干细胞动员对梗死心肌结构及功能的影响

目的探讨干细胞动员对心肌梗死后心肌基本结构和心功能的影响。方法结扎Wistar大鼠左冠状动脉制作急性心肌梗死(AMI)模型66只,随机分动员组33只和对照组33只,动员组应用基因重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)10μg·kg-1·d-1皮下注射共7 d,对照组皮下注射生理盐水7 d。建模后两组分别在24 h、2周和4周杀死大鼠,取出心脏,HE染色观察细胞形态特征、结构,梗死面积和心肌组织CD34阳性表达,并检测术后4周时动员组和对照组大鼠的血流动力学指标、心功能参数。结果动员组梗死区可见大量CD34浸润,梗死面积明显减小;梗死程度较对照组减轻,术后4周,动员组缺血心肌的基本结构得到保护,组织结构排列基本处于有序状态,左心功能恢复明显优于对照组,表现在SBP、DBP、LVSP、LV±dp／dtmax均高于对照组(P<0．05),LVEDP明显低于对照组(P<0．05)。结论干细胞动员能促进干细胞归巢梗死心肌并分化为心肌细胞样细胞,保护缺血心肌的基本结构,明显改善大鼠心肌梗死后的心脏功能。     

骨髓干细胞动员疗法对心肌梗死大鼠心肌的促血管生成作用

目的探讨骨髓干细胞动员疗法对心肌梗死大鼠冠状动脉新生血管形成的影响。方法结扎Wistar大鼠左冠状动脉制作急性心肌梗死（AMI）模型,人参皂甙Rg1联用辛伐他汀动员自体骨髓干细胞,建模后第24h、1周和4周时杀死大鼠,取出心脏,HE染色检测梗死面积,免疫组化方法观察心肌梗死灶、边缘区和正常心肌组织CD34阳性细胞及Ⅷ因子表达。结果人参皂甙Rg1联用辛伐他汀治疗后,治疗组大鼠心肌梗死区可见CD34阳性细胞浸润;治疗组大鼠梗死面积明显减小;治疗组大鼠梗死灶及周围组织中微血管密度明显高于AMI组及假手术对照组。结论在大鼠AMI模型中,人参皂甙Rg1联用辛伐他汀治疗,可动员骨髓干细胞归巢于缺血心肌,有效促进微血管形成,促进缺血心脏功能恢复。     

雌激素对心肌梗死大鼠外周血干细胞及血管生成的影响

目的探讨雌激素对急性心肌梗死大鼠外周血干细胞和心肌血管生成的影响。方法结扎去卵巢SD大鼠左冠状动脉制作急性心肌梗死模型,给予苯甲酸雌二醇干预治疗,分别于急性心肌梗死24h后免疫组化法检测归巢心肌的CD34+细胞数量;于d1、3、7流式细胞术测定外周血CD34+细胞数,免疫组化法测定心肌中基质细胞衍生因子(stromalcell-derivedfactor,SDF-1)的表达,分析心梗4wk后心肌组织中毛细血管密度判断血管新生情况。结果与卵巢完整大鼠相比,去卵巢大鼠心梗后外周血和心肌组织中CD34+细胞数、SDF-1的表达和4wk后毛细血管密度明显降低,雌激素干预各组上述指标明显升高,其中,雌激素替代组最高。结论雌激素可促进大鼠心肌梗死后外周血骨髓干细胞的动员和归巢,增加毛细血管密度,改善预后,其机制可能与提高心肌SDF-1表达有关。且采用心肌梗死前雌激素替代疗效优于心肌梗死后雌激素治疗     

