活性巨噬细胞移植促进脊髓损伤后功能恢复的实验研究

目的 探讨活性巨噬细胞移植对脊髓损伤修复的促进作用.方法 用改良Allen法制成大鼠脊髓损伤模型.随机分成对照组(A组),脊髓内微量注射生理盐水20μl;活性巨噬细胞移植组(B组),脊髓内注射活性巨噬细胞悬液20μl.移植后7、14、28 d采用斜板试验、脊髓运动功能BBB(Basse,Beattie and Bresnahan)评分法观察大鼠运动功能恢复情况,脊髓诱发电位检测观察神经功能恢复,HE染色观察脊髓损伤处空洞面积的改变情况,免疫组化法观察移植的活性巨噬细胞的存活情况及损伤部位神经纤维的再生情况.结果 术后28 d,两组斜板倾斜角度差异有统计学意义(A组44.96°±5.70°,B组52.72°±6.51°,P＜0.05);两组BBB评分差异有统计学意义(A组6.8±1.2,B组11.8±2.2,P＜0.05).同时,两组MEP潜伏期差异也有统计学意义[A组(4.69±0.47)mg,B组(3.62±1.29)ms,P＜0.05],两组SEP潜伏期差异有统计学意义[A组(4.19±1.97)ms,B组(2.01±0.55)ms,P＜0.05].两组神经轴突计数差异有统计学意义[A组(32.8±6.1)条/mm2,B组(40.8±9.0)条//mm2 P＜0.05].实验组可见损伤区巨噬细胞存在,脊髓损伤处空洞面积减小,有明显神经纤维再生.结论 活性巨噬细胞可在脊髓损伤处存活并减轻脊髓损伤,减小脊髓损伤处空洞面积,促进受损轴突的再生和运动功能的恢复.     

经嗅鞘细胞条件培养液诱导的骨髓基质干细胞移植对脊髓损伤修复的影响

[目的]研究经嗅鞘细胞条件培养液诱导的骨髓基质干细胞(BMSCs)移植对脊髓损伤的治疗作用。[方法]采用脊髓挤压损伤方法,制造SD大鼠脊髓损伤动物模型(共24只),随机分成A、B、C三组(每组8只),立即分别将DMEM、BMSCs和经诱导的BMSCs移植入脊髓损伤部位,分别于移植4、8周后处死动物,均采用HE染色观察脊髓损伤处空洞面积改变情况;并采用抗神经丝(NF)抗体、生长相关蛋白-43(GAP-43)抗体和神经元特异性核蛋白(Neu N)抗体免疫组织化学荧光染色,观察移植的BMSCs存活和分化情况及损伤部位神经纤维再生情况。[结果]移植4、8周后,脊髓损伤区空洞为移植细胞充填,空洞面积明显减少,差异有统计学意义(P0.01),BBB评分结果 C组和A、B组之间存在统计学差异(P0.05)。B、C组均可见再生神经纤维形成,同时部分移植细胞呈Neu N染色阳性,在C组上述改变更加显著。[结论]经嗅鞘细胞条件培养液诱导的BMSCs可以在脊髓损伤区存活,能够显著减小脊髓损伤处空洞面积,并可以促进脊髓损伤区神经纤维的修复再生,促进大鼠双下肢运动功能的恢复。     

骨髓间充质干细胞联合定向诱导的神经元样细胞移植治疗脊髓损伤

[目的]探讨一定条件下骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的能力,并进一步研究两种细胞联合移植治疗脊髓损伤(spinalcord injury,SCI)的效果。[方法]选取3个月龄雌性SD大鼠62只,2只处死后提取骨髓间充质干细胞用于细胞培养和分化研究,剩余大鼠采用改良Allen’s法制备T9～11SCI模型,然后随机分为4组(n=15),A组为空白对照组,B组为干细胞组,C组为神经元样细胞组,D组为联合移植组。诱导后的细胞采用免疫荧光方法检测细胞表面特异性标志,各组细胞用Hoechst33342标记,脊髓损伤模型建立1周后将细胞以局部注射的方法移植到损伤区,细胞移植后的1、2、4、6周对各组动物进行Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分,并行HE染色、荧光显微镜、免疫荧光法检测细胞在体内的存活和分化。[结果]术后2、4、6周各细胞移植组BBB评分较空白对照组相比显著增加(P0.05),D组高于B、C两组(P0.05),B、C两组组间比较差异无统计学意义(P0.05)。HE染色示B、C、D组术后6周的脊髓空洞较A组均减小,以D组最明显;荧光显微镜显示移植的细胞存活于脊髓损伤的区域;免疫荧光染色显示诱导后的细胞与体内存活的细胞表面特异性标志神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)、神经丝蛋白200(neuroflament200,NF-200)表达呈阳性,胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)表达呈弱阳性,其中D组NSE和NF-200阳性细胞数量较多,B、C两组较少。[结论]体内体外一定条件下骨髓间充质干细胞都有向神经元样细胞分化的能力;骨髓间充质干细胞和定向诱导的神经元样细胞都可用于移植治疗脊髓损伤,但以两者联合移植治疗的效果最佳。     

