脂肪来源间充质干细胞治疗神经损伤性勃起功能障碍的实验研究

目的 建立大鼠神经损伤勃起功能障碍(CNI-ED)动物模型,通过在阴茎海绵体注射脂肪来源间充质干细胞(ASCs),探究ASCs对双侧海绵体神经损伤后勃起功能障碍的治疗效果和作用机制.方法 实验动物分为3组,每组8只,分别为年龄匹配组(AMC组,假手术治疗),对照组(双侧海绵体损伤+海绵体注射PBS,PBS组),实验组(...     

脂肪来源干细胞在勃起功能障碍治疗中的研究进展

正阴茎不能获得和(或)维持充分的勃起以完成满意性交的病理状态称之为勃起功能障碍(erectile dysfunction,ED)。ED是一个广泛存在的健康问题,世界范围内的发病率约为10%~20%,其对病人及其伴侣的生活质量都带来了极大的困扰。1998年,磷酸二酯酶5抑制剂(phosphodiesterase type-5 inhibitors,PDE5-i)第一个代表药物西地那非的问世,使ED的治疗取得了突破性的进展。该类药     

脂肪干细胞来源外泌体促进糖尿病小鼠创面愈合的实验研究

目的探讨脂肪干细胞来源外泌体(adipose-derived stem cell released exosomes,ADSC-Exos)对糖尿病小鼠创面愈合的影响。方法取患者自愿捐赠脂肪组织,采用酶消化法分离培养ADSCs,并于第3代细胞上清液提取Exos(ADSC-Exos);透射电镜观察ADSC-Exos形态,Western blot检测膜表面标志性蛋白Alix、CD63,纳米颗粒跟踪分析仪检测粒径分布。取患者自愿捐赠皮肤组织,采用酶消化法分离培养成纤维细胞。将PKH26标记的ADSC-Exos与第5代成纤维细胞培养,共聚焦荧光显微镜观察其能否进入细胞,采用细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)及划痕法观察ADSC-Exos对成纤维细胞增殖及迁移的影响。取24只8周龄Balb/c雄性小鼠制备糖尿病模型后,背部制备直径8 mm全层皮肤缺损创面,实验组(n=12)及对照组(n=12)创面真皮层分别注射0.2 mL ADSC-Exos及PBS。第1、4、7、11、16、21天大体观察创面愈合情况,计算创面愈合率;第7、14、21天取材,行组织学(HE及Masson)及CD31免疫组织化学染色,观察创面结构、胶原纤维及新生血管情况。结果ADSC-Exos为边缘清晰、大小分布均匀的膜性囊泡;粒径为40~200 nm,平均102.1 nm;膜表面标志性蛋白Alix、CD63均呈阳性。ADSC-Exos与成纤维细胞复合培养观察示,ADSC-Exos可进入成纤维细胞胞内,并能促进成纤维细胞增殖及迁移。动物实验显示,实验组小鼠背部创面愈合明显快于对照组,各时间点创面愈合率差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,实验组创面结构愈合更好,愈合前期新生微血管更多,愈合后期胶原纤维沉积更多;其中,第7、14、21天创面缺损长度,第7、14天微血管数量,第14、21天胶原纤维沉积百分比,组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论ADSC-Exos通过促进创面血管新生以及成纤维细胞增殖、迁移和胶原合成来促进糖尿病小鼠创面愈合。     

脂肪来源干细胞促进大鼠坐骨神经再生机制研究

目的探讨高分子神经套管负载大鼠自体脂肪源性干细胞(ADSCs)对大鼠坐骨神经损伤修复的作用。方法提取10只SD大鼠腹股沟区ADSCs作为实验组,另选择10只SD大鼠作为对照组,制作单侧坐骨神经5.0 mm缺损模型。术后12周应用神经电生理检测,腓肠肌湿重和组织学观察,分析评价神经再生效果。结果术后12周,实验组存活7只,对照组存活8只,实验组坐骨神经传导速率为(12.39±0.71)ms,对照组为(8.13±0.87)ms,其差异有统计学意义(P0.05);腓肠肌湿重比率实验组为47.69±0.24,对照组为35.77±0.73,其差异有统计学意义(P0.05)。对照组有髓神经纤维数量较少,呈散在分布;实验组有髓神经纤维数量较多,有神经束膜形成。结论 ADSCs对于SD大鼠周围神经生长有促进作用。     

