人精子膜结合腺苷脱氨酶单克隆抗体的制备和初步鉴定

本研究以正常人精子，用ｐｅｒｃｏｌｌ分离，经脾直接免疫、细胞融合和克隆化后，以标准ＡＤＡ为抗原筛选，得到２８株单克隆抗体（ＭｃＡｂ）细胞株。其腹水效价均在１：６４００以上（ＥＬＩＳＡ）。免疫球蛋白分类显示，１株为ＩｇＭ，其余各株皆为ＩｇＧ。ＭｃＡｂ对ＡＤＡ活性的抑制实验结果显示，有２２株ＭｃＡｂ对ＡＤＡ有抑制作用而其余６株对ＡＤＡ无抑制作用。初步研究结果显示我们得到的ＭｃＡｂ具有特异性，可用于对精子中ＡＤＡ的性质研究。     

腺苷脱氨酶在人精子膜上的定位及其单克隆抗体对人精子穿卵能力的影响

利用本实验室制备的抗人精子膜结合腺苷脱氨酶（ＡＤＡ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）和间接荧光免疫技术，分析了该酶在正常人精子膜上的位置。同时，利用该酶单抗分析了该酶活性对人精子穿透去透明带卵的影响。上述两个实验的结果显示：（１）ＡＤＡ结合于人精子中段、尾部膜的外侧；（２）利用抗ＡＤＡＭｃＡｂ抑制ＡＤＡ活性可明显抑制正常人精子穿透去透明带卵的能力。这一研究结果提示，ＡＤＡ作为精子的膜蛋白组分，可能参与对精子生理功能的调节过程。     

鸡抗人精子卵黄抗体IgY的制备

目的 :探索一种快速和经济的从鸡卵黄制备抗人精子抗体IgY的方法。　方法 :用洗涤过的人精子免疫开产前的实验母鸡 ,间隔 7d加强免疫 ,4次加强注射后收集免疫鸡蛋 ,分离蛋黄和蛋清 ,去除蛋黄中的脂质后经 4次硫酸铵沉淀去除其它杂蛋白 ,再经SephadexG 2 5层析柱脱盐后获得卵黄抗体IgY。　结果 :鸡抗人类精子卵黄抗体IgY能使人类精子凝集 ,对照组用未免疫的鸡血清和卵黄抗体均为阴性。　结论 :产蛋母鸡可用来低成本和高效地生产抗人类精子抗体 ,精子凝集试验结果提示抗精子卵黄抗体可成为未来避孕药具的极有潜力的候选方法     

大鼠抗小鼠组织相容性抗原抗体的制备与纯化

为进一步了解异种移植间免疫排斥反应的抗体特性，采用NIH小鼠牌细胞免疫SD大鼠，制备大鼠抗小鼠组织相容性抗原抗血清，经辛酸沉淀、羟基磷灰石层析技术纯化抗体。结果：制备的大鼠抗小鼠组织相容性抗原抗血清具有较高效价（＞1：640），辛酸、羟基磷灰石二步法纯化的抗体具有纯度好、收获率高、能保留免疫原性、条件温和等特点。表明此法是制备各种抗组织相容性抗原抗体的有效方法。     

人绒毛滋养细胞单克隆抗体制备及初步鉴定

采集６～８周人工流产胎盘绒毛，经胶原酶处理及梯度离心后得到滋养细胞，再用ＮＰ－４０提取滋养细胞抗原。经常规免疫、细胞融合和克隆化后得到２０多株单克隆抗体（ＭｃＡｂ）细胞株。其中１０株ＭｃＡｂ进行了免疫学鉴定。免疫球蛋白分类，２株为ＩｇＭ，８株为ＩｇＧ，其中４株为ＩｇＧｌ。免疫斑点试验结果显示，１０株ＭｃＡｂ均为阳性，其滴度为１：８０～１：１２８０。免疫荧光定位，１０株中７株与滋养层细胞反应，２株与绒毛基底膜结合，１株为阴性。并对其进行了免疫转移印迹试验和交叉反应性研究，初步研究结果显示，单抗Ｔ６有着较好的特异性，值得进一步研究。     

