PTEN编码蛋白对TGF-β1刺激大鼠肾成纤维细胞分泌ColⅣ、FN的抑制作用

目的 观察PTEN基因编码蛋白对转化生长因子β1(TGF-β1)刺激大鼠肾成纤维细胞分泌Ⅳ型胶原(ColⅣ)、纤维连接蛋白(FN)的影响.方法 用重组PTEN腺病毒转染体外培养大鼠肾成纤维细胞,实验分为4组,对照组,TGF-β1组(给予TGF-β1刺激),PTEN TGF-β1组(Ad-PTEN转染后给予TGF-β1刺激)和GFP TGF-β1组(Ad-GFP转染后给予TGF-β1刺激).倒置荧光显微镜检测绿色荧光蛋白表达,RT-PCR检测PTEN mRNA表达.转染36h后TGF-β1体外刺激,TGF-β1刺激24h后ELISA法检测细胞上清中ColⅣ、FN水平.结果 PTEN腺病毒转染后可见明显绿色荧光蛋白表达,PTEN mRNA表达增多.TGF-β1组及GFP TGF-β1组较对照组ColⅣ、FN分泌量明显增多,PTEN TGF-β1组较TGF-β1组及GFP TGF-β1组ColⅣ、FN分泌量明显降低(P＜0.05).结论 PTEN基因编码蛋白能抑制TGF-β1刺激所致大鼠肾成纤维细胞分泌ColⅣ、FN,故可能具有抑制残肾纤维化、延缓残肾毁损速度的作用.     

重组融合饰胶蛋白拮抗转化生长因子β1刺激 增生性瘢痕成纤维细胞增殖的作用

目的观察重组谷胱甘肽S-转移酶与饰胶蛋白的融合蛋白(GST-Decorin)对转化生长因子β1刺激增生性瘢痕成纤维细胞的作用,探索瘢痕治疗的新方法。方法采用RT-PCR技术克隆饰胶蛋白(Decorin)cDNA并连接到pGEX-4T-1载体上,大肠杆菌内表达GST-Decorin;体外分离培养增生性瘢痕成纤维细胞,加入1∶6.25,1∶12.50,1∶25.00,1∶50.00,1∶100.00稀释度的GST-Decorin,经四唑盐(MTT)比色法测定细胞增殖速度;进一步将2mg/L的TGF-β     

成纤维细胞生长因子对关节软骨细胞转化生长因子β1作用的免疫组织化学观察

目的观察成纤维细胞生长因子对培养兔关节软骨细胞转化生长因子β１的表达。方法培养１月龄新西兰兔关节软骨细胞，在每次换液时加入成纤维细胞生长因子１００ｎｇ／ｍｌ，铺满后收集细胞，作关节软骨细胞转化生长因子β１常规及电镜免疫组织化学观察。结果光镜下实验组细胞明显呈棕色，电镜下细胞膜表面有明显的胶金颗粒黏附。结论成纤维细胞生长因子能促进关节软骨细胞转化生长因子β１的表达。     

重组融合饰胶蛋白拮抗转化生长因子β1刺激增生性瘢痕成纤维细胞增殖的作用

目的　观察重组谷胱甘肽S -转移酶与饰胶蛋白的融合蛋白 (GST -Decorin)对转化生长因子 β1 刺激增生性瘢痕成纤维细胞的作用 ,探索瘢痕治疗的新方法。　方法　采用RT -PCR技术克隆饰胶蛋白 (Decorin)cDNA并连接到pGEX - 4T - 1载体上 ,大肠杆菌内表达GST -Decorin ;体外分离培养增生性瘢痕成纤维细胞 ,加入 1∶6 .2 5 ,1∶12 .5 0 ,1∶2 5 .0 0 ,1∶5 0 .0 0 ,1∶10 0 .0 0稀释度的GST -Decorin ,经四唑盐 (MTT)比色法测定细胞增殖速度 ;进一步将 2mg L的TGF - β1 或同时与 1∶12 .5 0的GST -Decorin加入培养基内 ,比较细胞增殖速度的变化 ,并应用原位杂交及图像分析观察细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达。　结果　稀释度为 1∶6 .2 5～ 1∶2 5的GST -Decorin可有效地抑制瘢痕成纤维细胞的增殖速度 (P <0 .0 1或P <0 .0 5 ) ;1∶12 .5 0的GST -Decorin能完全拮抗 2mg L的TGF - β1 刺激细胞增殖及Ⅰ、Ⅲ型前胶原的mRNA表达。　结论　GST -Decorin可抑制体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞增殖并拮抗TGF - β1 ,提示其具有潜在的治疗瘢痕增生的作用     

