血小板衍生生长因子-B的表达与根尖周骨吸收的关系

目的:观察血小板衍生生长因子B链(PDGF-B)在大鼠根尖周炎中的表达情况,探讨PDGF-B与根尖周骨吸收的关系。方法:将24只SD大鼠开髓,分别于术后7,14,21,28 d取下颌骨,制备组织切片,用免疫组织化学的方法测定PDGF-B在大鼠根尖周炎中的表达,酶组织化学方法检测抗酒石酸酸性磷酸酶,观察破骨细胞。结果:在根尖周炎的急性期,即术后7 d和14 d,PDGF-B阳性细胞和破骨细胞都增多,二者存在明显正相关;在根尖周炎的慢性期,即术后21 d和28 d,PDGF-B表达继续增高,而破骨细胞数却迅速下降,二者为负相关。结论:PDGF-B在根尖周炎早期可能主要发挥促骨吸收作用,而在慢性期,PDGF-B可能主要与根尖周炎的修复相关。     

血小板衍生生长因子-B的表达与根尖周骨吸收的关系

目的：观察血小板衍生生长因子B链（PDGF-B）在大鼠根尖周炎中的表达情况,探讨PDGF-B与根尖周骨吸收的关系。方法：将24只SD大鼠开髓,分别于术后7,14,21,28 d取下颌骨,制备组织切片,用免疫组织化学的方法测定PDGF-B在大鼠根尖周炎中的表达,酶组织化学方法检测抗酒石酸酸性磷酸酶,观察破骨细胞。结果：在根尖周炎的急性期,即术后7 d和14 d,PDGF-B阳性细胞和破骨细胞都增多,二者存在明显正相关;在根尖周炎的慢性期,即术后21 d和28 d,PDGF-B表达继续增高,而破骨细胞数却迅速下降,二者为负相关。结论：PDGF-B在根尖周炎早期可能主要发挥促骨吸收作用,而在慢性期,PDGF-B可能主要与根尖周炎的修复相关。     

甲状旁腺素对大鼠正畸牙根吸收后修复期破骨细胞的影响

目的探讨皮下间断注射少量甲状旁腺素(PTH)(1-34)对大鼠正畸牙根吸收后修复期破骨细胞的影响。方法 63只雄性6~8周SD大鼠建立正畸牙根吸收动物模型后,随机分为空白对照组、阴性对照组和实验组。空白对照组大鼠不注射任何药物,阴性对照组间断注射6μg/kg生理盐水,实验组皮下间断注射6μg/kg PTH(1-34)(PTH:1μg/mL)。分别在中断加力0、7、10、14、17、21、25d处死大鼠取材,免疫组织化学测定牙根修复期压力侧牙周组织中核因子κB受体活化因子配体(RANKL)表达变化,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察实验区破骨细胞变化。结果中断加力后修复早期仍可见破骨细胞,实验组相对于其他两组破骨细胞数目差异无统计学意义(P>0.05);实验组相对于其他两组破骨细胞分化因子表达早期增强,晚期减弱(P<0.05)。结论皮下间断注射少量PTH(1-34)对牙根修复期仍持续的牙根吸收不会产生抑制作用。     

牙周膜牵张快速牙移动牙周组织中破骨活性的实验研究

目的:探讨牙周膜牵张快速牙移动过程中破骨活动的变化规律。方法:以犬为实验对象,实验侧牙列应用牙周膜快速牙移动方法,对照侧牙应用传统牙移动方法,通过TRAP酶组织化学染色的方法,观察牙齿移动过程中牙周膜及牙槽骨张力侧和压力侧的破骨细胞的数量、分布及活性。结果:在4周主动加力阶段,对照侧随加力时间延长,1,2,4周移动牙牙周膜压力侧内破骨细胞数量、阳性率及活性逐渐增强,4周达到高峰;骨吸收方式最初为潜行性骨吸收,逐渐发展到直接骨吸收和潜行性骨吸收并存。在实验侧,1,2,4周移动牙牙周膜压力侧内破骨细胞数量、阳性率及活性一直处于较高水平,破骨活动明显较对照侧活跃;骨吸收方式为直接骨吸收和潜行性骨吸收并存。停止加力一段时间后原受压侧牙周膜内均少见破骨细胞。结论:牙周膜牵张快速牙移动过程中,移动牙压力侧牙周膜及牙槽骨内破骨细胞的数量及活性均高于传统牙移动。     