自体PRP促进人脂肪来源干细胞成骨分化的体外实验研究

目的 探讨自体PRP对体外培养人脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)增殖及成骨分化的影响.方法 取自愿捐献吸脂术获取的脂肪组织进行分离培养ADSCs,倒置显微镜下观察细胞生长情况.将第3代ADSCs分别行成脂、成软骨定向诱导培养鉴定,并行CD29及CD44免疫荧光染色观察.取第3代ADSCs分别采用含10 mL/L PRP的成骨诱导培养基(PRP组)和不含PRP的成骨诱导培养基(对照组)进行培养,倒置显微镜观察细胞生长情况,培养后1、2、3、4、5 d采用MTT法检测细胞增殖活性;7、14、21、28 d行ALP活性检测,另取培养7、14 d的PRP组细胞行ALP染色观察;14 d时行PRP组茜素红染色检测钙结节形成情况.结果 倒置显微镜下第3代ADSCs多为梭形,倍增时间约35 h.成脂及成软骨诱导鉴定均为阳性,免疫荧光染色CD29和CD44呈阳性.MTT法示PRP组1、2、3、4、5 d的吸光度值分别为0.137±0.015、0.219±0.023、0.367±0.031、0.586±0.039、0.948±0.046,对照组分别为0.081±0.009、0.115±0.012、0.162±0.017、0.242±0.025、0.356±0.032,两组比较差异均有统计学意义(P＜0.01).成骨诱导7 d后,PRP组ALP染色阳性,细胞胞浆呈灰黑色,可见黑色沉淀:14 d后阳性细胞增多.ALP活性检测示PRP组7、14、21、28 d细胞活性值分别为23.96±2.05、41.26±3.38、38.12±3.03、35.89±2.24,对照组分别为17.83±1.62、26.64±2.37、23.85±1.99、20.78±1.81,两组比较差异均有统计学意义(P＜0.01).成骨诱导14 d后,茜索红染色示PRP组钙结节形成.结论 体外培养时,自体PRP可促进人ADSCs的增殖并诱导成骨分化,为骨组织工程提供一种新的种子细胞来源.     

低氧预处理促进大鼠脂肪来源干细胞体外促血管化的实验研究

目的为了观察不同低氧预处理条件对大鼠脂肪来源干细胞(rat adipose-derived stem cells, r ASCs)旁分泌功能及其体外血管化的影响,研究其相关促血管化机制。方法 1、将r ASCs分别放置于常氧培养箱(21%O_2),低氧培养箱1(2%O_2),低氧培养箱2(0.1%O_2),体外预置培养6、12、24和48小时。利用RT-PCR技术检测,细胞培养液中的VEGF-A,SDF-1a,bFGF,HFG基因在m RNA水平的表达情况。探索低氧预处理r ASCs促血管化的优选条件。2、在上述体外预置培养条件下,测定常氧与低氧组r ASCs旁分泌VEGF-A,SDF-1a蛋白水平情况以及体外血管化能力。结果研究结果发现,氧含量0.1%O_2和体外培养24小时促进血管再生能力更强,可以作为低氧预置优选条件。ASCs经过低氧预置后,条件培养基中VEGF-A和SDF-1a的含量明显高于常氧预置组(VEGF:2.2±0.3倍,P0.05;SDF-1a:3.2±0.5倍,P0.05)。与常氧组相比,低氧组的条件培养基显著促进了其体外管状形成能力(成管数量,常氧组:5.8±1.1,低氧组:11.9±2.6,P0.05)结论本研究通过优化体外低氧预处理条件,激发r ASCs的旁分泌功能,通过分泌促血管再生细胞因子,增加组织血管化再生能力,提示其具有改善勃起功能的潜能。     

脂肪源性干细胞治疗勃起功能障碍的研究进展

勃起功能障碍(erectile dysfunction,ED)是男性常见疾病,直接影响患者的生活质量.近年来,人们对阴茎勃起机制和ED病理生理学的研究取得一定进展,有了许多治疗ED的方法,如:口服磷酸二酯酶5型(phosphodiesterase 5,PDE5)抑制剂、阴茎海绵体内注射血管活性药物及阴茎假体植入[1]等.     