常通口服液对肠粘连大鼠血TGF-β1的影响

目的观察常通口服液对大鼠肠粘连模型血转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)水平的影响.方法 (1)选取54只SD雄性大鼠随机分为6组(n=9)正常对照组、模型对照组、四磨汤组、常通口服液低、中、高剂量组.除正常对照组外,其余大鼠均按Ellis法制备成肠粘连模型.正常及模型对照组予以蒸馏水ig(10ml·kg-1);四磨汤组以10m1·kg-1ig给药;常通口服液低、中、高剂量组分别按4.3、8.6、17.2g·kg-1ig给药.各组于术后第7d取血,酶联免疫吸附法(ELISA)测定TGF-β1水平.(2)选用SD雄性大鼠90只,随机分为2组,按Ellis法制备成肠粘连模型.给药方法及给药剂量同方法(1).常通口服液中剂量组与模型对照组于术后第1、3、5、7、9d采血,不同时间点各取血9只大鼠,并处死.测定TGF-β1水平.结果 (1)与正常对照组比较,模型对照组TGF-β1显著升高(P<0.001);与模型对照组比较,常通口服液中、高剂量组均能显著降低TGF-β1含量(P<0.05～0.01),而低剂量组TGF-β1含量无明显减少(P>0.05).(2)常通口服液中剂量组与模型对照组各个时间点相应比较,在术后第5、7、9d 3个时间点有显著性差异(P<0.01～0.001).结论常通口服液能降低TGF-β1水平.细胞因子TGF-β1在肠粘连形成中可能发挥一定作用.     

转化生长因子-β1Ⅱ型受体同源序列1对瘢痕疙瘩中成纤维细胞胶原合成的影响

目的　初步探讨转化生长因子 - β1(TGF - β1)Ⅱ型受体同源序列 1(TRH1)的生物学功能。　方法　根据已知序列合成TRH1多肽 ,以瘢痕疙瘩成纤维细胞为靶细胞 ,分别于蛋白水平和mRNA水平检测该多肽对TGF - β1所诱导的细胞胶原合成的拮抗作用。　 结果　TRH1可以明显抑制TGF - β1所诱导的瘢痕疙瘩成纤维细胞的胶原合成及细胞Ⅰ型前胶原mRNA的表达。结论　TRH1可能通过模拟TGF - β1Ⅱ型受体的结构来竞争性结合TGF - β1,从而拮抗或降低了TGF -β1对细胞的诱导作用。     

海水浸泡对腹部开放伤大鼠TGF-β1、VEGF蛋白及mRNA表达的影响

目的 观察海水浸泡对腹部开放伤大鼠转化生长因子β1(TGF-β1)和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白及mRNA表达的影响.方法 成年健康Wistar大鼠60只,随机分为2组,其中腹部开放伤合并海水浸泡组40只,腹部开放伤对照组20只.腹部开放伤合并海水浸泡后0.5、1、2、3、4h应用免疫组织化学、核酸原位杂交和图像分析技术检测大鼠肺和肾组织TGF-β1和VEGF蛋白及mRNA表达水平的变化.结果 对照组在致伤后1h开始出现TGF-β1蛋白阳性表达,2、3和4h表达逐渐增强.海水浸泡组0.5h开始出现阳性表达,此后表达逐渐增强,4h时阳性表达量最高.TGF-β1 mRNA表达滞后于蛋白表达.两组均于致伤后2h开始出现VEGF蛋白阳性表达,3、4h表达逐渐增强.VEGF mRNA与蛋白表达同步且一致.结论 TGF-β1和VEGF蛋白及mRNA的高表达与损伤关系密切,可作为海水浸泡伤预后判断的指标.     