移植脐带间充质干细胞治疗脊髓损伤的实验研究

[目的]探讨人脐带间充质干细胞移植治疗脊髓损伤的疗效.[方法]50只Wistar大鼠成功制备脊髓打击模型,随机分成3组:DMEM移植组、细胞移植组、空白对照组.术后通过BBB评分来观察大鼠后肢功能恢复的情况,通过HE染色、嗜银染色观察损伤周围空洞形成以及神经轴突的再生情况,免疫组织化学观察hUC-MSCs在损伤局部存活、迁移、分化情况以及检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)来比较各组损伤局部胶质瘢痕形成的面积.[结果] BBB评分结果表明损伤后3周细胞移植组高于其他两组(P＜0.05),免疫荧光显示hUC-MSCs移植到大鼠体内后在损伤局部存活并向损伤局部迁移;但是并没有检测到向神经元、星形胶质细胞分化;细胞移植组损伤周围形成的胶质瘢痕面积少于其他两组(P＜0.05).[结论]移植hUC-MSCs能够促进大鼠脊髓损伤神经功能的恢复.     

BMSCs静脉移植对大鼠脊髓损伤后神经功能恢复的影响

[目的]探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)静脉移植对大鼠脊髓损伤后神经功能恢复的影响.[方法]利用多中心急性脊髓损伤打击器(MASCIS Impactor)建立大鼠T11脊髓损伤模型,建模成功后随机分为两组:对照组(A组)、BMSCs移植组(B组).SCI后1周,A组自大鼠尾静脉注射无血清的DMEM/F12培养液0.1ml,B组自大鼠尾静脉注射移植BMSCs悬液0.1ml.两组大鼠于SCI后1、2、4、8周行BBB后肢运动功能评分,SCI后2、4、8周行SEP检测及脊髓组织病理学检查(HE染色与NF200免疫组化染色).[结果]SCI后2、4、8周,与A组比较,B组BBB评分升高,SEP N1潜伏期缩短、P1-N1波幅增高,差异均有统计学意义(P＜0.01);SCI后8周大鼠脊髓组织HE染色显示,两组大鼠脊髓组织损伤区均可见瘢痕组织及空洞形成,但B组脊髓空洞比A组小;SCI后2、4、8周,NF200免疫组化染色显示,两组大鼠脊髓组织均有NF200阳性表达,与A组比较,B组各时间点NF200阳性表达均增强,差异有统计学意义(P＜0.01).[结论]BMSCs静脉移植对大鼠SCI后神经功能的恢复有明显的促进作用.     

蛛网膜下腔移植人脐带间充质干细胞修复大鼠脊髓损伤

目的 观察蛛网膜下腔途径移植人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)修复大鼠脊髓损伤的疗效.方法 雌性Wistar大鼠40只建立脊髓损伤模型后随机分为:空白对照组(A组)、蛛网膜下腔DMEM注射组(B组)和hUC-MSCs移植组(C组).通过行为学及电生理学评价损伤大鼠后肢功能恢复情况.免疫荧光染色观察hUC-MSCs存活、迁移、分化,胶质酸性蛋白(GFAP)染色比较各组损伤局部胶质瘢痕面积差异.结果 移植4周后BBB评分,C组(9.19±0.26)高于A组(8.19±0.46)、B组(8.31±0.37),差异有统计学意义(P＜0.05).损伤后12周C组体感诱发电位(SEP)、运动诱发电位(MEP)潜伏期缩短和波幅值增高与其他组比较差异有统计学意义(P＜0.05).hUC-MSCs到达损伤局部并向神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞分化,分化的少突胶质细胞包绕轴突形成髓鞘.损伤局部胶质瘢痕面积C组(40 261.93±9137.56)均小于A组(203127.88±16448.84)、B组(219 622.47±18 944.89),差异有统计学意义(P＜0.05),A、B组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 hUC-MSCs可经蛛网膜下腔途径到达损伤局部并促进大鼠脊髓损伤的功能恢复.     