脂肪来源干细胞促进周围神经损伤修复的研究进展

目的总结脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)在促进周围神经损伤修复方面的研究进展。方法广泛查阅国内外近年相关文献,分析ADSCs促进周围神经损伤修复的机制并总结基础研究进展;回顾ADSCs治疗周围神经损伤的临床转化应用,指出其目前存在的问题,并对新的治疗方案提出展望。结果 ADSCs具有分化及旁分泌功能,其分泌的神经营养因子、抗凋亡、抗氧化等因子均能促进周围神经损伤修复。结论 ADSCs含量丰富、易获取,对周围神经损伤修复具有较肯定的疗效,有较好的临床应用前景。     

脂肪来源干细胞的可塑性

脂肪组织为中胚层来源,其中含有成熟的脂肪细胞和未分化的脂肪干细胞,以及微血管内皮细胞和少量的平滑肌细胞。具有干细胞特点的脂肪干细胞可以通过酶消化及离心等方法,从脂肪组织中分离获得。脂肪组织来源的干细胞(Adipose tissue derived stem cells,ADSCs)与骨髓基质干细胞(Bone marrow stem cells,BMSCs)相似,具有多向分化能力和自我更新能力。本文将就ADSCs的多向分化潜能,即分化的可塑性作一综述。1与可塑性相关的细胞表面标志人ADSCs与BMSCs具有相似表面标志[1],也表达CD105、CD166和STRO-1这三个标志多向分化潜能的关键…     

脂肪来源干细胞的研究进展

干细胞是具有自我更新能力并且在适宜微环境下具有多系分化潜能的原始细胞.近年来,传统十细胞的研究热点--胚胎十细胞,由于在细胞分化调节及伦理上具有一定的局限性,使对成体干细胞的研究得到了飞速发展.     

西地那非显著提高ED患者的勃起功能和勃起硬度

为了确定勃起硬度[根据勃起硬度等级评分(EHGS)]与：(1)勃起功能[根据国际勃起功能评分的勃起功能域(IIEF EF)]；(2)足够插入的勃起硬度的频率(由IIEF Q2评价)；(3)性交尝试成功率(根据患者事件日志)之间的关系。Mulhall JP等研究了大量关于枸橼酸西地那非治疗ED的双盲、安慰剂对照临床实验的数据。汇集6549名     

尿源干细胞治疗1型糖尿病性勃起功能障碍大鼠的实验研究

目的:验证尿源干细胞(USCs)治疗1型糖尿病性勃起功能障碍(DED)大鼠的效果及探索可能机制。方法:予10周龄SD雄性大鼠腹腔注射链脲佐菌素(40 mg/kg)以构建糖尿病大鼠模型,8周后行阿扑吗啡(APO)颈部皮下注射筛选DED大鼠模型。随后分离、培养、鉴定USCs。将所有大鼠分为正常对照组(n=6)、PBS组(n=6)和USCs治疗组(n=6),其中PBS组和USCs治疗组均为DED大鼠。分别将PBS或USCs(1×106/只)移植至PBS组和USCs治疗组大鼠阴茎海绵体。移植4周后分别比较三组大鼠的体重和血糖,并测定平均颈动脉内压(MAP)和海绵体内压(ICP)以评价阴茎勃起功能,分析其阴茎局部血管周细胞标志物、平滑肌/胶原比例、VEGF/VEGF/eNOS。结果:1型DED大鼠的成模率为75%。经流式分析证实USCs表达间充质干细胞表面标志物,并至少可向成骨、成脂方向分化。USCs移植4周后,除正常对照组大鼠体重保持增长外(P0.05),PBS组、USCs治疗组的体重无明显变化(P0.05)。此外三组大鼠治疗前后血糖均无显著变化(P0.05)。与PBS组比较,USCs治疗组的ICP及ICP/MAP均得到显著恢复(P0.01)。免疫荧光证实1型DED大鼠的VEGF/VEGFR1/eNOS通路和阴茎海绵窦周细胞功能(CD146)均受损,经USCs治疗4周后,该通路及CD146均得到显著恢复,平滑肌/胶原比例也得到有效恢复。结论:USCs可有效治疗1型DED大鼠,其作用机制可能是通过VEGF/VEGFR1/eNOS通路改善阴茎海绵窦内皮功能实现的。     

