髓复康促进大鼠脊髓修复再生的超微结构研究

目的 观察脊髓损伤后,脊髓神经毡等超微结构的变化和中药髓复康对于这种变化的影响;另外,希图从脊髓损伤区行细胞血管内皮细胞的超微结构方面,探查髓复康对大鼠损伤脊的保护作用,促修复再生作用及其作用柚是。方法 制备４５只下胸髓右侧半横断损伤的Ｗｉｓｔａｒ大鼠模型,分为髓复康、补阳还五汤、甲基强地松龙和空白对照４组,另设正常对照组用透射电镜和图像分析技术观察和分析髓复康对脊髓损伤区神经元和毛细血管内皮细胞     

脊复康对急性脊髓损伤大鼠行为影响的观察

目的 探讨中药复方“脊复康”对急性脊髓损伤大鼠运动功能恢复的影响。方法 90只雄性SD成年大鼠在无菌手术下,造成第12胸髓右侧半横断损伤模型。术后随机分成4组,即脊复康(J)组、激素(M)组、补阳还五汤(Y)组、空白对照(B)组。J组术后经食管插管逐日灌喂脊复康颗粒剂溶液。M组术后腹腔注射甲基强的松龙,隔日1次,共5次;Y组灌喂补阳还五汤煎剂;B组灌喂等量生理盐水。在术后1d、3d、7d、14d、28d,采用BBB法对各组大鼠的运动功能进行评分。在3d、7d、15d,从每组随机抽取5只,做病理学检查。另取6只为正常对照(N)组。结果 在脊髓半横断损伤的实验中,伤后3周,损伤诱发的运动功能障碍,可以在相当的程度上恢复达到正常水平。伤后3dJ组的BBB分值较M和B组的高(P>0.05);伤后7d,J组的BBB分值较B组高(P<0.05);伤后2周时,J组的BBB分值与N组没有差异,而M和B组的与N组的有统计学差异。结论 在大鼠脊髓半横断损伤的实验中,投给脊复康可以加速其运动功能的恢复,其机制有待于进一步的探讨。     

中药脊髓康对脊髓损伤大鼠Nogo-NgR基因表达的影响

目的 :观察中药脊髓康对急性大鼠脊髓损伤后Nogo-A,Ng R基因表达的影响,探讨其对急性脊髓损伤的治疗保护作用及机制。方法:180只雌性SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、强的松组及脊髓康高、中、低剂量组,每组30只。假手术组:切除T10节段椎板,不损伤脊髓;其余组采用改良Allen法建立脊髓损伤模型。强的松组:术后至处死前每日灌胃强的松0.06 g/kg,首次在术后30 min给药。脊髓康高、中、低剂量组:在同一时间分别给予脊髓康,每日50、25、12.5 g/kg。术后3、7、14 d分批处死动物,取损伤节段脊髓9例,分别利用Western Blot及Real-time PCR检测脊髓组织中Nogo-A、Ng R蛋白及m RNA表达水平。结果:假手术组在各时间点Nogo-A及Ng R的表达维持在基础水平。与模型组比较,各时间点假手术组、强的松组及脊髓康中剂量组Nogo-A、Ng R蛋白表达差异均有统计学意义,脊髓康高、低剂量组差异无统计学意义。术后3 d,各治疗组Nogo-A、Ng R m RNA水平均低于模型组;术后7 d,模型组Nogo-A、Ng R m RNA水平升至最高,14 d时有所下降,但仍高于其他治疗组,其中强的松、脊髓康中剂量组效果最显著,两者之间差异无统计学意义。结论:在Allen急性大鼠脊髓损伤后,脊髓康能调节Nogo-A及Ng R基因表达,激活Nogo-Ng R信号通路,促进脊髓损伤后神经细胞再生。     

大鼠脊髓急性损伤后P53蛋白的表达

目的：探讨ｐ５３在脊髓损伤后神经细胞凋亡中,可能发挥的作用。方法：选择大鼠脊髓急性压迫损伤模型,采用ＨＥ、Ｎｉｓｓｌ染色和免疫组化方法,检测了损伤后３０ｍｉｎ、２ｈ、４ｈ、８ｈ、２４ｈ、４８ｈ和７２ｈ时间点脊髓组织。结果：在损伤后４ｈ损伤段及相邻节段脊髓中有大量ｐ５３阳性细胞,并在２４ｈ时达高峰。高倍镜下阳性细胞形态主要分为两种：一类细胞阳性信号主要位于细胞核内,另一类细胞阳性信号主要位于胞浆内。     

