人骨肉瘤细胞体外药物敏感性的实验研究

采用四氮唑蓝（MTT）分析检测10例骨肉瘤细胞对氨甲喋呤（MTX）、阿霉素（ADR）、顺铂（CDDP）、长春新碱（VCR）、氮芥（NM）、丝裂霉素（MMC）的药物敏感性。其样本的检测率达9O％。骨肉瘤细胞对化疗药物的敏感性不一,其50％细胞生存的药物浓度（IC50）差异很大。在临床用药剂量下,6种化疗药物的平均生存率之间差异有显著性（P<0.01）,其中ADR除与CDDP之间差异无显著性外,与其它相比差异有显著性。同时观察到6种药物的剂量效应曲线也不相同。因而认为此结果不仅可作为一种药物敏感性试验的方法指导临床选择化疗药物,而且提示骨肉瘤细胞的药物作用模式。     

生物蛋白胶甲氨蝶呤缓释药粒在兔的体外和体内实验

目的：研究抗肿瘤药物载体的不同浓度纤维蛋白胶对抗肿瘤药物释放的影响.方法：（1）配制抗肿瘤药物与不同浓度纤维蛋白胶混合制剂.（2）纤维蛋白胶缓释药粒体外试验.（3）动物实验：把纤维蛋白胶甲氨蝶呤缓释药粒植入兔胫骨上端进行体内释放实验,并与静脉注射相同剂量甲氨蝶呤进行比较.结果：（1）纤维蛋白胶MTX缓释剂的药物释放与纤维蛋白浓度有关.体内外试验表明在释放初始时低及高纤维蛋白浓度组均有较高药物释放,后期药物释放量与纤维蛋白浓度呈负相关.（2）三组低、中、高不同浓度纤维蛋白胶缓释药粒,可使MTX在局部骨组织中维持有效含量达3周,中浓度组在第4周仍有较高有效含量.且骨组织中最高含量是静脉注射相同剂量时骨含量300倍以上,但血浆峰值浓度仅为静脉组血浆峰值七分之一以下.结论：（1）纤维蛋白胶体浓度变化不仅影响胶体密度,而且影响所含药物浓度.药物释放量与两者相互作用有关.（2）三种低、中、高不同浓度纤维蛋白胶体与MTX制成的缓释药粒具有良好的缓释功能.该缓释药粒MTX的1次局部用量可超过静脉注射1次用量的7倍以上,能较好的满足骨肿瘤局部化疗用药量大,维持时间较长,血浆药物浓度低,全身反应小的用药要求.（3）维持骨肿瘤局部较高的药物含量,及较长的时间宜选取用中等浓度的纤维蛋白胶体.     

壳多糖对骨巨细胞瘤的治疗意义

目的：确定壳多糖（几丁糖）是否可作为骨巨细胞瘤治疗的药物载体。方法：用壳多糖及壳多糖联合阿霉素，顺氨氧铂及甲氨喋呤对骨巨细胞瘤进行体外敏感实验（ＭＴＴ法）。结果：单纯壳多糖对骨巨细胞瘤在体外无抑制作用（抑制率为１．８％），壳多糖联合阿霉素，顺氨氯铂及甲氨蝶呤分别较单独应用相同浓度（血浆峰值浓度）药物的抑制率要高，但无显著差异（Ｐ〉０．０５）。结论：壳多糖可以作为阿霉素，顺氨氯铂及甲蝶呤的良好缓释载     

姜黄素及其联合化疗对子宫颈癌Hela细胞体外增殖的影响

目的：探讨姜黄素（curcumin,Cur）及其联合化疗对子宫颈癌Hela细胞体外生长的抑制作用.方法：将Cur单独应用或与临床上常用的宫颈癌化疗药物顺铂（cDDP）、博来霉素（BLM）、拓扑替康（TPT）联合应用,观察对Hela细胞生长抑制率的影响,药物敏感实验采用MTT法.结果：Cur抑制Hela细胞的生长,其半数抑制浓度（IC50）为22.37μmol/L,Cur与各种浓度的cDDP、BLM或TPT联用,可提高各种药物对Hela细胞的生长抑制率（P＜0.05）.结论：Cur在体外对宫颈癌Hela细胞具有抑制作用,与cDDP、BLM或TPT联合应用,可提高3种药物的化疗效果.     