脂肪来源间充质干细胞治疗克罗恩病的实验研究

目的：探讨脂肪来源间充质干细胞（ADMSC）在克罗恩病（CD）治疗中的作用及可能的作用机制。方法采用三硝基苯磺酸（TNBS）法建立CD小鼠动物模型。将75只6～8周龄SPF级雌性BALB／c小鼠,随机分成3组,包括对照组（乙醇溶液灌肠加PBS腹腔注射）、TNBS组（TNBS灌肠加PBS腹腔注射）和ADMSC组（TNBS灌肠加ADMSC腹腔注射）,每组25只。通过免疫组织化学染色和实时定量 PCR等方法检测组织炎性细胞因子的水平,并记录各组小鼠生存曲线。结果 ADMSC组较TNBS组病变程度明显减轻,生存率明显增加（60％比30％,P＜0．05）。ADMSC组促炎因子坏死因子α（TNF-α）、白介素12（IL-12）及血管内皮生长因子（VEGF）的表达显著低于TNBS组,而抑炎因子IL-10的表达显著增加（均P＜0．05）。结论 ADMSC可能通过下调促炎因子TNF-α、IL-12和VEGF的表达和上调抑炎因子IL-10的表达,有效修复结肠炎性损伤,有望用于CD的临床治疗。     

人脂肪来源干细胞与胶原支架共培养的实验研究

目的观察评价人脂肪来源干细胞(Human adipose derived stem cells,hADSCs)在胶原支架中的生长情况,为进一步体内组织修复研究提供依据。方法取人抽脂术后脂肪,经胶原酶解、过滤、离心获得hADSCs,代传代扩增后,接种到胶原支架上。细胞-材料复合物分别体外培养1周、2周,裸鼠体内培养2周、4周后,HE染色观察细胞在支架上的生长情况,免疫组化HLA-Ⅰ检测经裸鼠体内培养后的复合物上的细胞的种属来源。结果原代培养的hADSCs呈"梭形"或"成纤维细胞"样,并以克隆团形式生长。免疫荧光Vimentin染色阳性。第3代hADSCs经流式细胞鉴定,CD29、CD44、CD105表达阳性,CD45、CD34表达阴性。胶原支架复合hADSCs经过体外、体内培养,hADSCs均能长入胶原支架的空隙内,且体内培养比体外培养有更多的细胞长入支架。体外培养1周,已有细胞粘附生长在胶原支架的边缘,体外培养2周后,更多的细胞渗透到材料内部。体内培养2周后,大量细胞占据材料的边缘,有部分细胞能渗透到材料内部甚至材料全层。体内培养4周后,大量细胞渗透支架全层。HLA-Ⅰ抗体检测发现,支架材料内部细胞阳性表达,说明胶原支架内部的细胞来源于hADSCs。结论胶原支架与hADSCs具有较好的相容性,可作为hADSCs的载体材料,用于组织工程缺损修复的研究。     

脂肪来源干细胞在促进血管生成中的研究进展

脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells, ADSCs)是来源于脂肪组织的具有多向分化潜能的间充质干细胞。近年来,人们发现ADSCs不仅本身能够分化为血管内皮细胞、血管平滑肌细胞,在分化后表现出周细胞表型,构成重要的血管成分,还能通过旁分泌作用建立促进血管生成的微环境,具有明确的促血管生成作用,为各种缺血组织及创面的处理提供了新的方向。随着研究的不断深入,多种物理、化学环境及相关细胞因子均被证实能够稳定甚至增强这种促血管生成作用。在众多动物实验及临床试验中,ADSCs的安全性及有效性也得到证实,加之ADSCs具有来源广泛、取材方便、损伤小的多重优势,临床应用前景广阔,有望在缺血性疾病的治疗、增加皮瓣转移及脂肪移植成活率中发挥重要作用。     

脂肪来源的干细胞研究现状及应用

白癜风是皮肤科门诊的常见疾病,发病率约1 %～2 %,因为病因不明,所以白癜风的治疗在临床上一直是一个棘手难题.对白癜风的治疗有多种选择,但疗效大都不令人满意.黑素细胞(melanocyte,MC)移植是国内外比较前沿的治疗方法,特别是通过原代培养获得一定数量的MC,治疗面积较大的白癜风.     

