骨髓间充质干细胞即刻与延时治疗修复阴茎海绵体神经损伤大鼠勃起功能的研究

目的:拟观察在双侧阴茎海绵体神经(CN)损伤的大鼠神经性勃起功能障碍(NED)模型中即刻和延时向阴茎海绵体注射骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)对大鼠阴茎勃起功能的修复作用。方法:选取28只8周龄、体重200~250 g雄性SD大鼠随机分为4组:假手术组找到双侧海绵体神经后不做处理直接关腹并缝合皮肤;对照组、即刻治疗组和延时治疗组均通过钳夹的方式损伤双侧阴茎海绵体神经建立NED模型随后关腹缝合。假手术组和对照组向阴茎海绵体内注射对照剂,即刻治疗组注射BM-MSCs,延时治疗组术后两周注射BM-MSCs。术后12周采用电刺激CN记录阴茎海绵体内压(ICP),颈动脉穿刺测定平均动脉压(MAP),ICP/MAP作为勃起功能的评价指标来评估大鼠的勃起功能。在勃起功能检测后处死大鼠,取阴茎海绵体中段组织检测平滑肌、胶原和神经纤维。结果:在手术后12周,即刻治疗组和延时治疗组ICP和ICP/MAP均较对照组升高(P0.05)。即刻治疗组和延时治疗能提高大鼠海绵体组织内平滑肌与胶原的比例(P0.05),同时两组阴茎海绵体内平滑肌含量高于对照组(P0.05),阴茎海绵体背神经内神经微丝(NF)蛋白阳性神经纤维数目和nNOS的表达高于对照组(P0.05)。结论:阴茎海绵体内注射BM-MSCs能对双侧CN损伤大鼠的勃起功能恢复有促进作用。BM-MSCs治疗可以提高海绵体组织内平滑肌与胶原的比例,改善纤维化,并能提高海绵体组织中平滑肌含量、阴茎背神经的神经丝含量和nNOS的表达水平,术后延时治疗同样能取得一定的治疗效果。     

IGF-1基因治疗提高老龄大鼠阴茎海绵体平滑肌密度的研究

目的 观察阴茎海绵体内注射胰岛素样生长因子-1 (IGF-1)基因能否提高老年性大鼠阴茎勃起功能及其对阴茎海绵体平滑肌密度的影响,以探讨IGF-1基因治疗ED的机制.方法 4月龄SD雄性大鼠(青年组)10只;24月龄SD雄性大鼠(老龄组)20只,随机分为2组:PBS对照组、100 μg IGF-1质粒注射组.每组10只注射后8周行电刺激检测大鼠阴茎海绵体内压(ICP)和平均动脉压(MAP),分析比较IGF-1基因治疗的效果,Masson,s三色染色图文定量分析阴茎海绵体平滑肌在海绵体组织中含量的变化.结果 电刺激发现老龄组较青年组ICP/MAP和总ICP明显降低(P＜0.05).IGF-1基因治疗8周后,100 μg IGF-1质粒注射组较PBS对照组ICP/MAP和total ICP均明显提高(P＜0.05);阴茎海绵体平滑肌的含量在老龄组较青年组明显降低(P＜ 0.05);与PBS对照组比较,100μg IGF-1质粒注射组能够明显提高阴茎海绵体平滑肌的含量(P＜0.05).结论 I GF-1基因治疗能够改善老龄大鼠的勃起功能,其作用机制之一可能是通过提高阴茎海绵体平滑肌的含量.     