鞘鞍醇激酶-2在转化生长因子-β1诱导心脏成纤维细胞增殖与活化过程中作用

目的探讨鞘鞍醇激酶-2(SPHK2)在转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导心脏成纤维细胞增殖与活化中的作用。方法分离乳鼠心脏成纤维细胞并体外培养。利用慢病毒分别将对照或SPHK2小分子干扰RNA(siRNA)转染心脏成纤维细胞。采用Western blot检测siRNA对SPHK2蛋白的干扰效率;采用酶联免疫吸附法检测心脏成纤维细胞1-磷酸鞘鞍醇(S1P)水平;采用TGF-β1处理诱导对照组和SPHK2 siRNA组心脏成纤维细胞增殖与活化后,CCK8法检测心脏成纤维细胞增殖能力,Western blot检测心脏成纤维细胞活化的标记蛋白α-平滑肌激动蛋白(α-SMA)的表达,q-PCR检测心脏成纤维细胞胶原蛋白Ⅰ(ColⅠ)和胶原蛋白Ⅲ(ColⅢ)的mRNA水平。结果慢病毒转染SPHK2 siRNA后,心脏成纤维细胞SPHK2蛋白表达水平显著低于对照组,组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。SPHK2 siRNA组心脏成纤维细胞S1P水平显著低于对照组,组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。给予TGF-β1处理后,SPHK2 siRNA组心脏成纤维细胞增殖能力、α-SMA蛋白和mRNA表达、ColⅠ和ColⅢ的mRNA表达显著低于对照组,组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论下调SPHK2表达可抑制TGF-β1诱导心脏成纤维细胞的增殖与活化。     

醛固酮刺激心肌成纤维细胞增殖的实验研究

目的探讨醛固酮在致心肌纤维化中的作用。方法以培养的FBs为模型，观察醛固酮刺激FBs增殖，螺内酯阻断醛固酮的作用，用^3H-亮氨酸及^3-胸腺嘧啶掺入量作为反应FBs增殖的指标。结果醛固酮呈浓度依赖性的促FBs蛋白核酸合成速率明显增高，与对照组相比差异显著（P〈0．01）；螺内酯能明显抑制醛固酮介导的FBs蛋白核酸合成速率增高，与醛固酮刺激组相比差异显著（P〈0．01）。结论螺内酯抑制醛固酮刺激的FBs增殖。     

熊果酸对TGF-β1诱导肝细胞凋亡的抑制作用及其机制

目的 研究熊果酸(UA)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导肝细胞凋亡的干预作用及其机制.方法 采用原位灌注法分离健康SD大鼠原代肝细胞,随机分成空白对照组、UA自身对照组(UA 25μmol/L)、TGF-β1组(TGF-β12.5ng/ml)、UA干预组(UA 25μmol/L+TGF-β12.5ng/ml)、DPI干预组(DPI 0.5μmol/L+TGF-β12.5ng/ml).药物作用相应时间后,采用流式细胞术检测肝细胞增殖及凋亡情况,荧光定量PCR法检测肝细胞内CD95(Fas) mRNA的表达,Western blotting检测肝细胞内CD95蛋白的表达以及NADPH氧化酶(NOX)亚基p47phox移位至胞膜的蛋白量,并采用活性氧(ROS)检测试剂盒检测肝细胞内ROS水平.结果 在TGF-β1刺激肝细胞前30min加入UA进行干预可明显降低TGF-β1诱导的肝细胞凋亡率(80.53％±1.56％vs 63.97％±3.19％,P＜0.01),肝细胞增殖指数明显增加(10.83％±2.03％vs 18.67％±1.60％,P＜0.01),细胞内CD95 mRNA及蛋白表达均明显下调(2.40±0.25 vs 1.28±0.15,P＜0.01;1.37±0.18vs 1.05 ± 0.15,P＜0.05),p47phox向膜移位明显减少(1.76±0.22 vs 1.13±0.12,P＜0.01),肝细胞中ROS水平明显降低(3.23±0.53vs2.12±0.45,P＜0.01).结论 UA可能通过抑制肝细胞内NOX激活,减少ROS产生,下调CD95的表达来抑制TGF-β1诱导的肝细胞凋亡.     

RNA干扰阻滞胸腺素β4表达对TGF-β1诱导人肾小管上皮-肌成纤维细胞转分化的抑制作用

目的 探讨RNA干扰阻滞胸腺素β1表达对TGF-β1诱导人肾小管上皮-肌成纤维细胞转分化(EMT)的抑制作用.方法 构建能表达针对胸腺素β1的小干扰RNA(siRNA)的重组腺病毒载体,以及表达不针对任何已知mRNA的siRNA的阴性对照载体,分别感染人肾小管上皮细胞株(HKC),得到胸腺素β1表达受抑制的HKC-siTβ4和胸腺素β4表达未受影响的HKC-siC.根据用TGF-β1处理HKC、HKC-siTβ4和HKC-siC的情况,将培养的细胞分为4组:正常HKC组(C组),TGF-β1处理HKC组(T C组),TGF-β1处理HKC-siTβ1组(T siTβ1组)和TGF-β1处理HKC-sic组(T siC组).48h后,分别采用RT-PCR和Western blotting检测各组胸腺素β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙黏素表达,并分析胸腺素β1和α-SMA表达量的相关性.结果 C组胸腺素β4表达弱阳性,α-SMA表达阴性,E-钙黏素表达强阳性;T C组胸腺素β1和α-SMA表达强阳性,E_钙黏素表达较C组减弱(P＜0.01);T siTβ1组胸腺素β1和α-SMA表达弱阳性,表达量显著低于T C组(P＜0.01),E-钙黏素显著高于T C组(P＜0.01);T siC组胸腺素β1、α-SMA和E-钙黏素表达与T C组相比均无显著差异(P＞0.05).胸腺素β4和α-SMA表达呈显著正相关.结论 RNAi阻滞胸腺素β4表达能有效地抑制TGF-β1诱导EMT,提示胸腺素β4是介导TGF-β1诱导EMT的重要分子.     

