戊地昔布对人胃癌细胞生长的抑制作用

目的　探讨选择性环氧化酶 2 (COX 2 )抑制剂戊地昔布对人胃癌BGC 82 3细胞的作用及其作用机制。方法　用MTT法检测戊地昔布对人胃癌BGC 82 3细胞生长的作用 ,用流氏细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期分布 ,用激光共聚焦显微镜、透射电镜和DNA片段进一步检测细胞凋亡 ,用乳酸脱氢酶 (LDH)试剂盒测定BGC 82 3细胞的LDH含量。结果　戊地昔布 (2 5～ 4 0 0 μmol·L-1 )可时间和浓度依赖性抑制人胃癌BGC 82 3细胞的生长 ,作用 72h后 ,对细胞生长抑制率可达 2 4 0 %～ 92 0 % ,凋亡率由 (2 6± 0 7) %增加到 (7 6±1 5 ) %～ (1 6 5± 1 5 ) %。 1 0 0～ 4 0 0 μmol·L-1 也降低增殖指数 ,减少细胞周期S期细胞 ,增加G0 /G1 期细胞。随浓度增加 ,戊地昔布引起的LDH释放率有增加趋势 ,但只有 4 0 0μmol·L-1 戊地昔布可显著增加LDH释放率。结论　戊地昔布可通过诱导凋亡和细胞周期停滞而抑制人胃癌BGC 82 3细胞生长 ,4 0 0 μmol·L-1 戊地昔布抑制BGC 82 3细胞生长作用与细胞坏死有关     

戊地昔布诱导人食管癌Eca109细胞凋亡的机制研究

目的探讨特异选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂戊地昔布诱导人食管癌Eca109细胞凋亡及其作用机制。方法流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布;电子显微镜进一步检测细胞凋亡;采用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒测定Eca109细胞的LDH含量;流式细胞术检测p-p38MAPK及凋亡基因Fas和FasL蛋白的表达。结果戊地昔布(25~400μmol.L-1)可诱导人食管癌Eca109细胞发生凋亡,,凋亡率由(2.95±0.83)%增加到(48.46±0.73)%;50~400μmol.L-1时增殖指数和S期的细胞比例则明显降低,G0/G1期的细胞比例增加;同时,流式细胞术显示,25μmol.L-1戊地昔布即可上调人食管癌Eca109细胞p-p38MAPK蛋白的表达,并随剂量的增加而增强;50~400μmol.L-1的戊地昔布可上调Eca109细胞Fas及FasL的表达。结论戊地昔布可诱导人Eca109细胞凋亡,其诱导凋亡的机制可能部分是通过激活p-p38MAPK/Fas、FasL途径实现的。     

选择性非甾体类抗炎药戊地昔布

戊地昔布是一种选择性非甾体类抗炎药，绝对口服生物利用度为83％，tl／2平均值为8．11h。目前已经获准用于缓解由骨关节炎、类风湿性关节炎、痛经及手术引起的疼痛。经过大量临床试验发现，与非选择性非甾体类抗炎药相比，戊地昔布有很好的耐受性，不引起肠胃副作用，也不影响血小板的活性。     

COX-2抑制剂戊地昔布的合成

目的:合成COX-2抑制剂戊地昔布.方法:以苯乙酸为起始原料,经酰氯化、傅克酰化生成二苯乙酮后,与盐酸羟胺反应生成肟,再环合,磺化,氨化得戊地昔布.结果:得到的产品经IR,1H-NMR,MS和元素分析,证明是戊地昔布.结论:本合成路线简化了操作步骤,缩短反应时间,提高了收率.     

戊地昔布抑制Lewis肿瘤生长的作用

目的检测戊地昔布抑制肿瘤生长的作用并初步探讨其作用机制。方法流式细胞术检测戊地昔布对肿瘤细胞凋亡和细胞周期的影响,Westernblot检测戊地昔布对肿瘤组织Bcl2、Bax、Caspase3,MMP2和VEGF表达的影响,用MTT法检测脾淋巴细胞转化率。结果①戊地昔布抑制Lewis肿瘤的生长,提高荷瘤小鼠的存活率。②10～40mg·kg-1·d-1戊地昔布增加肿瘤细胞的凋亡率,从对照组的19.1%增加到23.1%～29.1%。但对细胞周期分布没有影响。③戊地昔布对Caspase3,Bax,MMP2和VEGF的表达没有明显影响,但降低抗凋亡蛋白Bcl2的表达。④戊地昔布对荷瘤小鼠体重,胸腺指数和脾脏指数,脾脏淋巴细胞增殖没有影响。结论戊地昔布抑制肿瘤细胞生长的作用与其诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

