聚合酶链反应技术及其在医学检验中的应用

聚合酶链反应（PolymeraseChainReaction,PCR）又称无细胞克隆或体外基因扩增,是一种对特定的DNA片段在体外进行快速扩增的方法,具有特异、敏感、快速、简便、重复性好、易自动化等优点,是分子生物学技术的一项突破。     

聚合酶链反应影响因素浅谈

我院近4年来将聚合酶链反应（PCR）技术应用于结核、淋病、非淋菌性尿道炎、肺炎等有关疾病的检查。通过对4180份标本的检测实践使我们对PCR检测效果的影响因素有了粗浅的体会，现简述如下，以与同道共商。1外部硬件因素一个成功的PCR必须具备的基本条件是：①模板核酸DNA或RNA。②人工合成的寡核苷酸引物。③合适的缓冲体系。④Mg2 。⑤三磷酸脱氧核昔酸。⑥耐热DNA聚合酶。⑦温度循环参数[1]（变性、复性和延伸的温度与时间及循环数）。以上基本条件的任何一项的质量，均可影响检测效果。2内部软件因素2．1核酸标本提取：PCR是以…     

聚合酶链反应在医学检验中的应用分析

聚合酶链反应（PCR）具有操作便捷、灵敏度高和特异性强等特点。它是研究、检测和鉴定标本中特定DNA片段的一种重要方法。实时定量PCR、荧光定量PCR、实时荧光定量PCR等技术在肿瘤学、免疫学、微生物学、遗传学等医学检验领域得到广泛的应用。本文通过对PCR在医学检验中的应用作简要的分析综述。     

聚合酶链反应检测肝病患者血清HBV-DNA的意义

目前ＨＢＶ -ＤＮＡ检测被广泛应用于临床 ,它是测定乙肝病毒最敏感、直接的指标 ,笔者通过检测各类肝炎及肝硬化患者血清ＨＢＶ -ＤＮＡ含量来探讨其与乙肝标志物及乙肝诊断的关系。1　材料与方法1 1　材料1 1 1　研究对象 :4 95例肝病患者均为我院 1999年 6月— 2 0 0 0年 4月收治患者 ,男 370例 ,女 12 5例 ;平均年龄 37.8岁 ;其中慢性肝炎 4 4 9例 (轻度 2 98例 ,中度 12 0例 ,重度 31例 ) ,肝硬化 4 6例。诊断均符合 1995年 5月北京第五次全国传染病寄生虫学术会议修订的病毒性肝炎防治方案 (试行 )。1 1 2　主要试剂及来源。不对称引…     

逆转录聚合酶链反应在中医药治疗抑郁症分子机制研究中的应用

逆转录聚合酶链反应主要用于检测或定量细胞中基因表达水平,是目前生物学及医学等领域研究基因表达调控的一种主要方法,中医药在治疗抑郁症上取得了很好的疗效,为了进一步探索中药对抑郁症的干预途径和寻找作用靶点,许多中医学者近年来成功设计了抑郁症动物模型,并采用逆转录聚合酶链反应技术对抑郁症模型动物的某些神经递质及受体、神经营养因子等进行基因表达分析,在基因水平为揭示中医药对抑郁症的治疗提供了崭新的思路.     

聚合酶链反应检测慢性肝炎患者血清乙型、丙型肝炎病毒感染

我院自1996年8月～1998年10月采用江苏常熟制药厂生产的苦黄注射液,治疗慢性乙型病毒性肝炎40例,取得良好疗效,同时设立不用该药的慢性乙型病毒性肝炎40例为对照组,结果如下。     

兼并复合聚合酶链反应检测白念珠菌和其它念珠菌

目的 为了早期、准确地诊断念珠菌病并使其得到及时治疗。方法 我们建立了检测白念珠菌和其它念珠菌的兼并复合PCR技术，以3条引物PSpA1,PCon1和PCon2复合1个试管中进行PCR扩增。结果 白念珠菌产生105bp和1015bp，其它念珠菌包括白念珠菌在内产生105bp，在0.5ml血液中可检测到30个白念珠菌。结论 该技术是一种简便、快速、准确诊断念珠菌病的方法。     