粒细胞集落刺激因子对心肌梗死大鼠心肌T细胞亚群的影响

目的:探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对心肌梗死大鼠心肌T淋巴细胞亚群的影响。方法:29只大鼠随机分为干细胞动员组(GAMI,n=9)、心肌梗死对照组(AMI,n=10)和假手术组(SO,n=10)。GAMI组和AMI组结扎左冠状动脉造成心肌梗死,SO组行相似的手术操作但不结扎冠状动脉。GAMI组给予rhG-CSF(50μg·kg-1·d-1),皮下注射,共7d。AMI组及SO组则每日皮下注射同等体积的生理盐水,共7d。心肌梗死后4周,通过免疫组化染色检测心肌CD3 、CD4 和CD8 细胞计数并计算CD4 /CD8 比率。结果:AMI组大鼠有3只分别于术后第3、7、8天死亡,GAMI组与SO组大鼠至观察结束无一只死亡。与AMI组相比较,GAMI组CD3 和CD8 细胞计数降低(均P<0.01),CD4 细胞计数无明显变化(P>0.05),CD4 /CD8 比率升高(P<0.01)。结论:G-CSF可降低心肌梗死后大鼠心肌CD3 和CD8 T淋巴细胞计数、升高CD4 /CD8 比率,提示G-CSF可减轻心肌梗死后的免疫损伤。     

冠状动脉内注射自体骨髓干细胞改善急性心肌梗死患者的心功能

目的 探讨自体骨髓干细胞冠状动脉内移植对急性心肌梗死患者心功能的影响.方法 因急性心肌梗死住院并行介入治疗的患者38例,按照完全随机分组的原则分为干细胞移植治疗组18例和对照组20例,干细胞移植治疗组患者在心肌梗死发生14 d后进行冠状动脉内注射自体骨髓干细胞治疗.术前1周和术后6个月时,采用99Tcm-MIBI心肌灌注显像、二维超声心动图评价患者心肌灌注、左心室射血分数.结果 干细胞移植治疗组与对照组比较,自体骨髓干细胞移植前2组间心肌灌注（2.1±0.1比2.2±0.2,P=0.76）和左心室射血分数（0.45±0.13比0.41±0.22,P=0.56）差异无统计学意义,术后6个月时干细胞移植治疗组心肌灌注明显好于对照组（1.5±0.2比2.3±0.4,P=0.04）,左心室射血分数高于对照组（0.55±0.12比0.44±0.24,P=0.03）,再梗死发生率、再次血运重建率和病死率2组间差异无统计学意义（P＞0.05）,而心力衰竭的发生率干细胞移植治疗组低于对照组（5.5%比35.0%,P=0.03）.结论 自体骨髓干细胞冠状动脉内移植可以改善急性心肌梗死患者的心功能,减少心力衰竭的发生.     

骨髓干细胞动员对心肌病心衰大鼠的心功能影响

目的:探讨骨髓干细胞动员对心肌病心衰大鼠的心功能影响。方法:选取20只心肌病心衰模型,随机分成两组,骨髓干细胞动员组(G组)为皮下注入重组人粒细胞刺激因子,心衰组皮下注入生理盐水。治疗前后采静脉血测外周血白细胞计数和单个核细胞数,将治疗5d后外周血分离出单个核细胞用流式细胞仪测CD34。四周后由彩色超声心动图评价心功能参数。结果:骨髓动员组外周血白细胞计数和单个核细胞数明显增高,流试细胞仪检查CD34阳性。在治疗4周后G组在超声心动图与心衰组有差异明显。结论:骨髓干细胞动员动员出造血干细胞,G组对心肌病心衰大鼠的心功能有明显改善。     

5-氮胞苷诱导心肌组织中c-kit~+干细胞分化的实验研究

目的:创建小鼠心肌干细胞(cardiac stem cells,CSC)分离、培养的方法,借助干细胞表面标记c-kit纯化CSC,并用5-氮胞苷诱导CSC分化为心肌细胞。方法:用酶定时消化方法分离提取小鼠心脏组织中的细胞,进行体外培养;免疫磁珠法纯化c-kit阳性细胞,并用流式细胞仪检测纯化后细胞表面标记c-kit、lin和CD34的表达;以免疫细胞化学染色法检测诱导后心肌特异性蛋白T、连接蛋白-43、心肌细胞特异性结蛋白;结合形态学变化,分析不同诱导条件作用结果之间的差异。结果:从C57BL小鼠心肌组织中分离消化所得的细胞中,含有一种小而圆形、折光性强的细胞,经传代培养的细胞增殖速度比原代细胞明显为快,存在较多的类似于干细胞增殖和形态学特点的细胞。用免疫磁珠法可以分选出高纯度的c-kit+CSC,这种CSC基本不表达CD34和lin。在不同诱导条件下,此种CSC可以分化为搏动的细胞,并能表达心肌特异性蛋白。结论:从C57BL小鼠心肌组织中可以获得CSC,用免疫磁珠法可以分选出表型为c-kit+-CD34--lin-高纯度的CSC,经5-氮胞苷诱导或改变CSC生长的微环境后,此种细胞可以分化成心肌细胞,且能形...     

