脑胶质瘤 p16基因的纯合性缺失、高甲基化、突变及表达

目的：研究p16基因在脑胶质瘤中的纯合性缺失、高甲基化和突变等结构变化及其与表达之间的关系。方法：应用聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR)和PCR甲基化银染分析技术（PCR-methylation assay with silver staining,PCR-MASS)对50例脑胶质瘤标本进行了p16基因纯合性缺失和甲基化检测；用PCR－SSCP和DNA测序技术进行了p16基因突变分析，用免疫组化检测了p16蛋白的表达。结果：50例脑胶质瘤中23例p16蛋白表达阳性，27例表达阴性，表达缺失率54％；9例（18％）纯合性缺失、7例（14％）高甲基化、2例（4％）突变。结论：p16基因在脑胶质瘤中有多种形式的结构异常，其结构的变化使p16蛋白表达障碍。p16基因纯合性缺失和高甲基化是基因失活的重要机制，在脑胶质瘤的发生、发展中起重要作用。     

肺癌组织中p53、K-ras、p15、p16基因的改变

目的　探讨p5 3、K ras、p15、p16基因在肺癌组织中改变情况及多基因联合检测在肺癌诊断中的价值。 方法　对 5 9例肺癌组织和 14例肺部良性组织 ,应用PCR SSCP 银染法检测 p5 3基因第 5～ 8外显子突变情况 ;应用PCR RFLP法对K ras基因突变进行检测 ;并应用PCR法检测 p15、p16基因纯合缺失情况。 结果　肺癌组织中 p5 3、p15、p16基因改变频率分别为 3 7.3 %、11.9%、2 3 .8% ,而在肺部良性组织中只有 1例 p16基因阳性。在 2 5例肺腺癌中 ,K ras基因突变率为 48.0 % ,其它类型肺癌中突变率仅为 8.8% ,而 14例良性组织中未检测出K ras基因突变。另外 ,p5 3基因和K ras基因突变与吸烟存在着密切关系 ,即吸烟者出现突变的频率 ( 4 8.7% ,68.5 % )明显高于非吸烟者 ( 15 .0 % ,11.1% ) ,P <0 .0 1。 4种基因联合检测敏感度为 78.0 % ,明显高于单一基因 (以阳性率最高的 p5 3为例 )的敏感度 3 7.3 %。 结论　p5 3基因、K ras基因和 p16基因在肺癌组织中改变率相对较高 ;多基因的联合检测有助于肺癌的早期诊断和筛查。     

Ki-67、p53在脑胶质瘤中的表达及意义

目的探讨Ki-67和p53与脑胶质瘤分级的关系。方法采用免疫组化SP法检测60例脑胶质瘤标本和10例正常脑组织标本Ki-67和p53的表达。结果 Ki-67和p53在正常脑组织与脑胶质瘤中的表达差异均有统计学意义（Ki-67：χ2=13.081,P=0.004;p53：χ2=11.667,P=0.009）;Ⅰ～Ⅱ级胶质细胞瘤与高度恶性Ⅲ～Ⅳ级胶质细胞瘤Ki-67和p53的表达差异均有统计学意义（Ki-67：χ2=12.589,P=0.006;p53：χ2=12.721,P=0.005）。结论脑胶质瘤中Ki-67及p53的阳性表达率与其恶性度相关,均可作为判断胶质瘤恶性程度的指标。     

染色体1p、19q缺失检测在胶质瘤病理诊断中的意义

摘 要：［目的］ 研究染色体1p和19q的缺失在不同病理类型胶质瘤中的分布差异,评价其在胶质瘤病理鉴别诊断中的价值。［方法］ 选取经术后病理确诊的Ⅱ～Ⅲ级胶质瘤患者共134例。采用特异性扩增片段分析法检测肿瘤组织染色体1p、19q缺失情况。［结果］ 134例患者中,组织病理学认定为间变性少突胶质细胞瘤（anaplastic oligodendroglioma,AO,WHO Ⅲ级）9例（6.7%）,少突胶质细胞瘤（oligodendroglial tumor,OT,WHO Ⅱ级）15例（11.2%）,混合型胶质瘤（星形+少突）32例（23.9%）,星型细胞瘤（astrocytoma,AA）78例（58.2%）。少突胶质细胞瘤、间变性少突胶质细胞瘤、混合型胶质瘤、星型细胞瘤的1p、19q缺失率为分别为73.3%（11/15）和 66.7%（10/15）、 66.7%（6/9）和77.8%（7/9）、53.1%（17/32）和59.4%（19/32）、43.6%（34/78）和41.0%（32/78）。染色体1p和19q的缺失情况（包括完整,杂合性缺失,联合缺失）在少突胶质细胞瘤、混合型胶质瘤、星型细胞瘤的分布差异有统计学意义（P<0.05）,但在不同级别少突胶质细胞瘤中,染色体缺失差异无统计学意义。 ［结论］ 染色体1p、19q的缺失与胶质瘤病理类型相关。单纯依靠组织病理学诊断难以准确判断胶质瘤类型,检测染色体1p、19q缺失情况可作为胶质瘤病理诊断的重要参考指标。     