戊地昔布对裸鼠食管癌移植瘤凋亡的影响及其可能机制

目的探讨戊地昔布对裸鼠食管癌移植瘤凋亡的影响及其可能机制。方法建立食管癌裸鼠原位移植瘤模型,给予戊地昔布4 wk。剥离瘤结节,计算瘤体体积和肿瘤生长抑制率;FCM法检测移植瘤中的细胞凋亡率;免疫组织化学和FCM法检测COX-2、c-jun和c-fos蛋白的表达变化;RT-PCR检测移植瘤中COX-2 mRNA表达变化。结果①用戊地昔布的裸鼠组,裸鼠体重明显增加,且随用药时间延长,其体重也随之增加。②戊地昔布可明显降低肿瘤重量,肿瘤生长抑制率为45.80%。③戊地昔布可增加肿瘤细胞的凋亡率。④戊地昔布可下调COX-2 mRNA和蛋白的表达;同时凋亡基因c-jun和c-fos蛋白表达升高。⑤肿瘤组织的凋亡率与COX-2蛋白表达呈负相关(r=-0.726,P=0.008),与c-jum、c-fos蛋白表达呈正相关。⑥给予戊地昔布后,裸鼠胃肠上皮细胞形态没有明显异常。结论戊地昔布能够抑制裸鼠移植瘤的生长和诱导凋亡,其机制部分与抑制COX-2表达及上调凋亡基因c-jun,c-fos有关。     

p38MAPK在戊地昔布诱导Eca109细胞凋亡中的调控作用

目的探讨p38MAPK信号转导途径在戊地昔布诱导食管癌Eca109细胞凋亡中的调控作用。方法将正常培养的人食管癌Eca109细胞随机分为正常对照组、戊地昔布组和戊地昔布+SB203580组;采用流式细胞术和DNA Ladder检测凋亡情况;RT-PCR检测p38mRNA的表达变化;流式细胞术和免疫细胞化学检测p38蛋白的表达变化。结果①戊地昔布能够诱导Eca109细胞发生凋亡,并呈剂量依赖性,而SB203580能够部分降低戊地昔布诱导的Eca109细胞的凋亡率;②戊地昔布能够上调Eca109细胞中p38mRNA和蛋白的表达,而戊地昔布+SB203580组p38mRNA和蛋白的表达下降;③p38蛋白表达与凋亡率呈正相关。结论戊地昔布能够通过部分激活p38MAPK信号途径诱导Eca109细胞发生凋亡。     

塞来昔布联合多柔比星对乳腺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的研究COX-2选择性抑制剂塞来昔布与多柔比星(doxorubicin,ADM)联合应用对乳腺癌MCF-7细胞和Sk-Br-3细胞的抗肿瘤作用,探讨塞来昔布是否对多柔比星具有减毒增效作用。方法实验分为对照组,塞来昔布组,多柔比星组和联合用药组。用MTT法检测药物对MCF-7细胞和Sk-Br-3细胞的生长抑制效应;Western blot测定MCF-7细胞和Sk-Br-3细胞bcl-2的表达;PI染色检测细胞凋亡;克隆形成法测定药物对MCF-7细胞和Sk-Br-3细胞系的细胞毒作用。结果 MTT结果显示,30μmol·L-1塞来昔布与0.625mg·L-1多柔比星联合作用于MCF-7细胞的72 h存活率为68.53%,作用于Sk-Br-3细胞的72 h存活率为32.66%,较多柔比星单用能明显降低乳腺癌细胞的存活率,且具有时间和剂量依赖性。流式细胞仪PI染色结果显示,联合用药诱导的细胞凋亡率分别为MCF-7细胞59.7%,Sk-Br-3细胞65.8%,较单用多柔比星诱导的凋亡率(MCF-7细胞25.9%,Sk-Br-3细胞28.7%)明显提高。Western blot结果显示单用多柔比星可以使蛋白bcl-2表达下调,合用后较单用下调更加明显。两者联合处理乳腺癌细胞后,caspases-3的活性明显增强。结论塞来昔布和多柔比星对乳腺癌MCF-7细胞和Sk-Br-3细胞有增殖抑制及促凋亡作用,两药联合表现为协同或相加作用。     

