂量组、大剂量组、洛伐他汀阳性对照组,复制高脂食饵性兔 AS 模型,每组7只。空白对照组喂饲基础饲料;其余各组给予高脂饲料（80％普通饲料＋14％蛋黄粉＋1％胆固醇＋5％猪油）喂饲,实验共8周。给予高脂饲料第1天起开始给药,GSPE 组每兔每天每公斤体重给予0.1 g、0.2 g、0.4 g,洛伐他汀阳性对照组每公斤体重给予洛伐他汀1 mg,以上药物均胶囊给药,模型组、空白对照组给以空胶囊。观察原花青素预防性用药后对兔主动脉内皮损伤的病理形态影响。结果GSPE 大、中剂量组与高脂模型组比较,从大体形态、组织学、扫描电镜三方面显示内皮细胞损伤均有一定的改善,斑块/内膜面积比分别减少29.5％,27.2％,差异有统计学意义（ P ＜0.05）,内/中膜厚度比分别减少72.5％,60.2％,差异有统计学意义（ P ＜0.05）。对主动脉内膜超微结构也有良好的修复和保护作用。但小剂量 GSPE 与高脂模型组比较,差异无统计学意义（ P ＞0.05）。结论大、中剂量 GSPE 对于减轻 AS 兔主动脉内膜损伤病变有一定作用。