抗精子抗体对人精子表面ConA受体影响的研究

本研究运用刀豆蛋白-A(ConA)-胶体金分子探针,对经兔抗人精子抗血清处理的正常人精子和免疫性不育患者的精子做分子水平的定位观察。结果表明,经兔抗人精子抗血清处理的精子和免疫性不育症患者的精子,其顶体反应的囊泡上和顶体后区胶体金的结合均明显低于正常,提示抗精子抗体能封闭精子顶体后区与卵细胞识别的位点,从而影响精子的受精能力。     

抗人精子中性鞘糖脂抗体的免疫活性及免疫组化鉴定

抗人精子中性鞘糖脂抗体的免疫活性及免疫组化鉴定刘建军，朱正美，崔肇春用精子特异性抗原制备抗精子抗体（ＡｓＡｂ）并研究其对受精及其过程的影响是当前生育调节研究中十分活跃的课题。已知鞘糖脂（ＧＳＬ）具有抗原性，它存在于质膜脂双层的外侧。有报道［１］表明它...     

人精子有效抗原的分析

本实验运用免疫性不育症患者血清和精浆中抗精子抗体对精子可溶性抗原的有效决定簇进行了SDS-PAGE和Westera Blot法的分析。结果表明:1.经反复冻融所提取的精子可溶性抗原具有较高的特异性。2.男性血清中抗精子抗体的靶抗原种类多于女性。3.精浆中抗精子抗体的靶抗原种类多于血清。4.精子抗原中58KD_a、69KD_a和91KD_a成份为抗精子抗体阳性的男性血清和精浆、女性血清共同识别的靶抗原。5.精子抗原中20KD_a成份可能是刺激男性生殖道淋巴组织产生与免疫不育有关抗体的特异性、功能性抗原。提示由于精子抗原对生殖道刺激产生抗体的方式、途径和部位不同,导致血清和精浆中抗精子抗体的克隆数不同。     

人精子抗原基因表达产物HSG_2Ag的纯化和鉴定

本研究运用离子交换层析法分离纯化人精子抗原基因表达克隆HSG2的溶原蛋白,并用ELISA法鉴定其中的表达产物(HSG_2Ag)。结果显示:(1)经离子交换层析法分离HSG_2溶原蛋白为12个主要蛋白峰;(2)用抗人精子抗体和纯化的人SIT阳性血清经ELISA法识别,在HSG_2溶原蛋白中,第3峰为人精子抗原基因表达克隆HSG_2的表达产物(HSG_2Ag)。结果提示,用上述方法分离和纯化的HSG_2Ag纯化度高,特异性高,适合应用于抗精子抗体检测试剂盒的制备,并为进一步研制精子抗原免疫避孕疫苗提供候选成分。     

Localization of antigenic determinants recognized by a monoclonal antibody in rat epididymal spermatozoa, with particular reference to sperm maturation

Summary.  This study localized antigenic determinants recognized by a mouse anti-human sperm monoclonal antibody TüS10 immunocytochemically and immunoelectron microscopically in the rat sperm recovered from the caput and cauda epididymidis. Immunocytochemistry showed that the antibody bound specifically to the plasma membrane overlying the principal piece of membrane-intact sperm from the caput and cauda epididymidis. Demembranation by Triton X-100 significantly decreased the affinity of the monoclonal antibody TüS10 to the caput sperm but did not obviously change that to the cauda sperm. Immunoelectron microscopy with biotinstreptavidin peroxidase complex pre-embedding method confirmed the localization of the antigenic determinants over the cell surface of the principal piece of the membrane-intact spermatozoa from the caput and cauda epididymidis. The demembranated sperm from the caput epididymidis showed no intracellular labelling, while those from the cauda displayed labelling on their external surface of the fibrous sheath. Using monoclonal antibody TüS10 as a probe, we detected different distribution patterns of the antigenic determinants between the spermatozoa in the caput and cauda epididymidis. These results suggest that spermatozoa mature with immunologically detectable changes in the fibrous sheath during their epididymal transit.     

