人类关节滑膜A型和B型细胞的分离和体外培养

目的 建立一种有效分离、培养高纯度人类关节滑膜Ａ、Ｂ型细胞的方法。方法 胶原酶的胰蛋白酶联合消化入关节滑膜组织碎片,细胞悬液经１２０目筛网滤过,与ＣＤ１４ｍｉｃｒｏｂｅａｄｓ混合孵育后通过磁性ＭＡＣＳ分离柱收集非粘附细胞及粘附细胞进行培养。用光镜、电镜、细胞免疫化学、流式细胞仪法鉴定该两种细胞类型。结果 分离培养的滑膜细胞纯度达９８％以上;粘附细胞具有巨噬细胞的特性,抗ＣＤ６８、ＣＤ１４阳性,符合巨噬细胞样滑膜细胞（Ａ型细胞）的特征;非粘膜附细胞具有成纤维细胞的特性,抗Ｖｉｍｅｎｅｉｎ、Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ阳性,符合成纤维细胞样滑膜细胞（Ｂ型细胞）的特征。结论 胶原酶和胰蛋白酶联合消化,免疫磁柱法是一 角切有效的分离人类关节滑膜Ａ、Ｂ型细胞的方法。     

改良的胶原酶滑膜细胞分离培养法

目的 探讨一种改良的滑膜细胞培养法。方法 修剪、收集关节滑膜层,依次以胶原酶、０．２％胰蛋白酶、０．２％胰蛋白酶－０．０２％ＥＤＴＡＮａ２消化。１００目筛网过滤,Ｄ－ｈａｎｋｓ洗液网后培养,行显微镜、电镜、ＡＢＣ法免疫组化鉴定。结果 培养的细胞具有成纤维细胞样形态和特征,免疫组化染色显示ｖｉｍｅｎｔｉｎ阳性、ＣＤ６８阴性,纯度达９８％以上,符合Ｂ超滑膜细胞特点,结论 改良的胶原酶消化法是一种有效的     

改良的胶原酶滑膜细胞分离培养法

目的 探讨一种改良的滑膜细胞培养法。方法 修剪、收集关节滑膜层,依次以胶原酶、0.2%胰蛋白酶、0.2%胰蛋白酶-0.02%EDTANa2消化,100目筛网过滤,D-hanks液洗网后培养,行显微镜、电镜、ABC法免疫组化鉴定。结果 培养的细胞具有成纤维细胞样形态和特征,免疫组化染色示vimentin阳性、CD68阴性,纯度达98%以上,符合B型滑膜细胞特点。结论 改良的胶原酶消化法是一种有效的滑膜细胞培养方法。     

人腹膜间皮细胞的分离培养

目的体外培养的人腹膜间皮细胞（ＨＰＭＣ）是研究腹膜功能的有用模型,我们为此建立了一种改良消化法,以从人大网膜分离腹膜间皮细胞。方法用０．２％胰蛋白酶－０．０２％ＥＤＴＡＮａ２消化人大网膜组织碎片,细胞悬液经１００目筛网滤过后进行培养：瑞士姬姆萨染色观察细胞形态,计算细胞纯度：免疫组化（ＡＢＣ法）鉴定细胞。结果分离培养的细胞光镜下呈铺路鹅卵石状,纯度达９５％以上。细胞表面标志鉴定显示角蛋白、波形蛋白抗原阳性,第Ⅷ因子相关抗原、白细胞ＣＤ４５抗原阴性,证实分离培养的确是ＨＰＭＣ。结论胰蛋白酶消化法是一种简单实用的分离ＨＰＭＣ的方法。     