华蟾素对耐阿霉素人乳腺癌细胞内阿霉素蓄积的影响

目的：测定华蟾素（cinobufacine,Cino）对耐阿霉素人乳腺癌细胞MCF-7/ADM内阿霉素（ADM）积累的影响,以探索Cino逆转MCF-7/ADM多药耐药（MDR）的可能机制。方法：MTT法检测CinoMDR的逆转作用,HPLC法检测Cino作用MCF-7/ADM后细胞内ADM的浓度的变化。结果：Cino15mg/L能增加MCF-7/ADM细胞对ADM的敏感性,使ADM的半数抑制浓度（IC50）由38.14mg/L降至12.93mg/L,显著增加MCF-7/ADM株细胞内ADM的浓度。结论：Cino能明显增加MCF-7/ADM株细胞内ADM的含量,部分逆转MCF-7/ADM的MDR。     

高效液相色谱法测定人血浆中帕瑞昔布和伐地昔布的浓度

目的建立高效液相色谱法测定人血浆中前体药物帕瑞昔布及其产物伐地昔布的浓度。方法色谱柱为Diamonsil C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm),柱温30℃,流动相为乙腈-水-磷酸(57∶43∶0.01,V/V/V),流速1.0 mL.min-1,检测波长240 nm;内标为塞来昔布。结果帕瑞昔布的线性方程为Y=0.017 8X-0.022 9(r2=0.999 9),线性范围为1～100 mg.L-1。伐地昔布回归方程为Y=0.315 2X-0.005 1,(r2=0.999 8),线性范围为0.05～5 mg.L-1。帕瑞昔布和伐地昔布日内及日间RSD均小于15%,回收率均大于85%。结论本方法灵敏度高、专一性好、操作简单,可同时检测血浆中帕瑞昔布和伐地昔布,能满足药动学研究需要。     

地西他滨联合紫杉醇对耐药MCF-7细胞增殖抑制和诱导凋亡的增敏作用

摘 要 目的：本研究旨在探讨地西他滨联合紫杉醇对紫杉醇耐药细胞MCF-7的细胞增殖抑制和诱导凋亡作用的影响。方法: 采用CCK-8方法检测联合用药（地西他滨+紫杉醇）或单独用药（地西他滨、紫杉醇）组不同给药浓度在24,48,72 h对耐药细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪检测不同给药组给药后48 h的细胞凋亡率。结果: CCK-8结果显示联合用药组相较于单药组对细胞增殖抑制作用显著增加（P＜0.05）,呈剂量依赖性,不同给药组的细胞增殖抑制率随着时间延长而增大;诱导细胞凋亡结果显示,48 h地西他滨单药组和紫杉醇单药组的细胞凋亡率分别是（20.4±1.98）%和（21.8±3.34）%,联合用药组的细胞凋亡率增加至（70.8±8.23）%。结论:地西他滨联合紫杉醇对紫杉醇耐药MCF-7细胞株的增殖抑制作用增加,促进耐药细胞的凋亡,地西他滨联合紫杉醇对耐药细胞株具有协同抗肿瘤作用。     

冬凌草甲素对MCF-7细胞的生长抑制作用及诱导凋亡作用的实验研究

目的探讨冬凌草甲素对人乳腺癌细胞MCF-7细胞的生长抑制作用及诱导凋亡作用。方法以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的MCF-7细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用Hoechst 33258荧光染色法以及流式细胞仪观察细胞凋亡情况。结果冬凌草甲素可显著抑制MCF-7细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,并呈现出一定的剂量-效应与时间-效应关系。Hoechst 33258荧光染色观察到典型的核浓缩、核碎裂等细胞凋亡的形态学变化。结论冬凌草甲素能显著抑制MCF-7细胞的生长,诱导细胞发生凋亡是其重要作用方式。     