脑胶质瘤p15基因缺失及5′CPG岛甲基化研究

目的　探讨p15基因变异及其与脑胶质瘤的发生、恶性进展的关系。方法　利用PCR和PCR -based甲基化检测技术检测了5 6例脑胶质瘤中p15基因外显子 1缺失及 5′CPG岛甲基化情况。结果　 43例高级别的脑胶质瘤中 ,14例发生了p15基因缺失( 3 2 6% ) ,而 13例低级别的脑胶质瘤中无一例发生p15基因缺失 ,差异具有显著性 (P <0 0 5 )。 1例低级别的脑胶质瘤、3例高级别的脑胶质瘤发生了p15基因 5′CPG岛甲基化。结论　p15基因异常可能参与脑胶质瘤的发生、恶性进展。基因纯合缺失是脑胶质瘤中p15基因失活的主要机制。     

原发恶性肿瘤MTS1／p16基因缺失的研究

目的:研究MTS1/p16基因在人类恶性肿瘤组织中的变化.方法:采用Southern杂交和多重PCR技术,分析了68例原发肿瘤组织标本,包括非小细胞肺癌31例、食管癌15例、胃癌13例、乳腺癌9例.结果:PCR检测癌旁组织未见p16基因缺失,而不同肿瘤组织标本的p16基因缺失差别很大,总缺失率为13.2%(9/68).Southern杂交检测p16基因的缺失率为17.7%(12/68).结论:MTS1/P16基因缺失在人类恶性肿瘤发生发展中起重要作用,是重要的多肿瘤抑制基因.     

星形细胞瘤P^16基因结构改变的研究

自的检测星形细胞瘤P16基因纯合子缺失和第2外显子点突变情况,探讨P16基因的失活方式及其与星形细胞瘤发生、发展的关系。方法应用多重比较聚合酶接式反应（PCR）技术和银染PCR一单链构象多态性（SSCP）分析的方法对45例星形细胞瘤标本和5例正常脑组织标本进行了检测．结果11例多形性胶质母细胞瘤（WHOgradeⅣ）5例发生了P16基因纯合子缺失,缺失率为45．5％;20例间变型星形细胞瘤（WHOgradeⅢ）P16基因纯合子缺失6例,缺失率为30％;14例低级别星形细胞瘤（WHOgradeⅠ～Ⅱ）和5例正常脑组织标本未发现P16基因纯合子缺失。银染PCRSSCP分析无P16基因纯合子缺失的肿瘤标本仅发现1例多形性胶质母细胞瘤出现了第2外显子点突变。结论1．约合子缺失是P16基因在星形细胞瘤中较常见的失活方式;2．P16基因的缺失失活可能与星形细胞瘤的恶性发展及演化有关。     

少突胶质细胞瘤中染色体1p/19q联合缺失与MGMT基因启动子甲基化的相关性

目的 研究少突胶质细胞瘤染色体1p/19q联合缺失与MGMT基因启动子甲基化的相关性。方法 选取少突胶质细胞瘤35例、间变型少突胶质细胞瘤32例标本作为实验组,星形细胞瘤20例及瘤旁正常脑组织标本20例作为对照组,荧光原位杂交方法检测染色体1p/19q联合缺失情况,巢式甲基化特异性PCR技术检测MGMT基因启动子甲基化情况。结果 少突胶质细胞瘤和间变型少突胶质细胞瘤1p/19q联合缺失率分别为85.71%、75.00%,均显著高于星形细胞瘤及正常脑组织（P<0.05）;少突胶质细胞瘤、间变型少突胶质细胞瘤、星形细胞瘤的MGMT基因启动子甲基化率均显著高于正常脑组织（P<0.05）,但三者组间比较差异无统计学意义（P>0.05）;少突胶质细胞瘤1p/19q联合缺失与MGMT基因启动子甲基化呈正相关性,并且均与患者3年生存率相关（P<0.05）。结论 少突胶质细胞瘤中1p/19q联合缺失与MGMT基因启动子甲基化状态密切相关,联合检测有助于提高临床病理诊断的精确性,更好地评估预后。     