补肾复方含药血清对骨吸收陷窝影响的时效关系研究

目的探讨补肾复方用于破骨细胞药效观察的含药血清制备条件之一(时效关系)。方法取体重270±20g的SD大鼠,雌雄各半,每组10只,同等条件下制备补肾复方含药血清和对照血清,分别观察不同采血时间、不同喂药时间的含药血清对骨吸收陷窝数量的影响。结果末次灌胃后1h采血组的骨吸收陷窝数明显少于其它各组(P＜0.05);灌胃1d和3d、7d组比较其含药血清的药效无差异,而与对照血清差异显著。结论补肾复方含药血清对破骨细胞骨吸收功能具有明显的抑制作用;补肾复方用于破骨细胞药效观察的大鼠含药血清制备条件之一为连续2次(间隔2h)灌胃、末次灌胃后1h采血。     

ODF诱导骨髓细胞向破骨细胞分化

目的:研究小鼠骨髓细胞在破骨细胞分化因子(ODF)和单核巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)的诱导刺激下向破骨细胞诱导分化的新方法。方法:分离小鼠骨髓细胞,ODF、M-CSF诱导培养,在倒置显微镜下观察细胞形态变化,酒石酸酸性磷酸酶(T-ACP)阳性表达。结果:小鼠骨髓细胞在ODF和M-CSF作用下,表现为长梭形和圆形细胞增多,增大。体外培养6d,有多核T-ACP阳性细胞产生。结论:小鼠骨髓细胞在ODF和M-CSF共同诱导作用下分化成破骨细胞,为体外研究破骨细胞的分化发育和功能调节提供新方法。     

CXCR2参与调控小鼠种植体周围炎发病机制的研究

目的 探讨CXCR2在小鼠种植体周围炎发病机制中的作用。方法 将小鼠的右上颌第一磨牙拔除后即刻植入种植体,愈合4周达骨结合后,随机分为对照组、模型组和治疗组。通过结扎浸有热灭活牙龈卟啉单胞菌的丝线诱导种植体周围炎,治疗组腹腔注射CXCR2抑制剂SB225002,对照组及模型组注射生理盐水。连续注射14 d后,肉眼观察牙龈大体形态;应用Micro-CT检测种植体周围骨丧失情况;HE染色、免疫荧光染色分别检测牙龈总炎症细胞、中性粒细胞浸润情况;TRAP染色观察牙槽嵴顶破骨细胞数量差异;RT-PCR检测Cxcl1 （人白细胞介素-8小鼠功能同源物）及骨吸收相关因子Rankl mRNA表达情况。结果 与对照组相比,模型组的骨吸收程度、中性粒细胞及破骨细胞数量、Cxcl1及Rankl mRNA表达水平显著升高。治疗组的骨吸收程度、中性粒细胞及破骨细胞数量、Cxcl1及Rankl mRNA表达水平较模型组显著降低。结论 CXCR2在小鼠种植体周围炎中参与中性粒细胞募集和破骨细胞生成,可能是种植体周围炎潜在的治疗靶点。     

雷尼酸锶对骨质疏松股骨折愈合影响的实验研究

目的探讨雷尼酸锶对骨质疏松股骨折愈合的影响。方法选用成年雌性SD大鼠40只,采用双侧卵巢切除和骨折手术方法建立骨质疏松股骨折(OPF)模型。将大鼠分为对照组和实验组,实验组给予雷尼酸锶(Strontium ranelate,SR),对照组给予同体积生理盐水。X线观察骨折断端愈合情况,检测二组大鼠股骨骨密度(BMD),HE染色观察骨痂组织,免疫组织化学方法检测骨形态发生蛋白-2(BMP-2),抗酒石酸酸性磷酸酶染色检测破骨细胞数。结果①OPF术后6周实验组骨折断端骨痂较大,有连续骨痂通过骨折断端;对照组骨折断端骨痂较小;②OPF术后2周,实验组BMP-2表达阳性细胞数高于对照组(P<0.05)。术后6周,实验组较对照组骨折愈合明显,BMP-2表达高于对照组(P<0.05);③OPF术后6周时,实验组骨小梁面积比和骨小梁平均宽度高于对照组,骨小梁平均间隔小于对照组(P<0.05)。④实验组破骨细胞数量减少(P<0.05)。⑤OPF术后2、6周,实验组BMD高于对照组(P<0.05)。结论研究结果提示雷尼酸锶可促进骨质疏松股骨折愈合,增加骨密度,抑制破骨细胞。     