BMSCs移植联合督脉电针对大鼠脊髓损伤后神经功能恢复的影响

目的 探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植联合督脉电针对大鼠脊髓损伤(SCI)后神经功能恢复的影响. 方法 从2011年3月至7月,采用全骨髓差速贴壁培养法进行SD大鼠BMSCs的体外分离与培养;利用多中心急性脊髓损伤打击器(MASCIS Impactor)建立大鼠T11脊髓损伤模型,建模成功后将大鼠随机分为4组:对照组(A组)、电针组(B组)、BMSCs移植组(C组)、联合组(D组).SCI后1周,C组与D组大鼠自尾静脉注射移植BMSCs悬液0.1 ml,A组与B组自大鼠尾静脉注射无血清的DMEM/F12培养液0.1 ml,B组与D组接受督脉电针治疗,1次/天.于SCI后1、2、4、8周采用BBB评分法进行后肢运动功能评分;于SCI后8周采用SEP检测脊髓传导功能,采用HE染色观察脊髓空洞大小,采用免疫组化染色检测神经丝蛋白(NF200)的表达.实验中获得的数据采用单因素方差分析. 结果 SCI后2、4、8周,与A组比较,B、C、D组BBB评分均显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05);与B、C组比较,D组BBB评分升高更明显,差异有统计学意义(P＜0.05).SCI后8周,与A组比较,B、C、D组SEP潜伏期缩短、波幅增高,差异有统计学意义(p＜0.05);与R、C组比较,D组SEP潜伏期更短,波幅更高,差异有统计学意义(P＜0.05).SCI后8周,4组大鼠脊髓组织损伤区均可见组织结构紊乱,细胞肿胀,空泡变性,且损伤区均可见瘢痕组织及空洞形成,其中A组脊髓空洞最大,B组和C组次之,D组最小.SCI后8周,4组大鼠脊髓组织均有NF200阳性表达,与A组比较,B、C、D组NF200阳性表达增强,差异有统计学意义(P＜0.05);与B、C组比较,D组NF200阳性表达更强,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 BMSCs移植联合督脉电针对脊髓损伤大鼠神经功能恢复的促进作用更为显著,优于单纯BMSCs移植和督脉电针治疗.     

亚低温联合BMSCs移植治疗大鼠脊髓损伤

目的 BMSCs在修复神经损伤方面起重要作用,同时改变外界温度对细胞移植成功率及增殖分化起重要影响。观察采用亚低温同时联合BMSCs移植对大鼠脊髓半横断损伤后恢复的影响。方法雌性成年SD大鼠45只,体重200～250g,以半切法制备脊髓胸段半横断损伤模型,随机分成3组,每组15只。A组为单纯损伤组,B组为单纯BMSCs移植组,C组为亚低温(33～35℃)治疗联合BMSCs移植组。于造模后1、2、4、6、8周进行BBB评分和斜板实验等运动功能检测。第4周取材行病理切片HE染色及BrdU免疫组织化学染色;第8周取材行辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)逆行示踪观察,透射电镜观察轴突的再生情况。结果造模4周后B、C组大鼠双下肢运动功能有明显恢复,BBB评分与A组比较差异有统计学意义(P0.05);C组BBB评分高于B组,比较差异有统计学意义(P0.05)。造模1、2周3组斜板倾斜角度组间比较差异均无统计学意义(P0.05);造模4周后3组间比较差异均有统计学意义(P0.05)。HE染色示造模后4周A组可见明显组织空洞,B组组织空洞小于A组,C组组织空洞消失。BrdU免疫组织化学染色示,A、B、C组大鼠脊髓损伤灶组织中的BrdU阳性细胞数分别为0、(90.54±6.23)、(121.22±7.54)个,组间比较差异均有统计学意义(P0.01)。HRP逆行神经示踪观察示,A、B、C组大鼠脊髓损伤灶组织中HRP阳性神经纤维束数目分别为(10.35±1.72)、(43.25±2.65)、(84.37±4.59)条,组间比较差异均有统计学意义(P0.01)。透射电镜示C组正中横断面可见大量新生的无髓及有髓神经纤维。结论 BMSCs移植对脊髓损伤后大鼠后肢功能恢复有促进作用,联合应用亚低温治疗有协同效果。     