肺癌组织中p16基因缺失的初步研究

目的　探讨p16基因缺失与肺癌发生的关系。方法　采用PCR方法检测 48例肺癌组织标本中p16基因缺失的情况 ,其中包括 2 3例原发性小细胞肺癌 (SCLC)和 2 5例原发性非小细胞肺癌 (NSCLC)。结果　在 2 3例SCLC中没发现p16基因缺失 ,而 2 5例NSCLC中 ,7例存在p16基因缺失 ,缺失率达 2 8%。结论　结果提示p16基因的变异与原发性非小细胞肺癌的发生及发展相关。     

脑肿瘤p16基因缺失，突变及5’CpG岛甲基化研究

目的：探讨不同种类的脑肿瘤P16基因变异及其与脑肿瘤的发生,发展的关系。方法：利用PCR,PCR－SSCP及PCR－based甲基化技术检测了56例胶质瘤,15例脑膜瘤及2例原发性脑淋巴瘤P16基因缺失,突变及5’CpG岛甲基化状况,结果：18例高病理级别的脑胶质瘤及1例原发性脑淋巴瘤发生P16基因缺失;6例脑胶质瘤及1例原发性脑淋巴瘤发生P16基因5’CpG岛甲基化,无1例发生P16基因突变。结论：P16基因失活可能参与脑胶质瘤的发生,恶性进展及原发性脑淋巴瘤的发生,P16基因缺失是P16基因失活的主要机制。     

miR-129-5p在人脑胶质瘤组织中表达下调的表观遗传学机制

目的:检测miR-129成熟体miR-129-5p在人脑胶质瘤组织中的表达特点,探讨人脑胶质瘤组织中miR-129-2表达异常是否与miR-129-2启动子甲基化有关.方法:收集湘雅医院神经外科2013年10-12月收治的胶质瘤患者肿瘤组织21例、脑外伤患者非肿瘤脑组织标本21例.Real-time PCR检测脑胶质瘤组织和非肿瘤脑组织、脑胶质瘤细胞株和正常脑胶质细胞株中miR-129-5p的表达;甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)检测胶质瘤组织中miR-129-2基因启动子甲基化的情况;亚硫酸氢盐硫化测序PCR(bisulfite-sequencing PCR,BSP)分析经甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycitydine,5-Aza-dC)处理后的胶质瘤细胞miR-129-2基因启动子甲基化水平的变化,同时Real-time PCR检测miR-129-5p的表达变化.结果:miR-129-5p在人脑胶质瘤组织和细胞中表达显著低于非肿瘤脑组织和正常脑胶质细胞(P＜0.05),胶质瘤组织中miR-129-2基因的启动子甲基化率显著高于正常脑组织(P＜0.05),使用5-Aza-dC去甲基化处理脑胶质瘤细胞后miR-129-2基因的启动子甲基化程度降低、miR-129-5p表达显著升高(P＜0.05).结论:miR-129-5p在脑胶质瘤中显著低表达,miR-129-2启动子甲基化是导致其低表达的机制之一.     

MDM2和p53在反应性及肿瘤性星形胶质细胞中的表达

目的：检测MDM2和p53蛋白在星形胶质细胞反应性增生与星形胶质细胞瘤中的表达，探讨二者在胶质瘤形成和发展中的作用及其相关性。方法：应用组织芯片和免疫组化染色技术检测正常脑组织、星形胶质细胞反应性增生、低级别（Ⅰ-Ⅱ级）和高级别（Ⅲ-Ⅳ级）星形胶质细胞瘤中MDM2和p53蛋白的表达情况。结果：正常脑组织中MDM2和p53蛋白均呈阴性表达；反应性增生组、低级别肿瘤组及高级别肿瘤组中MDM2蛋白的阳性率分别为32.7％（16／49）、59．2％（29／49）、80．0％（40／50）；p53蛋白的阳性率分别为27．3％（12／49）、57．1％（28／49）、82．0％（41／50）。二者阳性表达率均随着病变恶性程度的增加而升高，MDM2和p53在各实验组间的比较差异均有统计学意义（P〈0．05）；且MDM2和p53表达密切相关（P〈0．05）。结论：MDM2和p53在星形胶质细胞反应性增生及星形胶质细胞瘤中均呈不同程度的过度表达，且随着病变恶性程度的增加表达水平增高，MDM2扩增和p53突变是胶质瘤发生的早期事件，二者的联合检测可能会对星形胶质细胞反应性增生与低级别胶质细胞瘤的鉴别诊断以及星形胶质细胞瘤的早期诊断提供一定的依据。     