骨髓动员对大鼠骨髓源内皮祖细胞功能的影响

目的观察大鼠骨髓动员后骨髓源内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)功能的改变,探讨骨髓动员后骨髓干细胞移植提高下肢缺血性疾病疗效的可能机制。方法按是否接受重组人粒细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte-macrophage colony-stimulatory factor,rhG-CSF)注射液注射将Lewis大鼠分为动员组和对照组,获取骨髓单个核细胞用EBM-2培养液进行诱导分化,培养7d后对贴壁细胞进行EPCs的鉴定;采用黏附能力测定实验观察EPCs的黏附能力。另取Lewis大鼠制备单侧后肢缺血模型,在模型制备后7d将8×106个EPCs移植至缺血侧后肢的肌肉内,按照移植EPCs来源不同将后肢缺血大鼠分为动员组和对照组。EPCs移植4周后行后肢血管造影,计算缺血侧后肢侧支血管数目。结果大鼠骨髓单个核细胞培养7d后黏附能力测定实验中动员组黏附EPCs数量为(22.3±2.8)个/×100高倍视野大于对照组(16.8±4.4)个/×100高倍视野(P<0.05);大鼠骨髓源EPCs移植至缺血肢体后4周动员组EPCs移植后缺血侧后肢侧支血管数目为(4.7±1.0)大于对照组(3.3±0.5)(P<0.05)。结论骨髓动员使骨髓源EPCs功能改善,其可能是骨髓动员后骨髓干细胞移植提高下肢缺血性疾病疗效的机制之一。     

骨髓间充质干细胞旁分泌改善心室重塑的作用

心肌梗死是急性危重疾病之一,心肌梗死后的心室重塑在所难免,不能避免瘢痕组织形成,心肌梗死的部位由纤维瘢痕代替.如果心肌梗死的部位迅速被新生的有功能的心肌细胞修复,就会有良好的预后.能够分化为心肌细胞的干细胞能否达到修复心肌细胞的目的已成为研究热点,其中骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)获取容易、具有自我更新以及可以分化为心肌细胞的能力,成为心脏研究领域的重要细胞类型.BMSCS虽然仅占骨髓单核细胞的0.001%～0.010%,但是却具有较强的增殖能力.     

不同方案粒细胞集落刺激因子对骨髓干细胞动员效率的临床观察

目的观察不同方案对急性心肌梗死(AMI)患者外周血干细胞动员的效率,旨在寻找最佳的动员方案。方法A组予以粒细胞集落刺激因子(G-CSF)300μg,每日1次,皮下注射,连续5d;B组予以G-CSF300μg,每日2次,皮下注射,连续5d,第6天经美国Baxter公司生产的CS3000Plus血细胞分离机分离外周血干细胞,经流式细胞仪测定CD34+细胞数量。结果两组在用药前及用药后第2、3、4、5、6、7、8天外周血中白细胞计数上无统计学差异;但是,两组在用药后第3、5、6、7天外周血中CD34+细胞数量有统计学差异(P值分别为0.007、0.019、0.011、0.005),B组外周血中CD34+细胞数量要高于A组;在应用两组动员方案后,外周血中白细胞、CD34+细胞数量与动员时间变化曲线均显示峰型曲线,在动员后第5天,且B组曲线要明显高于A组;患者外周血中CD34+细胞数量与白细胞变化呈正相关(r=0.659),与体重变化呈负相关(r=-0.536),与性别、年龄变化及AMI发生时间没有相关性。结论行G-CSF300μg,每日2次组动员的患者,外周血中CD34+细胞数量的动员效率要明显优于300μg,每日1次组。     