川芎嗪和硫氮唑酮对照射后NIH/3 T3成纤维细胞增殖及bFGF表达的影响

目的　探讨川芎嗪及硫氮唑酮对照射后ＮＩＨ／３Ｔ３ 成纤维细胞增殖及ｂＦＧＦ表达的影响,为防治放射性肺纤维化的药物研究提供实验依据。方法　采用ＭＴＴ 法测定离体培养的ＮＩＨ／３Ｔ３ 成纤维细胞增殖程度并用免疫细胞化学ＡＢＣ 方法观察ｂＦＧＦ蛋白表达改变。结果　不同组ＭＴＴ法测得光密度值,对照组为０－７１ ±０－２２ ;照射组（Ⅰ） 为１－０３ ±０－２８ ;川芎嗪＋ 照射组为０－４７±０－１５ ;照射组（ Ⅱ） 为１－０５ ±０－２１;硫氮唑酮＋ 照射组为２－０２ ±０－２１;不同组ｂＦＧＦ 蛋白表达平均光密度：对照组为０－０２８±０－００５ ;照射组为０－０４４ ±０－００６ ;川芎嗪＋ 照射组为０－０２９ ±０－００１ ;硫氮唑酮＋ 照射组为０－０３６ ±０－００３。结论　川芎嗪明显抑制γ射线照射后ＮＩＨ／３Ｔ３ 成纤维细胞的增殖及ｂＦＧＦ蛋白表达,硫氮唑酮则不具有这一作用。     

碱性成纤维细胞生长因子和转化生长因子β1 在人发育骨与软骨中的表达及意义

观察碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)和转化生长因子β1(TGFβ1)在人发育骨与软骨中的表达和分布,认识这两种生长因子在人发育骨与软骨中的作用,用组织学、免疫组化及原位杂交技术,对临床经过石蜡包埋的人发育骨与软骨组织进行定位、定性检测。结果显示TGFβ1和bFGF在人发育的骨与软骨细胞中共同表达。作者认为TGFβ1和bFGF协同作用可能在人发育骨与软骨中起重要作用。     

软X线照射对体外培养大鼠成纤维细胞增殖的影响

目的观察软X射线照射对体外培养的成纤维细胞增殖的影响.方法观察培养的大鼠皮肤成纤维细胞照射后细胞计数的变化、划痕实验和"营救"实验.结果在0.5Gy～8Gy剂量范围内,剂量与成纤维细胞的增长成反比,而且0.5～4Gy剂量的量效关系经回归分析成直线型.0.5Gy、1Gy剂量照射后,在1～3天的增长的幅度明显比3～5天的小,而2Gy曲线在1～5天增长幅度明显低于5～7天.在0.1～0.025Gy的照射范围内成纤维细胞的增殖曲线和空白对照没有差别.划痕实验中对照的长满时间明显比照射的长满时间短,实施了"营救"措施的细胞照射与对照的长满时间没有明显差别.结论照射后成纤维细胞的增长与剂量成依赖关系,并且剂量越大细胞增殖恢复也越慢.照射对细胞的运动也有抑制作用.未照射细胞对照射成纤维细胞的增长有"营救"作用.     