人脑胶质瘤p53基因突变及MDM2、p16、p53蛋白表达与临床病理特征相关性研究

目的:探讨p53突变在人脑胶质瘤发生发展中的作用及p53蛋白蓄积与突变的符合程度,并研究MDM2、p16、p53蛋白表达与胶质瘤临床病理特征的关系以及三者的相关性。方法:利用聚合酶链反应-单链构象多态性分析法(PCR-SSCP)及LSAB免疫组化法对已明确诊断的48例人脑胶质瘤进行p53基因突变以及MDM2、p16、p53蛋白表达的检测。结果:48例胶质瘤中20例p53蛋白呈阳性表达(41.7%)。PCR-SSCP检测发现17例(35.4%)呈现p53基因的单链构象多态性改变,均位于5～8外显子,突变例数依次为7(41.2%)、1(5.9%)、4(23.5%)、5(29.4%)。两种方法检测的符合率为89.6%(43/48)。MDM2、p53蛋白阳性率分别为22.9%、41.7%,p16表达缺失率为60.4%。在高级别(Ⅲ、Ⅳ级)的肿瘤中p53表达率及p16表达缺失率分别为63.2%、84.2%,均明显高于低级别(Ⅱ级)的肿瘤(分别为27.6%、44.8%)(P<0.05)。在不同分级的胶质瘤中,MDM2表达率及阳性程度没有显著差异。在p53阳性表达的病例中常伴有p16的表达缺失(57.6%),而且大多出现在Ⅲ、Ⅳ级肿瘤中(9/12)。p53突变、三种分子的表达均与患者的年龄、性别、肿瘤的大小及发病部位无相关性。结论:胶质瘤中p53基因的突变与胶质瘤的发生及恶性进展相关,p53蛋白蓄积与突变率较一致。MDM2基因异常参与胶质瘤的发生,是其形成的早期事件;p16、p53在胶质瘤中的异常表达与肿瘤的分化程度相关。     

子宫颈癌的p16、p15基因缺失研究

目的　探讨p16、p15基因的纯合性缺失与子宫颈癌发生及发展的相关性。方法　本文采用PCR技术对 5 7例治疗前子宫颈癌组织的 p16、p15基因的纯合性缺失进行检测。结果　p16的纯合性缺失率为 15 7% ( 9 5 7) ,Ⅰ Ⅲ期宫颈癌的不同病理类型均有 p16基因的缺失 ,但没有显著性差异。p15基因未发现缺失。 结论　p16基因的纯合性缺失与子宫颈癌的发生有关 ,未发现缺失p15基因     

胶质瘤p27Kip1、bcl-2和PCNA蛋白的表达

目的　探讨胶质瘤p2 7Kip1,bcl 2和PCNA蛋白表达与肿瘤恶性程度、细胞增殖活性、凋亡程度的关系。方法　采用免疫组化染色S P法检测 66例不同级别的胶质瘤 p2 7Kip1,bcl 2和PCNA蛋白的表达。结果　在 66例胶质瘤中 ,p2 7Kip1表达 18例(2 7% ) ,bcl 2表达 2 0例 (3 0 % ) ,PCNA表达 5 1例 (77% )。p2 7Kip1蛋白表达率随着胶质瘤级别升高而减少 ;bcl 2蛋白表达率随肿瘤级别升高而相应增加 ;PCNA表达随胶质瘤级别升高阳性反应强度增加 ;但Ⅰ、Ⅱ与Ⅲ级和Ⅳ级组间无显著性差异。结论　p2 7Kip1蛋白表达的缺失可能与胶质瘤的发生有关 ;bcl 2基因可能间接抑制细胞凋亡而与胶质瘤的分型、细胞的增殖活性以及潜在的临床行为无直接关系 ;PCNA的表达与星形胶质细胞瘤的恶性行为有关     

Rb2/p130、CyclinD1在脑胶质瘤中的表达及意义

[目的]观察Rb2/p130、CyclinD1在脑胶质细胞瘤中的表达及其相关性,并探讨其与脑胶质细胞瘤临床病理分级的关系。[方法]选取Ⅰ~Ⅳ级脑胶质细胞瘤80例,并对其蜡块进行免疫组化SP法染色,检测Rb2/p130、CyclinD1在脑胶质细胞瘤中的表达。[结果]本组80例脑胶质细胞瘤中44例有不同程度的CyclinD1表达,阳性率为55.0%（44/80）。不同病理分级的脑胶质细胞瘤中CyclinD1的表达有统计学差异。随胶质瘤的恶性度增高,表达率上升。p130的阳性率为71.3%（57/80）,在不同病理分级的胶质瘤中,CyclinD1表达存在统计学差异,即随胶质瘤病理分级的增高,p130的表达率降低。CyclinD1与p130表达呈负相关。[结论]CyclinD1随脑胶质细胞瘤级别的增高,其阳性表达逐渐增强,而Rb2/p130则相反。CyclinD1的正调控与Rb2/p130的负调控可能是影响脑胶质细胞瘤发生发展的重要因素。     