紫苏醇亚微乳剂对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的抑制作用研究

目的:研究紫苏醇亚微乳剂对人乳腺癌细胞MCF-7的增殖抑制作用。方法:以紫苏醇溶液为对照,采用MTT比色法检测不同浓度(0、50、100、200、400、800μmol·L-1)紫苏醇亚微乳剂处理不同时间(24、48、72h)后对人乳腺癌细胞MCF-7的抑制率及半数抑制量(IC50)值,并设立空白组进行比较。结果:与空白组比较,试验组与对照组在作用24h、浓度高于400μmol·L-1,48h、浓度高于100μmol·L-1,72h、浓度高于50μmol·L-1时均表现出明显抑制作用(P<0.05);后2组抑制作用比较无显著性差异;试验组与对照组对MCF-7细胞株的IC50值分别为353.9、377.9μmol·L-1。结论:紫苏醇制成亚微乳剂后与其溶液比较,对人乳腺癌细胞MCF-7具有相同的抑制作用。     

丙戊酸钠对人乳腺癌细胞系MCF-7增殖的抑制作用及其量效关系研究

目的:探讨丙戊酸钠(VPA)对乳腺癌细胞系MCF-7的增殖抑制作用及其量效关系。方法:MCF-7细胞用0.75～4.0mmol·L-1VPA处理48h,同时设不加药对照组。MTT法分析细胞生长抑制、AnnexinⅤ/碘化丙啶双染法检测细胞凋亡、碘化丙啶法观察细胞增殖周期的变化。结果:与对照组比较,VPA组细胞生长抑制率由17%～54%递增,细胞凋亡率中位数分别为8.32%、9.6%、11.8%、13.7%、16.6%,与对照组比较均有不同程度的增加;细胞增殖周期分析可见对照组顺序出现G1、S、M期,而VPA组随药物浓度的升高而出现逐渐递增的G1期阻滞。结论:VPA可明显抑制MCF-7的生长,诱导凋亡和细胞周期G1期阻滞作用,且呈剂量依赖趋势,在乳腺癌治疗方面有重要价值。     

阿托伐他汀对低氧环境下人脐静脉内皮细胞增殖与细胞周期的影响

目的探讨阿托伐他汀对低氧环境下人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖和细胞周期的影响。方法将培养的HUVECs随机平均分为5组,每组8孔。正常对照组给予血清DMEM液培养12 h;低氧模型组置于低氧装置中用无血清DMEM液培养12 h;低、中、高浓度给药组均置于低氧装置中,分别用含0.05,0.10,0.20 mmol.L-1阿托伐他汀钙的无血清DMEM液培养12 h。采用MTT法测定细胞增殖情况,流式细胞术分析各组不同周期细胞所占比例。结果低氧模型组细胞增殖被明显抑制。在低氧环境下分别加入阿托伐他汀后,细胞增殖过程被明显促进,与低氧模型组相比,各浓度给药组差异有显著性或极显著性(P<0.05或P<0.01),但药物浓度与效应呈非线性关系,其中中浓度组促增殖作用最强,而高浓度组促增殖作用明显减弱。给予不同浓度阿托伐他汀干预后,HUVECs细胞周期中S期细胞显著增多,G0/G1期细胞所占比例下降。结论适当浓度的阿托伐他汀对低氧环境下HUVECs的增殖和DNA的合成有促进作用,阿托伐他汀在缺血心肌新生血管形成过程中可能具有一定作用。     

蛇床子素通过p53信号通路诱导人乳腺癌细胞株MCF-7凋亡

目的 探讨蛇床子素对人乳腺癌细胞株MCF-7的作用及其机制。方法 对数生长期的MCF-7 细胞用0,25,50,100 mmol·L^-1的蛇床子素处理。细胞培养48 h后,利用MTT检测细胞增殖;流式检测细胞凋亡和膜电位。RT-PCR检测p53、p21、BCL-2、Bax和CytC mRNA水平;免疫印迹法检测p53、p21、BCL-2、Bax 和CytC 表达。结果 蛇床子素可以成浓度依赖性诱导MCF-7 细胞增殖抑制和凋亡,上调Bax、p53、p21和CytC表达,下调 Bcl-2的表达以及细胞膜电位。结论 蛇床子素可通过激活p53信号通路而诱导MCF-7细胞凋亡。     

