桃红四物汤Ⅱ号抗血管生成作用及其对KDR/FLK-1表达的影响

目的探讨桃红四物汤(THSWD)Ⅱ号抗血管生成作用及其机理.方法以鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)法检测THSWDⅡ号对新生血管的效应,以MTT法检测其对血管内皮细胞ECV304增殖有无抑制作用,并以免疫组化法观察该方对小鼠B16黑色素瘤血管内皮细胞KDR/FLK-1的表达和微血管密度(MVD)计数的影响.结果THSWDⅡ号1 g/mL、2 g/mL组CAM血管指数降低(P＜0.01);THSWDⅡ号1 mg/mL、2 mg/mL组ECV304细胞吸光度值降低(P＜0.01);THSWDⅡ号5 g/kg、10 g/kg组及THSWDⅡ号10 g/kg 环磷酰胺25 mg/kg组肿瘤重量、KDR/FLK-1的表达、MVD计数均降低(P＜0.01).结论THSWDⅡ号具有抗CAM血管生成、抑制ECV304细胞增殖、抑制小鼠B16黑色素瘤生长的作用.其抗肿瘤作用机制可能与抑制内皮细胞KDR/FLK-1的表达,继而抗血管生成有关.     

三氧化二砷抑制小鼠B16黑色素瘤肺转移作用的研究

目的 探讨三氧化二砷（As2O3）对小鼠B16黑色素瘤肺转移的抑制作用。     

桃红四物汤对实验性脑缺血大鼠血清中ET-1,Ang-1,VEGF的影响

目的:观察实验性脑缺血损伤大鼠血清中内皮素1(ET-1),血管形成素1(Ang-1)和血管内皮生长因子(VEGF)水平的变化及桃红四物汤(TSD)对其的干预作用。方法:健康SD大鼠48只,以线栓法构建大鼠大脑中动脉栓塞致局灶性缺血损伤模型,实验动物随机分为6组,分别为假手术组、模型组、桃红四物汤3个剂量组(18,9,4.5 g·kg~(-1))和尼莫地平组(0.02 g·kg~(-1))。连续ig 7 d,采用TTC染色法对脑梗死体积进行检测,通过测定全血黏度和血浆黏度,观察桃红四物汤对脑缺血损伤大鼠血液流变学的影响,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠血清中ET-1,Ang-1和VEGF水平。结果:桃红四物汤高剂量组能显著减小脑缺血梗死体积。与假手术组比较,模型组全血黏度高、中、低切及血浆黏度均升高,差异具有统计学意义;与模型组比较,桃红四物汤高、中剂量组可显著降低高、中、低3个切变率下的全血黏度及血浆黏度,桃红四物汤低剂量组可显著降低脑缺血大鼠的血浆黏度;与模型组比较,桃红四物汤能显著降低血清中ET-1含量,显著升高血清中Ang-1和VEGF含量。结论:桃红四物汤可以明显改善脑梗死情况以及促进实验性脑缺血大鼠缺血区的血管新生,其作用机制可能与调控脑缺血大鼠血清中ET-1,Ang-1,VEGF含量有关。     

芪竹方粗提物对MGC-803细胞VEGF、KDR/flk-1蛋白表达的影响

目的 探讨芪竹方粗提物对MGC-803细胞血管内皮生长因子(VEGF)及其血管内皮生长因子受体(KDR/ilk-1)蛋白表达的影响.方法 MGC-803细胞处理方法被分成空白对照、二甲基亚砜(DMSO)对照、芪竹方粗提物高(500 μg/ml)、低浓度(250 μg/ml)四组,采用流式细胞仪、western blot...     