抗CD8单抗与抗CD40L单抗联合应用对小鼠心脏移植后慢性排斥反应的影响

目的 探讨干预慢性迟发性超敏反应（DTH）与CD8^＋T淋巴细胞的细胞毒等效应机制对同种小鼠心脏移植后慢性排斥反应的影响。方法 建立小鼠颈部异位心脏移植模型，实验组以BALB／c小鼠为供者，C57BL／6小鼠为受者，术后0、2、6及14d腹腔注射抗CD8单克隆抗体（抗CD8单抗）200μg／d，术后0、2及4d腹腔注射抗CD40L单克隆抗体（抗CD40L单抗）250μg／d；同系移植对照组供、受者均为BALB／C小鼠，术后同期腹腔注射等量生理盐水；同种移植对照组以BALWc小鼠为供者，C57BL／6小鼠为受者，术后不使用上述单抗。观察各组移植心的存活时间及移植心组织病理学变化。结果同种移植对照组移植心的平均存活时间为7．3d；实验组与同系移植对照组移植心的存活时间均超过60d。同种移植对照组移植心呈典型急性排斥反应病理学改变；同系移植对照组移植心组织未见明显病理变化；实验组移植心呈现血管周围炎、间质纤维化和血管内膜增生等慢性排斥反应组织病理改变。结论 清除CD8^＋T淋巴细胞和阻断CD40／CD40L通路的处理方案虽可预防急性排斥反应，显著延长移植心的存活时间，但并不能阻止慢性排斥反应的发生。     

人结直肠癌粘膜下注射125I标记抗CEA单抗CL58放射免疫导向手术的研究

目的探讨125I标记的抗CEA单抗(monoclonal antibody, McAb)CL58在结直肠癌放射免疫导向手术(radioimmunoguided surgery, RIGS)中的应用价值.方法将125I标记单抗CL58在纤维结肠镜直视下注射于29例结直肠癌患者癌周粘膜下;给药后3～14d行根治手术,术中使用手持式γ探测仪(gamma-detecting probe, GDP)对肿瘤、区域淋巴结、手术切缘等靶部位(target, T)进行放射性检测,以正常肠壁为对照本底(normal tissue, NT),以T/NT≥3为判别大肠癌、肠壁浸润及淋巴结转移的标准;全部标本行病理学检验;病理学阴性的淋巴结标本进行免疫组化染色寻找微转移灶.结果 GDP探测判别肿瘤的灵敏度为93.1%,判别切缘的特异度为95.5%.RIGS判别淋巴结的灵敏度及特异度分别为92.0%、87.8%,与临床判别相比差异有显著性意义(χ2=5.84,P＜0.05).免疫组化证实RIGS能够检出部分病例中常规病理检验未发现的淋巴结微转移灶.结论应用125I标记的抗CEA单抗CL58进行结直肠癌RIGS,可有效判断区域淋巴结转移.     

抗Fas单克隆抗体诱导人胃癌细胞系SGC-7901细胞凋亡的研究

目的 探讨抗Fas单克隆抗体诱导胃癌细胞凋亡的规律及在胃癌治疗中的意义。方法 应用细胞形态观察、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞光度术检测抗Fas单克隆抗体对胃癌细胞SGC-7901增殖周期的影响以及对细胞杀伤作用的方式，并检测了SGC-7901细胞表面bcb2的表达情况。结果 抗Fas单克隆抗体有阻滞细胞周期、通过诱发凋亡而抑制肿瘤细胞生长的作用。经抗Fas单克隆抗体处理后，SGC-7901细胞表面bcl-2蛋白表达无明显变化。结论 抗Fas单克隆抗体可以诱导胃癌细胞系SGC-7901细胞凋亡，抗Fas单克隆抗体诱导胃癌细胞凋亡与bcl-2表达无关。     

环孢素A与抗B7-1单克隆抗体联用诱导T淋巴细胞耐受的研究

目的 探讨抗原特异性无能Ｔ淋巴细胞的诱导及其耐受特性。方法 在体外建立抗原递呈细胞－Ｔ淋巴细胞－Ｂ淋巴细胞反应系统,利用环孢素Ａ（ＣｓＡ）与抗Ｂ７－１单克隆抗体联用阻断Ｂ７：ＣＤ２８共刺激途径,采用＾１３Ｈ－ＴｄＲ法检测Ｔ淋巴细胞增殖,酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ法）测定Ｂ淋巴细胞分泌的抗体。结果 ＣｓＡ与抗Ｂ７－１单克隆抗体联用可诱致Ｔ淋巴细胞无能,无能Ｔ淋巴细胞不产生白细胞介素２（ＩＬ－２）;     

