转化生长因子β1和胰岛素样生长因子1对体外培养人退变髓核细胞生物学活性的影响

目的：观察在体外培养条件下转化生长因子β1（TGF-β1）和胰岛素样生长因子1（IGF—1）对人退变髓核细胞生物学活性的影响。方法：体外培养人退变髓核细胞，台盼蓝染色法测定活细胞率。将每份髓核细胞样本分为对照组、TGF-β1组和TGF-β1＋IGF—1组。采用考马斯亮蓝法测定TGF—β1和IGF—1干预后第0、2、4、6天细胞内总蛋白含量。采用免疫组织化学和免疫荧光化学染色方法测定细胞在TGF-β1和IGF-1干预后0～6d合成Ⅱ型胶原的情况。结果：体外培养人退变髓核细胞的活细胞率为90％～95％。干预后第4、6天TGF-β1组和TGF-β1＋IGF—1组与对照组比较、TGF-β1＋IGF—1组与TGF-β1组比较细胞内总蛋白含量均显著增加（P〈0.05），TGF—β1＋IGF—1组Ⅱ型胶原的合成较对照组显著增加（P〈0．05）；干预后第6天TGF—β1组和TGF-β1＋IGF—1组与对照组比较、TGF-β1＋IGF—1组与TGF-β1组比较Ⅱ型胶原均显著增加（P〈0.05）。结论：一定浓度的TGF-β1能够促进人退变髓核细胞合成Ⅱ型胶原，改善其生物学活性，合用TGF-β1和IGF—1上述作用更加明显。     

转化生长因子β1不同作用时间对体外培养小鼠失神经骨骼肌肌源性干细胞内结缔组织生长因子的影响

目的观察转化生长因子β1（transforming growth factor β1,TGF-β1）对失神经骨骼肌肌源性干细胞（muscle derived stem cell,MDSC）内结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）的影响,探讨TGF-β1-CTGF通路致失神经骨骼肌纤维化的作用及机制。方法采用差速贴壁法分离培养并鉴定小鼠失神经骨骼肌MDSC,用浓度为10ng/ml的TGF-β1培养24h前、后分别作表型鉴定。体外MDSC分别在TGF-β1浓度为10ng/ml的培养基内培养0、3、6、12、24和48h,按时间点分为A～F组,Western blot检测CTGF蛋白表达,实时荧光定量RT-PCR检测CTGF mRNA水平。结果免疫组织化学观察示,加入TGF-β1干预前MDSC高度表达Sca-1,阳性率96%;TGF-β1干预后Sca-1表达阳性率明显降低,阴性率〉99%。Western blot检测A～F组CTGF与β-actin的平均吸光度（A）值比值分别为0.788±0.123、1.063±0.143、2.154±0.153、2.997±0.136、3.796±0.153和3.802±0.175,A～D组间两两比较差异均有统计学意义（P〈0.05）,D～F组间两两比较差异无统计学意义（P〉0.05）。A～F组RT-PCR的Ct值分别为1.659±0.215、1.897±0.134、2.188±0.259、2.814±0.263、2.903±0.126和3.101±0.186,A～D组组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）,E组和F组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论TGF-β1能促进体外培养小鼠MDSC生成CTGF,在3～12h时间范围内呈时间依赖关系。     