桃红四物汤对大鼠显微吻合血管内皮修复及血浆VEGF表达的影响

血管内皮生长因子（VEGF）是目前已知活性最强、专属性最高的血管生成因子。有研究提示VEGF可能在缺血及其相关性疾病发病机制中具有一定的作用,故笔者通过测定显微吻合大鼠血管处血浆VEGF水平,观察显微吻合血管内皮修复情况,以此探讨VEGF在缺血性相关疾病中的作用机制,现介绍如下。     

复色1号方对小鼠B16黑素瘤细胞增殖及酪氨酸酶活性的影响

目的 探讨复色1 号方对小鼠B16 黑素瘤细胞增殖及酪氨酸酶活性的影响.方法 采用MTT 法测定不同浓度的复色1 号方对小鼠B16 黑素瘤细胞增殖的影响,多巴速率氧化法测定对酪氨酸酶活性的影响,对其结果进行统计分析.结果 复色1 号方浓度在0.001～0.01g/l,范围内对小鼠B16 黑素瘤细胞的增殖与对照组相比无统计学意义(P＞0.05),0.05～0.1g/l 浓度范围内对小鼠B16 黑素瘤细胞的增殖与对照组相比有显著意义(P＜0.05),呈现一定的抑制作用;复色1 号方在0.001～0.1g/l 浓度范围内对小鼠B16 黑素瘤细胞中酪氨酸酶活性的影响与对照组相比,各浓度含药培养基组的A 值均有显著性差异(P＜0.05),呈剂量依赖性激活作用.在0.001～ 0.01g/l 浓度范围内,复色1 号方的最佳激活浓度为0.01g/l.结论 复色1 号方没有促进小鼠B16 黑素瘤细胞增殖的作用;在一定浓度范围内(0.001～0.1g/l),对小鼠B16 黑素瘤细胞酪氨酸酶的活性呈剂量依赖型激活作用.     

桃红四物汤对心肌梗死后心室重构及血管紧张素受体1表达的影响

目的:观察桃红四物汤对心肌梗死后心室重构的作用以及对血管紧张素受体1(AT1)表达的影响.方法:通过结扎大鼠冠状动脉构建心肌梗死后心室重构模型.将大鼠随机分为假手术组、模型组、卡托普利组、桃红四物汤低、中、高浓度组,每组12只,每组大鼠连续给药12周.治疗结束后采用多普勒超声心动图评价大鼠心功能,计算心脏质量/体质量比...     

山豆根对小鼠黑色素瘤细胞B16-BL6生长、增殖的影响

目的研究山豆根对小鼠黑色素瘤细胞B16-BL6生长、增殖的影响。方法培养小鼠黑色素瘤细胞B16-BL6并随机分为对照组和处理组,对照组用不含药物的RMPI1640培养基进行处理,处理组分别采用含有400μg/ml、500μg/ml、600μg/ml、700μg/ml、800μg/ml山豆根提取物的RMPI1640培养基进行处理。采用细胞增殖抑制实验、黏附实验、侵袭重组基底膜实验、趋化性运动实验观察山豆根提取物对黑色素瘤细胞B16-BL6增殖、黏附、侵袭和转移的影响。结果山豆根提取物终浓度为700、800μg/ml时,B16-BL6细胞增殖生长OD值明显低于对照组(t=2.526,4.371,P0.05);山豆根提取物终浓度为500、600、700、800μg/ml时,黏附能力OD值明显低于对照组(t=4.856,8.515,8.926,12.357,P0.05),侵袭细胞数明显低于对照组(t=4.661,9.824,12.460,16.300,P0.05),趋化性运动细胞数明显低于对照组(t=2.698,3.906,6.012,7.974,P0.05)。结论山豆根具有抑制小鼠黑色素瘤细胞B16-BL6增殖、黏附、侵袭和转移的能力,且与药物剂量呈依赖性关系。     

