微血管内血栓形成实验模型的建立与应用

目的 :建立一种血栓形成的模型 ,用于新药开发的药效研究。方法 :利用光化学反应原理制备血栓模型 ,即从静脉内注入光敏剂—血卟啉 ,用落射荧光显微镜的汞灯作光源 ,经紫外滤光片 (波长为 45 5nu)照射后 ,成功地建立了局部血管内血栓形成的模型。在此模型上 ,研究了四种中药制剂抗血栓形成的预防作用。通过观测光照后微血管内血栓形成的时间、血栓的大小等变化进行比较。结果 :四种中药制剂预防组血栓出现的时间均晚于对照组 ,血栓的面积也小于对照组 ;四种中药制剂抗血栓形成的药效有明显的差异 ,2号制剂有极显著效果。结论 :该模型制作简单 ,重复性好 ,病灶的部位、大小容易控制 ,对研究在体血栓形成过程的动态变化 ,尤其是对于抗血栓药物的药效研究有着很好的适应性     

MagA转基因小鼠模型的建立

目的建立MagA转基因小鼠,为活体MRI成像系统提供重要的实验动物模型。方法采用显微注射法．将MagA基因导入小鼠受精卵,再培育成转基因小鼠并繁殖传代。利用PCR方法鉴定转基因首建鼠及其子代基因型。结果酶切和DNA测序分析证实MagA基因准确克隆表达载体设计位点,目的基因序列与GenBank中MagA序列完全一致。通过PCR分析,进行转基因整合检测。目前转基因小鼠已稳定传代至第5代。结论MagA基因在转基因小鼠中整合,成功建立了MagA转基因小鼠。MagA转基因小鼠将成为MRI影像系统的重要实验动物模型。     

大鼠软脑膜微血栓模型的建立及抗血栓药物的实验观察

以建立一个筛选抗血栓药物的体内微血栓模型为主要目的,本实验采用显微操作仪和微量注射技术,将二磷酸腺苷(ADP)溶液(1×10~(-2)M,5×10~(-2)M)微量注射到大鼠软脑膜微血管表面,在微血管中定位、定量诱发出白色的血小板性附壁血栓。通过对血栓形成过程的定量分析,观察几种体外血小板聚集抑制剂(阿斯匹林、654-2、川芎嗪)对血栓形成的影响。结果表明:在不损伤血管壁的条件下,单纯ADP(2μl/次)对微静脉的血栓诱发率达85%,病理切片结果发现血栓体主要由血小板构成。三种血小板聚集抑制剂均表现有不同程度的抗血栓作用。以上结果提示该微血栓模型在研究抗血栓药物及血栓形成机制方面可能有一定的实用价值。     

小鼠巨细胞病毒模型的建立

目的为了探讨巨细胞病毒的致病机理。方法４周龄Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠腹腔内接种小鼠巨细胞病毒（ＭＣＭＶ）。结果导致小鼠急性感染期体重下降，生长迟缓，唾液腺肿胀以至于死亡。唾液腺中检出高滴度感染性病毒（２．０×１０５ＰＦＵ／ｍｌ）。在小鼠３Ｔ３／Ｓｗｉｓａｌｂｉｎｏ细胞单层上形成的空斑清晰，易判断计数、镜检组织切片可见脑神经原细胞胞浆内包涵体。结论小鼠巨细胞病毒模型的建立为抗－ＣＭＶ有效药物的筛选以及对ＣＭＶ感染的预防、治疗提供了资料。     

Nrf2敲除小鼠模型的构建与基因型鉴定

目的 构建并鉴定Nrf2敲除模型小鼠。方法 将引进一对雌雄杂合子(Nrf2^-/+)小鼠进行交配,繁育出F1代小鼠;将F1代小鼠中基因型为Nrf2^-/+的雌雄小鼠继续进行交配,获得F2代小鼠;小鼠5日龄时剪尾部组织提取DNA,用PCR和琼脂糖凝胶电泳进行基因型结果判定。提取Nrf2敲除小鼠肺组织蛋白质,用Western blot检测NRF2蛋白表达情况,佐证鉴定结果。结果 雌雄纯合子(Nrf2^-/-)基因敲除小鼠可继续交配,获得基因敲除纯合子小鼠;F1与F2代杂合子小鼠交配可获得3种基因型：野生型(Nrf2^+/+)、杂合子(Nrf2^+/-)、纯合子(Nrf2^-/-),用PCR成功鉴定出子代小鼠的基因型;Nrf2敲除小鼠肺组织的NRF2蛋白表达显著低于野生型(P<0.05)。结论 本研究成功繁育出Nrf2全身敲除模型小鼠,为进一步探讨NRF2的作用及其机制提供了新的实验工具。     