转化生长因子β1对人腹膜间皮细胞结缔组织生长因子的影响

目的 观察转化生长因子(TGF)β1对人腹膜间皮细胞(HPMCs)结缔组织生长因子(CTGF)的mRNA和蛋白表达影响并探讨其可能的机制。方法 原代培养HPMCs，用5ng／ml TGF-β1刺激第3代细胞，采用免疫组织化学染色、Western印迹、ELISA和RT-PCR等方法，观察CTGF的mRNA和蛋白表达、纤连蛋白(FN)和Ⅰ型胶原(ColⅠ)的mRNA和蛋白表达，细胞内磷酸化Smad2／3(p-Smad2／3)的蛋白表达以及在细胞内的迁移。结果 (1)刺激组CTGF的mRNA表达与对照组比均显著增加，其中48h为峰值；对照组细胞内仅有少量CTGF的蛋白表达，在TGF-β1刺激后24h表达明显增加，48h达峰值。(2)刺激组FN和ColⅠ的mRNA表达与对照组比均呈时间依赖性显著增加，上清液FN和细胞内ColⅠ的蛋白表达与对照组比也呈时间依赖性显著增加。(3)对照组细胞内几乎不表达p-Smad2／3(阳性细胞率3％)，在刺激后15min表达增加(29％)，细胞着色主要分散在胞质中；1h增加最明显(84％)，细胞着色加深且集中在胞核及周边；2h明显回落(37％)，细胞着色转淡并又分散至胞质中。结论TGF-β1在致腹膜纤维化过程中诱导了HPMCs内CTGF的转录和蛋白表达，可能与TGF-β1激活了HPMcs内Smad信号通路有关。     

转化生长因子-β1对体外培养的人毛囊干细胞生物学特性的影响

目的 观察转化生长因子-β1(TGF-β1)对体外培养的毛囊干细胞(HFSCs)生物学特性的影响.方法 体外分离培养人HFSCs,观察其在10-μg/L TGF-β1条件培养基下的细胞形态变化,噻唑蓝(MTT)比色法于24、48、72 h分别检测加入条件培养基前后细胞增殖能力,细胞接近铺满时划痕,并于0、24、48、72 h后用目镜测微尺测量划痕宽度检测迁移能力,将细胞接种于Transwell小室上层,下层加入含10 μg/L TGF-β1条件培养基,48 h后计数穿透细胞数,免疫荧光化学方法检测加入条件培养基前后角蛋白19、β-整合素、E钙黏蛋白、N钙黏蛋白、波形蛋白的表达.结果在TGF-β1作用下,HFSCs之间的紧密连接消失,细胞由圆形或多角形向梭形细胞转变,MTT结果显示,在TGF-β1作用下HFSCs各时间点A值与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),细胞划痕实验结果显示,TGF-β1能够促进细胞迁移,对照组差异有统计学意义(P<0.01).Transwell穿透实验结果表明,加入TGF-β1后,HFSCs细胞定向迁移穿透基底膜数量与对照组比较显著增多(47.9±8.8比35.8±6.7,P<0.01),免疫荧光结果显示TGF-β1能够降低角蛋白19、β-整合素和E钙黏蛋白表达,而N钙黏蛋白、波形蛋白的表达增加.结论 TGF-β1通过诱导体外培养的HFSCs上皮间质转化而促进其迁移.     

转化生长因子β1和结缔组织生长因子在狼疮肾炎肾小管间质中的表达

目的 研究狼疮性肾炎肾小管间质转化生长因子β1（TGF－β1）和结缔组织生长因子（CTGF）的表达特点及其意义。方法 应用免疫组织化学方法比较原发性肾小球肾炎微小病变型（MCD）和狼疮肾炎（LN）肾小管间质中TGF－β1和CTGF的表达及分布以及浸润细胞，α－平滑肌肌动蛋白（SMA）的表达特点。结果 TGF－β1及CTGF可不同程度地表达于LN的肾小球和肾小管间质，且较MCD的表达普遍增高，肾间质TGF－β1表达量与CTGF的表达量之间的相关系数r=0.5316,P=0.023。LN患者肾间质内CD3阳性细胞，CD68阳性细胞，PCNA阳性细胞以及α－SMA的表达明显高于MCD患者。α－SMA的表达程度与肾小管间质纤维化程度存在正相关关系，r=0.436,P=0.032。结论 LN肾间质内TGF－β1和CTGF表达增高，可能与LN肾间质病变及炎性细胞的浸润有关。     