丁苯酞对神经干细胞向神经细胞分化的促进作用

目的 研究丁苯酞通过PI3K-AKT信号通路促进神经干细胞向神经细胞分化的作用。方法 分离培养SD大鼠胚胎脑皮质层的神经干细胞,采用分化专用完全培养基培养后,通过光镜下观察和Nestin蛋白免疫荧光法进行鉴定。设置对照组和实验组,其中实验组添加丁苯酞辅助分化,分为丁苯酞低剂量组（1 μmol·L^-1）、中剂量组（5 μmol·L^-1）和高剂量组（10 μmol·L^-1）,作用24 h后,CCK-8法检测神经干细胞的细胞活力,碱性磷酸酶染色法检测神经干细胞的分化能力,免疫荧光法检测神经细胞分化程度,RT-qPCR法检测转录因子SOX2、PAX6和NeuN的mRNA表达水平,Western-blot及RT-qPCR检测PI3K-AKT信号通路的表达。结果 丁苯酞干预后神经干细胞活力提高,分化能力提高,碱性磷酸酶试验呈强阳性,转录因子SOX2、PAX6和NeuN的mRNA表达水平增高,PI3K-AKT信号通路蛋白和mRNA表达水平均增高,且呈现剂量依赖性。结论 丁苯酞可以促进神经干细胞向神经细胞分化,其作用机制可能与PI3K-AKT的激活有关。     

新生儿脐血与成人外周血细胞比较分析

目的:比较新生儿脐血与成人外周血细胞性质差异,为干细胞移植提供基础数据。方法:采用全自动血细胞仪对脐静脉血和成人外周血进行分析。结果:脐静脉血中有核细胞数目多,红细胞体积较大。结论:脐血里富含干细胞等原始细胞成分。     

Ricin Trafficking in Cells

The heterodimeric plant toxin ricin binds exposed galactosyls at the cell surface of target mammalian cells, and, following endocytosis, is transported in vesicular carriers to the endoplasmic reticulum (ER). Subsequently, the cell-binding B chain (RTB) and the catalytic A chain (RTA) are separated reductively, RTA embeds in the ER membrane and then retrotranslocates (or dislocates) across this membrane. The protein conducting channels used by RTA are usually regarded as part of the ER-associated protein degradation system (ERAD) that removes misfolded proteins from the ER for destruction by the cytosolic proteasomes. However, unlike ERAD substrates, cytosolic RTA avoids destruction and folds into a catalytic conformation that inactivates its target ribosomes. Protein synthesis ceases, and subsequently the cells die apoptotically. This raises questions about how this protein avoids the pathways that are normally sanctioned for ER-dislocating substrates. In this review we focus on the molecular events that occur with non-tagged ricin and its isolated subunits at the ER–cytosol interface. This focus reveals that intra-membrane interactions of RTA may control its fate, an area that warrants further investigation.     

灵芝多糖对肿瘤细胞与内皮细胞相互作用的影响

目的:研究灵芝多糖对肿瘤细胞与内皮细胞相互作用的影响。方法:应用免疫荧光法配合使用显微镜将内皮细胞区分出来后,通过MTT法观察灵芝多糖在内皮细胞增殖分化过程中的作用,并使用相同的方法观察肿瘤细胞的增殖分化过程与灵芝多糖的关系,同时观察灵芝多糖是否干扰2种细胞间产生的黏附作用及迁移反应。结果:内皮细胞的增殖分化过程与灵芝多糖不存在明显联系,肿瘤细胞的增殖分化过程与灵芝多糖也不存在明显联系,即无明显的细胞毒性反应。但灵芝多糖可阻碍2种细胞间产生的黏附作用和迁移反应,减少肿瘤细胞的迁移百分比。结论:灵芝多糖具有抗肿瘤功效,其作用机制为阻碍肿瘤细胞的黏附作用和迁移反应。     

