肽核酸生物传感器直接检测临床标本中提取的病毒基因组DNA

目的 以肽核酸生物传感器检测系统直接检测从临床标本中提取的乙型肝炎病毒基因组DNA。方法 抽取63例临床免疫学检测证实为乙型肝炎病毒(HBV)感染者标本血清的DNA，以及15例免疫学检测全阴的标本血清中的DNA，分别用肽核酸生物传感器法以及定量PCR法检测，比较两种方法的优劣并确定传感器法的检测限。结果 传感器法检测60例标本阳性，阳性率为95．24％，而定量PCR法检测63例均为阳性；15例阴性血清两种方法检测均为阴性；传感器法的检测限为8．6pg／L；两种方法检测HBV差异无显著性，但传感器检测法所用时间更短，且无需进行探针的标记。结论 利用肽核酸生物传感器成功地绕过了PCR扩增而直接检测出了临床标本中的HBV基因组DNA。     

荧光定量PCR技术和分离培养法检测小肠结肠炎耶尔森菌的比较研究

目的比较荧光定量PCR法和分离培养法在检测小肠结肠炎耶尔森菌中特异性和灵敏度的差异。方法从686份婴幼儿腹泻患儿的粪便标本中提取细菌基因组DNA,在进行小肠结肠炎耶尔森菌保守基因fox A和黏附侵袭位点基因ail的实时荧光定量PCR检测的同时,也按常规方法进行菌株分离培养,并对2种方法的检出结果进行比较分析。结果686份标本中,分离培养法检测结果为阳性4份,阴性682份;荧光定量PCR法检测结果为阳性5份,阴性681份。荧光定量PCR法检出的5份阳性标本中,分离培养法结果为4份阳性,1份阴性。结论采用fox A联合ail基因的荧光定量PCR法特异性强,灵敏度高,且操作简便快速,检测成本低,对于监测小肠结肠炎耶尔森菌有重要意义。     

链置换扩增压电DNA传感器检测铜绿假单胞菌的临床应用研究

目的探讨链置换扩增(SDA)压电DNA传感器检测铜绿假单胞菌的临床应用.方法应用SDA压电DNA传感器芯片技术和特异性寡核苷酸探针,对临床标本33份进行铜绿假单胞菌检测,并以荧光定量PCR作参照,与常规培养进行对比分析.结果在33份临床标本中,SDA压电DNA传感器检出17份铜绿假单胞菌阳性,与荧光定量PCR结果完全一致,而这两种方法与常规分离培养略有差异.结论 SDA压电DNA传感器芯片技术能直接检测铜绿假单胞菌基因组DNA,具有准确、快速、灵敏的优点.     

实时荧光PCR检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的研究

目的建立一种快速、准确检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的实时荧光聚合酶链反应（PCR）方法。方法收集临床诊断或疑似为败血症患者的血标本，直接提取细菌基因组DNA，确定其敏感性；以金黄色葡萄球菌nuc基因和MRSA的mecA基因为靶序列，合成引物，采用实时荧光PCR技术对上述基因进行检测，并将其结果与细菌常规培养结果对比，分析该方法检测MRSA的特异性、灵敏度、阳性预测值和阴性预测值。结果直接从血标本中提取细菌基因组DNA的灵敏度为10’CFU／mL。MRSA阳性血标本实时荧光PCR灵敏度为46．15％，特异性为100．00％，阳性预测值为100．00％，阴性预测值为56．25％。结论使用该方法快速检测临床血标本中MRSA的灵敏度不高，欲应用于临床快速诊断尚有若干问题需解决。     

HPV mRNA实时荧光定量PCR检测及其与宫颈癌发生的关系

目的建立一种反转录实时荧光定量PCR检测HPV mRNA表达量的方法,研究HPV mRNA表达量与宫颈癌发展的关系。方法取155例宫颈组织标本进行病理学诊断,同时分别进行HPV DNA实时荧光定量PCR检测、HPV E7 mRNA反转录实时荧光定量PCR检测。结果在所有的HPV DNA阳性标本中,宫颈炎和CINⅠ期标本mR-NA表达率为0,CINⅡ期标本mRNA表达率为50%,CINⅢ期标本mRNA表达率为50%,宫颈癌标本mRNA表达率为87.5%;表达水平依次增加。结论 HPV mRNA的表达率及表达量随宫颈癌的发展而增加和增强,其表达水平与宫颈癌发展呈正相关性;HPV mRNA定量检测方法的建立,可以为宫颈癌的预防、发展监测、手术预后等提供重要的临床指导。     