兔髓核细胞体外培养和重组人转化生长因子-β1对其代谢影响的研究

目的：探讨体外单层和立体培养兔髓核细胞时的变化及重组人转化生长因子-β1（rhTGF-β1，10ng／ml）对其代谢的影响。方法：体外培养兔髓核细胞，分为3组。A组，单层培养组；B组，Ⅱ型胶原支架立体培养组；C组，Ⅱ型胶原支架立体培养＋rhTGF-β1（10ng／m1）组。利用倒置显微镜、扫描电镜、RT-PCR、^3H-proline掺入法观察髓核细胞形态学、基因表达水平和总胶原合成的变化。结果：B、C组兔髓核细胞由A组的多角形转为类圆形；与A组相比，B组Ⅱ型胶原、集聚蛋白多糖基因表达水平升高（P〈0．05），总胶原合成升高（P〈0．01）。与B组相比，C组Ⅱ型胶原、集聚蛋白多糖、核心蛋白多糖基因表达水平增高（P〈0．01、P〈0．01、P〈0．05），总胶原合成升高（P〈0．01）。结论：兔髓核细胞由单层培养转到Ⅱ型胶原支架上培养时其基因表达和总胶原合成增强。rhTGF-β1（10ng／ml）增强立体培养的兔髓核细胞基因表达和总胶原合成。     

转化生长因子β1诱导肾间质成纤维细胞表型转化及其对结缔组织生长因子基因表达的影响

目的 研究转化生长因子β1（transforming growth factor beta-1,TGF-β1）诱导大鼠正常肾间质成纤维细胞（NRK-49F）表型转化过程中结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）基因表达的变化.方法 以不同浓度的TGF-β1（0、0.5、1、2、5、10 ng/ml）刺激NRK-49F细胞,分别应用MTT比色法、Western Blot、Northern Blot方法,检测TGF-β1刺激后肾间质成纤维细胞的增殖、Ⅰ型、Ⅲ型前胶原mRAN的表达、细胞表型标志物α-SMA mRNA及蛋白质表达、CTGFmRNA的表达变化.结果 1 ng/ml浓度以上TGF-β1能显著促进NRK-49F细胞增殖,上调Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达水平,诱导肌成纤维细胞表型标志α-SMA mRNA及蛋白质的表达,显著上调CTGF mRNA的表达水平（P＜0.01或P＜0.05）;以上效应均呈浓度依赖性.同时CTGF mRNA表达水平的增高与细胞表型转化的程度相一致.结论 TGF β1能诱导肾间质成纤维细胞发生表型转化,并促进了细胞增殖及细胞外基质的合成;该效应与TGF β1显著上调CTGF的基因表达一致.     

转化生长因子-β1介导的足细胞损伤

肾小球足细胞既是免疫介导,也是非免疫介导损伤耙点,足细胞的损伤是导致大量蛋白尿和肾小球硬化的关键,机制十分复杂.转化生长因子-β1是多功能的细胞因子,近年来的研究发现其在介导足细胞凋亡、脱落及功能异常等方面发挥着重要作用.     

转化生长因子β1对肾小管上皮细胞中结缔组织生长因子基因启动子活性的影响

目的探讨转化生长因子[β1（TCF-β1）对人近端肾小管上皮细胞系HK-2中结缔组织生长因子（CTGF）基因启动子活性的调控作用，以及丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）途径对该生长因子作用的影响。方法构建含有人类CTGF基因启动子的报告基因pCTGF-luc，将其瞬时转染HK-2细胞。通过检测荧光素酶的活性观察TGF-β1和MAPK途径抑制剂对CTGF基因启动子活性的影响。结果TGF-β1以剂量和时间依赖方式上调HK-2中CTGF基因启动子的活性。最佳刺激浓度是5ng／ml，最佳刺激时间为12h，荧光素酶相对活性分别为对照组的1．82倍和2．10倍（P〈0．05）。应用PD98059、SB203580和SP600125分别特异性抑制MAPK途径的胞外信号调节蛋白激酶（ERK）、蛋白激酶p38（p38MAPK）和c-Jun-氨基末端激酶（JNK）通路，对TGF-β1上调CTGF启动子活性的作用有不同影响。PD98059显著增加HK-2中pCTGF-luc的基础活性．并在一定浓度范围内（0．5～10μmol／L）促进TGF-β1的上调作用。SB203580对pCTGF-luc基础活性无影响，但以剂量依赖方式显著抑制TGF-β1的激活效应。而SP600125对基础状态和TGF-β1刺激下CTGF基因启动子活性无影响。结论TGF-β1以剂量和时间依赖方式上调HK-2中CTGF基因启动子活性，在转录水平调节CTGF表达。MAPK途径的ERK和p38MAPK通路可影响TGF-β1的这一调控作用。     