发囊基因芯片法和血样单克隆抗体法在HLA-Ⅱ类分型中的比较研究

目的 同步双盲法研究单克隆抗体法和基因芯片法在HLA分型中的准确性、重复性和实用性。方法 研究样本46份，单克隆抗体法采用一步法单抗分型技术，基因芯片法采用寡核苷酸芯片技术。结果 46份标本的单克隆抗体法和基因芯片法分型成功，对有差异的结果进行基因芯片法复查，重复率100％。单克隆抗体法耗时1.5h，基因芯片法耗时3.5h。基因芯片法的漏检率低于单克隆抗体法。两种方法主要在对DR2(DR15，DR16)的检测结果上不一致。结论 目前HLA-Ⅱ类抗原的分型，尤其是临床大样本分型，可以采用单克隆抗体分型技术进行快速分型。对于要求精细配型的骨髓移植，应该采用基因芯片分型或其他DNA分型技术。对于单克隆抗体分型结果可疑的样本应用基因芯片分型确认。     

Purification and characterization of sperm-coating antigen, identified by a monoclonal antibody

Summary. A procedure was designed for purification of a human seminal plasma-specific antigen (HSP-antigen) identified by a monoclonal antibody produced in this laboratory (mAb 4E6). Pooled human seminal plasma was fractionated by consecutively applied methods: affinity chroma-tography on Lentil lectin sepharose, gel chromatography on Ultrogel AcA 34 and immunoaffinity on mAb 4E6 coupled CNBr-Spharose 4B. The antigen-containing fraction obtained after this procedure was proved to be homogeneous when analysed by electrophoresis in polyacrylamide gel. After the consecutive purification procedures the degree of purification was 128 times as compared to the starting material. Electrophoretic analysis of the purified 4E6 antigen under reducing conditions showed that it consisted of 3 polypeptide subunits with molecular weight 70 kDa, 64 kDa and 60 kDa respectively. On the basis of the data obtained from competitive elisa testing of sera from infertile patients it has been suggested that the identified antigen may be involved in pathogenesis of immunologic infertility.     

^99mTc标记单克隆抗体膀胱内灌注诊断膀胱癌

目的 使放射免疫显像诊断膀胱癌更加简便，安全，可靠。方法 采用抗人膀胱癌单克隆抗体ＢＤＩ－１通过２－巯基乙醇直接还原法标记＾９９ｍＴｃ（＾９９ｍＴｃ）制备了＾９９ｍＴｃ－ＢＤＩ－１。结果 标记率为６９．９％，放化纯度大于９５％，３３例患者接受了通过膀胱内灌注的放射免疫显像诊断，其中４例非膀胱癌患者均未见显像，２９例膀胱癌患者肿瘤显像阳性率为８８．５％，原发和复发肿瘤可获得清晰的显像，显像肿瘤最小为     

抗结核分枝杆菌培养滤液蛋白10的新型单克隆抗体的制备及其临床应用

目的 制备抗结核分枝杆菌培养滤液蛋白10(CFP-10)特定抗原肽的单克隆抗体,为建立结核病临床早期诊断的免疫学方法奠定物质基础.方法 设计并合成结核分枝杆菌CFP-10第53 ～ 66位氨基酸(14肽AAVVRFQEAANKQK)作为特定的抗原肽序列,经免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,经酶联免疫吸附试验(ELISA)检测、多次有限稀释亚克隆建立能稳定分泌抗结核分枝杆菌特异抗原肽单克隆抗体的杂交瘤细胞系,纯化该单克隆抗体,进行免疫球蛋白亚型分析,并鉴定分析该单克隆抗体在蛋白质免疫印迹法(Western blotting)、免疫沉淀法和ELISA检测中的应用效果.共检测结核分枝杆菌培养上清样本38份,非结核分枝杆菌培养上清样本20份,结核性胸水样本32份,非结核性胸水样本24份以及健康对照血清样本20份.结果 单克隆抗体免疫球蛋白亚型分析显示该杂交瘤细胞系产生的抗体类型为IgG1和κ型.该抗结核分枝杆菌CFP-10特异性单克隆抗体可成功用于Western blotting和免疫沉淀法分析.ELISA定量检测显示,该特异性抗体检测结核分枝杆菌的敏感性为78.6％ (55/70),特异性为92.2％ (59/64).结论 CFP-10特定抗原肽单克隆抗体用于结核分枝杆菌检测有较高的敏感性和特异性,可用于结核病的早期诊断.