碱性成纤维细胞生长因子和转化生长因子β1在人发育骨与软骨中的表达及意义

观察碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）和转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）在人发育骨与软骨中的表达和分布,认识这两种生长因子在人发育骨与软骨中的作用,用组织学、免疫组化及原位杂交技术,对临床经过石蜡包埋的人发育骨与软骨组织进行定位、定性检测。结果显示ＴＧＦβ和ｂＦＧＦ在人发育的骨与软骨细胞中共同表达。作者认为ＴＧＦβ和ｂＦＧＦ协同作用可能在人发育骨与软骨中起重要作用。     

bFGF,EGF,TGF-β异构体与其受体在胎儿和成人皮肤中的表达特征

目的　探讨碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)、表皮细胞生长因子 (EGF)、转化生长因子 β的三种异构体 (TGF β1,β2 和β3 )及它们的受体在不同发育阶段皮肤中的表达特征。方法　用免疫组化方法和病理学技术确定这些细胞因子及其受体在 30例不同胎龄(13～ 31周 )的胎儿皮肤和 5例成人皮肤中的定位和表达量的变化规律。结果　bFGF、EGF、TGF β异构体主要分布于表皮细胞、内皮细胞、毛囊上皮细胞和部分成纤维细胞的胞质和胞外基质中 ,而其受体则主要分布于这些细胞的细胞膜和细胞质内。随着胎儿不断生长发育 ,这些蛋白表达的阳性率逐渐升高 ,在晚期妊娠胎儿(胎龄 2 9～ 31周 )和成人皮肤中 ,蛋白表达进一步升高 ,阳性率明显高于早期妊娠胎儿皮肤。结论　bFGF、EGF、TGF β的异构体及其受体可能对皮肤的发生、结构和功能的维持、损伤后修复具有重要作用 ;在妊娠早期胎儿皮肤中 ,这些蛋白低表达可能与胎儿皮肤创面无瘢痕愈合密切相关。     

模拟失重环境碱性成纤维细胞生长因子对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响

目的 探讨在模拟失重环境下碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人牙周膜成纤维细胞(hPDLF)增殖的影响. 方法 试验分对照组、模拟失重组和模拟失重加hPDLF组3组.采用酶消化组织块培养法分离、培养原代hPDLF.应用噻唑蓝比色法,检测模拟失重条件下,不同时间和不同浓度的bFGF对hPDLF增殖的影响. 结果 在模拟失重12h、24h组hPDLF增殖较对照组没有显著差别,在48h、72h模拟失重组较对照组显著降低,差异有统计学意义(t=7.303、8.668,P<0.01).模拟失重48 h时bFGF浓度在50～100μg/L范围内加bFGF组hPDLF增殖高于模拟失重组,差异有统计学意义(P<0.05),而bFGF浓度为1～10μg/L时,两组没有显著差别. 结论 模拟失重在48 h、72 h对hPDLF的增殖有抑制作用,模拟失重环境bFGF浓度在50～100μg/L范围内具有促进hPDLF增殖的效应.     

bFGF、EGFR和P53蛋白在肾细胞癌中表达及其临床意义

ｂＦＧＦ、ＥＧＦＲ和Ｐ５３蛋白在肾细胞癌中表达及其临床意义３６３０００漳州解放军第１７５医院谢庆祥汪鸿缪友仁林福地关键词肾肿瘤；成纤维细胞，生长因子中国图书资料分类号Ｒ７３７．１１恶性肿瘤的发生发展是由多种与细胞生长、分化有关的基因损伤累积的过程，但...     

7种中草药粗提液对肺成纤维细胞增殖抑制作用的比较研究

目的观察7种中草药粗提液对肺成纤维细胞增殖的作用,为中药治疗肺纤维化筛选苗头药物.方法根据肺纤维化的病理机制,确定赤芍、毛冬青、莲子心、瑞香狼毒、猫眼草、千金子、蒲公英粗提物为备筛药物,利用大鼠原代培养肺成纤维细胞,加入不同浓度的提取液,采用细胞形态学观察、MTT比色法,比较其对细胞增殖的抑制作用,并以乳酸脱氢酶（LDH）的测定来观察其细胞毒性.结果莲子心、狼毒、千金子对大鼠肺成纤维细胞有显著的抑制作用,其中效果最佳、细胞毒作用最小的为莲子心提取物.结论莲子心是一种有希望的治疗肺纤维化的苗头药物.     

高原环境对大鼠桡骨骨折愈合过程中TGF-β1表达的影响

为探讨高原地区骨折愈合过程中转化生长因子β1（TGF－β1）的表达特点及其对骨折愈合的影响，建立高原大鼠单侧桡骨中段骨折模型，采用免疫组化－图像分析方法检测骨折愈合各阶段TGF－β1的表达。结果表明，在骨折愈合过程中，高原组大鼠TGF－β1的表达量较平原组低，其中3天组和3周组与平原组比较差异有显著性意义（P＜0．01）。提示高原环境影响成骨细胞等的增殖、分化，进而影响TGF－β1的表达，并最终影响到骨折的愈合。