结缔组织生长因子介导转化生长因子β1促进瘢痕成纤维细胞转分化的研究

目的 了解结缔组织生长因子(CTGF)介导TGF-β1发挥促人增生性瘢痕Fb(HSFb)转分化的作用.方法 体外培养人HSFb,取5份细胞标本分别加入不同浓度TGF-β1(0、2.5、5.0、7.5、10.0 ng/mL),作用48 h后待测.余下标本分为:空白对照组;CTGF刺激组,培养液中加入终浓度10.0 ng/mL重组人CTGF;TGF-β1刺激组,培养液中加入终浓度10.0 ng/mL重组人TGF-β1;CTGF反义寡脱氧核苷酸(ASODN)转染组,细胞转染CTGF ASODN后,加入培养液;CTGF ASODN转染+TGF-β1刺激组,细胞转染CTGF ASODN后2 h,加人含终浓度10.0 ng/mL重组人TGF-β1的培养液.蛋白质印迹法分析不同浓度TGF-β1刺激对细胞CTGF表达的影响,比较各组α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达变化;流式细胞仪检测α-SMA阳性细胞百分率.结果 TGF-β1浓度为10.0 ng/mL时,CTGF的表达明显高于未受刺激的细胞(P<0.05).CTGF刺激组与TGF-β1刺激组α-SMA表达明显高于空白对照组(P<0.01).CTGF ASODN转染组以及CTGF ASODN转染+TGF-β1刺激组α-SMA表达与空白对照组接近(P>0.05).上述各组细胞α-SMA阳性细胞百分率依次为(10.8±2.8)%、(29.1±4.0)%、(28.7±4.8)%、(10.7±2.3)%、(14.3±2.9)%,统计学分析结果类似于α-SMA表达.结论 CTGF是TGF-β1发挥促人HSFb转分化的重要下游效应分子之一.     

转化生长因子-β对人肾小球系膜细胞结缔组织生长因子及细胞外基质成分表达的影响

目的:探讨转化生长因子-β(TGF-β)对人肾小球系膜细胞(HMCs)结缔组织生长因子(CTGF)及细胞外基质(ECM)成分表达的影响.方法:应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹技术,观察不同时间TGF-β1对HMCs CTGF mRNA及其蛋白质表达的影响,同时观察对Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原和纤维结合蛋白(FN)mRNA表达的影响.结果:在正常培养情况下,HMCs有CTGF mRNA及其蛋白质的表达.HMCs在TGF-β1刺激后,CTGFmRNA表达明显增加,6 h达到高峰,可持续增高到24 h;CTGF蛋白表达12 h达到高峰,可持续增高至24 h.Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原mRNA表达逐渐增加,24 h明显增加并达到高峰.FN mRNA12 h达到高峰,24 h后开始回落.结论:HMCs可表达CTGF.TGF-β可诱导体外培养的HMCsCTGF及ECM成分高表达.     