磁性诱导脂肪干细胞治疗动脉粥样硬化性勃起功能障碍的相关研究

目的探索磁性诱导脂肪干细胞(ADSCs)在治疗动脉粥样硬化性勃起功能障碍(ASED)中的作用。方法从SD大鼠(鼠龄2~3个月)附睾旁脂肪提取ADSCs进行培养及鉴定;以磁共振对比剂超顺磁纳米氧化铁颗粒(SPIONs)标记ADSCs,利用普鲁士蓝、台盼蓝染色、MTT法评估标记效率及对细胞活力、增值能力的影响。通过外在磁场作用,评估标记SPIONs后ADSCs的顺磁性。建立动脉粥样硬化大鼠模型,成模后阴茎海绵体内注射ADSCs。4周后分别对正常组、动脉粥样硬化组、无磁场作用的ADSCs治疗组、有外加磁场作用的ADSCs治疗组进行海绵体内压(ICP)测定,免疫组化染色测定大鼠阴茎海绵体组织中平滑肌和内皮的含量,ELISA法测定SOD、NOS活性及MDA含量。结果从大鼠附睾旁脂肪提取的ADSCs生长活跃,纯度高,且具有多向分化潜能;SPIONs可有效地被ADSCs摄入,且对ADSCs增殖、细胞活性无明显抑制作用;细胞内铁含量与标记SPIONs铁浓度呈正相关;标记SPIONs后的ADSCs具有顺磁性;ADSCs移植可显著改善ASED大鼠的勃起功能,并提高海绵体内皮、平滑肌组分,纠正阴茎海绵体组织中的氧化应激状态,且部分分化为平滑肌及内皮细胞。结论ADSCs移植能够显著改ASED大鼠的勃起功能,且磁性诱导促进ADSCs在阴茎海绵体中的定植能够增强ADSCs的治疗作用,为干细胞治疗提供了新的思路及理念。     

基质细胞衍生因子1α诱导脂肪来源干细胞迁移促进糖尿病缺血下肢肌肉修复的实验研究

背景与目的：基质细胞衍生因子1α (SDF-1α)是一种定向诱导细胞迁移的趋化因子,研究显示,间充质干细胞（MSCs）在受损组织中可以沿着SDF-1梯度迁移到损伤部位并参与组织修复,然而目前尚缺乏SDF-1α诱导脂肪来源干细胞（ASCs）对糖尿病缺血下肢进行组织修复的体内研究。因此,本研究探讨SDF-1α促进大鼠脂肪来源干细胞（r ASCs）向糖尿病大鼠缺血下肢肌肉组织迁移及对组织修复的影响。方法：取SD大鼠脂肪组织分离培养rASCs,行细胞形态观察,鉴定成脂、成软骨及成神经分化能力,并使用带绿色荧光蛋白（GFP）的腺病毒转染和标记r ASCs。将大鼠用STZ法构建糖尿病模型,并结扎大鼠的右下肢股动脉造成下肢缺血后,随机分为两组,通过尾静脉向两组大鼠体内注射r ASCs,其中一组在患肢中段部位肌肉处注射SDF-1α蛋白（SDF-1α+rASCs组）,另一组则用同样方式注射等量磷酸盐缓冲溶液（rASCs组）。治疗后的第1、2周行大鼠双下肢血流量检测,计算及比较各组大鼠的缺血下肢-健侧下肢血流比值。在第4周时处死大鼠,取缺血部位的肌肉组织行HE染色,观察不同治疗方法组中肌肉组织的排列情况。...     

勃起功能障碍的干细胞治疗研究

勃起功能障碍(erectile dysfunction,ED)是指阴茎不能持续勃起或虽能勃起但不能维持勃起而无法达到满意性生活的状况,病程至少3个月以上.定义中的性生活"满意",指阴茎不仅能勃起足以插入阴道而且还要维持一定的时间.ED发病率较高,1995年全世界约有1.52亿男性患者,估计2025年将有3.22亿[1].