复方浙贝颗粒联合顺铂对L1210/CDDP移植瘤小鼠的抑瘤作用及相关凋亡蛋白的影响

目的探讨复方浙贝颗粒联合顺铂(CDDP)对L1210/CDDP移植瘤小鼠的抑瘤作用及瘤体组织相关凋亡蛋白的影响。方法将急性淋巴细胞白血病多药耐药细胞株L1210/CDDP细胞接种于DBA/2小鼠腋前皮下构建多药耐药移植瘤模型,成模后按随机数字表法将移植瘤小鼠分成模型组、阳性药物(CDDP)组、高剂量CZBG联合CDDP组、中剂量CZBG联合CDDP组、低剂量CZBG联合CDDP组、中剂量CZBG组,分组当天给药;治疗结束后,计算实验各组的抑瘤率,应用免疫组织化学检测各组移植瘤的BCL-2及BAX蛋白表达情况。结果与模型组及顺铂组比较,各剂量CZBG联合CDDP组均能提高急性淋巴细胞白血病耐药细胞株L1210/CDDP移植瘤的抑制率(P0.05);与阳性药CDDP组比较,高剂量CZBG联合CDDP组具有较高的抑瘤率(P0.05)。与模型组及阳性药CDDP组比较,中、高剂量CZBG联合CDDP组能降低BCL-2表达(P0.05),提高BAX表达及BAX/BCL-2比值(P0.05)。结论 CZBG联合CDDP能提高急性淋巴细胞白血病耐药细胞株移植瘤的肿瘤抑制率,其机制可能是通过调节BAX/BCL-2凋亡途径来逆转多药耐药性,从而增加肿瘤细胞对药物的敏感性,起到协同增效的作用。     

异搏定逆转骨肉瘤多药耐药的体外初步观察

目的：探讨异搏定是否能在体外逆转骨肉瘤多药耐药。方法：应用MTT法测定异搏定与阿霉素共同作用后骨肉瘤细胞的细胞活性。结果：1μg阿霉素单独作用24h，骨肉瘤细胞的细胞活性在90％左右，抑制率为10％，48h抑制率为50％左右，而加入异搏定后，骨肉瘤的细胞活性明显降低，特别是在1μg／ml细胞悬液浓度时，抑制率最高，24h细胞抑制率达50％左右。结论：异搏定体外可逆转骨肉瘤多药耐药。     

异搏定逆转骨肉瘤多药耐药的体外初步观察

目的：探讨异搏定是否能在体外逆转骨肉瘤多药耐药，方法：应用ＭＴＴ法测定异搏定与阿霉素共同作用后骨肉瘤细胞的细胞活性，结果：１μｇ阿霉素单独作用２４ｈ骨肉瘤细胞的细胞活性在９０％左右，抑制率为１０％，４８ｈ抑制率为５０％左右，而加入异搏定后，骨肉瘤的细胞活性明显降低，特别是在１μｇ／ｍｌ细胞悬液浓度时，抑制率最高，２４ｈ细胞抑制率达５０％左右，结论：异搏定体外可逆转骨肉咨询我药耐药。     