红花黄素腹腔注射联合BMSCs移植对大鼠脊髓损伤的保护作用

目的 探讨红花黄素腹腔注射联合骨髓阳J充质干细胞(BMSCs)移植对大鼠脊髓损伤保护作用及其机制.方法 体外分离、培养BMSCs;SD大鼠45只,改良Allen法制备脊髓损伤模型,随机分为3组:A组、B组、C组.A组腹腔注射红花黄素治疗(40 mg/kg),B组和C组注射等体积的生理盐水,每日1次,共14 d;A组和B组损伤局部行BMSCs移植(6×106/60μl),C组注射等体积的PBS液.于术后1 d、2 d、3 d、4 d、7 d取材检测损伤处超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和细胞凋亡,术后1 d和7 d、14 d、21 d、28 d采用改良BBB评分法进行行为学检查评分.结果 术后随着时间的推移,各组BBB评分得分均增高,术后28 d时A组得分为(19.33±1.37),B组为(15.83±1.17),C组为(9.0±1.41),A组高于B组和C组,B组高于C组,差异有统计学意义(P＜0.05).SOD活性在相同时间点,均有A组高于B组和C组,B组高于C组,差异有统计学意义(P＜0.05);MDA含量在术后2 d、3 d、4d A组低于B组和C组(P＜0.05),且有A组低于B组(P＜0.05).术后3 d时各组细胞凋亡达高峰:A组(72.83±13.38),B组(96.33±6.35),C组(219.33±28.64);之后各组细胞凋亡数逐渐减少,至术后7d:A组(3.67±3.72),B组(16.33±5.54),C组(86.17±12.27);除术后第1天,在相同时间点,细胞凋亡数有A组少于B组和C组,B组少于C组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 红花黄素和BM-SCs移植均能抑制损伤脊髓局部自由基生成、脂质过氧化和细胞凋亡,减轻继发损伤,两者联合具有累加协同效应,有助于脊髓损伤大鼠肢体运动功能的恢复.     

大鼠脊髓损伤后不同时期移植人脐带间充质干细胞的修复效果观察

目的:观察大鼠脊髓损伤后不同时期局部移植人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchy-mal stem cells,hUCMSCs)修复脊髓损伤的效果,探讨hUCMSCs局部移植治疗脊髓损伤(spianl cord injury,SCI)的最佳移植时机。方法:雌性Wistar大鼠80只,随机均分为A、B、C、D组,以Impactor Model-Ⅱ打击器制备脊髓胸10(T10)损伤模型。A组为单纯损伤组,B组损伤后3d移植hUCMSCs,C组损伤后1w移植hUCM-SCs,D组损伤后3w移植hUCMSCs,分别于造模后24h、移植前1d及移植后8w(A组与D组损伤后相应时间点相同)每周对各组大鼠后肢功能进行行为学评分(BBB评分);移植后8周免疫组化染色观察移植细胞的存活、分化和血管再生情况,10周时用生物素葡聚糖胺(biotin dextran amine,BDA)示踪皮质脊髓束(corticospinaltract,CST)观察轴突的再生情况。结果:SCI后24h各组大鼠BBB评分无显著性差异(P0.05),D组在移植前和移植后1周与A组相应时间点的BBB评分无显著性差异(P0.05),移植后2w起各时间点评分均明显高于A组相应时间点,差异有统计学意义(P0.05);A组在SCI后9w时到达平台期,与实验结束时相比差异无统计学意义(P0.05)。移植各组移植后BBB评分逐渐上升,后一个时间点与同组前一时间点比较差异有显著性意义(P0.05),移植后6w开始C组明显高于B、D组(P0.05)。免疫组化染色A组脊髓中未见Brdu阳性细胞,损伤区血管形态欠完整,未见新生血管;损伤周围星形胶质细胞大量增生,细胞肥大、突起增多、排列不规则,形成胶质瘢痕;未见BDA标记的皮质脊髓束通过损伤区。B、C、D组脊髓中均有Brdu阳性标记的细胞存活,C、D组中细胞数量明显多于B组,但三组中均未见到移植细胞向神经元或神经胶质样细胞分化;B、D组损伤周围的星形胶质细胞较A组减少,但排列仍欠规则;C组损伤周围星形胶质细胞形态趋于正常,排列规则,且有大量星形胶质细胞通过损伤区,血管再生数目及通过损伤区的皮质脊髓束神经纤维也明显多于B、D组。结论:大鼠SCI后局部移植的hUCMSCs能长期存活,抑制胶质瘢痕形成,改善后肢运动功能;SCI后1w移植的效果优于SCI后3d和3w时移植的效果。     