动脉粥样硬化并发血栓形成家兔模型的研究

目的： 建立AS并发血栓形成的动物模型，为开展急性冠脉综合症（ACS）发病机制的研究奠定一定的实验基础。 方法： 实验组20只雄性新西兰兔，高胆固醇喂养18周，建立AS性兔模型；另取5只雄性新西兰兔用普通颗粒饲料喂养作为对组照。18周末采用血管紧张素Ⅱ 30 μg/kg静脉注射诱导，24 h后重复静脉注射1次。观察两组血脂、动脉壁斑块、血栓形态和AS血栓形成模型成功率。 结果： 实验组第9、18周血清TC、LDL-C水平明显高于对照组；实验组AS模型成功率为100%，而并发血栓的形成率为60％，可见血栓形成处血管内膜被掀起及内膜的连续性中断，伴有相应节段中膜的断裂、坏死和组织脱落，血栓与斑块相邻，而对照组未见血栓形成。 结论： 血管紧张素Ⅱ可导致血流动力学异常和血管壁结构的破坏，能成功诱导AS并发血栓形成模型，为ACS发生、发展和干预提供一个方便可行的研究方法。     

耐甲氧西林金黄葡萄球菌小鼠菌血症感染模型的建立与评估

目的 本研究采用临床分离鉴定的ST-239型耐甲氧西林金黄葡萄球菌(MRSA)感染BALB/c小鼠,建立菌血症感染模型.方法 从小鼠的临床症状、生存曲线和主要组织器官的病理学变化进行了时相性监测,并用该模型验证万古霉素对小鼠菌血症的治疗效果.结果 ST-239型MRSA感染的小鼠血液中细菌含量较高,小鼠炎症反应严重并伴有心、肺等多组织器官的损伤;对小鼠使用万古霉素后可显著降低血液中的细菌量,动物存活率明显提高,主要组织器官的病理学症状减轻.结论 该模型的建立将为进一步研究临床分离的MRSA的病原特性、发病机制、治疗方法等提供可靠的实验动物模型.     

肺脏树突状细胞表面共刺激分子在小鼠哮喘模型中的表达

目的 通过检测哮喘小鼠肺组织中树突状细胞(dendritic cells,DC)表面共刺激分子的表达以及细胞因子分泌的能力,探讨哮喘发生免疫耐受缺陷的原因.方法 Balb/c小鼠60只,分为3组(每组20只):哮喘组、磷酸盐缓冲液(PBS)对照组、健康对照组.对3组小鼠取肺组织做病理观察,行支气管肺泡灌洗液(BALF)计数细胞并分类,ELISA检测血清特异性IgE(sIgE)及BALF中细胞因子的水平.分离、培养肺脏DC,用流式细胞仪(FACS)测CD11c表达,并进一步用FACS分析哮喘小鼠DC表面共刺激分子CD11cCD80、CD11cCD86表达的变化.结果 哮喘小鼠肺组织表现为以嗜酸性粒细胞、淋巴细胞浸润为主的炎症改变,BALF中嗜酸性粒细胞计数显著增加(P＜0.01),血清sIgE水平显著升高(P＜0.01).与PBS对照组比较,哮喘小鼠CD11cCD80、CD11cCD86表达上调(P＜0.01),其分泌IL-10细胞因子的水平明显下降.结论 肺脏DC可能通过上调CD11cCD80、CD11cCD86在哮喘的免疫耐受缺陷中发挥作用.     