尿源干细胞治疗1型糖尿病性勃起功能障碍大鼠的实验研究

目的:验证尿源干细胞(USCs)治疗1型糖尿病性勃起功能障碍(DED)大鼠的效果及探索可能机制。方法:予10周龄SD雄性大鼠腹腔注射链脲佐菌素(40 mg/kg)以构建糖尿病大鼠模型,8周后行阿扑吗啡(APO)颈部皮下注射筛选DED大鼠模型。随后分离、培养、鉴定USCs。将所有大鼠分为正常对照组(n=6)、PBS组(n=6)和USCs治疗组(n=6),其中PBS组和USCs治疗组均为DED大鼠。分别将PBS或USCs(1×106/只)移植至PBS组和USCs治疗组大鼠阴茎海绵体。移植4周后分别比较三组大鼠的体重和血糖,并测定平均颈动脉内压(MAP)和海绵体内压(ICP)以评价阴茎勃起功能,分析其阴茎局部血管周细胞标志物、平滑肌/胶原比例、VEGF/VEGF/eNOS。结果:1型DED大鼠的成模率为75%。经流式分析证实USCs表达间充质干细胞表面标志物,并至少可向成骨、成脂方向分化。USCs移植4周后,除正常对照组大鼠体重保持增长外(P0.05),PBS组、USCs治疗组的体重无明显变化(P0.05)。此外三组大鼠治疗前后血糖均无显著变化(P0.05)。与PBS组比较,USCs治疗组的ICP及ICP/MAP均得到显著恢复(P0.01)。免疫荧光证实1型DED大鼠的VEGF/VEGFR1/eNOS通路和阴茎海绵窦周细胞功能(CD146)均受损,经USCs治疗4周后,该通路及CD146均得到显著恢复,平滑肌/胶原比例也得到有效恢复。结论:USCs可有效治疗1型DED大鼠,其作用机制可能是通过VEGF/VEGFR1/eNOS通路改善阴茎海绵窦内皮功能实现的。     

脂肪来源间充质干细胞治疗神经损伤性勃起功能障碍的实验研究

目的 建立大鼠神经损伤勃起功能障碍(CNI-ED)动物模型,通过在阴茎海绵体注射脂肪来源间充质干细胞(ASCs),探究ASCs对双侧海绵体神经损伤后勃起功能障碍的治疗效果和作用机制.方法 实验动物分为3组,每组8只,分别为年龄匹配组(AMC组,假手术治疗),对照组(双侧海绵体损伤+海绵体注射PBS,PBS组),实验组(...     

PDE_5基因特异性siRNA改善糖尿病性勃起功能障碍大鼠勃起功能的研究

目的 探讨人鼠PDEs基因siRNA对糖尿病性勃起功能障碍(DM ED)大鼠PDE,基因表达的抑制作用及其对DMED大鼠勃起功能的影响.方法 构建可同时表达2条针对大鼠PDEs基因的shRNA重组腺病毒;50只雄性SD大鼠随机取10只作为正常对照.其余建立DM ED人鼠模型,随机分为实验组、阴性对照组和空白对照组,分别将重组腺病毒rAd-rPDEs-shRNA、腺病毒rAd-mock及生理盐水注射于阴茎海绵体.注射后第7天,电刺激盆神经测定各组大鼠阴茎海绵体内压(ICP)及平均周围动脉压(MAP),然后取海绵体组织通过RT-PCR和Western blot分别检测PDE5基因mRNA及蛋白的表达.结果 ICP/MAP实验组和正常对照组显著高于阴性对照组和窄白对照组(P＜0.05),实验组和正常对照组间无显著性差异(P＞0.05);RT-PCR和Western blot 分析,实验组大鼠PDE5基因mRNA和蛋白表达均显著低于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05).结论 PDE5基因shRNA重组腺病毒转染可以改善DMED大鼠的勃起功能,为DMED治疗方法的探索提供了新的思路.     