药物敏感试验指导小鼠多次传代胃癌化疗的疗效及耐药基因观察

目的 通过应用药敏试验筛选化疗药物对多次传代的荷瘤鼠进行化疗,了解其疗效及耐药基因的表达.方法 用MTT法检测小鼠胃癌细胞对6种化疗药物的敏感性,对荷瘤鼠进行化疗,观察化疗后移植瘤的体积、抑瘤率,检测多药耐药基因1(MDR1)的表达.结果 用MTT法筛选最敏感的化疗药5-FU对第一代荷瘤小鼠进行化疗,其抑瘤率显著高于对照组,但MDR1的表达与对照组无显著性差异;筛选的最不敏感的阿霉素化疗组抑瘤率低,MDR1的表达与对照组比较无显著性差异.再对已行化疗的胃癌细胞筛选最敏感药物为顺铂,最不敏感药物为丝裂霉素.对第2代荷瘤小鼠进行化疗,发现顺铂组抑瘤率高,但MDR1的表达与对照组无显著性差异;丝裂霉素组抑瘤率低,MDR1表达高,与对照组比较有显著性差异.继而用5-FU和阿霉素对第2代荷瘤小鼠进行化疗,抑瘤率低,MDR1表达与对照组比较无显著性差异.结论 应根据药敏试验和耐药基因来实施科学的、药物适配的个体化化疗方案.     

重组可溶性TRAIL联合顺铂诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡的研究

目的 研究重组可溶性TRAIL(rsTRAIL)与化疗药物顺铂 (CDDP)单独及联合使用诱导骨肉瘤细胞MG-63的凋亡作用.方法 常规培养骨肉瘤细胞系MG-63,用不同浓度rsTRAIL、CDDP和两药联用处理细胞,于处理后的不同时间观察细胞形态变化.应用四氮唑蓝(MTT)比色法和吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双重荧光染色法检测两药单独使用和联合使用诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡的作用.结果 rsTRAIL对MG-63细胞的生长有明显的抑制作用,可见典型的细胞凋亡特点,细胞抑制率从6 μg/L的10.1%上升到800 μg/L的84.6%,细胞凋亡率从3 μg/L的19%提高到25 μg/L的69.7%,均具显著的剂量效应;亚毒性剂量的CDDP与低浓度的rsTRAIL合用,明显提高了MG-63细胞的生长抑制率和凋亡率(P＜0.05).结论 rsTRAIL具有诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡的作用,并通过诱导凋亡的方式有效地杀伤肿瘤细胞;化疗药物CDDP能加强rsTRAIL的抗肿瘤活性.     

人胃癌原代细胞培养化疗药物敏感性评价

目的:评价人胃癌原代细胞对7种化疗药物的敏感性。方法:取59例手术切除的新鲜胃癌组织标本,应用人胃癌原代细胞短期培养(混杂非肿瘤细胞)与纯化培养MTT法体外药敏试验,测定每种化疗药物对肿瘤细胞的抑制率。结果:药敏试验测定7种化疗药物抑制率除氨甲蝶呤(MTX)外纯化法均高于短期法,表明纯化法较敏感;两种方法测定药物敏感性顺序一致,由高至低依次为顺铂(DDP)、丝裂霉素(MMC)、阿霉素(ADM)、依托泊甙(VP-16)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、羟基喜树碱(HCPT)、MTX。结论:7种化疗药物以DDP、MMC、ADM较敏感,VP-16、5-FU次之,HCPT、MTX最差。     

Induction of apoptosis in osteogenic sarcoma cells by combination of tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand and chemotherapeutic agents