基于特异性聚合酶链式反应的西红花快速分子鉴别研究

 目的 建立一种基于特异性聚合酶链式反应(PCR)及荧光染料检测快速鉴别西红花真伪品的方法。方法 通过对叶绿体基因片段测序和比对分析,找出西红花与其常见掺伪品序列差异,针对差异碱基设计特异性引物,构建并优化聚合酶链式反应扩增反应体系,使用荧光染料法检测聚合酶链式反应产物,实现西红花的快速鉴别。结果 建立了基于psbA-trnH序列的西红花鉴别体系,优化后的聚合酶链式反应反应条件为90 ℃预变性1 min,90 ℃变性5 s,58 ℃延伸5 s,26个循环。在聚合酶链式反应反应产物中加入染料SYBR Green I,西红花正品出现强烈绿色荧光,而伪品无荧光。结论 位点特异性聚合酶链式反应方法可以简单快速鉴别西红花及其掺伪品。     

聚合酶链反应快速检测痰液中结核分支杆菌DNA的临床应用

目的:评价聚合酶链反应(PCR)检测痰液中结核分支杆菌在肺结核诊断中的价值。方法:62例已经确诊的肺结核患与62例同期非肺结核的呼吸内科病人,全部病例取清晨漱口后深部痰液3～5ml,分别作痰涂片找抗酸杆菌、作结核分支杆菌培养及PCR检测,对比效果。结果:两组病例的PCR检测结果分别与同组痰涂片找抗酸杆菌、结核分支杆菌培养比较,差异显著(P<0.01),PCR检测特异、敏感、快速。结论:用PCR检测痰中结核分支杆菌DNA可作为临床诊断肺结核的常规辅助手段。     

微孔渗漏法与聚合酶链反应联合检测沙眼衣原体

目的： 探索一种快速、经济、敏感的方法用来诊断泌尿生殖道中沙眼衣原体（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ， ＣＴ）。方法：用微孔渗漏法、聚合酶链反应法（ＰＣＲ）和直接免疫荧光分析法（ＤＦＡ）检测泌尿生殖道中ＣＴ。结果：微孔渗漏法阳性率为 ２５． ８７％， ＰＣＲ法阳性率为 ３４． ２８％，而 ＤＦＡ法仅为 ２５． ２４％，且微孔渗漏法不需要特殊仪器，测定时间短，工作量小，灵敏度高。微孔渗漏法与ＤＦＡ二者阳性率无显著性差别（Ｐ＜０．０５）。ＰＣＲ与ＤＦＡ二者阳性率有显著性差别（Ｐ＜０．０１）。结论： 因此微孔渗漏法与 ＰＣＲ法联合检测泌尿生殖道中 ＣＴ具有简便、快速、检出率高的优点。     

实时荧光定量聚合酶链反应法检测肺结核患者痰标本价值的对照研究

目的探讨不同方法对肺结核的诊断价值。方法以实时荧光定量聚合酶链反应法、痰直接涂片找抗酸杆菌法、痰结核杆菌培养法对我院56例确诊肺结核患者痰标本检查比较。结果荧光定量PCR法检出结核杆菌阳性率显著高于痰涂片抗酸染色和培养法,其他非肺结核结果阳性率仅为2.7%,特异度较高。结论实时荧光定量聚合酶链反应法对肺结核诊断方面灵敏度及特异度较高,同时反映抗结核治疗过程中痰标本中的结核杆菌的数量变化,对抗结核药物疗效有良好的监控效果,应列入肺结核常规实验室检查项目。     