静脉移植骨髓间充质干细胞促进脊髓损伤后GDNF基因的表达

[目的]探讨经静脉移植骨髓间充质干细胞(MSCs)对大鼠脊髓损伤(SCI)后胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)表达的影响。[方法]MSCs提取自成年Wistar大鼠的股骨干骨髓,经原代培养、鉴定及5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)核标记。以改良Allen′s打击装置制作大鼠T10节段脊髓损伤(SCl)模型,于伤后立即缝合切口并经尾静脉注射移植MSCs。实验共分为3组MSCs尾静脉移植组(A组)、生理盐水注射组(B组)、正常对照组(C组)。术后不同时间点应用免疫组化法和逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)观察MSCs移植后的存活状态以及不同时间点GDNF基因的表达变化。[结果]免疫组化结果MSCs经尾静脉移植后在损伤脊髓平面可以检测到迁移及存活,标记细胞呈棕黄色的核标记,以损伤区域为多并向周围迁移,移植术后第14d,A组Brdu阳性细胞较多,最远于距离损伤区2.5cm处可检测到。B及C组则均未检测到阳性细胞。RT-PCR结果移植术后第1、3、5d,A组表达量呈逐渐升高趋势,B组呈一过性表达升高,C组无变化。各时间点A组GDNFmRNA的表达量明显高于B组,P<0.05。免疫组化结果移植术后第7、14、28dGDNF的表达量明显高于B组,P<0.05。[结论]骨髓间充质干细胞经尾静脉移植后可迁移至脊髓损伤区域,并上调胶质细胞源性神经营养因子基因的表达,是该移植方式修复大鼠脊髓损伤的机制之一。     

骨髓间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤后氧化应激的影响

目的研究骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）移植对大鼠脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）后氧化应激的影响。方法取大鼠股骨和胫骨骨髓培养BMSCs并传代。参照Taoka方法制作30只大鼠脊髓压迫损伤模型,随机分为3组,损伤组（SCI）、假移植组（SCI＋生理盐水）、移植组（SCI＋BMSCs）。脊髓损伤30 min时,假移植组和移植组于损伤周围相应注射生理盐水和BMSCs。在损伤后第3天、7天、14天和28天,进行BBB（Basso-Beattie-Bresnahan,BBB）行为学评价。应用MTT方法检测血清中超氧化物岐化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）水平。结果脊髓损伤后,BMSCs移植第14天即可观察到大鼠后肢运动功能明显改善,第28天BBB评分有明显提高。与损伤组和假移植组大鼠相比,第7天、14天和28天移植组血中MDA水平降低（P〈0.05）;血中SOD水平较高（P〈0.05）。结论 BMSCs移植对SCI神经功能恢复有促进作用,其机制可能与其抑制氧化应激有关。     