转化生长因子β1短发夹RNA对白蛋白刺激人肾近曲小管上皮细胞细胞因子表达的影响

目的 研究pcDU6载体质粒介导的转化生长因子β1（TGF-β1）短发夹RNA（shRNA）对人血清白蛋白（HSA）致人肾近曲小管上皮细胞（HK2细胞）增殖，TGF-β1、结缔组织生长因子（CTGF）和纤连蛋白（FN）表达的影响，并探讨有关机制。方法 构建TGF-β1shRNA的pcDU6载体质粒，体外培养HK2细胞株。采用脂质体转染将表达TGF-β1shRNA的pcDU6质粒载体（pcDU6-A1-A2和peDU6-B1-B2）分别导人实验组细胞。用HSA（5g／L）刺激HK2细胞12h或24h。四甲基偶氮唑盐（MTF）比色法测定细胞增殖水平。RT-PCR半定量分析HK2细胞中TGF-β1、CTGF和FNmRNA的表达水平；双抗夹心酶联免疫吸附法检测HK2细胞培养液中TGF-β1及FN蛋白质水平。结果 HK2细胞在HSA刺激下，其TGF-β1、CTGF及FNmRNA的表达明显上调，培养液中TGF-β1和FN的蛋白质含量亦明显升高（P〈0．05）。与pcDU6空载体组比较，pcDU6载体质粒介导的TGF-β1shRNA干扰组TGF-β1、CTGF及FNmRNA的表达明显下调（P〈0．05）。TGF-β1shRNA转染HK2细胞后12h或24h，细胞培养液中TGF-β1和FN蛋白质含量明显下降，HK2细胞增殖被部分抑制（P〈0．05）。在细胞增殖、TGF-β1、CTGF及FN基因表达方面，TGF-β1shRNA干扰组组间比较，以及pcDU6空载体转染组与HSA刺激组比较，差异均无统计学意义。结论 peDU6载体质粒介导的TGF-β1shRNA能够明显抑制HSA刺激下HK2细胞增殖、TGF-β1、CTGF和FN基因的表达。HSA刺激HK2细胞增殖及CTGF和FN基因的过表达可能通过TGF-β1介导。     

尿液TGF-β1对人尿道狭窄瘢痕成纤维细胞CXCR3表达的影响研究

目的：探索尿道狭窄复发患着尿液中转化生长因子β1（TGF—β1）水平的变化以及其与尿道疤痕组织细胞中CXC趋化因子受体3（CXCR3）表达水平变化的相关性。方法：选取尿道狭窄复发患者、尿道狭窄复发同时合行膀胱造瘘患者和健康者各50例,采用ELISA法定量分析三组患者尿液中TGF-β1的浓度．并通过Transwell小率实验研究不同浓度TGF-β1对成纤维细胞辽徙能力的影响。采用QPCR和流式细胞仪检测不同患者组成纤维细胞CXCR3受休的表达情况,并进一步探究高浓度TGF-β1对不同患者组成纤维细胞CXCR3受体表达的影响。采用重组pLVX-shRNA2-SiTβRⅡ真核载体与成纤维细胞进行转染。通过Q-PCR和流式细胞学方法评估转染后细胞TGF-β1受体与CXCR3受体的相互变化情况。结果：尿道狭窄复发组和狭窄复发并造瘘组患者尿液TGF-β1浓度明显高于正常组（P〈0．05）,相成各组成纤维细胞丧面CXCR3受体明显低于正常组。Transwell实验证实随着TGF-β1浓度的逐步升高,成纤维细胞的迁移能力得以相应增强,同时高浓度TGF-β1溶液环境町以显著降低各组成纤维细胞CXCR3的表达（P〈0．05）。真核载体转染细胞后,相关Q—PCR和流式细胞学方法也提示TβRⅡ表达的下调可以伴随CXCR3表达显著增强。结论：在尿道狭窄复发的进程中,尿液中TGF-β1浓度的变化可能起到非常重要的作用。相关成纤维细胞表面CXCR3受体表达水平可能受其影响而可能现显著的下调性变化,最终导致尿道周同组织瘢痕增生。     