桃红四物汤对肝纤维化模型大鼠肝脏组织uPA/PAI-1mRNA表达的影响

目的:观察桃红四物汤对肝纤维化模型大鼠肝脏组织基质金属蛋白酶(MMPs)以及尿激酶型纤溶酶原激活物/纤溶酶原激活物抑制因子1(u PA/PAI-1)mRNA表达的影响,从纤溶系统-肝纤维化密切关联角度探讨该方药治疗肝纤维化的现代科学内涵。方法:按传统水煎法制备桃红四物汤制剂,采用HPLC法测定制剂中阿魏酸和羟基红花黄素含量以控制质量。采用皮下注射50%CCl4连续12周(每周2次)的方法制备肝纤维化模型大鼠,将模型动物随机分成模型组、秋水仙碱组(2mg/kg)、桃红四物汤4.25、8.50、17.00g/kg剂量组,每组10只,另取10只正常大鼠为正常组。从造模第7周开始,各组动物按剂量灌胃给药,10ml/kg体重,正常组和模型组给予等容量蒸馏水,每天1次,连续给药6周。末次给药后,禁食不禁水12h,3%水合氯醛麻醉处死动物,腹主动脉取血,分离血清,采用全自动生化分析仪测定AST、ALT活性;摘取部分肝脏,采用碱水解法测定羟脯氨酸(Hyp)含量;采用Westblot法测定MMP-1、TIMP-1的表达;采用荧光定量PCR法检测u PA、PAI-1mRNA的表达。另取部分肝脏组织,10%的福尔马林固定,HE染色进行病理学检查。结果:造模12周后,模型大鼠血清AST、ALT活性及肝脏组织Hyp含量显著增加,肝脏组织MMP-1、u PA表达显著降低、TIMP-1和PAI-1活性明显增加;连续给药6周后,桃红四物汤8.5、17g/kg剂量组能明显降低AST、ALT活性及肝脏组织Hyp含量;桃红四物汤各组均能增加MMP-1活性、降低TIMP-1的表达,其中桃红四物汤17g/kg剂量组作用明显;桃红四物汤各组均能明显增加u PA的活性,显著降低PAI-1mRNA的表达。HE染色显示:正常组大鼠肝组织肝索排列规则有序,结构清晰,肝细胞以中央静脉为中心呈放射状分布;模型组大鼠肝脏组织肝小叶结构破坏,肝索排列紊乱,肝细胞广泛性空泡样变性、坏死,汇管区扩大、并见大量纤维组织增生,将肝小叶分隔成大小不等的肝细胞团;桃红四物汤各组肝小叶结构破坏程度降低,肝细胞脂肪空泡变性减少。结论:桃红四物汤抗肝纤维化作用可能是通过激活u PA纤溶酶系统,增加MMPs活性,抑制胶原异常增生,维持细胞外基质平衡。     

南蛇藤对鼠黑色素瘤B16BL6细胞增殖抑制及凋亡诱导作用研究

目的：探讨南蛇藤乙酸乙酯提取物对鼠黑色素瘤B16BL6细胞增殖的抑制作用以及对细胞凋亡的影响。方法：采用MTT法测定细胞增殖,通过AO/EB染色法观察细胞的凋亡形态,应用流式细胞仪检测细胞的凋亡。结果：南蛇藤乙酸乙酯提取物可以抑制鼠黑色素瘤B16BL6细胞增殖,诱导其凋亡,呈剂量依赖性,并且与药物作用时间呈正相关。结论：南蛇藤乙酸乙酯提取物能够抑制鼠黑色素瘤B16BL6细胞增殖,诱导其凋亡。     