大鼠胚胎脊髓移植对损伤脊髓GAP-43 mRNA表达的影响

目的观察大鼠胚胎脊髓移植对损伤脊髓 GAP－ 43 mRNA表达和大鼠后肢功能恢复的影响。方法成年 Wistar大鼠 66只,随机被分为脊髓半切洞损伤应用胚胎脊髓移植组 (脊髓移植组, 30只 )、单纯脊髓半切洞损伤明胶海绵填充组 (单纯损伤组, 30只 )、正常对照组 (6只 )。术后第 1、 3、 7、 14、 28 d,对大鼠进行 Tarlov评分和斜板试验检查后肢功能。应用原位杂交的方法观察 GAP－ 43 mRNA的表达,记录阳性细胞数,采用计算机图像分析技术,进行定量分析。结果脊髓损伤后第 1 d,在脊髓移植组和单纯损伤组的损伤脊髓灰质中都可见到 GAP－ 43 mRNA的表达。于损伤后迅速增加,第 7 d时达到高峰。脊髓移植组 GAP－ 43 mRNA蛋白表达为 39.24± 6.83,约是单纯损伤组 (21.48± 7.83)的 2倍 (P< 0.05)。胚胎脊髓移植后可使损伤的脊髓中 GAP－ 43 mRNA持续高表达至术后第 28 d,而单纯损伤组仅持续到术后第 14 d。增加的 GAP－ 43 mRNA阳性细胞数与神经功能的改善平行。结论胚胎脊髓移植后可使损伤大鼠脊髓高表达 GAP－ 43 mRNA,并促进大鼠功能的恢复。     

软骨素酶联合雪旺细胞移植促进脊髓损伤修复的研究

目的 观察软骨素酶联合雪旺细胞移植在治疗急性脊髓损伤中的作用.方法 Wistar大鼠80只,制作T10节段急性脊髓损伤模型(致伤力10g×4cm).随机分成4组:对照组、雪旺细胞移植组、硫酸软骨素酶治疗组和联合治疗组.采用脊髓运动功能评分(BBB法,总分21)、神经电生理(SEP&MEP)检查和生物素葡聚糖胺(BDA)神经示踪及标本NF-200免疫组织化学染色等比较各组疗效.结果 4周后BBB评分实验组较对照组明显提高,各组间差异有统计学意义(P<0.05)(12周时4组分别为9.11±1.41、11.22±1.59、11.77±1.76和14.22±1.92).术后4周起,神经电生理检查实验组动物较对照组差异有统计学意义(P<0.05),12周时4组MEP的波幅分别恢复至术前的28.8%、44.9%、49.0%和56.8%.BDA示踪显示联合组较对照组有较多的神经纤维穿过损伤部位.NF-200免疫组织化学染色吸光度(A)比较各组间差异有统计学意义(P<0.05),3个实验组纵切片A值与对照组的比值为1.44、1.55和2.78.结论 联合应用软骨素酶和雪旺细胞移植来治疗脊髓损伤,起到协同作用,效果好于单一方法,能明显促进脊髓损伤后的轴突再生和肢体功能恢复.     

嗅鞘细胞移植在大鼠截瘫模型中的应用

目的探讨嗅鞘细胞局部移植治疗脊髓损伤的可行性、安全性及细胞移植数量和时机与疗效的关系。方法应用改良Allen’s法制备大鼠T10脊髓损伤模型,第1部分：随机分4组,移植时间分别设定为手术即时0,1,2,3周,共分为上述4组（随机）,每组共10只,4周后进行CBS评分。第2部分：取40只大鼠,随机分为5组,A组：注细胞数量为5：〈10。个。B组：移植方法同A组。注入细胞数量为4×10^5个。C组：移植方法同A组,注入细胞数量为3×10^5个。D组：移植方法同A组,注入细胞数量为2×10^5个;E组：移植方法同A组,将20μlDMEM／F12培养液注入损伤部位。结果在移植细胞为固定的4×10^5个时,损伤后2周移植大鼠CBS评分（损伤后4周,20．12±5．23,P〈0．05）较其余时间好：而在移植时间均为损伤后两周的情况下。B、C两组大鼠CBS评分（损伤后4周,B：20．34±5．63,C：20．34±5．63,P〉0．05）无明显差别,但较其余各组好（P〈0．05）。结论嗅鞘细胞局部移植治疗脊髓损伤安全有效,移植细胞数量适中和移植时间在2周时脊髓神经功能恢复较好。     