丝裂原活化蛋白激酶类和蛋白激酶C在转化生长因子β1诱导肾小管细胞结缔组织生长因子表达中的作用

目的了解转化生长因子β1（TGF-β1）诱导肾小管细胞结缔组织生长因子（CTGF）表达的机制，特别是蛋白激酶C（PKC）和丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）在CTGF基因表达中的作用及其对Smad磷酸化的影响。方法分别应用PKC抑制剂G06850以及MAPK的3个组成成分ERK、JNK和p38MAPK的抑制剂PD98059、U0126、SP600125和SB203580阻断相应通路，观察其对TGF．131诱导的CTGF表达以及Smad2／Smad3磷酸化的影响。结果TGF-β1（5μg／L）以时间依赖方式诱导HK-2细胞中Smad2／Smad3的磷酸化，从基础值0．87±0．09上升至2h时高峰2．350±0.11。PKC抑制剂G06850（5μmol／L）和ERK抑制剂PD98059（10μmol／L）、U0126（10μmol／L）可部分抑制TGF-β1诱导的CTGF表达，而p38MAPK抑制剂SB203580（20μmol／L）和JNK抑制剂SP600125（10μmol／L）对TGF-β1诱导的CTGF的表达无影响。PKC抑制剂G06850（5μmol／L）可减少TGF-β1诱导的Smad2／Smad3磷酸化，而ERK抑制剂PD98059（10μmol／L）和U0126（10μmol／L）对Smad2／Smad3的磷酸化没有影响。结论在肾小管上皮细胞中，TGF-β1诱导CTGF的表达需要PKC和Ras／MEK／ERK的参与。PKC以Smad依赖的方式参与肾小管上皮细胞中TGF-β1诱导的CTGF的表达，而Ras／MEK／ERK对CTGF表达的调节不依赖于Smads。     

转化生长因子-β转导通路在良性胆管狭窄形成中的作用

目的 观察转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad/结缔组织生长因子(CTGF)通路中各因子在良性狭窄胆管组织中的表达,探讨其信号转导通路在良性胆管狭窄形成机制中的作用.方法 采用免疫组织化学SABC法和原位杂交法检测TGF-β1,TGF-β受体I(TβR Ⅰ),TGF-β受体Ⅱ(TβRⅡ),Smad4,Smad7,CTGF蛋白以及CTGF mRNA在23例良性胆管狭窄组织及6例正常胆管组织中的表达,分别计算阳性表达率,并分析TGF-β1,Smad4及CTGF之间的相关性.结果 TGF-β1、TβR Ⅰ、TβRⅡ、Smad4、CTGF蛋白和CTGFmRNA在23例胆管良性狭窄患者中的阳性表达率分别为91.3%、82.6%、87.O%、78.3%、82.6%、65.2%,高于其在6例正常胆管中的表达且差异有统计学意义(P＜0.05),Smad7在胆管良性狭窄患者中的阳性表达为70.0%,与正常胆管比较升高但差异无统计学意义(P＞0.05).TGF-β1、Smad4及CTGF在良性狭窄胆管的阳性表达呈正相关.结论 TGF-β1/Smad/CTGF信号转导通路高表达是导致良性胆管狭窄形成的重要因素.     

转化生长因子-β1和胰岛素样生长因子-1对人髓核细胞体外增殖活性的影响

目的：研究转化生长因子-β1（TGF—β1）和胰岛素样生长因子-1（IGF—1）单独及联合应用对人髓核细胞体外增殖活性的影响，并观察其量效和时效关系。方法：体外分离培养人髓核细胞．将传2代细胞种于96孔板，采用噻唑蓝（MTT）比色法，观察TGF—β1和IGF—1在1％和10％血清浓度下对人髓核细胞体外增殖的调节作用及其剂量、时间与作用效果的关系。结果：在1％血清条件下，IGF—1的作用不显著，TGF—B1具有促增殖作用。在10％血清条件下，TGF—B1和IGF—1均能提高细胞的增殖活性，并且在有效浓度范围内呈剂量效应关系，TGF—B1的作用强于IGF—1。二者联合应用效果更显著。结论：TGF—B1和IGF—1均能不同程度地促进入髓核细胞的体外增殖，其效应在一定范围内与剂量和时间呈正相关．联合应用促进增殖作用更显著。     

胰腺组织修复中转化生长因子β作用的研究

急性胰腺炎发病机理不十分清楚,治疗也较困难.过去对胰腺炎的损害因素研究较多,Chiari于1886年提出"胰酶自身消化"学说,Opie提出"胆管阻塞"说[1],近年随着新概念新技术的不断引入,微循环障碍、缺血-再灌注损伤、内毒素、氧自由基、一氧化氮、炎症前细胞因子(TNF-α,IL-1,IL-6)等对胰腺组织的损害得到了深入研究,并且针对其不同的发病机制,在治疗方面进行了探索,取得一定效果.     