大鼠脊髓损伤后神经生长抑制因子Nogo-A的表达

目的研究神经生长抑制因子Nogo—A在大鼠脊髓损伤组织中不同时间点的表达情况．探讨Nogo—A基因在脊髓损伤时对神经再生的作用．方法建立急性脊髓损伤模型,采用原位杂交技术结合免疫组化技术检测。结果原位杂交法显示：Nogo-A mRNA在脊髓损伤后1d表达下降,3d升高,7d表达最高.免疫组化显示：Nogo—A含量在脊髓损伤后1d表达下降,3d开始上升,7d表达最高.结论Nogo-A在脊髓损伤后1d表达不明显,而后随时间的延长表达逐渐增加．表明脊髓损伤后Nogo-A表达先降低后升高．可能是造成成年哺乳动物损伤后神经再生障碍的重要原因之一.     

硫氧还蛋白对大鼠急性脊髓损伤后Nogo-A表达的影响

目的 观察经硬膜外注入硫氧还蛋白(Trx)对大鼠急性脊髓损伤(ASCI)后脊髓组织中Nogo-A表达的影响,探讨其对脊髓损伤的保护作用.方法 成年Wister大鼠56只,分为假手术组(A组,n=8)、损伤对照组(B组,n=24)和Trx治疗组(C组,n=24).B、c组用改良Allen's法以30 g/cm致伤大鼠T8脊髓制作损伤模型,同时在蛛网膜下腔置管,C组术后即刻和随后每天1次按0.75mg/kg从硬膜下导管推入硫氧还蛋白,B组在相同时问点给予等量生理盐水;A组打开椎板后蛛网膜下腔置管,不损伤脊髓,不给药.在术后3、7、14 d分别对其进行后肢运动功能BBB评分(n=8),评分完毕即处死动物,取受损节段脊髓组织行免疫组织化学观察脊髓组织中Nogo-A阳性细胞的表达,同时计数阳性细胞.结果 各时间点B组大鼠BBB评分均显著低于A组(P<0.01),伤后7、14 d时C组评分显著高于B组(P<0.05或0.01).B组在术后7与14日Nogo-A表达均显著高于A组(P<0.01);C组在伤后7、14 d的表达量显著低于B组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 大鼠急性脊髓损伤后Nogo-A显著升高,Trx能明显抑制Nogo-A的表达,可能促进轴突的再生.     

甲基强的松龙对大鼠急性脊髓损伤后Nogo-A表达的影响

目的：探讨大剂量甲基强的松龙（MP）对急性脊髓损伤（SCI）大鼠脊髓组织中Nogo-A蛋白表达的影响。方法：将56只成年SD大鼠分为正常对照组（A组,n=8）、急性脊髓损伤组（B组,n=24）和急性脊髓损伤后大剂量MP治疗组（C组,n=24）,C组在损伤后早期从尾静脉注射大剂量MP治疗。分别在术后3、7、14d对B、C组大鼠后肢运动功能行BBB评分,再在各时间点处死动物,取受损节段脊髓行HE染色及免疫组化染色观察形态学变化和Nogo-A在脊髓组织中的分布特点;同时应用Western-blot方法测定各组相应时间点Nogo-A表达量,并与A组比较。结果：B、C组大鼠在损伤后各个时间点后肢运动功能均有一定程度的恢复,Nogo-A蛋白在各组大鼠脊髓组织中均呈阳性表达,分布于神经细胞的细胞浆和脊髓神经纤维周围呈包裹神经纤维的状态。B、C组各个时间点Nogo-A表达均显著高于A组（P〈0.05）,7d时最高,14d时的表达量仍高于正常组;C组在各个时间点的表达量显著低于B组,差异有显著性（P〈0.05）。结论：大鼠急性脊髓损伤后Nogo-A显著升高,早期应用大剂量MP对Nogo-A的表达具有明显的抑制作用。     

