国产荧光定量PCR与COBAS Amplicor检测HBV DNA的结果比较

目的比较国产实时荧光定量PCR（FQ PCR）试剂与罗氏COBAS Amplicor方法检测乙型肝炎病毒（HBV）DNA的结果。方法据COBAS Amplicor 的FQ PCR试剂（A）的检测结果,抽取151份慢性乙型肝炎（慢乙肝）血清标本,采用两种国产实时FQ PCR试剂B、C对血清标本进行HBV DNA平行检测,以分析国产试剂的敏感度、特异度及与试剂A的相关性。结果试剂A、B、C测得的HBV DNA结果分别为（5.87±1.64）、（5.11±1.34）、（4.93±1.35）log10?copies/mL,试剂B、C与试剂A的相关系数分别为0.947、0.937。3种试剂检测结果总体差异有统计学意义（P＜0.05）,试剂B、C与试剂A检测结果相比差异有统计学意义（P＜0.05）。低HBV载量标本,试剂B、C与试剂A相关性较低。以试剂A为准,总体灵敏度、特异度分别为试剂B 90.4％、56.3%,试剂C 77.0%、100%。结论试剂B、C与试剂A在检测HBV DNA方面有较好一致性,但在低HBV载量时可靠性较低。试剂B灵敏度高,试剂C特异度高。     

国产试剂HBVDNA检测下限与核苷(酸)类似物停药后乙肝复发的分析

目的比较实时荧光定量PCR与COBAS Ampliprep检测血清HBVDNA水平的相互关系,探讨慢性乙型肝炎患者使用核苷酸类似物抗病毒治疗,达到停药标准停药后病情复发的风险。方法收集178份血清标本,分别采用COBAS Ampliprep/COBAS TaqMan HBV Test version、实时荧光定量PCR方法进行检测,分析其相关性,比较HBVDNA检测下限以下(HBVDNA<100 IU/mL)两者之间的差异。结果 (1)相关性:实时荧光定量PCR与COBAS Ampliprep方法所测HBVDNA结果呈线性相关(r=0.789,P<0.01),HBVDNA水平4～7 log检测值与COBAS Ampliprep所测HBVDNA水平呈线性相关(r=0.650,P<0.01),HBVDNA水平<4 log10IU/mL及>7log10IU/mL检测值与COBAS Ampliprep所测HBVDNA水平均无相关性(r=0.430,P=0.163;r=0.422,P=0.172)。(2)率的比较:实时荧光定量PCR检测HBVDNA下限为100 IU/mL(2 log10IU/mL),COBAS Ampliprep检测下限为20 IU/mL(1.3 log10IU/mL),两者HBVDNA检测限以上的百分率分别为33.1%、62.4%,差异有统计学意义(P<0.001)。实时荧光定量PCR检测HBVDNA水平在检测限以下119例,COBAS Ampliprep平行检测仍有52例(43.7%)能检测到HBVDNA,35例(29.4%)在检测下限以下(<20 IU/mL,1.3 log10IU/mL),32例(26.9%)未检测到核酸(Target Not Detected)。实时荧光定量PCR检测HBVDNA>7 log10IU/mL有21例,9例大于COBASAmpliprep检测上限。结论实时荧光定量PCR检测方法经济实用、结果准确可靠,与COBAS检测具有很好的相关性。目前的HBVDNA检测手段下,慢性乙型肝炎患者即使达到停药标准,停用核苷(酸)类似物仍应慎重。     