复元活血汤对病理模型大鼠血液流变性、血栓形成及微循环的影响

<正>目的:观察复元活血汤对病理模型大鼠血液流变性、血栓形成及子宫微循环的影响,探讨其效应及作用方式。方法:采用肾上腺素联合冰浴制作血瘀大鼠模型,观察复元活血汤对其血液流变性变化和血管内皮功     

急性氯气染毒对小白鼠耳廓微循环及肺形态学的影响

目的 观察急性高浓度氯气染毒时小白鼠耳廓微循环及肺形态学的改变,并探索其在肺损伤中的作用,为急性氯气染毒寻找更有效的解救措施。方法 选取健康小白鼠26只,分别观察高浓度氯气染毒前及染毒后5min、15min的耳廓微循环。小白鼠死亡后,观察其肺系数以及肺形态学的改变,并与对照组进行对照。结果 小白鼠高浓度氯气染毒后1、微循环:早期,小动静脉、细动静脉痉挛收缩,毛细血管网关闭达70％,血流较快;随中毒时间延长,小静脉、细静脉开始扩张,15min时扩张最明显,染毒后5min、15min小动静脉、细动静脉以及毛细血管网改变分别与染毒前相比差异均有非常显著性(P<0.01),动脉系统扩张不明显,毛细血管网逐渐开放,血流逐渐变慢,呈粒缓流、粒摆流,最后停止,其间伴有血细胞聚集,血色暗红,血管周围有渗出、出血。2、肺系数:小白鼠氯气染毒后肺系数明显增大。与对照组相比差异有非常显著性(P<0.01)。3、肺形态结构:肺脏大体观察:染毒后小白鼠肺脏外观明显肿胀、边缘圆钝、体积增大,肺脏表面弥漫性淤血和出血,呈深红色,剪开肺组织可有血性泡沫液体流出。镜下观察:肺泡腔大小不一,部分肺泡气肿,有肺大泡,肺泡壁破裂不完整,部分肺泡腔内充满红细胞和蛋白样液体,肺血管腔明显变小,肺泡壁毛细血管扩张,其内充满红细胞,支气管     

四物汤对小鼠耳廓、肠系膜微循环的影响

四物汤对小鼠耳廓、肠系膜微循环的影响白树平１管喜文１龚传美１管敏２四物汤由熟地、白芍、当归和川芎组成［１］。历代中医应用该方补血调经，多用于妇科，其加减方剂更为内科常用。本文观察了它对小白鼠耳廓、肠系膜微循环的影响。１材料与方法１．１实验材料四物汤煎...     

大鼠提睾肌动脉溶栓模型的建立与应用

目的为了较全面地评价溶栓治疗效果,本实验设计了一个既能观察血栓溶解过程,同时又能观察组织微循环状况的溶栓治疗动物模型.方法以大鼠提睾肌动脉作为靶血管,静脉注射血卟啉(1mg/kg)后,以紫外光(波长455nm)照射靶血管一定部位,通过光化学法制造血栓,血栓形成后10min输葡激酶(1mg/kg)静脉溶栓,以生理盐水作为对照.显微镜下直接观察血栓形成与溶解过程以及微循环血流状态,用显微摄像系统记录分析图像,并通过激光多普勒血流量图像仪测组织的血流量,从而评价血栓的溶解效果及溶栓前后组织的微循环状态与血流灌注情况.结果两组的再通率及再通程度无统计学差别(P》0.05),而溶栓组的血栓溶解时间较对照组减低,统计学差别显著(P《0.05);血栓溶解后,组织血流量和微血流流速的恢复值均较正常时减少,统计学差别显著(P《0.05).结论葡激酶具有一定的促血栓溶解效果,主干血管血栓溶解后,该血管供应的下游组织在微循环灌注等方面并不能完全恢复至正常状态.通过此模型,既可以评价溶栓剂溶解血栓的效能,又可衡量溶栓后组织的再灌注情况.     

高压氧对小鼠脑膜微循环影响的图象定量研究

采用计算机图象定量测量方法，对０．２５ＭＰａ高压暴露后小鼠的脑膜微血管变化进行了观察和定量测量。结果表明，ＨＢＯ暴露后小鼠脑膜毛细血管密度明显增加，微血管管径收缩，血流速度加快。作者以为，高压氧治疗对改善脑的微循环作用十分明显。     