组织块法与传统破骨细胞培养方法对骨吸收功能的比较研究

目的：比较组织块法与传统破骨细胞培养方法对破骨细胞骨吸收功能的影响。方法：用组织块法与传统破骨细胞培养方法进行破骨细胞培养,抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP）染色鉴定破骨细胞,超声去除骨片上细胞后,骨片经1%甲苯胺蓝染色,光镜下观察骨片上吸收陷窝。根据骨片上陷窝数目、面积以及深度定量比较两组破骨细胞骨吸收功能。结果：吸收陷窝经甲苯胺蓝染色后光镜下可清晰识别,组织块法在骨片上的吸收陷窝数目比传统法明显少,而且骨片上陷窝面积及深度也比传统法小而浅（P〈0.05）。结论：组织块法培养的破骨细胞无论从数量上还是从功能上均没有传统法培养的好。数量大的成骨细胞对共培养破骨细胞骨吸收功能起到负面作用。     

重组RANK蛋白抑制破骨细胞活性的实验研究

目的研究重组RANK蛋白在体外实验中对破骨细胞的抑制作用。方法成骨细胞与RAW264.7细胞以4∶1比例混合培养6d,以抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色鉴定后,加入3种浓度（10-4g/L、10-5g/L、10-6g/L）重组RANK蛋白,并设空白对照。3d后观察破骨细胞数目和形态,计数骨磨片吸收陷窝。结果混合培养6d后,体系中可见成熟破骨细胞出现。加重组RANK蛋白3d后,与对照组相比,各药物组TRAP阳性细胞个数、骨磨片吸收陷窝计数均明显减少。结论体外实验中重组RANK蛋白可以显著抑制破骨细胞活性及吸收功能。     

伊班膦酸钠在正畸源性根吸收中对破骨细胞的影响

目的 观察牙齿移动过程中破牙骨质细胞和破骨细胞分化因子(ODF)表达的变化,研究伊班膦酸钠对大鼠正畸源性根吸收的作用。方法 选取48只SPF级雌性Wistar大鼠,建立正畸牙齿移动动物模型,并设置自身对照。所有大鼠均于安装矫治器前3天在实验侧牙齿近中腭侧黏骨膜下局部注射50μL伊班膦酸钠,对照侧注射50μL生理盐水。每3天注射一次至实验结束。实验第3、7、14天各处死16只大鼠,随机选择8只作组织学切片观察,另外8只作扫描电镜(SEM)观察。结果 ①实验第7天和14天实验侧破牙骨质细胞数量小于对照侧(P＜0.05);②实验第7天和第14天实验侧牙周组织压力侧ODF阳性表达程度低于对照侧(P＜0.05);③SEM结果显示,实验侧第3、7和14天牙根表面吸收陷窝较对照侧数量少、面积小。结论 局部应用伊班膦酸钠可以减少牙周组织压力侧破牙骨质细胞的数量,降低牙周组织压力侧ODF阳性表达程度,减少正畸源性根吸收的发生。     

Combined effect of fluoride and arsenate on gene expression of osteoclast differentiation factor and osteoprotegerin