4种性病病原体聚合酶链反应检测结果分析

目的　探讨聚合酶链反应 (PCR)联合检测 4种性病病原体的必要性。方法　用PCR对 5 0 5 5例患者进行 4种病原体检测 ,其中对 4 0 99例患者进行沙眼衣原体 (CT)、解脲支原体 (UU)联合检测。结果　CT ,UU阳性率分别是 2 1.5 4 %和 2 4 .4 7% ,混合感染率为 5 .88% ,总感染率达 4 0 .13% ,远高于单项检测的阳性率。对 95 6例患者进行人乳头瘤病毒 (HPV)、单纯疱疹病毒 (HSV)联合检测 ,结果HPV ,HSV阳性率分别是 2 8.97%和 2 8.35 % ,混合感染率为 11.0 9% ,总感染率达 4 6 .2 3%。HPV男、女的阳性率分别为 19.37%和 4 1.12 % ,两者有极显著差异 (P <0 .0 0 5 )。对HSV阳性标本进行分型 ,HSV -II占 97.6 7%。结论　 4种性病病原体应做联合检测 ,以免漏诊。     

荧光聚合酶链反应在一期梅毒诊断中的应用探讨

目前临床上对一期梅毒初疮常用的检测主要有血清快速反应素环状卡片试验(RPR)、梅毒螺旋体血凝试验(TPHA)、荧光聚合酶链反应(FQ—PCR)、暗视野显微镜检查等，为探讨荧光聚合酶链反应在检测一期梅毒初疮中的临床意义，作者选取了62例临床上可疑为一期梅毒患者的生殖器溃疡或糜烂面分泌物同时作RPR、TPHA、暗视野显微镜、FQ—PCR检测，所选病例中初疮出现2周内的26例，初疮出现2周以上的38例，把两个时段患者所测结果进行对比分析，以评价FQ—PCR在检测一期梅毒初疮中的作用。现把所得结果报道如下。     

聚合酶链反应-酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸

目的 :评价聚合酶链反应 -酶联免疫吸附试验 (PCR- EL ISA)测定乙型肝炎病毒 DNA(HBV DNA)的临床应用价值。方法 :采用定量 PCR- EL ISA法和 EL ISA法分别检测 2 0 8例乙型肝炎患者血清的 HBV DNA和 HBV血清标志物(HBVm ) ,3 4份健康体检者作为阴性对照。结果 :血清 HBV DNA含量 >4× 10 6 拷贝 /ml分别是抗 HBc Ig M组、HBe Ag组、抗 HBc组、抗 HBe组和三抗体组 (抗 HBs、抗 HBBe、抗 HBc) ,其 HBV DNA阳性率分别为 10 0 % ,97.75 % ,62 .3 0 % ,41.67% ,16.0 0 %。结论 :PCR- EL ISA法定量检测 HBV DNA具有较强的特异性和灵敏度 ,为临床早期诊断 ,了解乙型肝炎病毒复制情况 ,判断有无传染性以及药物疗效观察具有重要的临床意义     

荧光探针定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒DNA的临床应用

荧光定量聚合酶链反应 (FQ -PCR)首先由美国的Ap pliedBiosystems公司于 1996年推出 ,该技术实现了PCR从定性到定量的飞跃 ,融会了PCR的高灵敏性、DNA杂交的高特异性和光谱技术的高精确定量等优点 ,有效地解决了其他方法很难处理的PCR污染的问题 ,尤其在检测HBV -DNA中的应用越     

中国汉族和蒙古族健康人药物代谢酶CYP3A4、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6基因多态性分析

 目的 用基因分型技术对中国汉族、蒙古族健康人CYP3A4、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6进行基因多态性分析,并对汉族人和蒙古族人基因表型和基因频率进行比较。方法 聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)对CYP3A4、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6进行分型。结果 汉族、蒙古族健康人CYP3A4*5等位基因频率为0, CYP3A4*18等位基因频率分别为0.183 8、0.202 5,CYP2C9*2等位基因频率分别为0.011 0、0.025 3, CYP2C9*13等位基因频率分别为0、0.00 32,CYP2C19*2等位基因频率分别为0.386 0、0.4146, CYP2C19*3等位基因频率分别为0.051 5、0.044 3,CYP2D6*10等位基因频率分别为0.573 5、0.465 2。结论 汉族、蒙古族健康人群CYP3A4*18、CYP2C19*2、CYP2C19*3、CYP2D6*10等位基因频率均没有显著性差异;本试验在汉族、蒙古族健康人中未发现CYP3A4*5等位基因;仅在蒙古族健康受试人群中发现1人为CYP2C9*1/*13基因型;蒙古族CYP2C9*2等位基因频率远小于汉族（P=0.023）。     