转化生长因子-β1和结缔组织生长因子在慢性胰腺炎组织中的表达及其意义

我们通过建立大鼠慢性胰腺炎 (CP)模型 ,用免疫组织化学技术 ,对转化生长因子 β1(TGF β1)和结缔组织生长因子(CTGF)在CP形成过程中的表达进行动态观察 ,探讨其作用。一、材料和方法1.试剂与仪器 :三硝基苯磺酸Sigma公司产品 ,恒流静脉泵TE 3 11型 ,Teru mo公司产品 ,兔抗大鼠TGF β1单克隆抗体 ,兔抗大鼠Ⅰ型胶原多克隆抗体SantaCruz公司产品 ,兔抗大鼠CTGF单克隆抗体和EnVisionTM试剂盒购自Dako公司。2 .模型制备[1] :48只SD大鼠 (必凯公司 ) ,体重 2 5 0～ 3 0 0 g ,随机分为两组 :(1)CP组 (n =2 4)。氯胺酮 (10 0mg/kg)…     

转化生长因子-β1小干扰RNA对胃癌细胞生物学行为的影响

目的探讨载体介导的转化生长因子(TGF)-β1小干扰RNA(siRNA)对人胃癌细胞株SGC-7901生物学行为的影响。方法构建TGF-β1特异性siRNA真核表达载体。转染胃癌细胞72 h后,以半定量逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot检测细胞中TGF-β1的mRNA和蛋白表达的变化；以噻唑蓝(MTT)比色法、流式细胞术、细胞附壁试验和Miliicell小室测定细胞增殖、周期、体外黏附和侵袭力,并观察裸鼠体内成瘤性。结果与未处理组比较,TGF-β1-siRNA载体能明显下调TGF-β1 mRNA[(0．910±0．066)与(0．617±0．025)比较,P＜0．01]和蛋白[(120．00±8．72)与(41．00±5．57)比较,P＜0．01]。在胃癌细胞中的表达；细胞抑制率达30．18%,体外黏附、侵袭力下降,裸鼠体内成瘤性受到抑制。结论载体介导的TGF-β1 siRNA可显著下调TGF-β1在胃癌细胞中的表达,在一定程度上抑制其恶性生物学行为。     

尿道狭窄患者围手术期尿液TGF-β1变化的分析研究

目的:探讨尿道狭窄患者围手术期尿液TGF-β1浓度变化情况以及影响该浓度的相关因素.方法:使用ELISA试剂盒对29例尿道狭窄患者术前1个月及术后1个月尿液中TGF-β1进行测定及记录.同期取泌尿系统其他手术的14例患者作为对照组,测定其术后1个月尿液中TGF-β1浓度.结果:检测结果显示实验组在接受手术治疗后尿液中TGF-β1含最较对照组有显著增高(P＜0.05).同时实验组患者术前和术后尿液TGF-β1浓度也存在明显差异(P＜0.05).在相关性因素的分析中,前尿道狭窄患者术后尿液中TGF-β1含量的变化幅度较后尿道狭窄患者更为显著(P＜0.05),同时采用自体组织替代技术较传统端端吻合技术以及内镜切开技术更能引起尿液中TGF-β1的明显变化(P＜0.05).但年龄、既往手术次数均未能引起患者术后TGF-β1的变化.结论:狭窄部位、手术方式都与患者尿液中 TGF-β1的含量存在一定的联系,而年龄及既往手术史等因素未发现与患者体内TGF-β1含量有较大的联系.