Objective To study the combined effect of fluoride and arsenate on the expression of SD rat osteoblastic osteoclast differentiation factor （ODF） mRNA and osteoprotegerin （OPG） mRNA. Methods Osteoblasts were obtained by enzymatic isolation from newborn SD rats. A factorial experiment was performed. Osteoblasts were exposed to NaF （0.5 mmolF/L, 4 molF/L） and Na3AsH2 （12.5 μmolAs/L and 200 μmolAs/L） separately or F plus As and cultured for 48 h. The gene expression of osteoblastic ODF and OPG was observed by RT-PCR. Results The expression ofODF mRNA increased in F0.5, F4 groups compared with control group and two groups of F0.As200, F,As200 compared with As200 group, and decreased significantly in groups of F4As12.5, F0.5As200, and F4As200. The expression of OPG rnRNA decreased in groups of F4, As200, F4As12.5, F0.5As200, and F4As200. Conclusion The joint effect of fluoride and arsenate on the gene expression of ODF is antagonistic, while the combined effect on the gene expression of OPG is synergistic. F4, F4As12.5, and F0.5As200 promote bone resorption of rat osteoclasts, whereas F0.5As12.5 inhibits osteolytic effect of rat osteoclasts.     

Ⅱ型碳酸酐酶对破骨细胞性骨吸收的影响

目的：研究破骨细胞分泌的Ⅱ型碳酸酐酶对骨吸收过程的影响。 方法：由1日龄SD大鼠四肢长骨分离破骨细胞,并接种于象牙骨片上共同培养,在培养液中分别加入不同浓度的Ⅱ型碳酸酐酶阻断剂乙酰唑胺,在第3天和第9天时观察破骨细胞骨吸收能力,以证实Ⅱ型碳酸酐酶对破骨细胞性骨吸收的影响。 结果：10^-6 mol•L^-1乙酰唑胺使骨吸收陷窝数和吸收面积均显著减少,浓度为10^-8 mol•L^-1时只对骨吸收面积有显著抑制作用。 结论：Ⅱ型碳酸酐酶通过调整破骨细胞内pH值,影响破骨细胞的分化、成熟及活化进而影响骨吸收。     

Expression of OPGmRNA and ODFmRNA in the patients of hip fracture due to osteoporosis

Objective：To investigate the gene expression of osteoprotegerin（OPG） and osteoclast differentiation factor（ODF） in the bone tissue of patients with hip fracture due to osteoporosis. Methods：OPGmRNA and ODFmRNA in the bone tissue in 50 cases of osteoporosis sufferers（over 50 years old） with hip fracture（Observer Group） and 30 cases of hip facture sufferers with no osteoporosis（Control group） were analyzed with the Semi-Quantitative RT-PCR method. Results：The mRNA expressed of ODF, OPG were both high in the patients with hip fracture. In the control group, the expression of OPG mRNA was observed, while the expression of ODF mRNA was very slight. Conclusion：Aged patients contained all signals including OPG, ODF that are essential for inducing osteoclastogenesis and promoting bone resorption.     

唑来膦酸盐通过p38 MAPK通路调控高糖条件下破骨细胞分化生成及骨吸收功能

目的 探究在高浓度葡萄糖的条件下,唑来膦酸盐（ZOL）对破骨细胞分化及功能的影响,以及p38丝裂原蛋白活化激酶（p38 MAPK）通路在其中的调控机制。方法 将RAW264.7细胞向破骨细胞方向分化诱导,分为4组：低糖组（5.5 mmol/L葡萄糖）、高糖组（16.5 mmol/L葡萄糖）、低糖+ZOL组（5.5 mmol/L葡萄糖+0.1 μmol ZOL）、高糖+ZOL组（16.5 mmol/L葡萄糖+0.1 μmol ZOL）。MTT法测定各组细胞增殖活性,光学显微镜检测RAW264.7细胞的迁移数目,免疫荧光组织化学染色检测各组破骨细胞细胞骨架的清晰程度。增加第 5 组：高糖+ZOL+SB203580（16.5 mmol/L 葡萄糖+0.1 μmol ZOL+10 μmol SB203580）后,TRAP染色鉴定各组阳性破骨细胞数量;将RAW264.7细胞与牙本质磨片共同培养,扫描电子显微镜测定各组细胞骨吸收陷窝的数量及面积;实时荧光定量PCR（Real-time PCR）及Western blotting检测破骨细胞相关因子的mRNA和蛋白的表达情况。结果 细胞增殖实验中各组细胞增殖情况无明显差别。高糖条件对RAW264.7细胞的迁移具有促进作用,差异具有统计学意义（P<0.05）;抑制细胞骨架的清晰程度及破骨细胞封闭区的形成;下调p38 MAPK、p-p38 MAPK、NFATc1、CTSK、TRAP mRNA和蛋白表达情况从而对破骨细胞的分化及功能发挥抑制作用,差异具有统计学意义（P<0.05）。加入唑来膦酸盐后,RAW264.7细胞迁移受到抑制,差异具有统计学意义（P<0.05）;细胞骨架的清晰程度进一步下降,破骨细胞封闭区的形成被进一步破坏破;p38 MAPK、p-p38 MAPK、NFATc1、CTSK、TRAP的mRNA和蛋白质表达降低,进一步抑制破骨细胞分化及功能,差异具有统计学意义（P<0.05）;加入SB203580后,破骨细胞分化和骨吸收功能受到抑制,p38 MAPK、p-p38 MAPK表达受到抑制,下游NFATc1、CTSK、TRAP表达降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 高糖条件抑制破骨细胞的分化生成和骨吸收功能。ZOL通过p38 MAPK信号通路实现了对高糖条件下破骨细胞分化及功能的抑制作用,提示p38 MAPK分子通路可作为唑来膦酸盐调控糖尿病性骨质疏松的新机制。     