Morphologic Evidence of Anti-Tumor Specificity of T Cells Activated by Denritic Cells Derived from Peripheral Blood Mononuclear Cells of Thyroid Cancer Patients

Recent studies suggest that immunization with autologous dendritic cells (DCs) results in protective immunity and rejection of established tumors in various human malignancies. The purpose of this study is to determine whether DCs are generated from peripheral blood mononuclear cells (PBMNs) by using cytokines such as F1t-3 ligand (FL), granulocyte macrophage-colony stimulating factor (GM-CSF), IL-4, and TNF-α, and whether cytotoxic T cells activated against the thyroid cancer tissues by the DCs. Peripheral blood was obtained from 2 patients with thyroid cancer. DCs were established from PBMNs by culturing in the presence of FL, GM-CSF, IL-4, and TNF-α for 14 days. At day 14, the differentiated DCs was analyzed morphologically. The immunophenotypic features of DCs such as CDla, CD83, and CD86 were analyzed by immunofluorelescence microscopy. At day 18, DCs and T cells were incubated with thyroid cancer tissues or normal thyroid tissues for additional 4 days, respectively. DCs generated from the PBMNs showed the typical morphology of DCs. Activated cytotoxic T lymphocytes (CTLs) were observed also. DCs and the CTLs were attached to the cancer tissues on scanning electron microscope. The DCs activated the CTLs, which able to specifically attack the thyroid cancer. This study provides morphologic evidence that the coculture of T cells/cancer tissues activated the T cells and differentiated CTLs. The CTLs tightly adhered to cancer tissues and lysed cancer tissues vigorously. Therefore DCs could be used as potential vaccines in the immunotherapy.     

不同来源间充质干细胞定向诱导为神经样细胞的研究

目的:比较不同来源间充质干细胞(MSCs)在体外定向分化为神经样细胞的能力。方法:无菌获取不同来源的MSCs并进行分组。A组:胎儿真皮;B组:胎儿骨髓;C组:成人骨髓。倒置显微镜下观察各组细胞形态并检测其倍增时间。流式细胞术检测各组MSCs的细胞表型和细胞周期。全反式维甲酸(ATRA)诱导各组MSCs在体外分化为神经样细胞,倒置相差显微镜观察神经样细胞的形态,免疫组织化学法和Western blot检测神经元特异性标志—神经丝蛋白(NF)和星形胶质细胞特异性标志—胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果:不同来源的MSCs具有相似的细胞形态、细胞表型和细胞周期,但是C组MSCs的增殖能力及体外传代能力低于A组和B组。不同来源、不同扩增代数的MSCs在诱导剂的作用下呈现典型的神经样细胞的形态,免疫组织化学显示,NF和GFAP均呈阳性反应。结论:不同来源的MSCs均可以在体外分化为神经样细胞,但不同发育阶段的MSCs体外分化为神经样细胞的能力存在差异。     

Effect of Low Dose Radiation on Differentiation of Bone Marrow Cells into Dendritic Cells

Low dose radiation has been shown to be beneficial to living organisms using several biological systems, including immune and hematopoietic systems. Chronic low dose radiation was shown to stimulate immune systems, resulting in controlling the proliferation of cancer cells, maintain immune balance and induce hematopoietic hormesis. Since dendritic cells are differentiated from bone marrow cells and are key players in maintaining the balance between immune activation and tolerance, it may be important to further characterize whether low dose radiation can influence the capacity of bone marrow cells to differentiate into dendritic cells. We have shown that bone marrow cells from low dose-irradiated (γ-radiation, 0.2Gy, 15.44mGy/h) mice can differentiate into dendritic cells that have several different characteristics, such as expression of surface molecules, cytokine secretion and antigen uptake capacity, when compared to dentritic cells differentiated from the control bone marrow cells. These differences observed in the low dose radiation group can be beneficial to living organisms either by activation of immune responses to foreign antigens or tumors, or maintenance of self-tolerance. To the best of our knowledge, this is the first report showing that total-body low dose radiation can modulate the capacity of bone marrow cells to differentiate into dendritic cells.