LightCycler实时监测PCR定量分析血清HBV DNA

目的 检验LightCycler实时监测PCR（real-time detection PCR,RTD-PCR)对血清中HBV DNA定量检测的灵敏性和可重复性，探讨HBV血清标志物与HBV DNA定量的关系。方法 HBV定量按深圳匹基公司乙肝PCR荧光检测试剂盒使用说明，对乙肝标志物已明确的773例血清中HBV DNA定量结果进行统计分析。结果 实时监测PCR对血清中HBV DNA定量检测的灵敏性高，可检测低至1000拷贝／ml血清；可重复性好，批间误差＜20％；各种标志物类型的血清HBV DNA含量分布情况表明，HBV血清标志物中HBeAg与HBV DNA含量有明显的关系，一般HBeAg阳性血清HBV DNA含量较高，但也有相当一部分例外。结论 LightCycler实时监测PCR对血清中HBV DNA定量检测灵敏性高可重复性好；仅根据HBV血清标志物往往不能确定乙肝患者HBV DNA复制水平的高低，HBV DNA定量检测具有十分重要的临床意义。     

荧光定量聚合酶链反应与分支链DNA信号扩增法检测血清HBV DNA的比较

目的了解荧光定量聚合酶链反应(PCR)法与分支链DNA信号扩增(bDNA)法在检测血清中HBV DNA含量上的优缺点.方法分别用这两种方法平行检测44份乙型肝炎患者的血清标本,并与定性PCR检测结果比较.同时用荧光定量PCR法观察15例乙肝患者干扰素治疗期间HBV DNA含量变化.结果①荧光定量PCR法和bDNA法比较,a前者测出的HBV DNA含量均值为(3.50×105±33.6)copies/μl;后者为(3.07×105±12.9)copies/μl,两者比较差异无显著性(P＞0.05).b前者的HBV DNA阳性率79.5%;后者及常规PCR定性法均为59.1%.荧光定量PCR法的阳性检出率显著高于bDNA法及常规定性PCR法(P＜0.05).②15例中5例获完全应答的乙型肝炎患者其血清HBV DNA含量在治疗16周内均逐渐下降至完全转阴.结论荧光定量PCR法与bDNA法在检测血清HBV DNA含量上,结果大多一致,且敏感性强,检验也较简便、价廉,并能较好评价和检测乙肝患者抗病毒疗效,宜于临床推广.     

两种HBV-DNA定量测定方法的比较

目的考察实时荧光PCR定量法(FQ-PCR)检测乙型肝炎病毒DNA的准确性。方法通过对 56份血清进行HBV—DNA检测,其中包括一个10倍倍比稀释系列6份、阴性血清12份和阳性血清38份。比较两种方法的准确性及临床标本符合情况。结果微板核酸杂交定量法和实时荧光定量法的线性回归系统分别为0．977 和0．999。实时荧光定量法所检测的不同含量的样本批内变异系数均低于微板核酸杂交定量法。结论实时荧光定量法具有较好的灵敏度、特异性、重复性和线性,与微板核酸杂交定量法有良好的相关性。     

定量PCR检测血清HBV-DNA与血清HBV标志物关系的研究

目的 :探讨定量PCR检测血清HBV -DNA与血清HBV标志物之间的关系及其临床意义。方法 :35 2例血清标本运用荧光定量PCR检测血清HBV -DNA及放射免疫法 (ELISA)检测血清HBV标志物。结果 :经荧光定量PCR检测 94例HBsAg、HBeAg、HBcAb均阳性的标本 ,其血清HBV -DNA全部阳性 ,DNA测值范围 4 .8× 10 5～ 2 .8× 10 8copy/ml;81例HBsAg、HBeAb、HBcAb均阳性的标本 ,其血清HBV -DNA4 3例阳性(阳性率为 5 3% ) ,DNA测值范围 1.0× 10 4～ 1.4× 10 7copy/ml;39例HBsAg、HBcAb阳性的标本 ,其血清HBV-DNA2 4例阳性 (阳性率为 6 1% ) ,DNA测值范围 3.5× 10 3 ～ 1.6× 10 7copy/ml;10 0例HBVM全阴性的标本 ,血清HBV -DNA全部阴性。结论 :荧光定量PCR检测血清HBV -DNA准确灵敏 ,可反映乙肝患者病程变化 ,对于乙肝临床诊断、治疗方案的选择、疗效观察及预后判断有极其重要的作用。     