自噬蛋白p62在急性脊髓损伤大鼠脊髓组织中的表达

目的观察p62在早期急性脊髓损伤(SCI)模型大鼠脊髓组织中的表达变化,探讨p62在急性SCI的作用。方法将SD大鼠随机分为假手术组和造模后1、3、7、14 d组,每组6只。采用高空重物坠落击打方法造成大鼠SCI。采用Basso、Beattie、Bresnahan(BBB)评分法评估大鼠神经功能,取损伤的脊髓组织进行HE染色,观察病理学改变。通过实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法和免疫组织化学方法检测急性SCI后大鼠脊髓组织中p62的表达变化。结果造模后1、3、7、14 d组BBB评分分别为(2.00±0.89)分、(4.67±1.03)分、(7.83±0.75)分、(14.50±1.05)分,均低于假手术组(21.00分),差异有统计学意义(P 0.05)。造模后1、3、7、14 d组损伤的脊髓组织神经元和白质髓鞘发生肿胀,随时间的延长逐渐出现变性和坏死。造模后1、3、7、14 d组p62表达逐渐增加,并呈持续增长趋势。结论 p62在大鼠发生急性SCI后表达持续增加,提示p62在急性SCI后发挥一定作用。     

甲强龙对兔急性脊髓损伤后血、组织髓鞘碱性蛋白表达的影响

目的探讨大剂量甲强龙(methylprednisolone,MP)对兔急性脊髓损伤后(SCI)血清及髓鞘碱性蛋白(myelinbasicprotein,MBP)表达的影响。方法45只家兔分成3组,Ⅰ组为全椎板切除 生理盐水对照组,Ⅱ组为不完全性SCI 大剂量MP冲击治疗组。Ⅲ组为不完全性SCI 生理盐水。用改良Allens法造成Ⅱ、Ⅲ组不完全性SCI模型,通过ELISA、MBP免疫组化染色进行对比观察血及脊髓组织中MBP的变化。同时进行下肢运动功能评分和脊髓诱发电位测定比较神经功能改变情况。结果大剂量MP治疗组的血清中髓鞘碱性蛋白浓度较单纯损伤组明显下降,病理切片上组织的MBP髓鞘染色明显增加,病理损害减轻。结论大剂量甲强龙(MP)对能下调SCI血中的MBP浓度,减少损伤脊髓髓鞘组织中MBP的释放,从而减轻髓鞘组织的退变促进神经功能恢复。     

补阳还五汤对大鼠急性上颈脊髓损伤后血小板活化因子的影响

目的 :观察补阳还五汤对大鼠急性上颈脊髓损伤(SCI)模型大鼠脊髓组织血小板活化因子(DAF)表达的影响。方法:将SPF级别3月龄Wistar大鼠60只,雌性,随机分成假手术组、模型组、甲强龙组、补阳还五汤组(即中药组),每组15只。造模后第1天,甲强龙组经尾静脉注射治疗共24 h,首剂量30 mg/kg,之后剂量5.4 mg/kg·h,每4 h给药1次;中药组以中剂量补阳还五汤颗粒剂,配制成含颗粒剂2.00 g/ml的水溶液,每日3.5 g/kg灌胃,相当于成人用量的1倍;模型组和假手术组予等体积生理盐水灌胃,均每日2次,用药2周。治疗后第1、3、7、14天分别以BBB分级法评价神经功能恢复情况;采用双抗体夹心法(ELISA法)于术后1、7、14 d检测脊髓损伤节段PAF的表达。结果:治疗后第1天,模型组、甲强龙组和中药组BBB评分明显降低,与假手术组比较差异有统计学意义(P0.01),但3组间比较差异无统计学意义(P0.05)。治疗后第7、14天评分结果,中药组与甲强龙组大鼠四肢运动功能评分明显高于模型组(P0.01),而中药组与甲强龙组比较差异无统计学意义(P0.05)。治疗后7、14 d,中药组与甲强龙组大鼠PAF值与模型组比较明显下降(P0.01),而中药组与甲强龙组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:急性上颈脊髓损伤后以补阳还五汤治疗,可以改善SCI大鼠四肢运动功能,其作用机制可能与通过降低脊髓组织中PAF表达明显有关。     