神经干细胞移植对大鼠脊髓损伤后胶质细胞源性神经营养因子与生长相关蛋白43基因表达的影响

目的研究海马源性神经干细胞(neuralstemcells,NSCs)移植对大鼠脊髓损伤(spinalcordinjury,SCI)后胶质细胞源性神经营养因子(glialcellline-derivedneurotrophicfactor,GDNF)及生长相关蛋白43(growth associatedprotein43,GAP-43)基因表达的影响,探讨NSCs移植修复大鼠脊髓损伤的机制。方法新生一日龄Wistar大鼠6只,提取海马区NSCs,进行培养及鉴定。Wistar成年大鼠以改良Allen打击装置制成SCI模型。将Wistar大鼠60只分为3组:A组NSCs移植(n=24)、B组单纯损伤DMEM填充(n=24)、C组正常对照组(n=12)。于术后第1、3及7天应用RT-PCR法观察,各组大鼠脊髓区GDNF和GAP-43基因表达的变化。结果移植术后第1天,A组GDNF mRNA的表达量较B组平均增加23.3%;第3天,较B组平均增加26.8%;第7天,较B组平均增加32.7%。移植术后第1天,A组GAP-43mRNA的表达量较B组平均增加19.5%;第3天,较B组平均增加21.6%;第7天,较B组平均增加23.1%。A组较B组明显增强了GDNFmRNA和GAP-43mRNA的表达,组间差异均具有统计学意义(P<0.05)。C组各时间点GDNF及GAP-43mRNA的表达量差异无统计学意义(P>0.05)。结论NSCs移植后改变脊髓损伤区局部的微环境,上调GDNFmRNA,促进GAP-43mRNA的表达,是修复脊髓损伤的机制之一。     

腺病毒介导心肌营养素-1基因转移对大鼠脊髓损伤后红核脊髓束的再生作用

目的 观察腺病毒介导心肌营养素-1基因(Adv-CT1)转移对大鼠脊髓损伤(SCI)后红核脊髓束(RST)轴突再生和前肢功能恢复的影响.方法 成年Wistar雄性大鼠24只,制备C3脊髓外侧索横切(C3Hx)模型,根据损伤区植入的不同成分分为3组(n=8):损伤对照组(明胶海绵+病毒缓冲液)、Adv-eGFP组(明胶海绵+Adv-eGFP)、Adv-CT1组(明胶海绵+Adv-CT1).荧光金(FG)于C5注射,4周后脑切片荧光显微镜下红核神经元计数观察RST再生;生物素化葡聚糖(BDA)于红核注射,脊髓切片观察RST再生;前肢不对称实验观察行为学的改变.结果 大鼠C3Hx损伤下区注射FG逆行示踪,损伤对照组、Adv-eGFP组和Adv-CT1组标记的红核神经元分别为(12.1±4.3)、(15.2±2.6)和(33.0±5.2)个,Adv-CT1组分别与损伤对照组和Adv-eGFP组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).RST的BDA顺行示踪,损伤对照组、Adv-eGFP组和Adv-CT1组损伤下区BDA标记的神经元分别为(6.0±1.3)、(6.0±1.0)和(17.1±2.0)个,Adv-CT1组分别与损伤对照组和Adv-eGFP组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).大鼠C3Hx4周后AdV-CT1组使用伤肢时间(9.3%±3.3%)明显比损伤对照组(3.6%±1.4%)和Adv-eGFP组(4.1%±2.6%)时间长,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 Adv-CT1转移促进RST再生和SCI后前肢功能部分恢复.     

Immune therapy with cultured microglia grafting into the injured spinal cord promoting the recovery of rat's hind limb motor function

Objective: To study the effect of activated microglia grafting on rats' hind limb motor function recovery after spinal cord injury.Methods: Microglia were separated from primary culture and subcultured for 3 generations. Lipopolysaccharide was added to the culture medium with the terminal concentrition of 10 μl/L for microglia activation 3 days before transplantation. Totally 80 adult Wistar rats were divided into transplantation group and control group, with 40 rats in each group. Spinal cord injury model of rats was set by hitting onto the spinal cord using a modified Allen impactor. With a 5 μl micro-syringe, the activated microglia suspension was injected into the injured area 7 days after the first operation. Basso, Beattie and Bresnahan (BBB) scoring for hind limb motor function was taken on the 1st, 7th, 14th, 21st, and 28th day after microglia transplantation, and 8 rats were sacrificed at each time point mentioned above, respectively. Frozen sections of the spinal cord were made for haematoxylin-eosin (HE) and Naoumenko-Feigin stainings. SPSS 11.0 software was used for statistical analysis.Results: BBB scores for hind limb motor function on the 14th, 21 st, and 28th day were significantly higher compared with the control group. Most liquefaction necrosis areas disappeared and only a few multicystic cavities surrounded by aggregated microglia remained in the transplantation group. Naoumenko-Feigin staining for microglia showed that the transplantation group had significantly more positive cells (P＜0.05).Conclusions: Grafting of activated microglia into the injured spinal cord can significantly promote the hind limb motor function recovery in rats with spinal cord injury and reduce the size of liquefaction necrosis area. The extent of lower limb motor function improvement has a positive correlation with the number of aggregated microglia.     