Background Osteosarcoma is one of the most common primary malignant tumors of bone with poor prognosis. TNF-related apoptosis inducing ligand (TRAIL) is a member of the tumor necrosis factor (TNF) cytokine family. TRAIL induces apoptosis in various tumor cell lines but is not found to be cytotoxic to many normal cell types in vitro. We investigated the cytotoxic activity of TRAIL and chemotherapeutic agents, including methotrexate (MTX), doxorubicin (DOX) and cisplatin (CDDP), on established osteosarcoma cell line—OS-732.Methods OS-732 cells were incubated with chemotherapeutic agents MTX,DOX and CDDP at various peak plasma concentrations(PPC), 0.1PPC,1PPC and 10PPC, alone or with 100 ng/ml of TRAIL for 24 hours or 48 hours. MTT was used to evaluate the cytotoxic activity of different agents on OS-732. The apoptosis proportion was assayed by flow cytometry. Cellular morphologic changes were observed by phase contrast microscope, scan electron microscope, and transmission electron microscope.Results The inhibitory rate was (24.438±3.414)% with TRAIL of 100 ng/ml for 24 hours. The cells were responsive to DOX and CDDP with a dose-effect relationship (P&lt;0.05). In OS-732 cells, DOX and CDDP cooperated synergistically with TRAIL when incubated the cells with them for 24 hours (the combined inhibitory rate is (58.360±2.146)% and (54.101±2.721)%, respectively). TRAIL alone or drugs alone induced the apoptosis rate was less than 25% (P&lt;0.05). However, the combination of TRAIL and MTX did not present synergistic effects on OS-732 cells (P&gt;0.05, compared with TRAIL alone). Conclusions Osteosarcoma OS-732 cells were not responsive to TRAIL-induced apoptosis. DOX and CDDP sensitize osteosarcoma OS-732 cells to TRAIL-induced apoptosis. The combination of TRAIL and MTX presented no synergistic effects on killing OS-732 cells.     

胃癌耐药细胞株耐药谱的体外实验

观察胃癌细胞与抗肿瘤药作用后对不同药物耐的耐受情况，方法：胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１在体外分别与长春新碱（ＶＣＲ），５氟尿嘧啶（５－Ｆｕ），阿霉素（ＡＤＭ）及氨甲喋呤（ＭＴＸ）作用，获得ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ，ＳＧＣ７９０１／ＡＤＭ，ＳＧＣ７９０１／５－Ｆｕ及ＳＧＣ７９０１／ＭＴＸ４个耐药细胞株。体外细胞毒性实验观察它们对ＶＣＲ，ＡＤＭ，５－Ｆｕ，ＭＴＸ，顺铂（ＣＤＤＰ）以及丝裂霉素Ｃ（ＭＭＣ）的敏     

Bcl-2短发夹状RNA增强甲氨喋呤对人淋巴瘤裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的:观察Bcl-2短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)与甲氨喋呤(methotrexate,MTX)联用后对人淋巴瘤裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法:45只裸鼠注射Raji细胞悬液制备裸鼠人淋巴瘤模型,将聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)与Bcl-2 shRNA载体质粒(本实验室制备)的混合物及MTX直接注入肿瘤内,观察Bcl-2 shRNA及联合MTX对肿瘤生长的影响。在用药21 d后无痛处死动物,分离皮下肿瘤,称重,计算抑瘤率;H-E染色观察肿瘤组织的病理形态;以RT-PCR法检测Bcl-2 mRNA在肿瘤内的表达情况。结果:Bcl-2 shRNA与MTX联用组移植瘤的生长最慢,与单用Bcl-2 shRNA和MTX相比差异有统计学意义(P<0.05)。处理结束后剥离瘤块,Bcl-2 shRNA组瘤质量与阴性shRNA组、空质粒组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。Bcl-2 shRNA与MTX联用对裸鼠移植瘤生长的抑制率最高,高于Bcl-2 shRNA和MTX的单用组(P<0.05)。H-E染色可见使用Bcl-2 shRNA组及MTX组出现明显的凋亡和组织坏死。瘤组织的单细胞悬液经RT-PCR检测显示Bcl-2 mRNA表达在Bcl-2 shRNA组均显著下降(P<0.05),而对照组则无明显变化。结论:Bcl-2 shRNA可增强MTX对人淋巴瘤裸鼠移植瘤生长的抑制作用。     