尿源干细胞治疗海绵体神经损伤性勃起功能障碍大鼠模型的实验研究

目的:探讨尿源干细胞(USC)对海绵体神经损伤性勃起功能障碍(CNIED)大鼠勃起功能和阴茎海绵体组织结构的保护作用。方法:60只成年雄性SD大鼠随机平均分为4组(n=15只/组):假手术组、双侧海绵体神经钳夹损伤组(BCNI组)、PBS组、USC组。假手术组予暴露双侧海绵体神经后直接关闭手术切口,其余3组均予血管钳钳夹双侧海绵体神经1 min,建立CNIED模型;PBS组和USC组分别予阴茎海绵体注射PBS(200μl)或USC(1×10~6细胞/200μl PBS)。治疗28 d后测定大鼠的最大海绵体内压(mICP)和m ICP/平均动脉压(mICP/MAP),并通过Western印迹检测海绵窦内皮细胞标志物e NOS,平滑肌标志物α-SMA,以及Collagen I,通过免疫组化检测海绵体阴茎背神经内的神经标志物(nNOS、NF-200),Masson染色检测海绵体平滑肌/胶原比值,以及TUNEL染色检测海绵窦内细胞凋亡水平。结果:治疗28 d后,USC组大鼠的mICP及mICP/MAP均较PBS组[(81±9.9)mm Hg vs(31±8.3)mm Hg,0.72±0.05 vs 0.36±0.03,P0.05]和BCNI组[(81±9.9)mm Hg vs(33±4.2)mm Hg,0.72±0.05 vs 0.35±0.04,P0.05]显著升高。免疫组化结果显示:USC组大鼠背神经内n NOS、NF-200阳性神经纤维面积的比例(%)均较PBS组(11.31±4.22 vs 6.86±3.08,27.31±3.12 vs 17.38±2.87,P0.05)和BCNI组(11.31±4.22 vs 7.29±4.84,27.31±3.12 vs 19.49±4.92,P0.05)显著增加;Western印迹检测结果显示:USC组大鼠e NOS/GAPDH比值较PBS组(0.52±0.08 vs 0.31±0.06,P0.05)和BCNI组(0.52±0.08 vs 0.33±0.07,P0.05)均显著提高,α-SMA含量亦较PBS组(1.01±0.09 vs 0.36±0.05,P0.05)和BCNI组(1.01±0.09 vs 0.38±0.04,P0.05)显著提高,而Collagen I含量较PBS组(0.28±0.06 vs 0.68±0.04,P0.05)和BCNI组(0.28±0.06 vs 0.70±0.10,P0.05)显著降低;且Masson染色结果示USC组大鼠阴茎平滑肌/胶原比值(%)亦较PBS组(17.91±2.86 vs 7.70±3.12,P0.05)和BCNI组(17.91±2.86 vs 8.21±3.83,P0.05)显著升高。TUNEL染色显示USC组大鼠海绵窦内细胞的凋亡指数(%)较PBS组(3.31±0.83 vs 9.82±0.76,P0.01)和BCNI组(3.31±0.83 vs 9.75±0.91,P0.05)显著降低。结论:USC可以通过保护神经、改善海绵窦内皮功能和海绵体纤维化,抑制细胞凋亡,显著保护CNIED大鼠的勃起功能。     

大鼠衰老过程中勃起功能改变与去乙酰化酶SIRT1的关系研究

目的:研究衰老过程中大鼠勃起功能变化、抗衰老蛋白SIRT1表达及其相关因子改变,探索SIRT1与老年性勃起功能障碍(ED)发生的关系。方法:SD大鼠按不同月龄分组,利用电刺激大鼠盆腔星状神经节法测定阴茎海绵体内压(ICP),颈动脉穿刺测定平均动脉压(MAP),ICP/MAP作为勃起功能的评价指标;马松染色观察胶原纤维变化;Western印迹测定不同月龄大鼠阴茎海绵体中SIRT1、P53及FOXO3a的表达变化;NO、c GMP检测试剂盒测定阴茎海绵体中NO、c GMP含量。结果:随月龄增长,大鼠勃起功能(ICP/MAP)在8月龄达到峰值,其后随月龄增长降低。c GMP含量变化与勃起功能一致。随月龄增加,大鼠阴茎海绵体中胶原纤维增多。SIRT1的表达随月龄增加不断降低;而凋亡因子P53、氧化应激因子FOXO3a的表达随月龄增加不断上升。结论:NO/c GMP通路活性降低、凋亡及氧化应激可能是衰老导致ED的原因。抗衰老蛋白SIRT1与其调控的凋亡、氧化应激因子改变与勃起功能一致,推测SIRT1与老年性ED的发病有关。     