苦参素对大鼠急性脊髓损伤后热休克蛋白47表达的影响

目的探讨苦参素治疗大鼠急性脊髓损伤(SCI)的机制。方法用30只Wistar大鼠制作钳夹型SCI模型,随机分成正常组、假手术组、SCI组、对照组和治疗组,在SCI后3d及每周评价BBB评分,并在第8周用免疫组化方法分析脊髓中热休克蛋白47(HSP47)的表达情况。结果正常组和假手术组Wistar大鼠脊髓组织低表达胶质细胞酸性蛋白(GFAP)和HSP47,高表达神经丝蛋白(NF),在SCI后GFAP和HSP47表达明显提高(P<0.05),NF表达明显降低(P<0.05)。苦参素治疗后,GFAP和HSP47表达降低(P<0.05),NF表达升高(P<0.05)。结论苦参素对Wistar大鼠SCI具有治疗作用,很可能通过抑制HSP47的表达发挥治疗作用。     

大鼠胚胎脊髓移植后对损伤脊髓神经营养因子表达的影响

目的：研究大鼠胚胎脊髓移植对损伤脊髓神经营养因子表达的影响。方法：将孕１４ｄ大鼠胚胎脊髓组织移植到成鼠半切洞损伤的脊髓中,手术后采用免疫组织化学技术,对损伤脊髓组织中神经生长因子（ＮＧＦ）、脑源性神经生长因子（ＢＤＮＦ）、神经生长因子３（ＮＴ－３）、睫状神经生长因子（ＣＮＴＦ）进行定量分析。结果：移植组神经营养因子１周、２周、４周、都明显高于单纯损伤组,４周时移植组ＢＤＮＦ表达高于其它各组（Ｐ〈０     

胚胎脊髓组织移植修复急性脊髓损伤的研究进展

成年哺乳动物脊髓损伤（ｓｐｉｎａｌｃｏｒｄｉｎｊｕｒｙ,ＳＣＩ）导致的感觉与运动功能障碍,至今仍少有补救措施。近年来,利用胚胎脊髓（ｆｅｔａｌｓｐｉｎａｌｃｏｒｄ,ＦＳＣ）组织移植修复ＳＣＩ取得了一些进展,本文仅就此方面的研究作一扼要综述。１历史与现...     

FTY720对大鼠急性脊髓损伤后RhoA表达的影响

目的观察大鼠急性脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后芬戈莫德(fingolimod,FTY720)对RhoA表达的影响,进一步探讨FTY720治疗SCI的可能机制。方法采用改良Allen’s法建立大鼠急性SCI模型。雌性SD大鼠75只,随机分为假手术组(n=15)、损伤组(n=30)和FTY720组(n=30)。FTY720组伤后30min一次性腹腔注射FTY7200.5mg/kg,假手术组和损伤组以相同方法给予浓度为0.9%的生理盐水。分别于伤后1天、3天、7天、14天及21天,应用RT-PCR和Western印迹法分别检测RhoA mRNA和RhoA蛋白的表达。结果损伤组RhoA mRNA和蛋白的表达于伤后3天开始明显增加,7天达到高峰,21天仍维持高水平表达;在同一时间点,与FTY720组和假手术组比较,差异有统计学意义(P0.05)。FTY720组伤后1天、3天和7天的RhoA表达高于假手术组(P0.05)。假手术组各时间点RhoA表达维持在较恒定水平。结论大鼠急性SCI后RhoA表达增加,FTY720可能通过抑制SCI后RhoA的表达,以达到减轻继发性SCI、促进脊髓神经功能恢复的目的。     

高血糖对急性脊髓损伤后果的影响

目的探讨给予高渗糖对急性脊髓损伤后神经学功能恢复的影响。方法将16只健康禁食的大白兔随机分为两组,采用Alien’s脊髓损伤模型,在脊髓损伤前一组动物接受50％高渗糖0．5g／kg体重（处理组）,另一组采用等容量生理盐水对照（对照组）,脊防损伤前后采股动脉血测定血糖并于损伤后3天进行神经学评分。结果处理组与对照组相比,血糖水平显著增高（P＜0．04）,72小时后的神经功能评分也明显不如对照组（P＜0．01）。结论急性脊髓损伤期间的高血糖可加重脊髓继发性损伤。     