围手术期抑瘤治疗对于进展期肝癌肝移植的临床价值

目的 探讨围手术期抑瘤治疗对降低进展期肝癌(pTNM分期:Ⅲ、Ⅳa)肝移植术后肝癌复发率、提高患者生存率的临床价值.方法 回顾分析了2002年4月至2005年12月于我院接受肝移植的36例Ⅲ、Ⅳa期肝癌患者的临床资料.抑瘤组患者(20例)术前均接受经皮肝动脉栓塞化疗(TACE)、或TACE联合射频消融(RFA)、无水酒精瘤内注射(PEI),术中、术后均采用阿霉素 5-氟尿嘧啶 顺铂方案行全身静脉化疗;以未接受任何抑瘤治疗的16例患者为对照(非抑瘤组),比较两组的肿瘤复发率、累计生存率和无瘤生存率.结果 抑瘤组肿瘤复发率(12/20,60.0%)明显低于非抑瘤组(14/16,87.5%)(P＜0.05).抑瘤组和非抑瘤组1年、2年生存率比较差异有显著意义(P＜0.05);抑瘤组1年、2年无瘤生存率亦显著高于非抑瘤组(P＜0.05).术前接受TACE联合RFA/PEI治疗的患者肿瘤坏死范围明显优于单用TACE者.结论 对于进展期肝癌患者等待肝移植期间采取TACE RFA/PEI治疗以抑制肿瘤进展,术后配合全身辅助化疗可以显著提高患者生存率、降低肿瘤复发率.阿霉素 5-氟尿嘧啶 顺铂化疗方案安全可行,具有临床应用价值.     

Reversion effects of curcumin on multidrug resistance of MNNG/HOS human osteosarcoma cells in vitro and in vivo through regulation of P-glycoprotein

Background P-glycoprotein （P-gp） encoded by ATP-binding cassette sub-family B member 1 （ABCB1） gene is a kind of ATP-dependent drug transporter, which plays important roles in multidrug resistance （MDR） of human cancers, such as osteosarcoma. Curcumin is a natural phenolic coloring compound originating from the rhizomes of Curcuma Ionga, which is proved to possess antitumor biological activities including reversion of MDR. However, the effect and molecular mechanisms of curcumin to osteosarcoma MDR remain unclear.     

化疗药物对人胃癌细胞体外生长抑制作用的初步研究

目的:探讨5种常用化疗药物对人胃癌细胞生长的抑制作用。方法:选用不同浓度的化疗药物采用体外短期培养法,结合H3-TdR掺入技术测定其对新鲜人胃癌标本细胞生长的抑制率。结果:5种化疗药物对19例胃癌细胞的抑制率从高到低顺序为:5-FU、VP-16、MTX、MMC、ADM。其抑制率有随药物浓度提高而增高的趋势,各个体间的抑制率不同。药物中浓度对分化不良型(低分化及印戒细胞癌)的敏感性明显高于分化良好型(高,中分化型)。结论:化疗药物对不同个体胃癌细胞体外抑制率有显著差异,体外检测化疗药物的敏感性可为临床化疗提供指导。     

大剂量甲氨蝶呤治疗骨肉瘤的血药浓度监测及其临床意义

目的监测大剂量甲氨蝶呤（high dose methotrexate,HD—MTX）治疗骨肉瘤患者的血药浓度,并探讨其临床意义。方法采用均相酶免疫分析法对接受HD—MTX化疗的10例骨肉瘤患者按照需要定时测定甲氨蝶呤（MTX）的浓度,分析各时间点MTX血药浓度特点及其与不良反应之间的关系。结果测得MTX0h平均浓度为（953．30±2350）μmol·L-1,72h平均浓度为（0．0860±0．0947）μmol·L-1,其中2例的72hMTX血药浓度大于中毒浓度,出现毒副反应,采用亚叶酸钙（cF）加大剂量、延长用药时间后,症状消失,所有患者均未发生严重不良发应。结论MTX各时间点的浓度存在个体差异,应进行血药浓度监测。在血药浓度监测下,及时调整CF的解救时间与剂量,使HD—MTX治疗安全可行。     