氟尿嘧啶对小鼠肠系膜及人甲襞微循环的影响

通过对小白鼠用药组及对照组，临床用药前后观察氟尿嘧啶对小白鼠肠系膜及人甲襞微循环的影响，发现氟尿嘧啶能扩张微血管、增加渗出及红细胞逸出，使血流减慢、肿瘤组织中药物经血管交换增多，并能造成肿瘤细胞乏氧，增加增敏剂的疗效，增加某些抗癌药的细胞毒性作用。说明氟尿嘧啶在抗癌及影响肿瘤组织微循环的同时也影响正常组织微循环。通过化疗药对微循环影响的研究，有助临床联合用药及多方式治疗，有助于寻找更有效的化疗方案，以减少化疗药对正常组织微循环生理功能的影响。     

Establishment of an Orthotopic Mouse Non-Muscle Invasive Bladder Cancer Model Expressing the Mammalian Target of Rapamycin Signaling Pathway

We established an orthotopic non-muscle invasive bladder cancer (NMIBC) mouse model expressing the mammalian target of the rapamycin (mTOR) signaling pathway. After intravesical instillation of KU-7-lucs (day 0), animals were subsequently monitored by bioluminescence imaging (BLI) on days 4, 7, 14, and 21, and performed histopathological examination. We also validated the orthotopic mouse model expressing the mTOR signaling pathway immunohistochemically. In vitro BLI photon density was correlated with KU-7-luc cell number (r² = 0.97, P < 0.01) and in vivo BLI photon densities increased steadily with time after intravesical instillation. The tumor take rate was 84.2%, formed initially on day 4 and remained NMIBC up to day 21. T1 photon densities were significantly higher than Ta (P < 0.01), and histological tumor volume was positively correlated with BLI photon density (r² = 0.87, P < 0.01). The mTOR signaling pathway-related proteins were expressed in the bladder, and were correlated with the western blot results. Our results suggest successful establishment of an orthotopic mouse NMIBC model expressing the mTOR signaling pathway using KU-7-luc cells. This model is expected to be helpful to evaluate preclinical testing of intravesical therapy based on the mTOR signaling pathway against NMIBC.     

高压氧中毒对小鼠耳廓微循环的影响

采用计算机图像定量测量方法对高压氧中毒后小鼠耳廓微循环的变化进行观察。结果表明，高压氧中毒后小鼠耳廓毛细血管开放数目减少、密度降低，细动脉、细静脉管径减小，血流速度变慢，有红细胞聚集现象。这些变化可能是氧自由基对组织细胞的毒性作用所致。     

旋转磁场对肺水肿,肺出血预防作用的实验研究

本研究采用旋转磁疗机对10只小白鼠进行了实验性肺水肿、肺出血发生前旋磁预处理，以观察旋转磁场对肺水肿、肺出血的预防作用。实验结果发现、经旋磁预处理的小鼠（旋磁组）肺脏大体观察、肺组织病理切片、肺系数以及耳廓微循环与生理盐水组相比无明显差异（P＞0．05），而与对照组相比差异有非常显著性（P＜0.01）。提示旋转磁场对肺水肿、肺出血有一定的预防作用。     

Aspirin influences mouse pial microvascular responses to regional hyperthermia

Pial microvascular responses to a hyperthermic exposure, at 44°C for 45 min, applied to the brain surface of anesthetized mice were observed and recorded by intravital videomicroscopy. The hyperthermic exposure was applied by heated artificial cerebrospinal fluid (ACSF). The effect of aspirin (100 mg/kg, i.p.), given 60 min prior to hyperthermic exposure was also studied. Mice were anesthetized (urethane, 1-2 mg/g, i.p.), the trachea was intubated and a craniotomy was performed. A cranial well was affixed on the animal's head, to which ACSF was delivered and drained. Microvascular responses such as changes in diameter, thrombosis and embolism were monitored. With core body temperature kept at 37°C and at a brain surface temperature of 43.3 ± 1.0°C, passing emboli were first observed in arterioles and then shortly afterwards in venules. A few minutes later, visible thrombi were prevalent. Arteriolar constriction was also noted. Further thrombo-embolic activity continued and by the end of a 45-min exposure arterioles attained a 21% constriction. Aspirin, compared to control, delayed the appearance of the first observable response (18.6 ± 4.2 vs 11.5 ± 4.5 min, P < 0.05) in arterioles and reduced arteriolar constriction (5 vs 24%, P < 0.01) at that time. No significant differences were noted between the two groups on the venular side. The protocol and experimental set-up described can be employed in a variety of studies when thermic treatments, whether hypo or hyper, and pial microcirculation are of interest.