低剂量 X 线照射对破骨细胞分化及功能活性的作用机制

目的:探讨低剂量X线照射(LDI)对破骨细胞的分化及功能活性的作用机制。方法:选择RAW 264.7细胞株作为破骨前体细胞,诱导构建破骨细胞模型。将破骨细胞随机分为对照组(0 cGy LDI)、照射组(10 cGy LDI)和P2X_7~(-/-)照射组(shRNA,10 cGy LDI)。采用生物发光试剂盒检测各组培养基中三磷酸腺苷(ATP)的浓度,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色评估破骨分化成熟度,实时荧光定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法检测破骨细胞P2X_7受体、组织蛋白酶K(cathepsin K)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)基因mRNA的表达情况。结果:LDI显著提高了照射组和P2X_7~(-/-)照射组细胞基质中ATP的释放,照射组中ATP分泌更加显著。形态学实验提示,LDI在一定程度上提高了破骨细胞的分化和骨吸收能力。与对照组比较,照射组P2X_7受体及cathepsin K mRNA表达明显升高,而P2X_7~(-/-)照射组明显降低(P<0.05);照射组MMP-9 mRNA表达与对照组比较无显著差异(P>0.05),而P2X_7~(-/-)照射组MMP-9 mRNA表达明显降低(P<0.05)。结论:LDI通过ATP偶联P2X_7受体,从而提高破骨细胞的活性、分化及骨吸收能力。     

血管内皮生长因子在实验性根尖周炎中的表达

目的：通过检测正常根尖周组织和实验性根尖周炎进展过程中根尖周组织血管内皮生长因子（VEGF）免疫组化表达的分布情况及规律，探讨其在根尖周组织炎症进展中的作用。方法：HE染色与VEGF免疫组化染色，光镜观察大鼠根尖周炎进展情况和VEGF在根尖周组织的表达部位与程度，检测VEGF表达阳性部位的平均积分光密度值。结果：根尖孔周围炎性浸润区、根尖周内芽组织及吸收程度严重的根尖周骨组织中，VEGF表达较正常组强，并有随牙髓暴露时间增长而逐渐增高趋势。结论：VEGF参与根尖周炎症的进展及肉芽组织形成，可能参与调节根尖骨吸收。     

骨破坏因子RANK RANKL OPG在口腔领域研究进展

OPG/RANKL/RANK系统信号通路对调节破骨细胞分化与骨吸收过程中具有至关重要的作用。成骨细胞及骨髓基质细胞表达RANKL与破骨细胞前体细胞或破骨细胞表面上的RANK结合后,促进破骨细胞的分化与激活,并抑制破骨细胞的凋亡;另一方面成骨细胞及骨髓基质细胞则分泌表达OPG与RANKL竞争性结合,阻止RANKL与RANK的结合。作为破骨细胞形成、分化和骨吸收调节的关键调节物OPG/RANKL/RANK系统信号通路在口腔领域中乳牙的萌出及替换、正畸牙的移动、牙周炎等生理性及病理性过程中的改建发挥功能。