SDF-1/CXCR4轴在骨髓间充质干细胞移植促进胰岛再生中的作用

目的 观察同种异体骨髓间充质干细胞(MSCs)移植入受体后,基质细胞衍生因子(SDF)-1/CXCR4轴在促进残存胰岛及其周围新生血管增殖中的作用.方法 对大鼠MSCs进行体外培养、鉴定.链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠随机分为A组(MSCs移植组)、B组(MSCs移植+SDF-I/CXCR4轴阻断剂AMD组)和C组(糖尿病对照组),另设D组(正常大鼠对照组).移植MSCs后第30天取出各组大鼠胰腺和血清,胰腺组织采用苏木素-伊红(HE)染色和免疫组织化学法观察CD31、增殖细胞核抗原(PCNA)、胰腺干细胞标志物(PDX)-1在胰腺组织的表达水平.血糖仪检测血糖水平、放免法检测胰岛素水平、酶联免疫吸附试验(ELISA)检测SDF-1水平.结果 (1)A组残存胰岛周围可见新生血管,CD31、PCNA、PDX-1染色阳性率分别为(71.2±5.3)%、(76.5±4.5)%、(69.8±6.7)%;B组残存胰岛周围基本未见新生血管,CD31、PCNA、PDX-1染色阳性率分别为(7.4±2.1)%、(5.5±3.7)%、(8.8±2.9)%,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).(2)移植后第25天,A组血糖浓度基本正常,低于B组和C组,而胰岛素水平明显高于B组和C组(P＜0.05).(3)A组与B组血清SDF-1水平差异无统计学意义(P＞0.05),但都明显高于C组(P＜0.05).结论 MSCs促进胰岛再生和新生血管形成,AMD3100能抑制MSCs的作用,进而提示SDF-1/CXCR4轴在胰岛再生和血管形成中具有重要作用.

Abstract：

Objective To investigate the role of stromal cell derived factor-1 (SDF-1)/CXCR4axis in recipients' remnant islets regeneration and neovascularization after the transplantation of allogeneic bone marrow mesenchymal stem cells (MSCs). Methods MSCs were isolated from SD rats, cultured in vitro and identified by testing the phenotypes with flow cytometry ( FCM ). The diabetic rats induced by streptozotozin were randomly divided into group A ( MSCs transplant group), group B ( MSCs transplant +AMD group) and group C ( DM control group). Group D serve as the normal control. The pancreata were removed and blood serum was retrieved from each group simultaneously at the 13th day after MSCs transplant. The expression of CD31, proliferating cell nuclear antigen (PCNA) and PDX-1 in each group of pancreas tissue was detected by using immunohistochemistry, and the morphological changes in the isletswere observed by Hematoxylin and Eosin (HE) staining. Serum glucose and insulin levels were determined by blood glucose monitor, radioimmunoscintigraphy, and SDF-1 in serum was by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). Results Neovascularization was observed in the remnant islets of the recipient pancreatic tissue and CD31 -positive cells (71.2 ± 5.3 ) %, PCNA-positive cells ( 76. 5 ± 4. 5 ) %, PDX-1-positive cells (69. 8 ±6. 7)% were highly expressed in group A. As compared with group A, seldom-positive cells[CD31 (7.4±2. 1)%, PCNA (5.5 ±3.7)% and PDX-1 (8.8 ±2.9)%]and rarely neovascularization were observed in group B (P ＜0. 05 ). Serum glucose level in group A was lower than that in group B and group C, but serum insulin level in group A was significantly higher than that in group B and group C (P ＜ 0. 05 ). There was no significant difference between group A and group B in serum SDF-1level ( P ＞ 0. 05 ), but that was higher in groups A and B than in group C ( P ＜ 0. 05 ). Conclusion Obviously, MSCs promote recipient neovascularization surrounding the islets, which enhances the proliferation and regeneration of remnant islets. AMD 3100 has the function of intervening SDF-1/CXCR4 axis,which inhibits the effect of MSCs on promoting islets regeneration. It is suggested that SDF-1/CXCR4 axis may play an important role in vascularization and islets regeneration.