荧光定量PCR检测HBV DNA与HBV血清标志物的对比监测和分析

目的：探讨荧光定量PCR法检测乙型肝炎病毒(HBV)DNA与HBV血清免疫学标志物(HBVM)的相互关系。方法：801例血清标本采用ELISA方法对其免疫学标志物进行检测，并用实时荧光定量-聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测血清HBV DNA。结果：HBV DNA的总检出率为67.0％，在模式HBsAg( )，HBeAg( )，HBcAb( )中，HBV DNA的含量明显高于HBsAg( )，HBeAb( )，HBcAb( )及HBsAg( )，HBcAb( )模式。在HBsAg(-)模式中HBV DNA亦有检出。结论：HBVM能提供乙肝感染的间接证据，而荧光定量PCR法检测HBV DNA准确灵敏，能真实反映HBV感染、复制及病程变化，在乙型肝炎的诊断治疗中具有重要的临床指导价值。     

检测慢乙肝病人外周血HBV DNA含量的临床意义

目的研究荧光定量PCR法检测慢性乙型肝炎病人血清HBV DNA含量的临床意义。方法血清HBV DNA定量检测采用荧光PCR法（FQ—PCR）；采用免疫组化ABC法标记相应肝组织中aBcAg，研究二者之间的关系。结果血清HBV DNA含量较低组（A、B组），肝组织中aacAg的表达呈阴性或少数阳性；而血清HBV DNA含量较高组（C、D组），肝组织HBcAg表达多数呈阳性或强阳性，随着血清HBV DNA含量的升高肝组织HBcAg表达强度和范围也随之增加。结论血清HBV DNA定量检测能较好地反映乙肝病毒在体内的复制状况。     

应用分子信标荧光PCR定量检测乙型肝炎病毒核酸的评价

目的：分子信标(Molecular Beacon)是近年新发展的一种荧光标记发夹形寡核苷酸探针。本目的在于对国产分子信标荧光PCR定量检测HBV核酸试剂盒(厦门泰伦生物工程有限公司的“乙型肝炎病毒荧光PCR定量检测试剂盒”)的主要性能进行评价。方法：以Roche公司的乙型肝炎病毒(HVB)定量检测试剂盒AMPLICOR HBV MONITOR^TM Test Kit为参比,对分子信标定量检测临床血清标本HBV DNA的结果,进行比较和分析。结果：根据两种试剂盒定量检测34份乙型肝炎和非肝炎血清及一份系列10倍稀释血清(含高水平HBV DNA)的数据,并以Roche试剂盒的结果为参比标准,分子信标试剂盒定量检测HBV DNA的相对敏感性、特异性和符合率均为100％(分别为：19／19,15／15和34/34);其定量检测HBV DNA的线性范围和下限分别为10^3～10^3copies/ml和10^3copies/ml;两种试剂盒定量检测HVB DNA的相关系数(r)＝0．987。结论：初步结果表明：该国产分子信标荧光PCR定量检测HBV核酸试剂盒的主要性能,与Roche公司的AMPLICOR HBV MONITOR^TM Test试剂盒相似,并具有较后更宽的线性定量范围。     

脂血对检测HBV DNA的影响及解决办法

目的：评价脂血标本对荧光定量PCR检测乙肝病毒DNA的影响,并选择有效去除脂血对HBV DNA测定干扰的方法。方法：采集29例HBV DNA值〉10^5copies/ml的乙肝青壮年志愿者空腹和高脂饮食后2、46、h静脉血,测定血清甘油三酯（TG）和HBV DNA。选用低温高速离心法和乙醚萃取法处理脂血标本,测定清亮血清HBV DNA值。结果：TG水平轻度升高时,血清HBV DNA测定值有61%超出允许误差范围,且TG水平越高,超出允许误差范围百分率越高、差值越大;TG水平重度升高时,出现假阴性结果。低温高速离心法去除脂血因素干扰效果较萃取法好。结论：高血脂对荧光定量PCR检测HBV DNA结果存在影响,通过低温高速离心法可以有效去除脂血因素干扰。     