褪黑素抗氧化治疗糖尿病大鼠阴茎勃起功能障碍的研究

目的 观察褪黑素对糖尿病大鼠阴茎勃起功能的影响,探讨氧化应激在糖尿病性勃起功能障碍发病机制中的作用.方法 一次性腹腔注射STZ建立糖尿病大鼠模型,随机分为糖尿病组、褪黑素(MT)治疗组以及对照组.8周后通过电刺激各组大鼠勃起神经来检测海绵体内压,评价勃起功能;采用硫代芭比妥酸法检测阴茎海绵体组织中丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法测超氧化物氧化酶(SOD)活性;免疫组化染色半定量分析各组大鼠阴茎海绵体中平滑肌及内皮的含量.结果 与正常对照组相比,阴茎海绵体组织中MDA含量显著增加(P＜0.01),SOD活性降低(P＜0.05),最大海绵体内压(ICP)亦显著降低(P＜0.05);与糖尿病组相比,MT组大鼠海绵体MDA含量明显降低(P＜0.05),其SOD活性和ICP显著升高(P＜0.05);且其海绵体平滑肌及海绵窦内皮细胞含量明显提高.结论 MT可通过改善组织中氧化应激水平,促进阴茎海绵体平滑肌和内皮组织修复,提高勃起功能;抗氧化治疗可能为糖尿病性勃起功能障碍的防治提供新的策略.     

糖尿病性勃起功能障碍大鼠阴茎海绵体组织中神经生长因子的表达及其治疗作用的研究

目的:本研究通过检测糖尿病性勃起功能障碍(ED)大鼠阴茎组织中神经生长因子(NGF)表达,并使用hNGF进行治疗,以探讨糖尿病性ED发病机制及NGF治疗作用的机制。方法:成年雄性SD大鼠60只,随机取50只大鼠用于制作糖尿病模型,饲养8周后,取正常组和糖尿病组大鼠阴茎海绵体组织,采用RT-PCR和W estern印迹法检测NGF的mRNA及蛋白水平。从造模成功的糖尿病大鼠中筛选出有ED大鼠,把所有大鼠分为5组:正常组、糖尿病性ED组、糖尿病性ED单用NGF组(NGF组)、糖尿病性ED单用胰岛素组(R I组)、糖尿病性ED联合应用NGF和胰岛素组(NGF+R I组,胰岛素通过颈部皮下注射给药,NGF通过腹腔内注射给药),8周后测海绵体内压(ICP),并取所有大鼠阴茎海绵体组织用免疫组化法观察nNOS神经纤维的变化。结果:与正常组相比,糖尿病性ED组大鼠阴茎海绵体组织中NGF的mRNA表达增加,蛋白含量增加。与糖尿病性ED组相比,NGF组、R I组、NGF+R I组ICP水平显著升高(P<0.05);NGF组、R I组、NGF+R I组阴茎组织中nNOS神经纤维水平显著升高(P<0.05)。结论:糖尿病晚期勃起神经出现损伤并发生ED,推测可能与NGF分泌增加的幅度小于高血糖状态对勃起神经的损伤程度有关,也可能与NGF与其相应受体结合转运能力损害有关,给予外源性NGF可能有助于糖尿病性ED局部神经病变减轻和勃起功能改善。提示NGF的异常在糖尿病性ED的发病及治疗中可能具有重要作用。     

多聚ADP-核糖聚合酶抑制剂联合西地那非改善糖尿病大鼠勃起功能的研究

目的 探讨多聚ADP-核糖聚合酶抑制剂(PJ-34)联合西地那非对糖尿病大鼠勃起功能的影响.方法 40只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病+西地那非组、糖尿病+PJ-34组、糖尿病+PJ-34+西地那非组.测定各组大鼠阿扑吗啡诱导下的性行为变化;电刺激盆神经测定各组大鼠阴茎海绵体内压(ICP)及平均周围动脉压(MAP),然后取海绵体组织测定Caspase-3活性.结果 Caspase-3活性在糖尿病大鼠中显著升高,PJ-34治疗可有效抑制其活性.糖尿病+西地那非组、糖尿病+PJ-34组性行为能力及ICP/MA均低于正常对照组,PJ-34与西地那非联合应用疗效显著高于单一用药.结论 PJ-34联合西地那非可以显著改善糖尿病大鼠的勃起功能,为糖尿病性勃起功能障碍治疗方法 的探索提供了新的思路.     