Bcl-w蛋白在原发性胆囊癌中的表达及意义

目的 研究Ｂｃｌ－ｗ蛋白在原发性胆囊癌（ｐｒｉｍａｒｙ ｇａｌｌｂｌａｄｄｅｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ,ＰＧＢＣ）中的表达及其意义。方法 以特异性羊抗免Ｂｃｌ－ｗ抗体,ＤＡＫＯ Ｅｎｖｉｓｉｏｎ＾ＴＭ系统（ＬＤＰ法）免疫组织化学方法检测石蜡我埋的ＰＧＢＣ标本中Ｂｃｌ－ｗ蛋白的表达。结果 ４７例ＰＧＢＣ中Ｂｃｌ－ｗ阳性２８例（６０％）;１５例胆囊腺肌瘤样增生（ＧＢＡＤＨ）Ｂｃｌ－ｗ阳性１４例（９３％）;     

新生C57BL/6小鼠成肌细胞体外培养、纯化和鉴定的实验研究

目的建立C57BL/6小鼠成肌细胞体外培养、纯化和鉴定的方法。方法采用Ⅱ型胶原酶和胰蛋白酶消化分离新生C57BL/6小鼠的成肌细胞,用Percoll分离液纯化细胞,在含15%胎牛血清的DMEM培养基中进行成肌细胞培养,倒置相差显微镜下观察细胞生长情况,Desmin抗体鉴定成肌细胞。结果经过Ⅱ型胶原酶和胰蛋白酶消化分离,Percoll纯化的成肌细胞纯度较高,Desmin染色95%以上的细胞胞浆染色阳性。结论采用Percoll纯化、国产胎牛血清培养,可以获得高纯度的成肌细胞。     

肺泡Ⅱ型细胞培养方法的改良及其应用

目的：研究不同方法对体外培养肺泡Ⅱ型上皮细胞纯度、活力、产量、存活时间的影响。方法：采用不同浓度胰蛋白酶消化法和胰蛋白酶加胶原酶消化法消化、分离组织，低密度接种，常规浓度含血清培养和无血清培养，抗大鼠IgG包被与不包被，倒置显微镜观察细胞生长，检测细胞活力，免疫组织化学方法鉴定细胞纯度和电镜检测鉴定细胞。结果：两种方法消化、分离组织，肺泡Ⅱ型上皮细胞纯度、活力、产量、存活时间经统计学分析无显著性差异。结论：不同浓度胰蛋白酶消化分离肺组织程序相对简单、低密度接种、无血清培养所得细胞纯度能够满足体外研究肺泡Ⅱ型上皮细胞功能的需要，从而简化了体外培养肺泡Ⅱ型上皮细胞的程序。     

转化生长因子β1基因修饰的小鼠树突状细胞在移植体内的迁移？…

目的 观察β型转化生长因子（ＴＧＦβ１）基因修饰的Ｂ１０小鼠骨髓树突关细胞（ＤＣ）在Ｃ３Ｈ小鼠体内的迁移和存活,以探讨ＤＣ生物学特性与移植耐受性的关系。方法 从Ｂ１０小鼠骨髓分离ＤＣ前体细胞,在粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子＋β型转化生长因子（ＧＭ－ＣＳＦ＋ＴＧＦβ）条件下培养增殖（ＧＣ１）并转导Ａｄ－ＬａｃＺ（Ｄｃ２）或Ａｄ－ＴＧＦβ１（ＤＣ３）,每组５×１０＾５个细胞注入Ｇ３Ｈ小鼠后掌皮下,分别     

大鼠滑膜细胞原代培养的研究

目的:建立原代培养大鼠滑膜细胞的方法。方法:取大鼠关节滑膜组织,用酶消化法分离细胞,用RPMI-1640培养液进行培养并传代,观察滑膜细胞生长状况。结果:用酶消化法培养滑膜细胞,方法简单,细胞形态典型。结论:单一的胶原酶消化法是一种有效的滑膜细胞原代培养的方法。     

佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞的原代培养及分泌功能研究

分离、培养佐剂性关节炎（ＡＡ）大鼠膝关节滑膜细胞，倒置相差显微镜观察细胞形态，检测细胞增殖能力及培养上清中白细胞介素１（ＩＬ－１）、肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）的生物活性和前列腺素Ｅ２（ＰＧＥ２）的含量。结果表明ＡＡ大鼠滑膜细胞存在三种不同的形态，即巨噬细胞样细胞（ＭＣｓ）、树突状细胞（ＤＣｓ）、成纤维细胞样细胞（ＦＣｓ）；滑膜细胞增殖能力增强；其分泌ＩＬ－１、ＴＮＦ－α和ＰＧＥ２的能力增强。本实验为研究类风湿性关节炎的病理及筛选抗风湿药提供了理想的实验材料。     

雷公藤多甙诱导类风湿关节炎滑膜细胞凋亡的研究

目的:评估抗风湿中药雷公藤多甙(TripterygiumGlycosides,TG)诱导滑膜细胞凋亡(Apo)在类风湿关节炎(RA)治疗中的作用,探讨其药理机制。方法:用光镜、电镜、共聚焦显微镜、流式细胞仪(FCM)及DNA凝胶电泳检测不同浓度TG诱导RA滑膜细胞凋亡情况。结果:TG组凋亡细胞百分率显著高于骨性关节炎(OA)组(P<0.01)和正常人组(P<0.01),TG组凋亡细胞百分率为(55±11.2)%。结论:TG可以诱导滑膜细胞凋亡,并且这可能是其治疗RA的机制之一。     

巴马香猪骨髓间充质干细胞的分离扩增及初步鉴定

目的建立巴马香猪骨髓问充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）分离、培养、扩增的方法,并进行鉴定。方法采用梯度离心法分离并结合贴壁筛选法传代纯化培养猪的MSCs;采用倒置相差显微镜观察MSCs的形态学特征;流式细胞仪检测第3代细胞表面标志抗原CD71、CD34的表达率。结果原代培养的MSCs于6h后贴壁,贴壁细胞呈集群生长趋势。培养7～9d后可见细胞融合,14～21d达到95％融合。第3代细胞表面标记物CD71阳性率为95％,CD34阳性率为O％。结论采用全骨髓梯度离心法分离并结合贴壁筛选法能够成功分离和培养巴马香猪的MSCs,在第3代可获得高纯度MSCs。     

人外周血树突细胞的分离与提纯

目的 从人外周血中分离、培养及鉴定树突细胞（ＤＣ）。方法 从正常人外周血分离获得单个核细胞,培养２小时后,取会细胞,在无血清培养基中加入不同的细胞在子,于２的第１,６,８天对形态,表型和功能分擀行测定,并在光镜、电镜下观察ＤＣ的纯度与得率。结果 体外培养６～８天可获得高纯度大量的ＤＣ,较高表达ＨＬＡ ＤＲ、ＣＤ４０、ＣＤ８３和ＣＤ８６,能强烈激发同种慢体Ｔ淋巴细胞增殖。结论 上述方法可以从人外周血     

小鼠子宫内膜上皮细胞的分离和原代培养

目的 建立一种高效的子宫内膜上皮细胞分离和体外培养方法,为子宫疾病的发病机制或治疗药物筛选的进一步研究提供一个比较理想和有价值的的实验模型.方法 用酶消化、过滤、离心与差速贴壁纯化相结合的方法分离培养小鼠子宫内膜上皮细胞,以上皮细胞角蛋白为抗原的免疫荧光法对分离培养的细胞进行纯度鉴定.结果 小鼠子宫内膜上皮细胞培养4～...     

改良法培养鼠腹膜间皮细胞

目的 :建立一种从腹腔灌注消化液分离鼠腹膜间皮细胞的培养模型。方法 :用 0 .12 5 %的胰蛋白酶 - 0 .0 1%EDTANa2 消化液注入鼠腹腔 ,抽取腹腔灌注液进行培养 ,采用相差显微镜、电镜和免疫组化鉴定间皮细胞。结果 :分离并培养的细胞融合后在相差显微镜下呈铺路卵石状 ,纯度达 95 %以上。电镜下可见丰富的微绒毛。免疫组化鉴定角蛋白和波形蛋白阳性 ,Ⅷ因子和白细胞CD4 5抗原阴性。结论 :鼠腹膜间皮细胞培养模型建立成功 ,该模型可为进一步研究腹膜透析并纤维化的防治提供实验基础     