乙型肝炎患者治疗后血清中e抗原与病毒DNA水平的关系

目的 通过对乙型肝炎病毒血清学标志物(HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBcIgG)的检测及内标、外标两种聚合酶链反应(PCR)方法 检测乙型肝炎病毒载量的比对,更好地了解人体内乙型肝炎病毒携带情况,指导临床诊治.方法对经治疗后丙氨酸氨基转移酶(ALT)/天冬氨酸氨基转移酶(AST)正常、COBAS AMPLICOR定量PCR(内标法)检测不到乙肝病毒DNA(HBV-DNA)、用Abbott AxSYM微粒子酶免分析法(MEIA)检测乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)阳性、表面抗体(抗-HBs)阴性、e抗原(HBeAg)阳性(HBeAg＞4 S/CO)、抗-HBe阴性、抗-HBcIgG阳性的42例血清,再用上海复星长征医学科学有限公司提供的HBV-PCR外标法荧光定量检测试剂盒,Light Cycler实时荧光定量PCR仪检测.结果 42例ALT/AST正常,HBeAg阳性(HBeAg＞4 S/CO以上),HBeAg的平均值42.26 S/CO.COBAS AMPLICOR定量PCR(内标法)未检测到HBV-DNA(＜300拷贝/ml)的血清;用Light Cycler定量PCR仪(外标法)检测HBV-DNA,有7例为阳性,7例HBV-DNA的平均含量3.1×105拷贝/ml,,阳性率17%.结论 乙型肝炎病毒e抗原阳性并不说明体内病毒复制一定活跃.经治疗后,病毒复制下降,部分患者e抗原仍阳性,e抗原何时消失有待进一步研究.血清学标志与HBV复制状态存在不一致性,兼顾内、外标两种PCR方法检测HBV-DNA更客观.     

超速离心浓缩对提高血液NAT筛查不确定标本鉴别率的临床研究

目的探讨超速离心浓缩（简称超浓缩）血液标本中的病毒对提高三联检核酸筛查阳性、病毒含量低不能常规鉴别标本的可鉴别率。方法30份Roche COBAS s201核酸扩增检测系统筛选出的COBAS TaqScreen MPX HIV、HCV、HBV三项联检核酸阳性,但COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV、HCV及HBV定量试剂原倍鉴别结果均阴性的标本,进行4℃、24600g超速离心1h,浓缩富集病毒后,使用Roche公司的COBASAmpliPrep/COBASTaq-ManHIV、HCV及HBV定量试剂盒进行HIV、HCV及HBV鉴别试验,鉴别阳性的标本,超浓缩处理后用Novartis（原Chiron）公司的PROCLEIX ULTRIO试剂进行相应病毒的鉴别试验加以确证。结果30份RocheMPX核酸筛查阳性、鉴别阴性的标本,经4～10倍超浓缩处理后有23份标本被鉴别为HBV阳性,可鉴别率为76.7%。结论超浓缩处理可解决绝大部分核酸检测三联检阳性但鉴别未果的标本的病毒鉴别问题。     