1-磷酸鞘氨醇受体1-3在Ⅰ型糖尿病ED大鼠阴茎海绵体组织中的表达

目的探讨1-磷酸鞘氨醇受体1-3(S1PR1-3)在糖尿病性勃起功能障碍大鼠阴茎海绵体组织中的表达。方法 20只成年雄性SD大鼠随机分为正常对照组和糖尿病组,成功造模2个月后,测定两组大鼠阴茎海绵体内压/平均动脉压(Max ICP/MAP),采用Western blot分析S1PR1-3、eNOS、RhoA、ROCK1、ROCK2的表达。结果与对照组相比,糖尿病组大鼠勃起功能显著降低(P0.05);糖尿病组大鼠阴茎海绵体S1PR1、S1PR3、eNOS蛋白表达水平下降(P0.05),而S1PR2、RhoA、ROCK1、ROCK2的表达升高(P0.05)。结论Ⅰ型糖尿病可导致大鼠勃起功能障碍,可能与S1PR1、S1PR3表达下调,eNOS/NO/cGMP信号通路受抑制以及S1PR2受体表达升高,激活RhoA/Rho激酶信号通路有关。     

枸杞多糖对糖尿病大鼠阴茎海绵体氧化应激损伤的保护作用

目的探讨枸杞多糖(LBP)对糖尿病大鼠阴茎海绵体氧化应激损伤的保护作用。方法 SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病大鼠模型,随机设立糖尿病组(DM组)、枸杞多糖灌胃组(LBP组),并设立正常对照组(NC组)。8周后通过APO试验检测勃起功能,硫代巴比妥酸法检测阴茎海绵体组织内丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法检测阴茎海绵体组织内超氧化物歧化酶(SOD)含量,光镜下观察阴茎海绵体组织Masson染色病理切片中胶原纤维、平滑肌纤维的差异。结果与NC组比较,DM组大鼠勃起次数明显减少(P0.05),阴茎海绵体组织内MDA含量显著增高(P0.05),SOD含量明显减少(P0.01);大鼠阴茎海绵体组织平滑肌部分断裂,数目减少,胶原纤维菲薄,结构破坏,排列紊乱。经灌胃8周后,LBP组与DM组比较:勃起次数增多(P0.05),大鼠阴茎海绵体组织中MDA含量降低(P0.05),SOD含量明显增加(P0.01),光镜下观察阴茎海绵体组织结构改善。结论实验证实,LBP可以减轻糖尿病大鼠阴茎海绵体氧化应激损伤,修复部分组织结构,改善大鼠勃起功能。     

左旋精氨酸对糖尿病大鼠阴茎海绵体氧化应激损伤的保护作用

目的 探讨左旋精氨酸(L-Arg)对糖尿病大鼠阴茎海绵体氧化应激损伤的保护作用.方法 大剂量STZ腹腔注射建立糖尿病大鼠模型,随机分为糖尿病组、L-Arg治疗组,并设正常对照组.治疗8周后用电刺激各组大鼠勃起神经测定海绵体内压评价勃起功能采用黄嘌呤氧化酶法检测阴茎海绵体组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性,硫代芭比妥酸法测丙二醛(MDA)含量;光镜下观察Masson染色切片.结果 糖尿病组较正常对照组,阴茎海绵体MDA含量显著增高(P<0.01),SOD活性显著下降(P<0.05),最大海绵体内压(ICP)显著降低(P<0.05);与糖尿病组比较,L-Arg可使海绵体MDA含量明显降低(P<0.05),显著提高其SOD活性及ICP(P<0.05).糖尿组大鼠阴茎组织中胶原纤维含量明显减少,排列紊乱、稀疏,平滑肌减少变薄,出现断裂;L-Arg组大鼠阴茎组织结构可见明显改善.结论 糖尿病大鼠阴茎海绵体存在氧化应激损伤,导致海绵体结构的改变是其勃起水平下降的重要因素,通过补充L-Arg,可以减轻勃起组织的氧化应激损伤,改善组织结构,从而提高勃起能力.     