耐阿霉素人骨肉瘤细胞株的建立及其生物学特性

目的:诱导并建立耐阿霉素(Adriamycin,ADM)的人骨肉瘤细胞株,观察耐药细胞系(Saos-2/ADM1,Saos-2/ADM 4)的生物学特性.方法:以ADM为诱导剂,采用逐步增加药物剂量冲击诱导方法,诱导人成骨肉瘤原代Saos-2细胞株,建立不同药物浓度耐药系(Saos-2/ADM1,Saos-2/ADM4);MTT法检测原代与耐药细胞株对ADM、顺铂(Cispla-tin,DDP)、甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)、异环磷酰胺(Ifos-famide,IFO)、表柔比星(Epirubicine,EPI)、比柔比星(Pirambi-cin,THP)、紫杉醇(Paclitaxel,PTX)药物敏感性;光学显微镜、透射电镜观察细胞形态及超微结构变化;细胞生长曲线检测细胞增殖能力;流式细胞仪检测细胞周期比例.结果:经167d的诱导,建立了Saos-2/ADM1,Saos-2/ADM4细胞株,其对ADM的耐药指数(Resistant drug index,RI)分别为原代细胞株49.8和74.6倍;耐药细胞株对MTX,EPI,THP,PTX亦产生不同程度的交叉耐药,对DDP仍然敏感;光镜观察Saos-2/ADM1,Saos-2/ADM4细胞株细胞体积增大,多核现象较原代Saos-2细胞株明显增加;透射电镜显示Saos-2/ADMI,Saos-2/ADM4细胞株表面突起较原代Saos-2细胞株减少、且核仁增大增多;细胞生长曲线显示耐药细胞株增殖能力下降,S期细胞所占比例减少.结论:建立了耐ADM人骨肉细胞株Saos-2/ADM1,Saos-2/ADM4并观察了耐药细胞株的生物学特性.     

塞来昔布对乳腺癌阿霉素耐药细胞株MCF-7/ADM的增殖抑制作用

目的： 通过研究选择性环氯化酶2(COX-2)抑制剂塞来昔布联合阿霉素(ADM)对乳腺癌MCF-7/ADM细胞株生长的作用,探讨塞来昔布的抗肿瘤作用。方法：MCF-7/ADM细胞加入不同浓度等倍稀释的ADM（0.05、0.10、0.20、0.40、0.80和1.60 mg/L）为对照组,MCF-7/ADM细胞加入无细胞的完全培养基为阴性对照组,在对照组的基础上联合应用10、20 μmol/L塞来昔布为实验组,各组细胞于24、48、72 h后采用CCK-8检测细胞生长抑制率。MCF-7/ADM细胞单加0.05 mg?L-1ADM及联合塞来昔布(10、20 μmol/L)处理后3 h收集细胞,采用流式细胞术检测细胞内ADM水平。结果：不同浓度ADM单药及联合塞来昔布（10和20 μmol/L）　作用于MCF-7/ADM 24、48和72 h后细胞生长受到抑制,实验组不同时间细胞生长抑制率均高于对照组(P<0.05),且20 μmol/L塞来昔布实验组细胞生长抑制率高于10 μmol?L-1塞来昔布实验组,差异具有统计学意义（P<0.05）。对照组24、48和72 h的细胞未见明显变化,但实验组细胞作用48和72 h后出现细胞改变及死亡,呈塞来昔布剂量依赖性。与对照组比较,塞来昔布实验组（10和20 μmol/L）细胞内ADM浓度升高（P<0.05）;20 μmol/L塞来昔布实验组细胞内ADM浓度高于 10 μmol/L塞来昔布实验组(P<0.05)。结论：选择性COX-2抑制剂塞来昔布联合ADM可有效逆转乳腺癌ADM细胞株耐药。
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