多重实时荧光定量PCR检测急性肝炎患者HBV和HCV方法的建立与意义分析

目的建立一种新的可以快速筛查急性肝炎患者HBV和HCV感染的多重实时荧光定量PCR方法。方法收集596例急性肝炎患者血清或血浆样本,应用自主构建的多重实时荧光定量PCR方法同时检测HBV和HCV,同时应用HBV和HCV单管检测试剂进行检测分析。结果新建立的多重实时荧光定量PCR体系,可以有效地检测HBV和HCV的阳性质控品及阳性样本。多重实时荧光定量PCR体系特异性较好,检测HBV和HCV时,两者之间无交叉反应,且以多种血浆病毒的核酸样品为模板进行检测时结果全为阴性;多重实时荧光定量PCR体系检测HBV、HCV的灵敏度分别为20 IU/ml、50 IU/ml;多重实时荧光定量PCR体系精密度好,检测HBV、HCV的CV值分别为0.11%、0.096%。在检测临床样本时,多重复合体系检测血清或血浆中HBV和HCV的检出率与单独检测HBV和HCV具有很好的一致性,且HBV和HCV的一致率分别达到97.7%(k=0.952)、98.8%(k=0.976);同时有6例样本出现HBV和HCV共感染。结论新型多重实时荧光定量PCR方法对快速检测及筛查HBV和HCV较快捷,而且特异性好、灵敏度高、精密度好。因此多重实时荧光定量PCR方法对2种肝炎病毒的检测具有重要意义。     

应用竞争聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒DNA

目的探讨竞争聚合酶链反应(C-PCR)在乙型肝炎病毒(HBV)临床检测中的意义。方法根据中国人群最常见的HBV病毒adr亚型基因组序列合成一对HBV特异的引物,并制备内对照DNA,将适量的内对照DNA加入到常规HBV DNA PCR检测反应体系中,使其与HBV靶序列共扩增。结果在20μl C-PCR反应体系中,加入约100～500拷贝内对照DNA能够有效的获得共扩增信号;在120个临床血清标本的C-PCR扩增中识别出5个不能有效扩增的标本。结论C-PCR能够有效地指示临床标本HBV DNA体外扩增的假阴性。     

荧光定量PCR检测TTV方法学建立及临床应用

目的　建立一种灵敏度高、特异性好、操作简便的荧光实时定量PCR技术。方法　设计针对TT型肝炎病毒(TTV)基因保守序列非转录区的一对引物和一条荧光基团双标记探针。将PCR扩增所得的产物片段克隆 ,作为定量检测的标准品。对 36例丙肝患者及 12 3例不同血清标志物阳性的乙肝患者、16 6例健康体检者血清中TTVDNA定量检测 ,评估TTVDNA在不同人群中检出阳性率的差异显著性。结果　该方法检测TTVDNA的灵敏度高于普通套式PCR ELISA方法 ,线性范围为 10 2～ 7拷贝 /ml;批间CV为 13.2 %～ 16 .0 % ,批内CV为 6 .5 %～ 11.3%。健康体检者、丙肝患者、乙肝患者三组人群阳性检出率无显著性差异 ;且乙肝患者 (TTVDNA )血清ALT水平与TTVDNA载量无显著相关性 (P >0 .0 5 ) ;乙肝患者血清ALT异常与正常两组TTVDNA阳性检出率无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论　该方法操作简单、灵敏度高、特异性好、结果数据化 ,适合于临床实验室进行临床标本的TTVDNA定量检测。     

乙型肝炎病毒核酸相关抗原在评价病毒复制中的应用价值

目的 通过对乙型肝炎病毒核酸相关抗原(hepatitis Bvirus nucleic acid related antigen,HBV NRAg)与HBeAg和乙型肝炎病毒DNA(hepatitis B virus DNA,HBV DNA)之间的比较,探讨HBV NRAg在评价病毒复制中的应用价值.方法收集157例...     

两种游离DNA检测方法的比较研究

目的：对比评价人血清游离DNA的分支DNA（bDNA）检测和实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测方法。方法：收集44例人血清标本,分别运用bDNA技术和荧光定量PCR检测其游离DNA浓度,对2种方法检测结果做分析比较。同时采用bDNA技术分别检测其中10例血清和血浆游离DNA含量。结果：bDNA技术的检测结果和荧光定量PCR具有较高的相关性（r=0.7077,P〈0.0001）;血清较血浆具有较高的游离DNA的水平。结论：bDNA操作简便且结果可信,适用于人群大规模筛查游离DNA水平。