血管活性肠多肽基因转导增强阴茎勃起功能

目的 探讨阴茎海绵体勃起神经递质血管活性肠多肽(VIP)基因转导入糖尿病大鼠阴茎海绵体并表达多量VIP以增强勃起功能的可行性.方法 将构建的重组质粒pcDNA3/VIPcDNA注射入链尿佐菌素诱导的糖尿病大鼠阴茎海绵体,在注射3 d后测定阴茎海绵体内压(ICP),分别以正常空白、空白、单纯注射缓冲液和单纯注射pcDNA3载体对照.Dot blot法测定阴茎组织中VIP mRNA表达水平.结果 糖尿病大鼠阴茎海绵体注射重组质粒后3 d,电刺激海绵体神经,ICP较对照组明显升高(P＜0.05);阴茎组织VIP mRNA表达增多(P＜0.05).结论 成功将重组质粒pcDNA3/VIP cDNA转导入糖尿病阴茎海绵体,VIP mRNA表达增加能增强糖尿病大鼠阴茎海绵体的勃起功能.     

hIGF-1基因治疗老龄大鼠勃起功能障碍的剂量及时效研究

目的:探讨阴茎海绵体内注射胰岛素样生长因子1(hIGF-1)基因提高老年性大鼠阴茎勃起功能的最佳剂量和作用实效。方法:4月龄SD雄性大鼠10只(青年组);24月龄SD雄性大鼠40只,随机分为5组,每组10只:PBS对照组、hIGF-1基因10μg注射组、100μg注射组和1000μg注射组,注射后在不同时间段4周和8周行电刺激检测大鼠阴茎海绵体内压(ICP)和平均动脉压(MAP)的测定,分析比较不同剂量和不同时间hIGF-1基因治疗的效果;RT-PCR检测hIGF-1基因mRNA的表达。结果:电刺激发现老年组较青年组ICP/MAP和总ICP明显降低(P<0.05)。4和8周的治疗之后,10μg注射组、100μg注射组和1000μg注射组较PBS对照组ICP/MAP和总ICP均明显提高(P<0.05);100μg注射组和1000μg注射组在4和8周时ICP/MAP和总ICP值和青年组相仿;10μg注射组虽然不能达到和青年组相仿的治疗效果,但仍然有治疗意义;所有hIGF-1基因治疗组均可检测到hIGF-1 mRNA的表达。结论:hIGF-1基因治疗能够提高老龄大鼠的勃起功能,100μg即可达到有效的治疗,hIGF-1基因治疗至少能够维持8周时间。     

雄激素调控ERK1/2通路改善去势大鼠勃起功能的机制研究

目的:研究细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)通路在雄激素缺乏引起的勃起功能障碍(ED)中的作用。方法:8周龄健康雄性SD大鼠30只,随机分成对照组(A组)、去势组(B组)、去势后补充雄激素组(C组)。B组和C组大鼠均手术去势,其中C组大鼠在去势1周后注射十一酸睾酮(TU)100 mg/kg,其余组则注射等量生理盐水。1个月后测各组大鼠血清睾酮浓度、平均颈动脉压(MAP)、阴茎海绵体内压(ICP),通过Western印迹检测大鼠阴茎海绵体ERK1/2、内皮型一氧化氮合酶(e NOS)的蛋白表达。结果:B组大鼠血清睾酮[(1.27±0.48)nmol/L]较A组[(17.14±1.07)nmol/L]和C组[(16.24±1.90)nmol/L]明显降低(P0.05),ICP/MAP比值B组较A组和C组明显下降(P0.05);Western印迹结果显示ERK1/2在各组中表达基本一致(P0.05),而磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶1/2(P-ERK1/2)在B组中表达高于A组和C组(P0.05),e NOS在B组中表达明显低于A组和C组(P0.05)。结论:雄激素可能通过调控ERK1/2通路改善去势大鼠的勃起功能。     