桃红四物汤对实验性大肠癌Bcl-2/Bax蛋白及Casepase-3mRNA表达的影响

目的:观察桃红四物汤对大肠癌凋亡相关基因Bcl-2、bax蛋白和Casepase-3 mRNA表达的影响。方法:建立BALB/C小鼠人大肠癌LS174T细胞大肠癌模型,随机选取48只荷瘤小鼠分为模型组,桃红四物汤组,5-Fu组,桃红四物汤+5-Fu组,每组12只小鼠。模型组灌服生理盐水。检测各组肿瘤体积、重量、免疫组化检测Bcl-2、bax和实时定量PCR检测Casepase-3 mRNA的表达情况。结果:桃红四物汤组,5-Fu组,桃红四物汤联合5-Fu组移植瘤质量均显著低于模型组(P<0.05),以桃红四物汤+5-Fu组较显著。桃红四物汤联合5-FU组凋亡相关基因Bcl-2、Casepase-3表达减弱(P<0.05)、Bax表达增强均较模型组显著(P<0.05)。结论:桃红四物汤对Bcl-2蛋白及Casepase-3 mRNA表达有一定的抑制作用,对Bax蛋白表达有促进作用,以桃红四物汤联合5-Fu为著。     

槲皮素-环糊精复合物对B16F10黑色素瘤细胞荷瘤BDF1小鼠肿瘤生长和肿瘤血管生成的抑制作用

〔英〕/Kale R…∥J Pharm Pharmacol.-2006,58(10).-1351~1358研究了难溶于水的槲皮素与磺丁基醚-7β-环糊精(后者可增加槲皮素的溶解性)复合物抑制肿瘤血管生成和肿瘤细胞生长的作用。在体外实验中,将经过培养的人红-白细胞癌和宫颈癌细胞株接种于96孔板(1×104/孔)培育24h后     

三氧化二砷通过抑制新生血管形成发挥抗小鼠恶性黑色素瘤作用

目的:采用小动物活体成像技术研究三氧化二砷(As2O3)的抗小鼠恶性黑色素瘤作用及其机制。方法:荧光素酶(luciferase,Luc)基因标记小鼠B16黑色素瘤(B16-Luc)细胞,MTT比色法和Annexin V/PI双标记法分别检测细胞增殖活性及凋亡;BALB/c小鼠腋下接种B16-Luc细胞制备荧光黑色素瘤动物模型,腹腔注射4和8 mg/kg As2O3治疗25天,小动物光学活体成像系统连续动态观察肿瘤生长;治疗末期处死动物、剥离肿瘤块、制片,HE和CD34免疫组化染色观察肿瘤病理和新生微血管形成。结果:1.0~32.0μmol/L As2O3体外显著抑制B16-Luc细胞增殖和诱导其凋亡。活体成像技术观察显示As2O3在体内剂量依赖性地抑制小鼠B16-Luc恶性黑色素瘤的生长,肿瘤组织中新生微小血管显著减少,肿瘤组织中心呈明显坏死改变。结论:As2O3体外诱导小鼠恶性黑色素瘤B16细胞凋亡,主要通过降低肿瘤组织新生血管的形成、促使肿瘤坏死而发挥抗恶性黑色素瘤作用。     

胃复方调控HIF-1α/VEGF信号通路抑制胃癌细胞增殖及血管生成机制研究

目的：观察不同浓度胃复方水提物（WFF）对人胃癌HGC-27细胞的增殖抑制作用，进一步探讨WFF调控HIF-1α/VEGF信号通路的作用机制。方法：采用不同浓度（1.2 mg/mL、1.3 mg/mL、1.4 mg/mL、1.5 mg/mL、1.6 mg/mL、1.7 mg/mL、1.8 mg/mL）的WFF,CCK-8法寻找最佳干预浓度并观察不同的干预组别[非特异性对照组（NC组）、WFF组、WFF+HIF-1α过表达质粒组、WFF+2-MeOE2 (HIF-1α抑制剂)组、HIF-1α过表达质粒组、2-MeOE2组、甲磺酸阿帕替尼组]对HGC-27细胞增殖的影响；运用血管生成实验观察不同组别对胃癌细胞血管生成能力的影响；进一步采用Western blot法观察不同组别[NC组、WFF组、WFF+HIF-1α过表达质粒组、WFF+2-MeOE2组（HIF-1α抑制剂）、HIF-1α过表达质粒组、2-MeOE2组]对HIF-1α/VEGF信号通路相关蛋白表达的影响。结果：CCK-8法验证了WFF与NC组比较，对HGC-27细胞增殖具有抑制作用，差异有统计学意义（P<0.01），且...     