辛基酚对MCF-7乳腺癌细胞增殖及凋亡作用研究

目的探讨辛基酚（octylphenols,OP）诱导乳腺癌细胞凋亡及抑制乳腺癌细胞增殖的可能机制。方法应用MTT法及流式细胞仪检测OP对乳腺癌细胞MCF-7的增殖抑制及细胞周期的变化;Real Time PCR和Western blot法检测OP对MCF-7乳腺癌细胞中细胞周期相关蛋白p27Kip1和CyclinE的mRNA及蛋白表达的影响及对凋亡抑制蛋白PAK4表达的影响。结果 OP对MCF-7细胞增殖有明显的抑制作用,MCF-7细胞阻滞在G0/G1期,使S期的细胞减少;Real Time PCR和Western Blot检测发现培养的MCF-7细胞,随着OP的处理浓度增加,CyclinE蛋白在分子水平和蛋白水平均降低,p27Kip1的表达量升高。结论 OP可能通过调控细胞周期相关蛋白的表达,抑制MCF-7乳腺癌细胞增殖。     

消瘤1号诱导MCF-7人乳腺癌细胞凋亡的研究

目的:研究中成药消瘤1号诱导MCF-7人乳腺癌细胞的凋亡作用,并通过分析其作用后MCF-7细胞Bax和Bcl-2蛋白表达的变化,探讨其诱导MCF-7细胞凋亡的分子机制。方法:采用细胞培养技术,用1、10、100、1000μg·mL-1的消瘤1号处理MCF-7细胞24h,PI染细胞,流式细胞仪测定细胞周期的变化,Western Blot法检测Bax和Bcl-2蛋白的表达。结果:流式细胞仪检测结果表明细胞阻滞在G0/G1期;Weston Blot法测定结果表明消瘤1号能够增加细胞中Bax蛋白表达,减少Bcl-2蛋白表达,且该2种蛋白的表达依赖于消瘤1号的浓度。结论:消瘤1号可通过调节Bax/Bcl-2蛋白表达的变化诱导MCF-7细胞凋亡。     

Pokemon 基因对MCF-7 细胞增殖的影响

目的转染Pokemon表达载体到MCF-7细胞中,探究Pokemon对乳腺癌细胞增殖的影响。方法构建Pokemon基因表达质粒,瞬时转染Pokemon表达质粒到乳腺癌细胞中,Westernblot检测pokemon的蛋白水平表达情况,通过MTT和平板克隆形成试验法观察Pokemon对乳腺癌细胞增殖及克隆形成能力的影响。结果MTT法显示,随着培养时间的增加,MCF-7细胞在转染Pokemon后的生长速度明显增加;细胞平板克隆形成试验显示,MCF-7细胞在转染Pokemon后克隆数明显增加,由此可以说明Pokemon能增强癌细胞MCF-7克隆形成能力。结论Pokemon作为一个致癌基因,能促进乳腺癌MCF-7细胞系的增殖并增加其克隆形成能力。     

丹蒽醌对乳腺癌细胞MCF-7增殖及侵袭转移的抑制作用及其作用机制研究

目的 研究丹蒽醌对乳腺癌细胞MCF-7增殖及侵袭转移的抑制作用,并探讨其作用机制。方法 CCK-8法检测不同浓度（10、20、40、60、80、100 μmol/L）的丹蒽醌作用24、48 h对乳腺癌细胞MCF-7增殖能力的影响;Transwell实验考察丹蒽醌对乳腺癌细胞MCF-7侵袭转移能力的影响。实时荧光当量PCR（RT-qPCR）法检测c-Myc、Cyclin D1 mRNA的表达水平;Western blotting法检测p-AMPKα、ACC、c-Myc、Cyclin D1蛋白的表达水平。结果 不同浓度的丹蒽醌作用不同时间对乳腺癌细胞MCF-7增殖均具有抑制作用;20、40 μmol/L的丹蒽醌能够明显的抑制乳腺癌细胞MCF-7的侵袭转移,同时能够激活p-AMPKα的表达,抑制ACC、c-Myc、Cyclin D1等基因的表达,从而抑制乳腺癌细胞MCF-7增殖。结论 丹蒽醌对乳腺癌细胞MCF-7增殖及侵袭转移具有抑制作用,其作用机制可能与激活AMPK信号通路抑制c-Myc、Cyclin D1等增殖相关基因表达有关。