前列腺癌根治术后勃起功能障碍动物模型的建立

目的 对大鼠海绵体神经(CN)进行解剖并对其造成钳夹损伤,以建立前列腺癌根治术(RP)后勃起功能障碍(ED)的动物模型.方法 将36只雄性SD大鼠随机分为模型组、假手术组、正常组,术后4周通过阿朴吗啡(APO)实验及海绵体内压(ICP)/平均动脉压(MAP)测定、阴茎神经型一氧化氮合酶(nNOS)免疫组织化学检测以评估建立模型的效果.结果 术后4周3组大鼠的阴茎勃起率和平均勃起次数分别为0%和0次、100%(11/11)和(2.24±0.86)次、100%(12/12)和(2.39±0.92)次.模型组大鼠无明显勃起反应,假手术组、正常组可见明确勃起反应.电刺激盆腔星状神经节(MPG)前3组大鼠ICP/MAP分别为(0.13±0.04)、(0.10±0.03)、(0.12±0.03),电刺激MPG后分别为(0.12±0.05)、(0.57±0.08)、(0.58±0.06),电刺激MPG前3组ICP/MAP差异均无统计学意义(P＞0.05),模型组与假手术组、正常组的电刺激MPG后ICP/MAP差异有统计学意义(P＜0.05).3组大鼠阴茎nNOS阳性神经纤维数分别为(23.04±2.59)、(73.94±7.51)、(80.26±6.95),模型组大鼠阴茎nNOS阳性神经纤维数明显少于假手术组、正常组(P＜0.05).结论 大鼠CN结构与人类非常相似,CN钳夹损伤是建立RP术后ED模型的可靠的方法.

Abstract：

Objective To identify rat cavernous nerve (CN) and develop a rat model of erectile dysfunction (ED) after radical prostatectomy (RP) caused by injury of cavernous nerve.Methods Thirty-six male SD rats were were randomly divided into 3 groups:model group,sham-operation group and nomal group.Four weeks after surgery,rat models were evaluated by apomorphine test,ICP/MAP measurement and nNOS-positive nerve fibres in penis.Results The rats in model group had no erectilty in apomorphine test and electical stimulating MPG.The rats in sham-operation group and nomal group had erectility at the same conditions,accompanied with increased ICP/MAP in electrical stimulation ( P＜0.05 ).The nNOS-positive nerve fibres in model group ( 23.04 ± 2.59 ) were less than those in sham-operation group (73.94 ±7.51 ) and normal group (80.26 ±6.95 ).Conclusion Cavernous nerve in rats is highly similar to that in human beings.The rat model of erectile dysfunction after radical prostatectomy caused by cavernous nerve crush injury is reliable.     

高脂饮食上调大鼠慢性炎症水平导致勃起功能障碍发生风险增高

目的探讨高脂饮食(high-fat diet,HFD)对勃起功能的影响。方法将20只10月龄雄性SD大鼠随机分成两组:对照组(n=10,喂食常规饲料)和模型组(n=10,喂食高脂饲料)。4个月后,检测其体重、空腹血糖和血脂水平等指标,同时用最大海绵体内压(max intracavernous pressure,Max ICP)和平均动脉压(mean arterial pressure,MAP)的比值评价其勃起功能,探讨HFD对勃起功能的影响。而后采用苏木精-伊红(H&E)染色观察肝脏和阴茎组织的形态学变化、Masson's三色染色观察海绵体平滑肌纤维化程度;免疫组化检测海绵体组织中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白介素-6(interleukin-6,IL-6)表达水平;Western blot检测海绵体组织中磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)、丝氨酸/苏氨酸激酶(protein kinase B,AKT)、核因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)、TNF-α和IL-6等蛋白的表达情况,研究HFD激活炎症导致勃起功能改变的可能机制。结果与对照组比较,模型组的体重增量、总胆固醇(total cholesterol,TCH)、甘油三酯(triglyceride,TG)和低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)等水平均明显升高(P<0.05);Max ICP/MAP值降低(P<0.001);肝脏组织中出现大量脂滴空泡;海绵体平滑肌细胞(cavernosum smooth muscle cells,CSMCs)排布欠规则,肌纤维间隙增宽,肌纤维含量明显减少,胶原纤维含量明显增多;内皮细胞(endothelial cells,ECs)萎缩,连续性中断;同时其海绵体组织中PI3K、AKT、NF-κB、TNF-α和IL-6等的表达水平明显升高(P<0.05)。结论HFD可引起大鼠海绵体组织炎性水平升高,导致CSMCs和ECs形态异常,增加其患勃起功能障碍(erectile dysfunction,ED)的风险。     