桃红四物汤对药物致不完全流产早孕大鼠的血管生成及Ang-1,Ang-2,Tie-2表达的影响

目的:观察桃红四物汤对药物致早孕大鼠不完全流产模型的大鼠子宫微血管密度,血清中促血管生成素1(Ang-1)和促血管生成素2(Ang-2)含量及子宫组织中酪氨酸激酶受体(Tie-2)表达的影响。 方法:SD早孕大鼠采用灌胃米索前列醇(100 μg·kg^-1)和米非司酮(8.3 mg·kg^-1)造成不完全流产大鼠模型,随机分为模型组(等容量蒸馏水)、阳性药物益母草颗粒组(4.3 g·kg^-1)、桃红四物汤高、中、低剂量组(18.0,9.0,4.5 g·kg^-1),受孕大鼠作为正常对照组(等容量蒸馏水)。连续灌胃7 d后腹主动脉取血及大鼠子宫组织,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中Ang-1和Ang-2的含量,采用免疫组化检测子宫组织的Tie-2及微血管密度(MVD)CD34的表达情况。 结果:桃红四物汤显著增加药物流产后大鼠子宫的血管微密度,显著升高血清中Ang-1,Ang-2的含量,并使子宫组织中Tie-2的表达显著增加。 结论:桃红四物汤有明显的促进不完全流产早孕大鼠子宫血管新生作用,作用机制可能与调节血清中Ang-1和Ang-2的浓度及子宫组织中Tie-2的表达相关。     

桃红四物汤对光老化小鼠皮肤组织中MMP-1、MMP-3 mRNA及血清中TNF-α、IL-1含量表达的影响

目的:研究桃红四物汤对光老化小鼠皮肤组织中基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)mRNA及血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1(IL-1)的影响。方法:将60只小鼠随机分为6组,空白对照组、模型对照组、阳性对照组(VE组)和中药低、中、高剂量组,对模型对照组、阳性对照组(VE组)和中药低、中、高剂量组制备光老化模型,空白对照组正常饲养。空白对照组和模型对照组给生理盐水,高、中、低剂量组给相应剂量药液,阳性对照组(VE组)给予维生素E滴剂,于造模前30 min灌胃。造模完成后,采用Elisa和RT-PCR方法检测血清中TNF-α、IL-1含量和皮肤组织中MMP-1、MMP-3 mRNA含量的表达水平。结果:与空白对照组比较,模型对照组血清中TNF-α、IL-1和皮肤组织中MMP-1、MMP-3 mRNA含量的表达水平显著上升,差异具有统计学意义(P0.01);与模型对照组组比较,中药低、中、高剂量组血清中TNF-α、IL-1和皮肤组织中MMP-1、MMP-3 mRNA含量的表达水平显著下降,差异具有统计学意义(P0.01)。结论:桃红四物汤在皮肤光老化过程中具有保护作用。     