外源性供氧对脊髓损伤后继发性脊髓水肿的影响

目的　观察外源性供氧对脊髓损伤组织学的影响。方法　采用Allen法于兔L2 椎体水平造成急性脊髓损伤。对照组不予治疗 ,携氧复合液治疗组和复合液治疗组兔分别在伤后 30min开始给药。于伤后 48h、3、7d、4周分别从各组中取 5只兔 ,进行脊髓组织含水量、丙二醛(MDA)及形态学观察。结果　伤后 48h、3、7d携氧复合液组伤段脊髓组织含水量分别为 (69.1 4±0 .92 ) %、(71 .93± 0 .87) %、(71 .63± 1 .0 1 ) % ;脊髓组织MDA含量分别为 (2 8.54± 5 .98) μmol/g、(2 7.81± 3 .64) μmol/g、(2 6.1 4± 4 .2 6) μmol/g,均显著低于对照组 (P <0 .0 1 )。组织形态学检查携氧复合液组的病理改变较对照组轻。结论　脊髓损伤后早期外源性供氧对继发性脊髓损伤有保护作用。     

大鼠急性脊髓损伤后内质网应激相关蛋白CHOP的表达及其意义

目的:探讨内质网应激相关蛋白CHOP在急性脊髓损伤中的表达及其意义.方法:48只健康SD大鼠随机分为实验组与对照组(每组24只),实验组采用Allen法制作急性脊髓损伤模型,对照组只切开椎板不损伤脊髓.分别十伤后3h、1d、3d、7d时(每个时间点6只)应用改良Tarlov评分法评价其神经功能;然后处死动物,取受损节段脊髓行HE染色及免疫组化染色,观察形态学变化和CHOP在脊髓组织中的分布特点;并应用TUNEL方法检测神经细胞凋亡情况.其量的评定借助于IPP(Image-Pro Plus 6.0)软件,结果分别用累积光密度(integrated optical density,IOD)及平均光密度(mean density)表示.结果:对照组大鼠均末见明显瘫痪,实验组出现不同程度的下肢功能障碍,对照组各时间点的Tadov评分均高于实验组(P<0.01).对照组各时间点未见明显坏死细胞和细胞凋亡,实验组出现不同程度的细胞坏死和凋亡.实验组CHOP表达各时间点均明显高于对照组(P<0.01),实验组内CHOP表达1d增加,3d达到高峰,7d减少.实验组内细胞凋亡1d时增加,3d达到高峰,7d减少,且3h<1d<3d>7d(P<0.01).CHOP表达与细胞凋亡在时间上具有一致性,相关系数为0.644.结论:急性脊髓损伤能够诱导CHOP表达,CHOP表达的增高可能与内质网应激诱导的神经细胞凋亡有关.     

神经营养素3对大鼠急性脊髓损伤后Fas表达的影响

[目的]探讨神经营养素3（NT-3）对脊髓损伤保护作用的分子机制。[方法]105只SD大鼠随机分成3组：对照组（生理盐水组），实验组（NT-3组），假手术组。用改良Allen＇s WD法以30gcm致伤SD大鼠制作大鼠全瘫模型，经蛛网膜下腔导管于术后即刻、4、8、12、24h、3、7d注入NT-320μl（含NT-3200ng），对照组在相同时间点给予等容积生理盐水，假手术组只打开椎板后蛛网膜下腔置管，不致伤，不给药。采用免疫组织化学方法检测Fas蛋白在脊髓神经元的表达变化情况。[结果]假手术组中Fas蛋白弱阳性表达，对照组中Fas蛋白4h即出现强阳性表达，24h达高峰，实验组与对照组相比Fas蛋白表达明显减少（P〈0．01）。[结论]NT-3能通过抑制Fas蛋白的表达抑制脊髓损伤后神经元凋亡，从而保护损伤的脊髓组织，这可能是NT-3对脊髓损伤具有保护作用的机制之一。     

bFGF对大鼠脊髓损伤后c-fos mRNA表达的影响

目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF)对大鼠脊髓损伤后c-fosmRNA表达的影响。方法：采用Allen's法造成大鼠Ts脊髓损伤模型,用原位杂交方法检测神经元c-fosmRNA的表达。结果：脊髓损伤后神经元c-fosmRNA表达较正常末损伤神经元显著增加,表达高峰出现在损伤后1h,bFGF能显著抑制损伤后神经元c-fosmRNA的异常表达。结论：应用外源性bFGF抑制了脊髓损伤后的c-fos基因表达,保护了神经元并抑制了继发性损害的发生,是bFGF保护脊髓损伤可能的作用机理。