漏声表面波生物传感器液相检测系统的构建及检测HPV的实验研究

目的 建立漏声表面波生物传感器液相检测技术平台，并用该检测系统实时检测人乳头瘤病毒（HPV）。方法 构建检测和参比双路延迟线，并观察在液相中两路延迟线的相位变化规律；以人乳头瘤病毒为检测对象，用传感器检测系统对其进行实时检测。结果 两路延迟线的相位值在液相中发生不同的变化；检测HPV时，检测延迟线的相位值发生较大的变化，而参比通道的相位曲线变化不是很大。结论 成功构建了漏声表面波生物传感器液相检测技术平台，并实现对双链DNA病毒HPV实时检测反应。     

实时荧光PCR技术检测高危型HPV的临床应用评价

[目的]评价实时荧光PCR技术检测高危型HPV的临床应用效果. [方法]应用实时荧光PCR技术检测80例已经HCⅡ方法检测高危型HPV的宫颈脱落细胞标本,其中40例为阴性标本;40例为阳性标本,比较两种方法检测结果的一致性.结果不一致的应用HPV基因分型试剂进行检测.以病理学检查结果作为金标准,评价实时荧光PCR技术的临床应用效果. [结果]80例标本的实时荧光PCR检测结果中,76例的结果与HCⅡ结果一致,总符合率为92.50％,Kappa值为0.85.6例结果不一致的标本,经HPV分型检测有1例为HPV6型,其余5例均为阴性.实时荧光PCR技术检测的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为93.33％,63.08％,39.47％和97.62％. [结论]实时荧光PCR技术与HC-Ⅱ方法检测结果一致性高,是检测高危型HPV感染的另一有效手段,可在临床上用于宫颈癌及其癌前病变的筛查.     

定量荧光PCR法验证流式细胞术测定人类白细胞抗原B27临界值标本的研究

目的 观察用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法来验证流式细胞术(FCM)检测人类白细胞抗原表达为临界值标本,评价其在强直性脊柱炎(AS)的临床诊治价值.方法 分别对482例患者用流式细胞术检测人类白细胞抗原表达为阳性、临界值、阴性的样本及100名健康人群样本,以实时定量荧光PCR检测外周血HLA-B27DNA,确定样本的阳性率.结果 PCR法检测出阳性组调查282例阳性率100.00％、临界值组调查80例阳性率91.25％、阴性组调查120例阳性率为0.83％;健康对照组调查100名,阳性率3.00％.结论 以定量荧光PCR检测＞103为标准,FCM检测临界值组阳性率过高,差异有统计学意义,存在假阳性;阳性组和阴性组无明显差异,但阴性组有假阴性产生,定量PCR法对流式细胞术检测为临界值标本具有较高诊断价值,可防止假阳性和假阴性的产生,进一步提高AS诊断率和可靠性.     

巢式PCR检测人乳头状瘤病毒的方法学建立及临床应用

目的建立巢式PCR(nPCR)检测人乳头状瘤病毒的方法学及作临床应用。方法以MY09/MY11为外引物,GP5+/GP6+为内引物建立nPCR,优化体系,评价其特异性和灵敏度,同时检测了54例HPV DNA阳性、4例弱阳性、42例阴性的标本,与基因导流杂交法作一致比较。结果检测到单一目的片段;最低能检测到1∶16 384稀释的HPV18阳性对照品,明显高于MY09/MY11方法;nPCR法检测到60例HPV DNA阳性标本,40例HPV DNA阴性的标本,与基因导流杂交法具有较好的一致性(χ2=39.518,P0.001;Kappa=0.628,P0.001)。结论所建立的nPCR具有较好的特异性和灵敏度,与基因导流杂交法具有较好一致性。     

食管癌组织人乳头瘤病毒感染及其与微卫星杂合性缺失的关系

目的 探讨食管癌组织中14个微卫星位点的杂合性缺失与人乳头瘤病毒(HPV)感染的关系.方法 采用荧光定量PCR法检测112例食管癌标本中HPV-16、18型的感染情况;采用PCR荧光测序仪凝胶电泳检测112例患者匹配的肿瘤和外周血样本中14个微卫星位点的杂合性缺失状况;比较HPV阳性和阴性标本中14个位点的杂合缺失率.结果 染色体3p、9p、13q、17p和17q上的微卫星位点发生了高频的杂合性缺失;发现在2个位点处--D6S497和D13S260,HPV阳性的标本较阴性的拥有更高的杂合性缺失率.结论 缺失涉及众多位点反映出食管癌中基因组存在广泛的不稳定现象;HPV阳性标本在D13S260和D6S497两个位点处拥有更高的杂合缺失率提示食管癌中HPV的作用靶点可能是位于这两个位点处的某些候选基因;另外,四川省是食管癌高发区,该结果也说明HPV是当地食管癌的一重要高危因素.