基于细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ序列位点特异性聚合酶链反应鉴别鹿茸及其伪品

目的:基于细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)序列建立一种新的PCR鉴定方法,以快速鉴别出梅花鹿、马鹿茸片与驯鹿茸片。方法:采集不同来源的鹿茸片共60批。通过比较梅花鹿、马鹿与驯鹿等其他伪品的COⅠ基因序列差异,根据SNP鉴别位点设计梅花鹿茸、马鹿茸同驯鹿茸的鉴别引物Cne-F、Rt-F、Co-R,并对影响聚合酶链反应(PCR)结果的主要因素变性时间、退火温度、退火时间、延伸时间等进行方法学考察和优化。结果:该实验构建的双位点特异PCR鉴别体系,基于COⅠ的鉴别位点,可通过PCR扩增获得294 bp的梅花鹿、马鹿特异片段,而产生514 bp的驯鹿特异片段,伪品及阴性对照无条带。结论:该实验建立对梅花鹿、马鹿及驯鹿等其他伪品鹿茸的PCR鉴别方法简便、可靠。     

逆转录-聚合酶链反应法检测消瘤保肺丸对E-cad、α-catenin及β-catenin表达的影响

目的 研究消瘤保肺丸对人肺癌PG细胞中E-cad、α-catenin及β-catenin表达的影响.方法 采用逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测E-cad、α-catenin及β-catenin表达的情况.随机分为四组,即消瘤保肺丸高剂量组、消瘤保肺丸低剂量组、对照组及空白组,分析电泳凝胶的灰度值.结果 消瘤保肺丸高剂量组对3种分子的表达与空白组差异显著,(P<0.01).消瘤保肺丸低剂量组α-catenin、β-catenin表达与空白组差异显著,(P<0.05);E-cad表达与空白组无显著差异,(P>0.05).在α-catenin的表达与空白组差异显著,(P<0.05).结论 消瘤保肺丸对人肺癌PG细胞的E-cad、α-catenin及β-catenin的表达有明显影响,消瘤保肺丸对肺癌有一定的抑制作用,该实验为今后分子水平的进一步研究提供了依据.     

鹿茸线粒体DNA的指纹鉴定研究

 目的 通过鹿茸特异性引物鉴别和随机扩增多态DNA(RAPD)鉴别的比较,选择一种更简便的方法用于鉴别鹿茸。 方法 采用盐析法从梅花鹿茸、马鹿茸、驯鹿茸、市售鹿茸等样品中抽提线粒体DNA,并应用试剂盒进行纯化。进行特异性引物扩增和序列测定,同时进行随机扩增多态DNA扩增。结果 梅花鹿茸,马鹿茸,驯鹿茸以及部分市售鹿茸经特异性引物扩增后均可在琼脂糖凝胶中显示313 bp片段,只是条带亮度不同。而其余市售鹿茸无扩增条带; 随机扩增多态DNA不仅有效显示阳性与阴性的DNA扩增结果,而且对梅花鹿茸,马鹿茸,驯鹿茸的聚合酶链反应产物的差异,以不同的条带数目和条带亮度得以验证。结论 随机扩增多态DNA鉴别鹿茸真伪的方法更准确快捷,通过随机扩增多态DNA扩增后主条带与梅花鹿茸或马鹿茸扩增的条带大小和亮度一致,则为正品;如不一致,则为《中国药典》规定外的鹿茸或其他混淆品。这种方法对于筛选、甄别市售动物中药材,特别是名贵中药具有广阔的应用前景。