马尾松树皮提取物对小鼠B16黑色素瘤细胞中黑色素生成抑制效果及其机制的初步研究

目的探讨马尾松树皮提取物(Pinus massoniana bark extract,PMBE)抑制小鼠B16黑色素瘤细胞中黑色素的生成效果及其分子机制。方法 10～50μg/ml的PMBE与小鼠B16黑色素瘤细胞共培养后进行各项细胞学研究:MTT法检测PMBE对细胞的毒性;以左旋多巴为底物测定PMBE对酪氨酸酶(TYR)活性的抑制作用;DCM法检测PMBE对细胞ROS的清除能力;比色法测定PMBE对细胞内黑色素生成的抑制效果以及对细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)、GSH/GSSG的影响;RT-PCR检测酪氨酸酶及其相关蛋白1(TRP-1)和2(TRP-2)在mRNA水平表达量的影响。结果 PMBE对小鼠B16黑色素瘤细胞的增殖无明显影响,并可显著减少细胞内的黑色素含量。另外,PMBE对活性氧具有很强的清除能力,同时可上调细胞内GSH/GSSG比率,从而增强细胞的还原力。PMBE还对酪氨酸酶活性表现出了一定的抑制效果,但这种抑制却并不发生在mRNA水平。结论 PMBE对小鼠B16黑色素瘤细胞内黑色素生成具有显著抑制效果并主要通过降低酪氨酸酶活性和清除活性氧来实现。     

桃红四物汤对光老化小鼠皮肤组织中Smad-3、TIMP-1、TIMP-2、AP-1蛋白表达水平的影响

目的:研究桃红四物汤对光老化小鼠皮肤组织中Smad-3、TIMP-1、TIMP-2、AP-1蛋白含量的影响。方法:将30只小鼠随机分为6组,分别为中药低、中、高剂量组、空白对照组、模型对照组、阳性对照组(VE组)。对模型对照组、阳性对照组(VE组)和中药低、中、高剂量组小鼠进行皮肤光老化模型制备,空白对照组小鼠正常饲养。在造模前30 min,给空白对照组和模型对照组小鼠灌胃生理盐水,高、中、低剂量组小鼠灌胃相应剂量药液,阳性对照组(VE组)灌胃维生素E滴剂。造模完成后,采用Western-blot方法检测皮肤组织中MMP-1、MMP-3、MMP-12、Smad-2蛋白含量的表达水平。结果:与空白对照组比较,模型对照组小鼠皮肤组织中Smad-3、TIMP-1、TIMP-2蛋白含量的表达水平显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05),AP-1蛋白表达水平显著上升(P<0.05);与模型对照组相比,中药低、中、高剂量组小鼠皮肤组织中Smad-3、TIMP-1、TIMP-2蛋白的表达水平显著上升(P<0.05),AP-1蛋白表达水平显著下降(P<0.05)。结论:桃红四物汤对皮肤光老化具有一定的保护作用。     

乳宁Ⅱ号对乳腺癌小鼠移植瘤生长转移的防治作用及其机制

目的 探讨乳宁Ⅱ号对乳腺癌MA-891 TA2小鼠移植瘤生长转移的作用及其机制.方法 建立乳腺癌MA-891细胞株TA2小鼠移植瘤肺转移模型,观察药物对移植瘤生长转移的影响,结合免疫组化法、图像分析法检测血管内皮生长因子（VEGF）、血管内皮生长因子受体（VEGFR）、微血管数（MVC）、微血管面积（MVA）的水平.结果 乳宁Ⅱ号组瘤重抑制率、肺转移抑制率分别为37.3%,65.4%,肿瘤的生长和肺转移受到明显的抑制;乳宁Ⅱ号组VEGF、VEGFR、MVC、MVA的水平较荷瘤对照组水平明显降低（P＜0.05）.结论 乳宁Ⅱ号能通过抑制新生血管形成发挥抑瘤抗转移的作用,其机制可能与通过下调VEGF、VEGFR表达水平有关.     

乳宁Ⅱ号防治乳腺癌MDA-MB-435裸鼠移植瘤生长转移作用及其抑制血管生成的机制研究

乳腺癌是严重威胁妇女健康的恶性肿瘤，其发病率已列居女性恶性肿瘤的首位，并呈逐年上升趋势。尽管治疗方法有所进步，然而乳腺癌远期生存率并未得到明显改善，肿瘤侵袭性生长及转移是其最重要的原因及关键的因素，而肿瘤的血管生成是肿瘤生长侵袭、转移的基本条件。因此，抑制肿瘤血管生成是阻止肿瘤发生发展、延长患者生命的有效途径。