p53、ras基因产物在胶质瘤中的表达与肿瘤分级的关系

目的以免疫组织化学方法探讨p53、ras基因产物在胶质瘤中的表达及其与肿瘤分级的关系.方法收集星形细胞瘤的病理检验蜡块共158例,作p53与p21蛋白的免疫组织化学检查.结果在158例星形细胞瘤中,p53和p21的阳性率分别为56.32%和51.9%,两者均可见于肿瘤的早期阶段.在从Ⅰ级～Ⅳ级的星形细胞瘤中,p53蛋白的阳性率依次上升,(P＜0.005),Ⅰ、Ⅱ级和Ⅲ、Ⅳ级的p53阳性率经t检验,(P＜0.05).说明在从良性星形细胞瘤到恶性星形细胞瘤的进展过程中,p53蛋白有对恶性星形细胞瘤有显著的标记作用.从Ⅰ级～Ⅳ级的星形细胞瘤中,p21蛋白的阳性率分别依次上升(P＜0.05).结论星形细胞瘤从良性或低恶性阶段向高度恶性的进展过程中.p53、ras癌基因产物的表达强度也随之增强.p53蛋白的过度表达与星形细胞瘤的恶性程度密切相关.     

结肠癌p16基因缺失与突变的研究

目的 :探讨p16抑癌基因外显子 2缺失、突变与结肠癌发生、发展的关系。方法 :采用聚合酶链反应 (PCR)、聚合酶链反应—单链构象多态性 (PCR SSCP)分析方法检测结肠癌中p16基因外显子 2的缺失、突变。结果 :30例结肠癌样本中 ,高分化及低分化腺癌各 1例PCR扩增无扩增产物 ,可能为p16基因缺失 ;其余 2 8例结肠癌、正常组织均有产物出现。SSCP分析 ,30例结肠癌中未见异常泳动带 ,无p16基因突变。结论 :p16基因外显子 2缺失可能很少参与结肠癌的发生发展 ;而p16基因突变可能与结肠癌发生无关。     

胶质瘤患者血浆与肿瘤组织p16基因甲基化的检测及意义

目的：研究p16基因启动子区CpG岛甲基化与胶质瘤恶性程度分级及肿瘤细胞增殖活性的关系,并探讨血浆DNA甲基化检测的临床意义。方法：应用半巢式甲基化特异性PCR（MSP）法检测40例不同级别的胶质瘤组织及其对应血浆标本中p16基因CpG岛甲基化状态。免疫组化SP法分析肿瘤组织p16蛋白和Ki-67抗原的表达情况。结果：胶质瘤组织p16基因甲基化发生率为42.5%（17/40）,血浆p16基因甲基化为27.5%（11/40）,二者差异无统计学意义（χ^2=1.9780,P=0.1596）;p16蛋白表达缺失率为72.5%（29/40）,其中55.2%（16/29）缺失与甲基化有关（P=0.0229）。甲基化发生率随胶质瘤恶性程度增加有增高趋势,高度恶性者高于低度恶性者,差异有统计学意义（肿瘤组织：χ^2=11.4288,P=0.0007;血浆：χ^2=8.9439,P=0.0028）。甲基化阳性者中Ki-67抗原增殖指数明显高于甲基化阴性者（P〈0.05）。结论：p16基因CpG岛甲基化导致该基因灭活是胶质细胞恶性增生的主要机制之一,为肿瘤发生的晚期事件。血浆DNA甲基化状态可能成为临床诊治中有效的监测指标。     

p16及p15基因在子宫颈癌中的纯合性缺失及其临床意义

目的 :探讨抑癌基因p16、p15基因的纯合性缺失在子宫颈癌的发生发展中的作用。方法 :应用比较PCR技术检测 34例子宫颈癌组织和 2 0例正常宫颈组织中p16、p15基因的纯合性缺失。结果 :p16、p15基因的纯合性缺失率分别为 11 8%、14 7% ,p16、p15基因的纯合性缺失与组织学类型、临床分期及组织学分级无关。结论 :p16、p15基因的纯合性缺失在子宫颈癌的发生发展中可能起到一定的作用