小鼠骨髓间充质干细胞的体外培养和鉴定

目的建立一种实用高效的小鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的体外分离培养方法,并进行初步表型鉴定。方法采取贴壁细胞分离法分离和培养MSCs。倒置显微镜观察原代及传代细胞的形态及生长过程,使用免疫细胞化学方法进行MSCs的初步表型鉴定。结果 MSCs贴壁生长,形态均一,呈成纤维缓胞样,生长状态良好。免疫细胞化学检测CD44、CD105、CD34阳性率分别为94.3%、82.3%、3.3%。结论采用贴壁培养法可分离培养出高纯度的MSCs。     

人骨髓源性神经样细胞的形态及超微结构

目的:探讨人骨髓间充质干细胞(Bone Mesenchymal Stem Cells,BMSC)分化形成的神经样细胞的形态及结构特征。方法:采用密度梯度离心法和贴壁培养的方法分离纯化人BMSC,流式细胞仪检测CD34、CD45、CD44等细胞表面抗原在BMSC上的表达。联合应用碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growthfactor,bFGF)、表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)、二甲基亚枫(di methyl sulphoxide,DMSO)和丁羟基茴香醚(butylhydroxy anisol,BHA)诱导人BMSC向神经细胞分化。光学显微镜下观察细胞的形态变化;甲苯胺蓝染色法对分化后细胞进行尼氏体染色;透射电子显微镜观察分化后细胞的超微结构特点。结果:分离纯化的人BMSC经流式细胞仪检测显示间充质干细胞相对特异性抗原CD44表达阳性,造血干细胞特异性抗原CD34、CD45表达阴性;加入诱导培养基培养2周后,细胞胞体变圆,折光性增强,有突起形成;甲苯胺蓝染色法显示分化后的细胞尼氏体染色阳性;透射电镜下细胞胞浆中有大量密集的呈扁平囊状的粗面内质网及其间的一些游离核糖体和多聚核糖体所组成的尼氏体的超微结构,并有神经微丝的形成。结论:EGF/bFGF/DMSO/BHA诱导人BMSC分化形成的神经样细胞能够表达成熟神经细胞典型的形态及超微结构特征。     

细胞凋亡过程中形态学变化

用倒置显微镜、光镜及透射电镜观察了人食管癌Ｅｃａ１０９细胞经顺铂作用后的形态学变化及细胞死亡特征。结果显示：肿瘤细胞皱缩出芽、核裂解及凋亡小体形成。电镜下凋亡细胞表面的微绒毛完全消失，代之以圆形、半圆形突起。一些细胞伸出多个不规则伪足样的突起。在消化收集药物作用后的细胞时，发现仍贴壁的细胞回缩比未用药对照细胞回缩的速度缓慢。结果提示：在细胞凋亡及其形态变化的过程中，可能伴随着细胞胞质的异常运动。     

胎儿骨髓间充质干细胞的培养及鉴定

目的从胎儿骨髓中分离培养纯化骨髓间充质干细胞(MSC),并进行细胞表面标志的检测,探讨MSC的培养方法。方法采用全骨髓培养、贴壁筛选法分离培养MSC,采用差速贴壁培养方法纯化细胞,采用流式细胞仪检测细胞表面标志,并观察不同方法处理的培养界面对细胞贴壁和生长的影响。结果通过分离纯化培养,光镜下细胞形态以长梭形、不规则多角形为主;IV型胶原包被和Co60照射(照射量6GY)处理的培养瓶更利于MSC的贴壁、生长;流式细胞仪检测结果显示CD44( )、Stro-1( )、CD14(-)、CD34(-)、CD45(-)、CD11b(-)。结论采用贴壁筛选法和差速贴壁法结合可获得较高纯度的MSC,并且细胞生长良好,在体外具有较强的扩增能力。