胱硫醚-γ-裂解酶和胱硫醚-β-合成酶在高血压大鼠阴茎海绵体中的表达

目的:探讨高血压对大鼠阴茎海绵体组织胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)和胱硫醚-β-合成酶(CBS)表达的影响及与大鼠勃起功能的关系。方法:健康雄性SPF级自发性高血压大鼠(SHR)与对照组WKY(Wistar-Kyoto)大鼠各10只,于12周龄时测定大鼠血清睾酮、阴茎海绵体内压/平均动脉压(ICP/MAP)、血浆和阴茎海绵体内源性H2S的含量,采用免疫组化和Western印迹分析CSE和CBS在阴茎海绵体内的表达。结果:SHR与WKY大鼠的血清睾酮值没有显著差别,SHR的ICP/MAP在0、3和5 V电刺激盆腔神经节(MPG)时均显著低于WKY组(n=10,P0.05)。SHR血浆H2S含量显著低于WKY大鼠[(10.49±1.35)μmol/Lvs(21.92±2.75)μmol/L,P0.05],SHR阴茎海绵体组织内源性H2S含量显著低于WKY大鼠[(52.60±3.44)nmol/mg prot vs(87.67±2.12)nmol/mg prot,P0.05],SHR阴茎海绵体组织内源性H2S生成率也较WKY大鼠显著降低[(1.14±0.07)nmol/(mg·min)vs(4.35±0.32)nmol/(mg·min),P0.05]。CSE及CBS主要表达在SHR和WKY大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞和血管内皮细胞的胞质,SHR的CSE及CBS蛋白表达量均显著低于WKY大鼠(P0.05)。ICP/MAP与CSE和CBS表达呈高度正相关(r=0.955、0.977,P均0.05)。结论:高血压大鼠阴茎海绵体组织中CBS和CSE的表达下降,导致阴茎海绵体内H2S合成减少,可能是高血压引起勃起功能下降的机制之一。     

电刺激阴茎海绵体神经测定大鼠勃起功能的方法探讨

目的:探讨电刺激阴茎海绵体神经(CN)测定大鼠勃起功能的方法。方法:选择4月龄雄性SD大鼠20只,体质量(425±25)g。左颈总动脉内插管,直接法持续监测大鼠平均动脉压(MAP);左侧海绵体内插管测定阴茎海绵体内压(ICP);前列腺右侧叶前外侧表面暴露右侧CN,通过电刺激CN诱发阴茎勃起。电刺激参数为:5V,2ms,25Hz,每次刺激持续1min,间隔5min重复电刺激,共刺激3次。电刺激CN前的(ICP/MAP)×100(rR)代表阴茎海绵体的静息状态;电刺激CN后的(ICP最大值/MAP)×100(bR)代表阴茎海绵体的勃起状态或大鼠的基础勃起功能;bR/rR代表阴茎勃起后ICP的增高程度。结果:电刺激CN使ICP明显升高,MAP变化不大,表明电刺激可有效诱发勃起。ICP、MAP、rR、bR、bR/rR等各项指标3次重复测定之间的差异均无统计学意义(均P>0.05),表明电刺激法结果稳定。rR、bR和bR/rR总的平均值分别为(12.00±2.62)%、(67.68±11.28)%和(5.85±1.80)。结论:电刺激阴茎CN测定大鼠勃起功能的方法稳定易重复,能够客观准确地评估阴茎的勃起程度,是研究阴茎勃起功能的重要技术,值得在国内推广。